超低温冻存对人骨髓基质干细胞生物学特性的影响

目的 观察超低温冻存对人骨髓基质干细胞(BMSC)生物学特性的影响. 方法 从正常献髓者髂骨采集骨髓,分离培养出BMSC,并对其进行成骨诱导培养.将第4代人BMSC经短期超低温冻存、复苏后,通过细胞活性率测定、形态学比较、细胞增殖功能、碱性磷酸酶(ALP)活性检测及体外矿化能力比较,观察超低温冻存对人BMSC生物学特性的影响.结果 第4代人BMSC冻存、复苏前后的两组细胞无论在细胞活性率、细胞形态、生长过程、ALP活性等方面均无显著性差异(P＞0.05).结论 短期的超低温冻存对人BMSC的生物活性无明显影响.     

改良hela细胞冻存与复苏方法的实验研究

目的:建立一种改良的hela细胞冻存和复苏的方法.方法:取生长状态良好的HELA细胞分别进行传统和改良方法冻存,于冻存后1年分别行传统和改良的复苏方法.用MTT法测细胞生长曲线,应用两因素析因分析统计方法评定不同冻存方法、不同复苏方法单独和/或组合对细胞复苏率的影响.结果:HELA体外生长良好.电镜观察细胞超微结构没有明显改变.细胞的复苏率均受不同冻存方法和复苏方法单、双因素影响.冻存复苏后生长曲线良好.结论:改良后的HELA冻存和复苏方法可使细胞保持最佳生物学特性,细胞的复苏率高,适合用于体外实验研究.     

非程控降温-80℃冷冻保存外周血干细胞的活性观察

目的 :观察非程控降温 - 80℃冷冻保存外周血造血干 /祖细胞的活性 ,为临床自体外周血造血干细胞移植提供方便、有效的冻存方法。方法 :常规方法动员外周血干细胞 ,CS - 30 0 0PLUS血细胞分离机采集干细胞 ,以 10 %二甲亚砜、10 %人AB型血清、RPM116 4 0培养基为冷冻保护剂 ,2ml/管冻存干细胞 ,按第 1、2、4周和第 2、3月顺序复苏细胞并测定GM -CFU集落数、台盼兰拒染率和CD34 细胞百分率。结果 :用该方法冷冻保存的外周血干细胞 ,在 4周内其细胞活性与采集时的细胞活性无明显差别 (P >0 .0 5 ) ,冻存至 2～ 3个月时细胞活性则明显降低 (P <0 .0 5 )。结论 :应用血清和DMSO等作为冷冻保护剂、- 80℃直接冻存的外周血干细胞 ,在 4周内复苏后其细胞活性无明显降低。     

成年大鼠神经干细胞的冷冻复苏及生物学特性观察

目的 建立成年大鼠神经干细胞冷冻复苏方法，观察冻存复苏后神经干细胞的活力及生物学特性。方法 采用10％BSA 8％DMSO做冷冻保护剂，于液氮中冻存；采用细胞培养和免疫细胞化学方法观察冻存复苏后细胞的活力、形态、分化能力及特异性抗原表达。结果 不同的冻存时间、细胞代数对冻存后细胞的存活率没有明显影响；冻存复苏的神经干细胞不仅有较高的存活率，而且仍保持其原有的生物学特性。结论 成年大鼠神经干细胞的冻存并不影响其活力及原有的生物学特性。     

超低温冻存同种异体成骨细胞与异种脱钙骨复合异位组织工程化骨

目的：研究同种异体成骨细胞经超低温冻存后在体内的成骨能力及其免疫反应。方法：体外分离培养SD大鼠颅骨成骨细胞，提纯并传代至第3代时一部分作为对照组用；另一部分采用-196℃超低温冻存，24h后复苏。将该两种第3代细胞分别与脱细胞并去抗原性的猪脱钙型松质骨(decalcmed bone，DB)复合，将两种复合体和单纯DB分别植入SD大鼠背部肌袋内，各24只，4周后取标本，应用组织学、碱性磷酸酶测定、体视学及免疫学测定，观察成骨现象及免疫反应。结果：经超低温冻存的同种异体成骨细胞异体异位植入后，成骨量、成熟度明显优于未冻存成骨细胞；引起的免疫反应亦低于未冻存细胞。结论：同种异体成骨细胞经超低温冻存、复苏后，抗原性明显降低，未引起强烈的免疫排斥反应，仍具有成骨能力。     

大体系冻存对细胞因子诱导的杀伤细胞免疫表型及细胞杀伤活性的影响

目的探讨大体系(50 mL)冻存对细胞因子诱导的杀伤(CIK)细胞免疫表型及细胞杀伤活性的影响。方法采集6例健康志愿者的外周血,采用Ficoll法分离得到单个核细胞,用细胞因子诱导培养CIK细胞。收集冻存1个月后复苏的CIK细胞,采用流式细胞术检测其冻存前后的细胞活率和免疫表型;通过与乳腺癌细胞共培养(效靶比10∶1和40∶1)的方法测定其杀伤活性,与新鲜未冻存的细胞杀伤活性进行比较,同时并对不同效靶比冻存前后的细胞杀伤活性进行比较。结果 CIK细胞大体系冻存前平均细胞活率(97.79±1.92)%,显著高于复苏后的(83.61±3.42)%(P<0.05)。复苏后CIK细胞中CD3~+、CD3~+CD4~+、CD3~+CD8~+、CD3~+CD56~+表型CIK细胞所占比例虽较冻存前稍有降低,但差异均无统计学意义(P>0.05)。效靶比10∶1、40∶1时冻存前细胞和复苏后细胞杀伤率比较差异均无统计学意义(P>0.05);效靶比40∶1时冻存前细胞和复苏后细胞杀伤率均显著高于效靶比10∶1时(P<0.05)。结论大体系(50 mL)冻存对于CIK细胞活率虽有影响,但对免疫表型和细胞活性均未影响。     

HL60细胞冻存复苏生物学特性对比分析

目的探讨不同冻存复苏条件对白血病细胞株HL60生物学特性的影响,并优化培养方法与条件。方法对比不同浓度DMSO冻存条件、不同复苏方法对复苏后细胞生物学特性的影响,并确定培养液血清最佳浓度。结果采用5%DMSO冻存防护效果好于其他组,改良后细胞的复苏存活率明显高于传统复苏方法。结论以5%DMSO作为HL60细胞冻存保护剂并采用改良复苏方法,可使细胞保持最佳生物学特性,12%血清为HL60细胞常规培养的最适浓度。     

低温冻存对人脂肪间充质干细胞生物学特性的影响

目的: 比较人脂肪间充质干细胞(human adipose-derived mesenchymal stem cells,hADSCs)冻存前和复苏后的生物学特性,为今后建立低温干细胞库提供实验支持。方法： 采用0.1%Ⅰ型胶原酶消化法从腹部大网膜脂肪组织中分离hADSCs,体外培养扩增,将处于均一稳定生长状态的第3代hADSCs置于液氮中分别冻存1、3和6个月,复苏后台盼蓝染色检测细胞存活率,采用MTT法绘制细胞生长曲线,流式细胞术检测细胞表面抗原,成脂成骨诱导后鉴定多向分化能力,RT PCR检测成脂特异性基因过氧化物酶体增殖物激活受体γ-2(peroxisome proliferator activated receptorγ-2,PPARγ-2)和成骨特异性基因骨钙素(osteocalcin,OC)的表达情况。结果： 随冻存时间的延长细胞存活率略有下降,但差异无统计学意义(P＞0.05)。MTT结果显示冻存前后细胞增殖能力均很强。流式细胞检测结果显示冻存前后细胞均高表达CD29、CD44、CD73、CD90、CD105和CD166,低表达CD45和HLA-DR。冻存前后hADSCs均具有向脂肪细胞和骨细胞分化潜能,且RT-PCR结果显示,PPARγ-2和骨钙素mRNA的表达冻存前后差异均无统计学意义(P＞0.05)。结论： 经液氮冻存后的hADSCs具有高存活率,生物学特性保持稳定且仍具有多向分化潜能。     

分离人肝细胞的超低温保存

目的　探索一种肝细胞超低温冻存的方法。方法　将分离的肝细胞洗涤 (5 0×g ,3min)后 ,用自制配方的肝细胞保存液制成悬浮液 ,置于 -80℃超低温冰箱内冻存 ,两周后取冻存的肝细胞常规方法复苏 ,台盼蓝染色、计数 ,普通方法接种培养观察 ,以同期分离的细胞接种培养为对照。结果　冻存的肝细胞解冻后存活率较高 ,经台盼蓝染色其活率为 95 %± 1% ,接种培养的细胞贴壁率为 80 %± 2 % ,其白蛋白的合成功能与对照组的白蛋白合成功能差异无显著性 ,细胞生长良好。结论　人肝细胞可在 -80℃超低温条件下保存 ,这可望成为贮存肝细胞的有效办法之一。     

不同冻存液对人羊膜间充质干细胞-80 ℃冻存与复苏效果的影响

目的:观察不同冻存液对人羊膜间充质干细胞冻存复苏后的存活率及再培养情况的影响,并探索简单有效的冻存与复苏方法.方法:将含有血清培养基短期体外培养的人羊膜间充质干细胞分为4组,分别加入不同冻存液(体积分数):A组10%二甲基亚砜 40%胎牛血清 50%DMEM/F12,B组10%二甲基亚砜 90%胎牛血清,C组5%二甲基亚砜 4.5%羟乙基淀粉 20%胎牛血清 70.5%DMEM/F12,D组10%胎牛血清 90%DMEM/F12.以相同方法冻存并复苏细胞,比较4组细胞回收率及再培养情况.结果:A、C 2组细胞复苏后回收率高于另外2组(P均<0.05),且于复苏后再培养24 h内出现较多贴壁细胞.结论:以5%二甲基亚砜 4.5%羟乙基淀粉 20%胎牛血清 70.5%DMEM/F12作冻存液冻存羊膜间充质干细胞效果好.     

校园体育文化建设的现状及其发展对策

就校园体育文化的内涵及校园体育文化建设的现状进行梳理与分析,并针对目前校园体育文化的现状 提出了相应的发展对策。     

加强医院细节文化建设的对策

加强医院细节文化建设,应注意制度建设和创新,注重各项规章制度及行为规范的落实;对医务人员的细节文化培训,完善年轻医生规范化培训制度;改善医生执业环境,关注医生心理调控;完善医学人才选拔、淘汰和培养机制等。此外,还要注意对患者开展健康教育、医疗卫生政策与法律教育。     

南通城市文化特色研究

城市文化是地域文化的集中表现，地域(区域)文化构成民族文化的多样性。民族文化是文化国力生生不息的源泉，发掘、研究、彰显城市文化特色是探索“中国特色城镇化道路”的重大课题。独特的“江海文化”孕育和发展了南通城市，江海文化的杰出代表张謇营造“南通——中国近代第一城”，铸就了令世人瞩目的南通近代辉煌。南通在新世纪要获得更大的发展必须承传历史文脉，加强文化的自觉意识，彰显自己的城市文化特色。     

中西方体育文化的比较

阐述了中国传统文化与体育的关系、西方文化与体育的关系,分析了中西方体育文化的差异及其互补性。     

细胞培养技术的研究进展

随着现代科学的发展,体外细胞培养技术已成为多个领域必不可少的研究工具,并且其新技术和方法也在不断涌现。本文就细胞培养技术的发展、支架材料以及细胞培养的影响因素作一综述。     

浅谈建立合作文化的方式与途径简

合作文化是医院文化建设的重要组成部分,是医院团队精神的体现,也是医院在实际工作中的价值观、信念和行为准则。在深化医药卫生体制改革过程中,合作文化在医院文化建设中尤其重要,如何通过团结互助的合作文化提高管理水平,提升医院业务能力,缓解医患矛盾,凝练医院文化,建设和谐医患关系,发挥合作文化的作用成为医院文化中共同探讨的话题。     

双相血培养瓶临床应用探讨

目的 :评价Hemoline双相血培养瓶临床应用情况。方法 :采用Hemoline双相血培养瓶对4 16份血标本进行培养 ,就检出阳性率、菌种分布及阳性检出时间进行评估。结果 :4 16份血标本分离出 72株病原菌 ,阳性检出率 17.3% ;菌种分布于葡萄球菌属、链球菌属、肠球菌属、肠杆菌科、非发酵菌、真菌等 16个属 2 1种 ;阳性检出时间多数集中在 2 4～ 72h、<2 4h阳性检出率达 8.4 %、>72h阳性检出率为 6 .9%。结论 :使用Hemoline双相血培养瓶提高了阳性率 ,缩短了培养时间 ,并且检出种类多、范围广 ,而且操作简便 ,结果准确 ,由其替代传统的血培养瓶是切实可行的 ,值得推广使用     

无血清培养基中成釉细胞瘤细胞的生长特性

 【目的】 研究成釉细胞瘤细胞在无血清培养基中的生长特性，建立成釉细胞瘤细胞的无血清培养法。【方法】 用Defined Keratinocyte-SFM（DK-SFM）无血清培养基和DMEM培养成釉细胞瘤细胞，观察细胞的生长特性、细胞形态和传代次数，流式细胞仪（FCM）测定S期细胞比率（SPF）和增殖指数（PI）。【结果】在DK-SFM培养基中，细胞传代6次，平均生长92d；细胞形态清晰，仅见少许散在的成纤维细胞生长：SPF值为12．3％～14．5％，PI值为11．6％～15．3％。在DMEM中，细胞传代3次，平均生长61d；细胞境界不清．并可见较多的成纤维细胞；SPF值为7．9％～9．2％，PI值为8．3％～9．6％。【结论】成釉细胞瘤细胞在DK-SFM无血清培养基中存活时间长，DK-SFM较DMEM更适合体外培养成釉细胞瘤细胞。     

无血清培养基中成釉细胞瘤细胞的生长特性

【目的】 研究成釉细胞瘤细胞在无血清培养基中的生长特性，建立成釉细胞瘤细胞的无血清培养法。【方法】 用Defined Keratinocyte-SFM（DK-SFM）无血清培养基和DMEM培养成釉细胞瘤细胞，观察细胞的生长特性、细胞形态和传代次数，流式细胞仪（FCM）测定S期细胞比率（SPF）和增殖指数（PI）。【结果】在DK-SFM培养基中，细胞传代6次，平均生长92d；细胞形态清晰，仅见少许散在的成纤维细胞生长：SPF值为12．3％～14．5％，PI值为11．6％～15．3％。在DMEM中，细胞传代3次，平均生长61d；细胞境界不清．并可见较多的成纤维细胞；SPF值为7．9％～9．2％，PI值为8．3％～9．6％。【结论】成釉细胞瘤细胞在DK-SFM无血清培养基中存活时间长，DK-SFM较DMEM更适合体外培养成釉细胞瘤细胞。     

医院文化建设要有文化特色

结合弋矶山医院文化建设实践,探讨了如何建设有个性、有特色的医院文化。一是要认清院情、人才和使命;二是要通过绿色医院和人文关爱体现医院文化特色;三是通过营造文化氛围、发挥文化力量、实践文化使命来推进医院文化特色建设。