凋亡素在体外对人卵巢癌细胞及正常卵巢细胞凋亡的影响

目的　探讨凋亡素基因 (VP3)表达对人卵巢癌细胞和正常卵巢细胞凋亡的影响。方法　采用LipofectamineTM2 0 0 0介导的基因转染方法将重组凋亡素真核表达质粒pcDNA3.1 -VP3 导入仓鼠正常卵巢细胞CHO -K1、人卵巢癌细胞CoC1及人卵巢癌细胞耐药亚株CoC1 DDP。结果　凋亡素基因已在转染细胞中存在并在转录水平表达 ;CHO -K1中凋亡素组与空质粒组凋亡率差异无显著性 (P >0 .0 5 )。CoC1和CoC1 DDP中 ,凋亡素组凋亡率明显高于空白对照组和空质粒组 (P <0 .0 1 ) ,且凋亡素更易诱导CoC1 DDP细胞凋亡 (P <0 .0 1 )。结论　在转染细胞中凋亡素基因在转录水平得到表达 ;凋亡素能特异性诱导人卵巢癌细胞CoC1及人卵巢癌细胞顺铂耐药亚株CoC1 DDP凋亡 ,不影响正常卵巢细胞CHO -K1 ;凋亡素更易诱导卵巢癌顺铂耐药亚株CoC1 DDP细胞的凋亡     

siRNA抑制survivin的表达诱导人卵巢癌SKOV-3细胞凋亡的研究

目的筛选能有效抑制survivin基因表达的小干扰RNA(siRNA),探讨survivin基因抑制对人卵巢癌SKOV-3细胞凋亡的影响。方法设计3段survivin siRNA靶位点,用PCR扩增siRNA表达框,与survivin-绿色荧光蛋白融合基因表达质粒共转染293T细胞,再构建有效siRNA的表达载体,转染卵巢癌SKOV-3细胞,分析sur-vivin基因的表达及细胞凋亡情况。结果筛选出了1段能高效抑制survivin表达的siRNA,能显著下调SKOV-3细胞内的survivin表达,并导致SKOV-3细胞凋亡。结论利用RNA干扰能有效抑制survivin基因表达并诱导人卵巢癌SKOV-3细胞凋亡,为进一步的靶向survivin分子的体内抗肿瘤研究奠定了基础。     

肝癌临床发展与cyclin D1表达DNA含量及细胞凋亡发生的关系

Cyclin D1基因是近年来提出的重要原癌基因,其基因表达产物在细胞周期关键限速点G1-S转换中起重要正调控作用[1].此外,细胞凋亡的发生及细胞增殖在肝癌的发生发展中也起重要作用[2,3].本研究通过检测cyclin D1表达、细胞凋亡发生和细胞DNA含量,探讨三者与肝癌临床分期之间的关系,为寻找对临床有价值的肿瘤标记物和预后判断提供帮助.     

高三尖杉酯碱诱导白血病细胞凋亡与人端粒酶逆转录酶及端粒酶的关系

目的 研究高三尖杉酯碱(HHT)诱导白血病细胞调亡与细胞端粒酶和端粒酶逆转录酶(hTERT)水平的关系。方法 在体外，以HL60细胞株细胞为对象，采用半定量RT—PCR法检测hTERT mRNA表达量；采用端粒重复序列扩增法(TRAP)—酶联免疫吸附试验(ELISA)检测端粒酶活性；采用TUNEL法检测凋亡细胞。结果 与空白对照相比，HHT能够下调hTERT mRNA的表达。HHT浓度为0．005—0．030μg／m1时，HL60细胞hTERT mRNA表达无明显变化；当浓度增至0．040—0．050μg／m1，hTERT mRNA表达量下降至检测不出。0．020μg／m1 HHT作用18h后，hTERT mRNA表达呈下降趋势，24h后端粒酶活性明显下降，两者的下降趋势基本相似，但hTERT mRNA表达下降幅度较端粒酶活性下降幅度更大。在HHT作用下，HL60细胞凋亡率增加，而端粒酶活性及hTERT mRNA水平下降，且与HHT浓度或作用时间相关。结论 HHT下调端粒酶活性可能与hTERT mRNA转录水平下降有关。通过下降hTERT mRNA转录和端粒酶活性可能是HHT诱导HL60细胞凋亡的原因之一。     

食管鳞状细胞癌TE-13细胞线粒体DNA及细胞凋亡检测

目的:检测人食管鳞状细胞癌TE-13细胞中线粒体DNA(mtDNA)与细胞凋亡的发生情况及可能的关系。方法:TE-13细胞分为2组:溴化乙啶(EB)处理组在细胞培养液中加入50mg/LEB,未处理组常规培养;在培养第4、8和12天分别利用半定量RT-PCR检测2组细胞mtDNA的表达,利用流式细胞术检测细胞的凋亡情况。结果:EB处理组的第4天和第8天mtDNA的表达量分别为(0.467±0.031)和(0.197±0.015),到第12天mtDNA已完全丢失,未处理组分别为(0.660±0.046)、(0.673±0.031)和(0.653±0.021),差异有统计学意义(F组间=1133.878,F时间=109.058,F交互=104.597;P<0.001)。流式细胞术检测结果显示,EB处理组凋亡细胞百分比高于未处理组(F组间=2773.035,F时间=407.652,F交互=406.641;P<0.001)。结论:抑制TE-13细胞中mtDNA的复制可能会促进细胞凋亡。     

卵巢癌细胞凋亡和细胞倍性与p53基因突变的关系

目的了解Ｐ５３基因突变、细胞倍性、细胞凋亡三者的关系,探讨突变型Ｐ５３基因在肿瘤发生中的作用机制。方法应用ＰＣＲ－ＳＳＣＰ检测２０例正常卵巢组织、２０例良性卵巢肿瘤、４５例恶性卵巢癌（其中肿瘤未转移组２０例,肿瘤转移组２５例）患者的Ｐ５３基因突变,流式细胞仪Ｆａｃｓｃａｎ检测卵巢癌细胞染色体倍性,凋亡率及其在细胞周期各相中的分布情况。结果卵巢癌转移组的Ｐ５３基因突变率为６０％,未转移组为４０％（Ｐ     

三氧化二砷诱导人卵巢癌细胞凋亡及对线粒体的影响

目的 研究三氧化二砷(As2O3)诱导人卵巢癌细胞凋亡中是否发生线粒体系统和Bcl-2蛋白表达的改变,探讨As2O3诱导凋亡的可能引发机制.方法 采用光镜、电镜和流式细胞术等技术,观察细胞凋亡、线粒体超微结构改变及检测线粒体跨膜电位(Δψm).结果 As2O3可诱导卵巢癌细胞凋亡,具有剂量依赖性和细胞株类型差异性;不同浓度As2O3均可诱导SKOV3、3AO细胞Δψm的降低,且随浓度升高,下降愈明显;电镜观察到As2O3作用SKOV3、3AO 72 h后,线粒体明显肿胀,内嵴消失,基质电子密度降低.免疫荧光染色显示As2O3能抑制SKOV3、3AO细胞的Bcl-2蛋白表达.结论 线粒体Δψm的下降和Bcl-2蛋白表达的抑制,是As2O3诱导细胞凋亡的重要环节.     

基底细胞癌中细胞凋亡和细胞增殖的关系

本文利用原位末端转移酶法和免疫组织化学技术分别检测基底细胞癌(ＢＳ)中细胞凋亡和细胞增殖与ＢＳ发生及其生物学行为的关系。1　材料与方法1.1　材料收集本院和湘雅医院病理科1995～1999年活检ＢＳ标本41例,意外死亡病人的正常皮肤组织8例。所有组织均经10%福尔马林固?..     

循环肿瘤DNA在上皮性卵巢癌诊断及预后评估中的应用

循环肿瘤DNA作为一种可以检测和量化肿瘤突变的观察指标在肿瘤的临床诊疗中的作用越来越突出。在卵巢癌的组织学分型中,上皮性卵巢癌占绝大多数。随着肿瘤的演进,肿瘤细胞内的DNA片段可进入血液循环,形成循环肿瘤DNA,其在上皮性卵巢癌的早期诊断、手术及辅助治疗的疗效判定、肿瘤负荷的评价、随访期的动态监测及预后分析等方面,均有一定的临床应用价值。     

JNK信号通路与细胞凋亡

肿瘤耐药的分子机制很复杂,包括染色体和基因表达的异常,细胞内药物蓄积减少,DNA损伤修复功能增强,细胞解毒功能增强,凋亡信号传导异常、凋亡抑制因子表达异常等。其中凋亡及生存相关的细胞信号通路是目前研究的热点。丝裂原活化蛋白激酶（mitogen activated-protein kinase,MAPK）信号通路是其中一条引人注目的通路。本文综述了MAPK信号通路中的一条重要通路c-Jun氨基末端激酶（c-Jun N-terminal kinases,JNK）信号通路,JNK信号通路与细胞凋亡的关系,以及其与肿瘤耐药相关的研究。     

大鼠高胆红素血症与海马神经细胞凋亡关系的实验研究

目的探讨高胆红素血症新生大鼠海马区Fas蛋白、N-甲基-D-天冬氨酸(NMDA)受体的表达、神经细胞凋亡率及其相关性，以进一步阐明胆红素的神经毒性机制。方法通过制作高胆红素血症动物模型，采用免疫组化法、TUNEL法及流式细胞术检测大鼠海马区Fas蛋白、NMDA受体的表达率及神经细胞的凋亡率，并探讨其问相关性。结果高胆红素血症时，海马区神经组织，Fas蛋白、NMDA受体表达率及神经细胞凋亡率明显增高，且与脑组织胆红素浓度呈正相关。结论高胆红素血症时，胆红索可通过NMDA受体过度活化和Fas系统的参与，传递凋亡信号，介导胆红素神经毒性的发生，导致神经细胞凋亡。     

压力应激动物模型在肿瘤中的应用和研究现状

目的就各类压力应激荷瘤动物模型的造模方法进行综述,对其特点进行评述,并分析了压力应激在肿瘤发生发展中的作用机制。方法应用计算机检索PubMed数据库(2000/2013),以"stress,animal model,tumor"为检索词;检索中国知识资源总库(2000～2013)、重庆维普数据库(2000～2013)、万方数据库(2000～2013)三大中文期刊数据库,以"应激,动物模型,肿瘤"为检索词。文章所述内容需与应激动物模型的建立、应用、评价,及压力应激与肿瘤的关系等方面研究密切相关,排除重复性研究。结果共收集596篇关于应激动物模型的文献,中文156篇,英文440篇。阅读标题和摘要进行初筛,排除发表时间较早、重复及类似的研究,纳入30篇符合标准的文献。结论压力应激与肿瘤研究领域为进一步从抗焦虑、抑郁等角度筛选抗肿瘤药物提供参考。     

肿瘤细胞凋亡与食管鳞癌发生发展的关系及意义

目的 :通过测定肿瘤细胞凋亡的数量 ,证明凋亡细胞与食管癌发生发展的关系和意义。方法 :利用TUNEL技术进行凋亡细胞测定。结果 :凋亡指数在食管细胞的癌变过程中逐步增加 ,但在癌症的进展中逐步减少。结论 :通过凋亡细胞的指数检测 ,结果证明细胞凋亡在食管鳞状上皮癌发生发展中起着重要的作用     

食管鳞癌患者血浆cfDNA水平与新辅助化疗和临床病理特征的关系

目的探讨食管鳞癌患者血浆游离DNA(cfDNA)水平与新辅助化疗和临床病理特征的关系。方法收集2015年1—3月在郑州大学附属肿瘤医院(河南省肿瘤医院)胸外科一病区接受手术治疗的30例食管鳞癌患者的临床资料,从生物样本库调取其相应的血浆样本,测定血浆cfDNA水平。分析患者初诊时血浆cfDNA水平和临床病理特征的相关性,以及患者初诊时和新辅助化疗后血浆cfDNA水平。结果食管鳞癌患者初诊时血浆cfDNA水平与年龄、性别、吸烟史、饮酒史、肿瘤家族史、肿瘤位置、肿瘤分期、分化程度、T分期、N分期无关(均P>0.05)。大肿瘤组(肿瘤体积>17.5 cm~3)血浆cfDNA水平高于小肿瘤组(肿瘤体积≤17.5 cm~3),差异有统计学意义(P<0.05)。cfDNA水平与肿瘤体积呈正相关(r=0.381,P<0.05)。根据疗效将14例接受新辅助化疗的患者分为化疗有效组和化疗无效组,各7例。化疗有效组新辅助化疗2个周期后血浆cfDNA水平低于初诊时,差异有统计学意义(P<0.05)。化疗无效组患者新辅助化疗2个周期后血浆cfDNA水平与初诊时比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论食管鳞癌患者血浆cfDNA水平能够间接反映体内瘤负荷。血浆cfDNA水平随肿瘤体积的缩小而降低,可被作为食管鳞癌新辅助化疗后肿瘤负荷的生物学标志物。     

膀胱癌肿瘤血管生成与肿瘤细胞凋亡和增殖的关系

目的:探讨膀胱癌组织中微血管密度(MVD)与肿瘤细胞凋亡和增殖的关系.方法:应用S-P法对64例膀胱癌组织中血管内皮细胞的第Ⅷ因子抗原和ki-67抗原进行染色,计数肿瘤的微血管教及ki-67标记指数(LI);应用TUNEL法检测膀胱癌细胞凋亡状态.结果:MVD在不同病理分期和细胞学分级上有显著差异(P<0.05),且随着病理分期和组织学分级的增高而增高(P<0.05).MVD与凋亡指数(AI)呈负相关(P<0.001),与ki-67LI无关(P<0.05).结论:膀胱癌肿瘤血管生成与膀胱癌浸润、转移密切相关;血管生成可以抑制肿瘤细胞的凋亡,促进肿瘤的恶性进展.     

胃癌细胞凋亡与胃癌患者临床预后的关系

目的 研究胃癌组织中自发性细胞凋亡的发生情况及其与胃癌临订病理参数和胃癌患者预后的关系。方法 采用脱氧核糖酸末端转移酶介导的ｄＵＴＰ缺口末端标记（ＴＵＮＥＬ）技术对５３例有随访结果的胃癌组织中的凋亡细胞进行原位观察和比较。结果 胃癌组织自发性细胞凋亡指数平均为５．７６％。细胞凋亡指数与胃癌患者年龄、性别、肿瘤大小、浸润深度无明显关系,与胃癌细胞分化程度、淋巴结转移及临床分期有关,高、中分化腺癌凋亡     

膀胱移行细胞癌P-gp170表达与细胞凋亡的关系

目的 探讨原发性膀胱移行细胞癌P－糖蛋白（P－gp170)表达与细胞凋亡的关系。方法 用免疫组化SP方法和凋亡细胞原位标记（TUNEL）检测了40例膀胱移行细胞癌P－gp170表达和细胞凋亡，并应用图像分析系统定量分析其凋亡指数（AI）。结果 40例膀胱移行细胞癌P－gp170表达率为48％，细胞学分级之间无显著性差异（P＞0．05）；AI随组织学分级增高而增高，各分级之间有显著性差异（P＜0．05）；AI在膀胱移行细胞癌P－gp170阳性表达组明显低于P－gp170阴性表达组，有显著性差异（P＜0．01）。结论 原发性膀胱移行细胞癌P－gp170高表达可能抑制细胞凋亡过程致AI降低。     

兔原发性甲状旁腺机能亢进甲状旁腺细胞增生与凋亡的相关性

目的 探讨兔甲状旁腺细胞增殖与凋亡在原发性甲状旁腺机能亢进症(PHPT)发病机制中的作用.方法 健康成年中国白兔80只,随机分成两组,对照组40只以正常饮食(Ca:P,1:0.7)喂养,实验组40只以高磷饮食(Ca:P,1:7)喂养诱发原发性甲状旁腺机能亢进动物模型.在第3、4、5、6个月动物死亡后,分别对实验组和对照组动物行甲状旁腺细胞计数,同时采用免疫组织化学法观察腺体增殖细胞核抗原(PCNA)和Bcl-2的表达及采用DNA片段末端标记作细胞凋亡的定量检测,并与对照组正常腺体作对照研究.结果 PHPT组腺体细胞计数(个/高倍视野)是正常对照组的1.61倍(分别为673±151与418±25,t=12.112,P＜0 01);PHPT组凋亡指数明显高于对照组(分别为200.2±125.6与11.0±3.0,t=-10 193,P＜0.01);PHPT组腺体细胞PCNA阳性率(50.5‰±11.6‰)显著高于对照组(26 7‰±2.8‰)(t=-13 120,P＜0 01),Bcl-2表达(460‰±190‰)显著高于对照组(67‰±4‰)(t=-14.120,P＜0.01);PCNA和Bcl-2表达与腺体细胞凋亡指数均呈正相关(r值分别为0.861和0.871,P＜0.05).结论 甲状旁腺细胞增生与凋亡失衡可能是导致PHPT发生的主要原因.

Abstract：

Objective To evaluate the effect of proliferation and apoptosis of parathyroid cell in rabbits with primary hyperparathyroidism (PHPT) . Methods A total of 80 adult Chinese rabbits were randomly divided into two groups (n=40 each) . The control group was fed with a normal diet (Ca: P,1:0.7) while the experimental group a high phosphate diet (Ga: P, 1: 7) for3-,4- ,5-, or 6-month intervals to establish the animal model of PHPT. The parathyroid was totally removed for pathological examination after all rabbits were sacrificed. The thyroparathyroid complex was removed en bloc, fixed in neutral formalin and prepared for histological examination. The number of parathyroid cell in PHPT was calculated. Proliferation was determined by immunohistochemistry of proliferation cell nuclear antigen (PCNA) while apoptosis assessed by in situ dUTP biotin nick-end labeling (TUNEL). Results The number of parathyroid cell was 1.61 times in PHPT than that in the normal control (673±151, 418 ±25, t=-12.112, P＜0.01).Apoptotic index (AI) increased significantly more in PHPT than that in normal control (200.2‰±125.6‰, 11.0‰±3.0‰, t=-10.193, P＜0.01). The rate of PCNA positive-cell increased significantly more in PHPT than that in control (50.5%＞±11.6‰, 26.7‰±2.8‰,t=-13.120, P＜0.05).So did Bcl-2 (460‰±190‰, 67‰±4‰, t=-14.120,P＜0.05). There was a positive correlation between AI and PCNA (r=0.861, P＜0.05). It was the same as between AI and Bcl-2 (r=0.871, P＜0.05). The value of bone mineral density decreased significantly more in PHPT than that in normal control (152±34,189±12, t=9.236, P＜0.05). Conclusion PHPT may be mainly induced by an excessive proliferation of parathyroid cells and an acceleration of apoptotic process.     

胃癌组织中Angiopoietin-2、TRAIL与凋亡关系的研究

目的研究血管生成素-2(Angiopoietin-2)、肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TNF related apoptosis indueing ligand,TRAIL)在胃癌组织中的表达,探讨二者与细胞凋亡的关系.方法应用免疫组化技术检测67例胃腺癌组织中及相对应的正常胃黏膜中Angiopoietin-2、TRAIL蛋白的表达,用原位末端标记(TUNEL)技术检测癌组织中的凋亡指数(AI).结果angiopoietin-2在胃癌组织中明显表达(52.39%),而在癌旁正常黏膜呈弱表达(7.46%),低分化癌的angiopoietin-2的表达水平高于中高分化癌,有淋巴结转移者的angiopoietin-2的表达高于无淋巴结转移者(P均<0.05).TRAIL在正常胃黏膜中的阳性表达率97.01%高于癌组织中的阳性表达率47.76%(P<0.05);TRAIL蛋白的表达与肿瘤的分化程度有关,分化程度越低,TRAIL的表达率越低(P<0.05),TRAIL蛋白表达与胃癌的直径、部位、大体分型,浸润深度及有无淋巴结转移及患者的年龄、性别无关(P>0.05).胃癌组织中细胞凋亡指数为1.85±0.66.angiopoietin-2蛋白表达阳性组与阴性组、TRAIL蛋白阳性组与阴性组中凋亡指数分别存在着显著性差异(P<0.05);Angiopoietin-2与TRAIL蛋白表达之间无明显的相关性(rs=0.112,P>0.05).结论Angiopoientin-2可抑制肿瘤细胞凋亡,促进肿瘤的恶性进展;TRAIL可诱导胃癌细胞发生凋亡.