虎杖醇提取物对体外诱导肝细胞脂肪变性的影响

目的:探讨虎杖醇提取物对体外诱导肝细胞脂肪变性的影响.方法:以人肝L-02细胞作为研究对象,用四环素建立肝细胞脂肪变性模型.将实验分为诱导组、继续诱导组、脱离诱导组,用油红O染色观察细胞形态和细胞内脂滴的形成情况,并测定细胞内三酰甘油(TG)含量的变化.结果:虎杖醇提取物(20～80μg/ml)可明显降低细胞内TG值,并呈剂量依赖性.结论:虎杖通过减少细胞内TG的生成从而阻止肝细胞脂肪变性.     

油酸诱导培养肝细胞脂肪变性模型的建立

目的 以人正常肝细胞株L-02 为实验材料,采用油酸诱导建立培养肝细胞脂肪变性模型.方法 将人肝细胞株L-02进行细胞培养,加入不同浓度的油酸,采用MTT法确定油酸诱导肝细胞脂肪变的最佳浓度,以油红O染色观察细胞内脂滴形成状况,并检测细胞内TG的含量及上清中的ALT、AST的水平.结果 用含20μg/ml油酸的1640培养基培养L-02肝细胞72h,光镜及电镜下见肝细胞内有典型的脂滴形成,肝细胞内TG含量显著升高; ALT及AST较对照组升高,差异有统计学意义(P＜0.01).结论 成功建立了油酸诱导培养肝细胞脂肪变性的模型.     

重组热休克蛋白72对体外培养大鼠肝细胞脂肪变性的影响

目的探讨重组热休克蛋白72（HSP72）对体外50％胎牛血清培养的大鼠肝细胞脂肪变性及肝细胞损伤的影响。方法sD大鼠肝细胞分4组培养。①对照组：DMEM培养液（不含血清）与多粘菌素B;②实验组1：对照组培养液中加50％胎牛血清;③实验组2：对照组培养液中加50％胎牛血清与重组HSP72;④实验组3：对照组培养液中加重组HSP72。动态检测各组肝细胞内甘油三酯（TG）含量、脂肪变性率及悬液中ALT、AST含量。SPSS11．5软件统计分析实验结果。结果对照组肝细胞内TG含量及悬液中AIJT、AST含量无显著变化（均P〉0．05）,肝细胞脂肪变性率为0。实验组1、2肝细胞脂肪变性明显,肝细胞内TG及悬液中ALT、AST含量较对照组均显著升高（均P〈0．01）,且与其它组比较实验组2变化更为显著（P〈0．01）;实验组3肝细胞内TG无明显变化（P〉0．05）,肝细胞脂肪变性率为0,但悬液中A¨、AST含量却较对照组有显著升高（均P〈0．01）。结论重组HSP72能导致肝细胞损伤,但不能诱导肝细胞脂肪变性;重组HSP72能加重50％胎牛血清所诱导的肝细胞脂肪变性及肝细胞损伤。     

p-JAK1/p-STAT3通路在蓝莓益生菌血清干预肝细胞脂肪变性中的作用

【摘要】 目的 建立体外肝细胞脂肪变性模型,探讨白介素-22（IL-22）调控的磷酸化酪氨酸蛋白激酶-1（p-JAK1）/磷酸化信号转导激活转录因子-3（p-STAT3）信号通路在蓝莓益生菌血清改善肝细胞脂肪变性实验中的作用机制。方法 制备蓝莓益生菌原液,并制备大鼠10%蓝莓益生菌低、中、高剂量血清及生理盐水血清。建立游离脂肪酸（FFA）诱导的正常肝细胞株L-02细胞脂肪变性模型,设立正常组,模型组,蓝莓益生菌低、中、高剂量血清组。定量检测细胞内三酰甘油（TG）含量;油红O染色检测细胞内的脂质沉积; RT-PCR和实时荧光定量PCR（qRT-PCR)检测各组IL-22、p-JAK1、p-STAT3、 胆固醇调节元件蛋白-1c（SREBP-1c ）的基因表达;免疫荧光及Western blot检测各组IL-22、p-JAK1、p-STAT3、SREBP-1c的蛋白表达。结果 FFA诱导刺激24 h后,模型组细胞TG含量高于正常组（P IL-22、p-JAK1、p-STAT3 基因表达及蛋白表达均较正常组减弱（P 均SREBP-1c 基因及蛋白表达较正常组升高（P 均P 均IL-22、p-JAK1、p-STAT3 的基因表达和蛋白表达较模型组、低剂量血清组、中剂量血清组增强（P 均P <0.01）。结论 蓝莓益生菌通过对p-JAK1/p-STAT3信号通路的调节,参与拮抗肝细胞脂肪变性的作用。     

L02脂肪变模型中氧化应激的发生及羊栖菜多糖的干预作用

目的建立人正常肝细胞株(L02)脂肪变模型,探讨软脂酸(PA)对肝细胞氧化应激的作用及羊栖菜多糖(SFPS)对脂肪变肝细胞氧化还原系统的影响。方法采用0.5 mmol/L的PA诱导L02细胞建立脂肪变模型,并予以不同浓度(25、50、100μg/m L)SFPS进行干预。Annexin V-FITC标记法检测细胞的凋亡,MTT比色法检测细胞增殖活力,测定细胞内过氧化产物丙二醛含量(MDA)和超氧化物歧化酶(SOD)。结果 SFPS可抑制PA对L02细胞增殖活性的下降和凋亡率的上升,降低MDA含量,升高SOD水平,不同浓度组间比较差异有统计学意义且具有剂量依赖性。结论 L02细胞脂肪变性时发生明显的氧化应激,羊栖菜多糖能在一定程度上减轻氧化损伤、抗细胞凋亡。     

采用Changliver细胞制备肝细胞脂肪变性模型的方法探索

目的：探索油酸（OA）诱导建立人正常肝细胞Changliver脂肪变性的离体细胞模型的实验条件。方法选用不同浓度油酸作用不同时间点诱导Changliver细胞,并用四甲基偶氮唑盐比色（MTT）法检测细胞活性,油红O染色观察细胞内脂滴数量、甘油‐3‐磷酸氧化酶法检测细胞内三酰甘油（TG）含量。结果采用0．2mmol/LOA诱导24h能建立较好的Changliver细胞脂肪变性模型,模型组细胞内TG水平为（379．98±23．19）mg/g,空白组细胞内TG水平为（185．03±12．68）mg/g,两组比较差异有统计意义（P＜0．01）。结论0．2mmol/LOA油酸诱导的Changliver细胞24h可建立比较稳定的脂肪变性模型。该模型为非酒精性脂肪性肝病的研究提供可靠的新途径。     

胡柚皮黄酮诱导自噬抑制肝细胞脂肪变性的作用研究

目的 观察胡柚皮黄酮对棕榈酸诱导的肝细胞脂肪变性的影响。方法 棕榈酸诱导HepG2细胞脂肪变性，不同浓度胡柚皮黄酮干预后，采用油红O染色法观察肝细胞脂肪变性；荧光探针法观测细胞内活性氧水平及线粒体膜电位变化；免疫印迹法检测Beclin-1、LC3及P62蛋白表达。结果 棕榈酸诱导后，HepG2细胞内脂滴和活性氧含量明显增高；胡柚皮黄酮处理后，细胞内脂滴和活性氧均明显降低，线粒体膜电位恢复，LC3和Beclin-1蛋白表达上调，P62蛋白表达下调。结论 胡柚皮黄酮能改善肝细胞脂肪变性和氧化应激反应，机制可能与其调控线粒体自噬，维持线粒体功能稳定有关。     

两种细胞系用于建立体外脂肪肝模型的比较

目的对比油酸诱导肝癌细胞株HepG2、正常肝细胞株L02建立的肝细胞脂肪变性模型,通过检验复方蛋氨酸胆碱的防治作用,寻找简便、稳定的体外药物筛选模型。方法设正常组、HepG2模型组、HepG2不同浓度给药组、L02模型组、L02不同浓度给药组、用油酸诱导肝细胞脂肪变,复方蛋氨酸胆碱干预,以油红O染色镜下观察细胞内脂滴形成状况,并检测细胞上清中的ALT、AST、γ-GT水平。结果油酸刺激HepG2、L02肝细胞24 h,细胞内典型脂肪滴形成。复方蛋氨酸胆碱2次给药,药物难以使HepG2细胞内脂滴减少,L02细胞在加油酸48 h后油红O染色证明细胞内脂滴可减少,脂滴表达的红色IOD值,各给药组与模型组比较,差异有极显著性（P〈0.01）。细胞上清液中ALT、AST、γ-GT,复方蛋氨酸胆碱各组与模型组比较差异有显著性,证实其对肝细胞损伤较小。结论L02比HepG2更适合作为体外的筛药细胞模型,油酸刺激L02细胞形成脂肪变,药物提前24 h干预,24 h后再给药1次,这种造模和给药方案可作为一种可行的脂肪肝细胞筛药模型使用。     

胰岛素抵抗在大鼠实验性非乙醇性脂肪肝中的作用

目的：探讨胰岛素抵抗在非乙醇性脂肪肝（NAFLD）中的作用.方法： 8只SD大鼠随机分成正常对照组（6只）和高脂饮食组（42只）,正常对照组饲养8周,高脂饮食组分为7组,每隔2周处死1组,测定大鼠的体重,肝脏的湿重,空腹真胰岛素（FIns）、血糖（FBG）、血脂水平,观察肝组织学改变.结果： 模型组大鼠喂养8周时出现NAFLD.与正常对照组相比,模型组大鼠的FBG,FIns,TG,高密度脂蛋白胆固醇（HDL-C）,胰岛素敏感指数（ISI）,肝细胞脂肪变程度与对照组相比均有差异.TG, FIns与肝细胞脂肪变程度成正相关,ISI,HDL-C与肝细胞脂肪变程度成负相关.结论： 模型组大鼠存在胰岛素抵抗; 胰岛素抵抗在非乙醇性脂肪肝的发生中起重要作用.     

白藜芦醇对软脂酸钠诱导的肝细胞脂肪变性的影响

目的：研究白藜芦醇对软脂酸钠诱导的细胞内甘油三酯沉积的影响。方法：用软脂酸钠诱导法使HepG2细胞内甘油三酯沉积,建立细胞脂肪变性模型,将实验分为对照、白藜芦醇、高脂及高脂＋白藜芦醇组,用油红O染色法定量检测各组细胞内甘油三酯的浓度。结果：0．2mmoL软脂酸钠可引起明显的细胞内甘油三酯沉积（P〈0．05）,而40μmoL白藜芦醇则可抑制软脂酸钠的这一效应,使细胞内的脂质浓度几乎降至基线水平。结论：白藜芦醇可改善软脂酸钠诱导的肝细胞脂肪变性。     

非诺贝特对脂肪变性肝细胞甘油三酯代谢及氧化应激水平的影响

目的探讨非诺贝特（fenofibrate,FF）对脂肪变性肝细胞甘油三酯代谢及氧化应激水平的影响。方法以油酸（OA）诱导人肝癌HepG2细胞脂肪变性为模型,采用不同浓度的FF（0、5、10、50μmol/L）干预HepG2细胞24h,油红O染色观察HepG2细胞内脂滴,甘油-3-磷酸氧化酶法检测细胞内甘油三酯（TG）含量,硫代巴比妥酸比色法、黄嘌呤氧化酶法分别测定细胞培养上清液中的丙二醛（MDA）含量及超氧化物歧化酶（SOD）活性。结果 OA诱导HepG2细胞脂肪变性,细胞内TG含量明显增加,同时细胞培养上清液中MDA含量增加,SOD活性降低;FF能明显减轻油酸诱导的HepG2细胞脂肪变性,降低细胞内TG水平及细胞培养上清液中MDA含量,提高SOD活性。结论非诺贝特抑制油酸诱导的HepG2细胞脂肪变性,其可能与提高HepG2细胞的抗氧化能力、减轻细胞氧化应激损害有关。     

N-乙酰半胱氨酸对乙醇诱导张氏肝细胞损伤的保护作用

目的探讨N-乙酰半胱氨酸（NAC）对体外乙醇处理诱导的张氏肝细胞损伤的保护作用。方法体外培养张氏肝细胞,实验分为对照组、乙醇处理组和NAC高、中、低剂量进行预处理的保护组,并测定NAC预处理对乙醇诱导的肝细胞损伤模型的细胞存活率,细胞内天门冬氨酸氨基转移酶（AST）、丙氨酸氨基转移酶（ALT）、活性氧（ROS）、细胞上清液中肿瘤坏死因子-α（TNF-α）和白细胞介素-6（IL-6）水平的影响,评价NAC是否对乙醇造成的肝细胞损伤具有保护作用。结果NAC预处理后,细胞的存活率高于乙醇处理组（P < 0.05）,细胞形态学观察结果显示,NAC的干预组细胞形态优于乙醇处理组;NAC预处理显著降低细胞内AST、ALT、ROS和细胞上清液中TNF-α和IL-6的含量（P < 0.05）。结论NAC干预可减轻体外乙醇处理诱导的肝细胞损伤,并降低细胞内ROS和炎性因子的水平。     

骨化三醇对脂肪变性肝细胞三酰甘油代谢及细胞因子信号转导抑制因子-3 基因表达的影响

目的 研究骨化三醇对脂肪变肝细胞三酰甘油代谢及细胞因子信号转导抑制因子-3（SOCS-3）基因表达的影响.方法 以油酸（OA）诱导正常人肝细胞LO2脂肪变为模型,按加入骨化三醇浓度的不同（10-8、10-7、10-6 mol/L）分为三个干预组,设空白对照组.干预组先加入不同浓度骨化三醇干预24h,之后加0.2 mmol/L的OA24h.检测细胞内三酰甘油（TG）、上清液谷草转氨酶（AST）含量,采用实时荧光定量PCR检测各组细胞SOCS-3 mRNA的表达,多组间比较采用单因素方差分析进行数据分析.结果 模型组TG[（362.43±22.20）mg/dL]、AST[（5.550.46）U/L]、SOCS-3 mRNA表达（4.61±0.39）均较对照组[（175.78±7.69）mg/dL、（0.63±0.33）U/L、（1.00±0.00）]明显增高（P＜0.01）;干预组TG分别为（286.87±16.01）、（257.16±11.73）、（209.43±27.79）mg/dL,AST分别为（4.98±0.50）、（4.23±0.36）、（3.50±0.48）U/L,SOCS-3 mRNA表达分别为（3.71±0.69）、（2.67±0.70）、（1.31±0.42）,较模型组均有所下降,差异均有统计学意义（均P＜ 0.05）.结论 骨化三醇可抑制肝细胞脂肪变,其作用机制可能与骨化三醇抑制SOCS-3的表达有关.     

成纤维细胞生长因子-21对体外诱导的非酒精性脂肪肝细胞模型脂代谢的影响

目的：探讨成纤维细胞生长因子-21(FGF-21)对体外诱导的非酒精性脂肪肝（NAFLD）细胞模型脂代谢的影响及其可能的作用机制。方法：采用MTT法筛选医用脂肪乳注射液使用浓度和FGF-21作用浓度,将体外诱导的NAFLD细胞分为对照组、模型组、脱离脂肪乳组和FGF-21治疗组,光学显微镜观察油红O染色情况,全自动生化仪检测NAFLD细胞内甘油三酯(TG)水平,免疫细胞化学方法观察细胞内肉毒碱脂酰转移酶-1(CPT-1)、过氧化氢酶体增殖物激活受体γ(PPARγ)及固醇调节元件结合蛋白-1c（SREBP-1c）的表达。结果：MTT法筛选出0.1%医用脂肪乳注射液作为建立体外诱导NAFLD细胞模型的最佳诱导浓度,与正常肝细胞株HL7702比较,模型组油红O染色后细胞浆内有大量被染成橘红色的脂滴,细胞内TG水平显著升高（P＜0.01）,CPT-1蛋白表达减弱,PPARγ和SREBP-1c蛋白表达增加。MTT法筛选出0.5 mg/LFGF-21作为观察该药物对NAFLD细胞模型影响的作用浓度,与模型组比较,FGF-21处理组细胞内TG水平显著降低（P＜0.01）,CPT-1蛋白表达增加,PPARγ和SREBP-1c蛋白表达减弱。结论：FGF-21处理能减轻NAFLD细胞中TG蓄积,并使HL7702细胞CPT-1蛋白表达增加,而PPARγ和SREBP-1c蛋白表达减少。     

miR-122表达下调与脂肪性肝病的关系

目的探讨肝脂肪变时肝细胞株L-02 miR-122表达水平的变化。方法用油酸诱导法建立L-02脂肪变肝细胞株模型,于24、48、72 h用激光共聚焦显微镜检测细胞三酰甘油含量,提取细胞总RNA,逆转录为cDNA,用荧光定量PCR检测miR-122的表达,并与正常肝细胞株作对照。结果成功建立脂肪肝细胞株模型,随着油酸诱导时间延长,细胞内三酰甘油含量增加,miR-122在脂肪肝细胞表达下调,其拷贝数仅为正常肝细胞的1/16.68(P<0.05)。结论肝细胞株脂肪变时miR-122表达显著下降。     

The correlation between the down-regulation of miR-122 and fatty liver desease.

目的 探讨肝脂肪变时肝细胞株L-02 miR-122表达水平的变化.方法 用油酸诱导法建立L-02脂肪变肝细胞株模型,于24、48、72 h用激光共聚焦显微镜检测细胞三酰甘油含量,提取细胞总RNA,逆转录为cDNA,用荧光定量PCR检测miR-122的表达,并与正常肝细胞株作对照.结果 成功建立脂肪肝细胞株模型,随着油酸诱导时间延长,细胞内三酰甘油含量增加,miR-122在脂肪肝细胞表达下调,其拷贝数仅为正常肝细胞的1/16.68(P<0.05).结论 肝细胞株脂肪变时miR-122表达显著下降.     

雌激素对人肝癌HepG2细胞脂肪变性的作用及AQP7表达的影响

目的探讨雌激素对人肝癌HepG2细胞脂肪变性的作用及水通道蛋白7（AQP7）表达的影响。方法将培养后的人肝癌HepG2细胞分为HepG2细胞组、脂肪变模型组、雌激素低剂量组、雌激素高剂量组;其中脂肪变模型组及雌激素低、高剂量组使用2.0mM油酸溶液200滋l处理,而雌激素低、高剂量组分别加入500滋l浓度为40.0、80.0滋g/ml的雌激素,HepG2细胞组不作任何处理;4组细胞均继续培养72h。采用噻唑蓝（MTT）法测定细胞存活率,油红O溶液染色法测定脂滴面积比,贝克曼AU-480全自动生化仪测定TG水平,RT-PCR、Westernblot法分别测定HepG2细胞AQP7mRNA及蛋白相对表达量。结果与HepG2细胞组比较,脂肪变模型组细胞存活率降低（P＜0.05）,脂滴面积比、TG水平均升高（均P＜0.05）;与脂肪变模型组比较,雌激素低、高剂量组细胞存活率均升高（均P＜0.05）,脂滴面积比、TG水平均降低（均P＜0.05）;与雌激素低剂量组比较,雌激素高剂量组细胞存活率升高（P＜0.05）,脂滴面积比、TG水平均降低（均P＜0.05）。与HepG2细胞组比较,脂肪变模型组AQP7mRNA及蛋白相对表达量均降低（均P＜0.05）;与脂肪变模型组比较,雌激素低、高剂量组AQP7mRNA及蛋白相对表达量均升高（均P＜0.05）;与雌激素低剂量组比较,雌激素高剂量组AQP7mRNA及蛋白相对表达量均升高（均P＜0.05）。HepG2细胞AQP7mRNA及蛋白相对表达量与脂滴面积比、TG水平均呈负相关（均P＜0.05）。结论雌激素能抑制油酸诱导的HepG2细胞脂肪变性,其机制可能与雌激素能上调AQP7表达有关。     

TNF-α对脂肪变性肝细胞SREBP-1c的表达及甘油三酯含量的影响

目的 探讨TNF-α对油酸诱导的脂肪变性肝细胞模型固醇调节元件结合蛋白1c(sterol-regulatory elementbinding protein-1c,SREBP-1c)mRNA的表达及甘油三酯(triglyceride,TG)含量的影响.方法 以正常肝细胞株L02进行细胞培养,用油酸诱导建立肝细胞脂肪变性模型,在对照组及模型组中加入TNF-α与抗TNF-α抗体分组进行培养,采用RT-PCR法检测SREBP-1c及脂肪酸合成酶(fatty acid synthetase,FAS)mRNA的表达;采用油红O染色观察细胞内脂滴的变化,并检测细胞内TG含量.结果 TNF-α作用组SREBP-1c mRNA的表达上调,与对照组相比差异显著(P＜0.01);而使用抗TNF-α抗体作用后表达下调.实验显示,TNF-α作用组较对照组脂变细胞数量增多,细胞内TG含量显著增加(P＜0.01),而使用抗TNF-α抗体作用后TNF-α作用组脂变细胞数量减少,细胞内TG含量显著下降(P＜0.01).结论 TNF-α上调L02肝细胞SREBP-1c mRNA的表达促进细胞内TG的合成,可能参与了肝细胞的脂代谢及脂肪变性的形成.     

不同膳食脂肪酸对肝细胞SREBP-1c表达及脂代谢的影响

目的探讨不同膳食脂肪酸构成对肝细胞脂代谢及固醇调节元件结合蛋白-1c(sterol-regulatory elementarybinding protein-1c,SREBP-1c)表达的影响。方法以HepG2肝细胞为研究对象,分为空白对照组、二十碳五烯酸(EPA)组、棕榈酸(PA)组、EPA和亚油酸(LA)1∶1混合组、PA和油酸(OA)1∶1混合组,EPA、PA单独处理组终浓度为150μmol/L,混合处理组各组分浓度为75μmol/L,总浓度为150μmol/L,处理细胞24 h。采用油红O染色观察细胞内脂滴的变化,测定甘油三酯(TG)含量来评价细胞内脂质含量;采用RT-PCR、Western blot法检测SREBP-1c mRNA及蛋白的表达。结果 PA组、PA和OA 1∶1混合组SREBP-1c mRNA及蛋白的表达上调,EPA和LA 1∶1混合组、EPA组SREBP-1c mRNA及蛋白的表达下调,与对照组相比差异显著(P<0.05)。与对照组相比,EPA和LA 1∶1混合组、EPA组肝细胞内TG含量显著减少(P<0.05);PA和OA 1∶1混合组、PA组肝细胞内TG含量显著增加(P<0.05)。结论 PA、OA上调肝细胞SREBP-1c的表达并促进细胞内TG的合成,可能促进肝细胞脂肪变性;而EPA、LA下调肝细胞SREBP-1c的表达并显著降低肝细胞内TG含量,减轻肝细胞脂肪变性。     

水通道蛋白9在培养肝细胞脂肪变性模型中的表达及意义

目的:探讨油酸诱导的脂肪变性肝细胞模型中水通道蛋白9(Aquaporin-9,AQP9)的表达及意义.方法:用油酸诱导正常肝细胞株L-02建立肝细胞脂肪变模型.采用油红O染色观察细胞内的脂滴,并检测细胞内甘油三脂,游离脂肪酸.甘油含量,RT-PCR法和Western blotting法分别检测AQP9 mRNA和蛋白的表达.结果:油红O染色显示24h开始出现脂肪变性,72h脂肪变性最重;模型组TG、FFA、甘油含量均在各时相点较对照组显著升高,差异有统计学意义(P＜0.01);模型组AQP9 mRNA的表达上调,于24h开始增高,72h表达最强,与对照组相比差异有统计学意义(P相似文献