反义PCNA与反义bcl-2脱氧寡核苷酸抑制人视网膜色素上皮生长

目的　观察反义增生细胞核抗原 (PCNA)和反义 bcl-2脱氧寡核苷酸对培养的人视网膜色素上皮细胞 (RPE)生长的作用 .方法　用 DNA合成仪合成有 1 8个核苷酸的反义PCNA和 1 5个核苷酸的反义 bcl- 2脱氧寡核苷酸片段 ,以不同浓度加入 RPE培养液 ,培养 2～ 4d,用 SABC法检测细胞PCNA和 bcl- 2的表达 ,用 MTT法及流式细胞仪测定细胞抑制率 .结果　 6 .2 5～ 1 0 0μm ol· L- 1 的反义 PCNA对 RPE的抑制率为 8.3%～ 38.4% ,呈剂量依赖性 ,并抑制细胞 PCNA的表达 .反义 bcl- 2未显示抑制作用 .结论　反义 PCNA脱氧寡核苷酸可抑制近 40 %的 RPE生长 ,其临床应用值得进一步研究     

脂质体介导Bcl-2反义寡核苷酸对胆管癌细胞株QBC939的作用

目的：观察Bcl-2反义硫代磷酸寡脱氧核苷酸（ASODN）对人胆管癌QBC939细胞的作用及对Bcl-2蛋白表达的影响。方法：脂质体LipofectamineTM2000介导Bcl-2 ASODN转染QBC939细胞,应用台盼篮拒染实验检测细胞存活率、克隆形成实验检测克隆形成率、Western blot检测Bcl-2蛋白表达。结果：Bcl-2 ASODN转染后Bcl-2蛋白免疫印迹条带光密度显著低于对照组（P<0.01）;台盼篮拒染实验和克隆形成实验均显示Bcl-2 ASODN可以部分抑制QBC939细胞增殖,经ASODN作用,细胞的存活率和克隆形成率均显著低于对照组（P<0.05）。结论：Bcl-2 ASODN通过封闭人胆管癌QBC939细胞bcl-2基因表达抑制人胆管癌QBC939细胞的增殖。     

脂质体包裹TGF-α反义脱氧寡核苷酸抑制人大肠癌细胞的增殖

目的 研究用转化生长因子α（TGF-α）反义脱氧寡核苷酸（ASODN）对人大肠癌细胞株HR8348生长增殖的作用,探讨大肠癌治疗的新途径。方法 采用人工全盛的TGF-α反义及无关对照ODN经阳离子脂质体包裹后转染人大肠癌HR8348细胞,采用MTT法,[^3H]-TdR掺入实验。细胞周期分析,裸鼠体内接种等方法测定瘤细胞体内外增殖的变化。结果 经TGF-α反义ODN处理的HR8348细胞与对照组HR8348细胞相比,体外增殖速度减慢（细胞增殖抑制率达71%）,DNA合成受抑,裸鼠体内成瘤率下降（25%vs100%)。结论 TNF-α反义ODN能有效抑制大肠癌细胞的体内外生长增殖,可用于实验性肿瘤基因治疗研究。     

bcl-2反义寡核苷酸对膀胱癌BIU87细胞株的影响

目的:探讨bcl-2反义寡核苷酸对培养的膀胱癌BIU87细胞株的影响.方法:采用bcl-2基因第1外显子的反义寡核苷酸,以硫代磷酸修饰(PS-ASON),序列为5′-TCTCCCAGCGTGCGCCAT-3′,与膀胱癌细胞株BIU87共同孵育作为实验组.加入正义的bcl-2寡核苷酸,序列为5′-TACCGCGTGCGACCCTCT-3′(PS-SON)作为对照组,用流式细胞仪检测细胞凋亡和坏死率,电镜观察细胞形态变化.结果:与对照组相比,实验组的细胞坏死率明显上调,电镜下细胞形态呈坏死改变.结论:bcl-2的反义寡核苷酸引起膀胱癌细胞大量坏死,可能成为膀胱癌的治疗方法之一.     

c-erbB2反义寡核苷酸对人卵巢癌细胞放射敏感性的影响

目的 :探讨癌基因c -erbB2的反义寡苷酸对人卵巢癌细胞放射敏感性的影响。方法 :设立c -erbB2正义寡核苷酸组和非处理组作对照 ,用RT -PCR检测卵巢癌细胞处理前后c -erbB2表达水平的变化。用MTT法及平板克隆形成试验检测人卵巢癌细胞株SKOV3在脂质体c-erbB2反义寡核苷酸作用前后受60 Coγ射线不同剂量照射后的细胞存活分数和集落形成率。结果 :c -erbB2反义寡核苷酸能抑制c-erbB2癌基因的表达 ,经脂质体介导的c-erbB2反义寡核苷酸作用的卵巢癌细胞经γ射线照射后其存活分数和集落形成率较转染正义寡核苷酸组及单纯照射组明显下降 (P <0 .0 1) ,而转染c -erbB2正义寡核苷酸组的存活分数和集落形成率与单纯照射组相比无明显差异 (P >0 .0 5 )。结论 :c -erbB2反义寡核苷酸通过抑制c -erbB2的表达降低人卵巢癌细胞株SKOV3放射抗拒性。该作用可能与c-erbB2反义寡核苷酸抑制了引起细胞辐射抗拒的细胞信号转导途径有关。     

c-raf-1反义寡核苷酸转染对人卵巢癌SKOV3细胞增殖的抑制作用

目的：探讨c-raf-1基因反义寡核苷酸转染对人卵巢癌SKOV，细胞增殖的抑制作用及其分子机制。方法：实验分3组：正常对照组、c-raf-1正义治疗组、c-raf-1反义治疗组。脂质体转染后不同时间分别进行MTT试验、集落形成试验、荧光显微镜检测、蛋白质荧光强度测定，以观察不同条件处理后各组细胞的增殖、凋亡、蛋白质表达有无差别。结果：反义治疗组与正义治疗组比较：转染72h OD值分别0．272与1．307（P〈0．05）；克隆形成率分别为30．6％与75．0％（P〈0．05）；凋亡率分别为19．7％与9．2％（P〈0．05），同时明显地下调P74蛋白质的表达水平（P〈0．05）。结论：c-raf-1反义寡核苷酸对人卵巢癌SKOV，细胞的增殖有明显的抑制作用。     

阳离子脂质体介导提高反义寡聚脱氧核苷酸转染卵巢癌细胞株SKOV3／mdr1的效率

多药耐药基因（MDRI）编码的P－糖蛋白（Pgp,P-170)是导致卵巢癌化疗失败的重要原因之一。本研究将针对MDR1基因的硫代反义寡聚脱氧核苷酸导入卵巢癌耐药细胞株SKOV3．mdr1,观察其对该细胞株P170表达的影响。反义寡聚脱氧核苷酸（MDR1－AS）通过阳离子脂质体介导或单纯转染的方式导入SKOV3／mdr1细胞,将正义寡聚脱氧核苷酸（MDR1－S）同样导入细胞为对照。经以旨质体介导的1．6μmol/LMDR1-AS转染后,Pgp阳性的细胞百分数从100％降至48．7％,经过16μmol/L和10μmol/L两个浓度的单纯MDR1－AS转当柏,Pgp阳性细胞的百分数也从100％分别降至52．6％和86．7％,因此,通过阳离子脂质体介导可大大提高反义寡核苷酸转染的效率。     

bcl-2-反义寡核苷酸对卵巢癌顺铂耐药细胞株的耐药逆转作用

目的：探讨bcl-2—反义寡核苷酸(bck-2—AODN)对卵巢癌顺铂(DDP)耐药细胞耐药性的逆转作用。方法：以卵巢癌顺铂耐药细胞株A2780/DDP为模型,用脂质体转染的方法,将bck-2-AODN转染A2780/DDP细胞,同时以转染bcl-2正义链(bcl-2-SODN)作对照。采用DNA凝胶电泳检测转染后是否诱导细胞出现凋亡,应用免疫组织化学技术检测Bcl—2蛋白表达变化,RL-PCR检测Bcl—2mRNA表达水平的变化。MTT法检测细胞抑制率与药物半数抑制浓度。结果：脂质体转染bcl-2反义寡核苷酸12h后,倒置显微镜下即可见A2780/DDP有40％细胞出现变化,收集细胞检测,bcl-2蛋白表达降低;实验组bcl—2mRNA表达水平与转染前相比,基因扩增条带亮度明显减弱,mRNA表达率下降(P＜0．05);DNA凝胶电泳出现梯带状条带;细胞药物半数抑制浓度下降(P＜0．05)。结论：bcl-2-AODN可通过增加细胞的凋亡而一定程度地逆转卵巢癌细胞的顺铂耐药性,提高卵巢癌细胞对化学治疗药物的敏感性。     

阳离子脂质体介导提高反义寡聚脱氧核苷酸转染卵巢癌细胞株SKOV3/mdr1的效率

多药耐药基因(MDR1)编码的P-糖蛋白(Pgp,P-170)是导致卵巢癌化疗失败的重要原因之一.本研究将针对MDR1基因的硫代反义寡聚脱氧核苷酸导入卵巢癌耐药细胞株SKOV3/mdr1,观察其对该细胞株P170表达的影响.反义寡聚脱氧核苷酸(MDR1-AS)通过阳离子脂质体介导或单纯转染的方式导入SKOV3/mdr1细胞,将正义寡聚脱氧核苷酸(MDR1-S)同样导入细胞为对照.经以脂质体介导的1.6μmol/LMDR1-AS转染后,PgP阳性的细胞百分数从100%降至48.7%,经过16μmol/L和10μmol/L两个浓度的单纯MDR1-AS转染后,Pgp阳性细胞的百分数也从100%分别降至52.6%和86.7%.因此,通过阳离子脂质体介导可大大提高反义寡核苷酸转染的效率.     

脂质体介导c-myc反义寡核苷酸诱导HeLa细胞凋亡的实验研究

目的体外研究C-MYC反义寡核苷酸(ASODN)对人宫颈癌HELA细胞凋亡的影响,寻求提高肿瘤细胞放射敏感性的方法。方法免疫组化、流式细胞术、半定量RT-PCR法鉴定ASODN的有效性;GIEMSA染色、流式细胞术检测凋亡指数(AI)、DNA LADDER检测细胞凋亡。结果转染后,免疫组化结果显示C-MYC蛋白表达降低;半定量RT-PCR结果显示C-MYC MRNA表达较空白对照组及阴性对照组明显减弱(P<0.05)。GIEMSA染色可见凋亡小体;流式细胞术结果显示转染后凋亡指数为(10.29±0.66)%,转染ASODN(C-MYC)联合放射的凋亡指数为(16.83±0.57)%,均明显高于空白对照组(1.79±0.19)%(P<0.05);DNA LADDER呈现具有凋亡特征的梯带。结论本实验所设计的ASODN能有效地抑制C-MYC基因的表达;转染ASODN(C-MYC)能够显著增加HELA细胞凋亡,从而提高肿瘤细胞的放射敏感性。     

Liposome-C-erbB2 antisense oligodoxynucleotides in human ovarian cancer cells

目的　探讨脂质体—硫代磷酸化修饰的C erbB2 反义脱氧寡核苷酸 (C erbB2 antisensephosphorothioatedoligodeoxynucleotides ,C erbB2 S ODNs)对卵巢癌细胞系C erbB2 癌基因表达及细胞增殖的影响。方法　采用流式细胞仪技术 ,3 H TdR掺入方法了解脂质体—C erbB2 S ODNs对卵巢癌细胞系SKOV3 C erbB2 癌基因表达及细胞生长 ,细胞周期的作用。结果　脂质体—C erbB2 S ODNs能降低C erbB2 的表达 ,并抑制细胞生长达 30 % ;脂质体—C erbB2 S ODNs较单用C erbB2 S ODNs的作用效率增强约 4 0倍。结论　C erbB2 癌基因的反义调控可能在卵巢癌基因治疗中有一定作用 ;脂质体能够有效地增强C erbB2 S ODNs的作用效率。     

bcl-2硫代反义寡核苷酸增强膀胱癌细胞对顺铂的敏感性

目的　研究凋亡抑制基因bcl 2硫代反义寡核苷酸 (S ODN)转染T2 4细胞后对顺铂药物敏感性影响。方法　将培养细胞分为 6组 :反义S ODN组 ,正义S ODN组 ,反义S ODN +顺铂组 ,正义S ODN +顺铂组 ,顺铂组和对照组。应用脂质体法介导bcl 2正义、反义S ODN转染T2 4细胞。通过免疫细胞化学方法观察细胞内BCL 2的蛋白表达 ,RT PCR方法检测细胞内bcl 2mR NA的相对表达量 ,MTT法测经顺铂 (cis platinum)处理的各组细胞的生成率 ,流式细胞仪 (FCM)检测细胞凋亡率。结果　bcl 2反义S ODN处理过的T2 4细胞中BCL 2蛋白和bcl 2mRNA表达明显下降。顺铂对反义S ODN组细胞的半抑制浓度 (IC50 )为 (2 .2 5± 0 .0 9) μg/ml显著低于正义S ODN组 (5 .83± 0 .15 ) μg/ml和对照组 (6 .11± 0 .2 1) μg/ml(P <0 .0 1)。顺铂处理反义S ODN组细胞的凋亡率显著高于其它组。结论　bcl 2反义S ODN能显著抑制T2 4细胞中BCL 2蛋白的表达并增强T2 4细胞对顺铂的药物敏感性     

阳离子脂质体Lipofectamine2000对人胰腺癌Capan-2细胞的毒性作用

目的 探讨阳离子脂质体Lipofectamine2000(Lipo)在一定浓度下对细胞毒性的作用机制.方法 应用一定毒性浓度的Lipo作用于胰腺癌Capan-2细胞,利用细胞直接记数法和流式细胞术检测其对Capan-2细胞生长、细胞凋亡和周期的影响.结果 Lipo与siRNA的浓度均影响转染率的高低.在2 ml转染体积中,Lipo在5μl的浓度下,使Capan-2细胞生长明显减慢,以第3天后更加明显(P<0.001).随着转染细胞按常规培养的时间延长,早期凋亡细胞明显增多(P<0.05),活性细胞明显减少(P<0.01),而损伤细胞和死亡细胞明显增多(P<0.001),以48 h后更明显:G0～G1期细胞明显增多(P<0.05),Gz-M期细胞明显减少(P相似文献   

CD147反义核酸对卵巢癌细胞生物学行为的影响

目的：研究经CD147反义RNA表达质粒载体转染建株的卵巢癌细胞系8910的生物学行为变化。方法：用CD147反义RNA表达质粒PCDNAasCD147转染人卵巢癌细胞系8910，克隆经筛选、鉴定后进行凝胶酶谱实验、肿瘤细胞侵袭力实验及动物实验。结果：CD147反义核酸转染的8910与空载体转染组相比，刺激成纤维细胞产生基质金属蛋白酶的能力下降，细胞侵袭力下降，荷瘤裸鼠成瘤力下降（P＜0．01）。结论：CD147反义核酸能抑制卵巢癌的转移和成瘤，因而有可能成为卵巢癌的治疗的药物靶点。     

chk2反义寡核苷酸对顺铂诱导卵巢癌SKOV-3细胞凋亡的影响

目的:观察卵巢癌SKOV-3细胞转染chk2反义寡核苷酸后在顺铂作用下细胞凋亡的变化.方法:用MTT法检测不同浓度顺铂对SKOV-3细胞的抑制率,Western Blot法检测SKOV-3细胞中Chk2蛋白的表达. 流式细胞仪及TUNEL法检测转染chk2反义寡核苷酸后顺铂作用下SKOV-3细胞凋亡情况.结果:顺铂对SKOV-3细胞的生长抑制率随浓度增高和时间延长而升高. Western Blot法检测证实转染chk2反义寡核苷酸后SKOV-3细胞中Chk2蛋白表达受到明显抑制. 流式细胞仪检测抑制chk2基因表达后SKOV-3细胞凋亡率为(77.6±1.7)%,明显高于正常组(24.7±1.76)%,空脂质体组(35.6±1.4)%及转染正义寡核苷酸细胞组(47.6±1.2)%. TUNEL法检测结果与流式细胞法一致.结论:chk2可作为卵巢癌增敏治疗的有效靶点.     

反义bcl-2寡核苷酸对半乳糖诱导的晶状体上皮细胞中Bcl-2蛋白及细胞周期的影响

目的:探讨反义bcl-2寡核苷酸(bcl-2 ASODN)对半乳糖诱导的兔晶状体中Bcl-2蛋白表达及细胞周期的影响.方法:人工合成与bcl-2基因翻译起始区序列互补的寡核苷酸并磷酸化修饰,用半乳糖和bcl-2 ASODN处理体外培养的兔晶状体,流式细胞术检测bcl-2 ASODN对半乳糖诱导的LEC中Bcl-2蛋白表达水平及细胞周期的影响.结果:5.0～15.0μmol/L反义bcl-2寡核苷酸能下调半乳糖诱导的晶状体上皮细胞中Bcl-2蛋白的表达,荧光强度从158.70±2.14降至113.94±2.88,同时可降低S期细胞数,从20.60%降至0.67%.结论:bcl-2 ASODN能抑制半乳糖诱导的晶状体中Bcl-2蛋白的表达水平,阻止细胞进入S期,抑制细胞增殖.     

血管内皮生长因子受体2反义寡核苷酸对人乳癌细胞生长的影响

目的:探讨血管内皮生长因子受体2(KDR)反义寡核苷酸(asONs)在体外对人乳癌细胞生长的抑制作用.方法:采用MTT及Western-blot方法检测4条KDR反义寡核苷酸(asON1、asON2、asON3、asON4)在体外对人乳癌细胞系MCF-7细胞增殖及KDR蛋白表达的抑制作用;asON4作用于MCF-7细胞后,Western-blot检测信号蛋白Bcl-2、Bax、P53表达的变化.结果:asON1、asON2、asON3、asON4在体外以剂量依赖方式抑制了MCF-7细胞的增殖,asON1、asON2、asON3、asON4以0.8 μmol/L剂量给药54 h后,均显著抑制了MCF-7细胞KDR蛋白表达.asON4作用54 h后,MCF-7细胞Bcl-2表达下降,Bax、P53的表达无明显改变.结论:KDR asONs在体外可抑制乳癌细胞的生长.     

紫杉醇体外对人卵巢癌细胞的影响

目的探讨国产紫杉醇体外对人卵巢癌HO8910细胞凋亡的作用。方法MTT染色法测定HO8910细胞的生长,用流式细胞仪观察凋亡及细胞周期的变化。结果紫杉醇与HO8910细胞抑制作用呈浓度依赖关系,IC50=16．66umol／L。人卵巢癌细胞在紫杉醇作用下,没有出现明显凋亡。细胞分裂阻滞在G2M期。结论紫杉醇能有效抑制HO8910细胞生长,但是没有引起细胞凋亡。     

转染反义Bcl-2对柔红霉素诱导人视网膜色素上皮细胞凋亡的影响

目的 :观察转染反义Bcl 2对柔红霉素诱导人视网膜色素上皮细胞 (RPE)凋亡的影响 .方法 :用Annexin V fluo ,琼脂糖凝胶电泳 ,TUNEL分别观察柔红霉素诱导正常RPE与转染反义Bcl 2的RPE的凋亡作用 .结果 :Annex in V fluo法在 4h即可检测到凋亡细胞膜的变化 ,琼脂糖凝胶电泳在 36h可检测到确切的梯状带纹 ,1 80 μg·L-1 柔红霉素作用 72h转染组与正常组凋亡指数分别为 0 .5 9和 0 .4 5 (P <0 .0 1 ) .结论 :转染反义Bcl 2可增加柔红霉素诱导的RPE凋亡的敏感性 .