三种非发酵革兰阴性杆菌TEM及SHV型β-内酰胺酶基因检测

多重耐药特别是全耐药非发酵糖革兰阴性杆菌如铜绿假单胞菌、鲍曼不动杆菌、嗜麦芽窄食单胞菌等所致的医院感染及其严重的耐药性问题受到广泛关注,并已成为临床抗菌感染治疗难点之一[1～4].本研究采用聚合酶链反应技术检测自临床分离的革兰阴性杆菌铜绿假单胞菌、嗜麦芽窄食单胞菌和黄杆菌属细菌中TEM及SHV型β-内酰胺酶(β-lactamases,BLA)基因存在状况,以期达到进一步明确耐药机制,并为细菌耐药性监测及流行病学调查提供分子生物学依据.     

12株产β-内酰胺酶革兰阴性杆菌的耐药基因检测

目的 研究革兰阴性杆茵产β-内酰胺酶的基因型.方法 收集北京大学人民医院12株革兰阴性杆菌,用VITEK-2系统进行鉴定和药敏检测,对多种β内酰胺酶基因进行聚合酶链反应(PCR)扩增.耐药基因与pGEM-3zf载体连接转化至大肠埃希茼DH5d,筛选、鉴定阳性克隆后进行序列分析.结果 12株菌检测出CTX-M型、TEM型、SHV型、OXA型、PER型和IMP型耐药基因,其中1株鲍曼不动杆茵同时携带OXA型和PER型耐药基因.2株大肠埃希茵的耐药基因分别在CTX-M-14的基础上发生了1个位点的突变.结论 细菌携带一种或多种耐药基因导致多重耐药,基因突变可导致新的基因型产生.鲍曼不动杆菌产金属碳青霉烯酶或丝氨酸碳青霉烯酶对亚胺培南耐药.     

革兰阴性杆菌超广谱β-内酰胺酶检测的探讨

临床发现，越来越多的革兰阴性杆菌对三代头孢类抗生素耐药，其主要原因是细菌质粒介导产生的超广谱β－内酰胺酶（Extended Spectrum β－Ｌ；ESBLs）所致。研究发现。产ESBL细菌主要集中在肠杆菌科细菌，以肺炎在雷伯杆菌和大肠埃希氏菌为主，另外有阴沟肠杆菌、沙雷氏菌、产碱杆菌、铜绿假单胞菌、鲍曼不动杆菌等其它革兰阴性杆菌也有报道。由于产ESBL的菌株往往携带多重耐药基因，表现在不仅β－内酰类抗生素耐药。而且对氨基甙类、喹诺酮类抗生素也耐药，给临床治疗带来极大困难。目前产ESBL菌株有增多趋势并可引起医院感染的暴发流行。所以，ESBL的检测在临床上具有重要意义。目前，尽管检测ESBL的方法众多，但仍无令人满意的统一方法。本文对目前实验室较常采用的单纸片琼脂扩散试验（SD）法、双纸片协同试验（CD法）和Etest三种方法检测ESBL作一初步探讨。     

革兰阴性杆菌诱导型β-内酰胺酶测定及耐药性分析

对174株革兰阴性杆菌进行诱导型β－内酰胺酶的测定和耐药性分析,结果产诱导型β－内酰胺酶细菌65株（37．4％）,其中铜绿假单胞菌,嗜麦芽窄食单胞菌,阴沟肠杆菌,弗旁地枸橼酸杆菌检出率最高,分别为60．0％,60．0％,53．8％,50．0％,产诱导型β－内酰胺酶细菌对第一代,第二代头孢菌素有较高耐药性,对第三代头孢菌素和氨基糖甙类,喹喏酮类耐药率较低,产酶株与非产酶耐药率很接近。提示常规药敏试验未能真正反映细菌耐药情况,诱导型β－内酰胺酶的检测可以补充常规药敏的不足。     

下呼吸道感染产超广谱β-内酰胺酶革兰阴性杆菌的耐药监测

由于第三代头孢菌素对需氧革兰阴性菌的抗菌作用强、抗菌谱广，且毒性低，被广泛用于治疗革兰阴性杆菌感染。近年来国内外的病原学研究表明，革兰阴性杆菌对此类抗菌药物的耐药率逐年上升。主要是由于第三代头孢菌素能诱导细菌产生基因位点突变，使细菌产生质粒介导的超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)，它能水解青霉素、头孢菌素及单环类抗生素。我国三级医院中已广泛开展ESBLs的基础研究，加强二级医院使用抗生素的监测及管理也是必要的。ESBLs主要由革兰阴性杆菌中的肺炎克雷伯菌、大肠埃希菌和阴沟肠杆菌产生，本研究即对我院下呼吸道感染上述3种细菌的分离株进行分析，现报道如下。     

革兰阴性杆菌β-内酰胺酶表型和基因型研究

目的了解铜陵地区临床分离的革兰阴性杆菌产生超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)、头孢菌素酶(AmpC酶)和金属β-内酰胺酶(MBL)的分布情况,并检测产ESBLs大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌的ESBLs基因型鉴定。方法采用三维试验检测革兰阴性杆菌产ESBLs和AmpC酶,纸片协同法检测MBL,用聚合酶链反应(PCR)对ESBLs表型阳性的大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌进行TEM型、SHV型、CTX-M型三种耐药基因检测并克隆测序。结果356株革兰阴性杆菌检出产酶株90株,检出率25.3%。单产ESBLs革兰阴性杆菌57株,检出率16.0%,以肺炎克雷伯(31.6%)、大肠埃希菌(31.0%)检出率高;单产AmpC酶4株,检出率1.1%,其中阴沟肠杆菌3株;同时产ESBLs和AmpC酶16株,检出率4.5%,以鲍曼不动杆菌(12.5%)检出率最高;产MBL细菌13株,均为非发酵菌,以嗜麦芽窄食单胞菌检出率最高,为71.4%。17株ESBLs表型阳性的大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌有16株检出ESBLs耐药基因,其中CTX-M型15株(88.2%),TME型13株(76.1%),SHV型2株(11.8%),有11株细菌同时带有两种ESBLs基因,1株带有3种ESBLs基因。结论革兰阴性杆菌产生ESBLs、AmpC酶和MBL多种β内酰胺酶,铜陵地区大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌ESBLs基因型以CTX-M型为主。     

聊城地区革兰阴性杆菌耐药谱分析

目的了解革兰阴性杆菌的菌群分布和耐药现状,为临床合理使用抗生素提供依据。方法采用法国梅里埃公司VITEK32鉴定仪从各类标本中分离革兰阴性杆菌2282株,用K-B法进行细菌的耐药监测,并加以分析。结果2282株革兰阴性杆菌中,分离率占第一位和第二位的分别为大肠埃希菌(30.8%)、铜绿假单胞菌(27.9%);亚胺培南对所有革兰阴性杆菌有最好的抗菌活性,其余细菌对抗生素耐药率都有升高趋势;产超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)细菌分离率为60.0%。结论加强对细菌耐药性的监测,及时向临床反馈可为临床合理使用抗生素提供依据。     

革兰阴性杆菌超广谱β-内酰胺酶的检测及药敏分析

目的　了解本院常见的革兰阴性杆菌中超广谱 β -内酰胺酶 (ESBLs)细菌的发生率和药敏情况 ,为防止产ESBLs细菌的传播和抗生素的合理应用提供依据。方法　细菌鉴定用Vitek - 32细菌鉴定仪 ,药敏试验用K -B法 ,ESBLs初筛用双纸片法 ,ESBLs确证用NCCLS 1 999年推荐的确证方法。结果　产ESBLs耐药菌占全部分离菌的 2 8 9% ,其中各细菌ESBLs发生率大肠埃希菌为 2 8 6 % ,肺炎克雷伯菌为 34 1 % ,阴沟肠杆菌为 4 0 5 %。另外有 1例铜绿假单胞菌、2例弗劳地枸橼酸杆菌、2例嗜麦芽窄食单胞菌产ESBLs。对试验所做抗生素 ,ESBLs阳性株比阴性株具有更高的耐药率和更严重的交叉耐药现象。结论　本院产ESBLs细菌以大肠埃希菌、肺炎克雷伯菌和阴沟肠杆菌多见 ,ESBLs的发生率和菌种分布有上升趋势 ,ESBLs菌感染的治疗仍以亚胺培南为首选     

1242株革兰阴性杆菌抗生素耐药分析

目的 了解我院近4年革兰阴性杆菌的分布及耐药情况.方法 对各类标本中培养分离出的1 242株革兰阴性杆菌,采用全自动微生物分析仪进行分析.结果 1 242株革兰阴性杆菌中,以铜绿假单胞菌、大肠埃希菌、肺炎克雷伯菌、产气肠杆菌、阴沟肠杆菌、不动杆菌属多见,革兰阴性杆菌对β-内酰胺类及喹诺酮类耐药率普遍增高.结论 革兰阴性杆菌耐药严重,应定期进行细菌耐药监测.     

革兰阴性杆菌产AmpC酶和超广谱β-内酰胺酶的检测及耐药相关性

目的了解革兰阴性杆菌产AmpC酶和超广谱β-内酰胺酶（ESBLs）的情况及其耐药性，指导临床合理用药。方法K—B法检测184株革兰阴性杆菌对11种抗生素的耐药性；采用头孢西丁（FOX）药敏纸片进行AmpC酶的初筛，通过酶提取物三维试验方法确证产AmpC酶细菌；采用NCCLS推荐的纸片扩散确证试验检测184株革兰阴性杆菌中大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌产ESBLs的情况。结果184株革兰阴性杆菌中，AmpC酶阳性率为23．3％主要产生菌为鲍曼不动杆菌57．7％，铜绿假单胞菌37．5％，AmpC酶阳性菌对头孢噻肟（CTX）、头孢曲松（CRO）、复方新诺明（SXT）、左旋氧氟沙星（LEV）、哌拉西林（PRL）、氨曲南（ATM）、头孢他啶（CAZ）、阿米卡星（AK）、头孢吡肟（FEP）、美洛培南（MEM）的耐药率分男11为94．7％、86．8％、84．2％、81．6％、71．0％、68．4％、68．4％、55．3％、50．O％、5．3％；38株大肠埃希菌和26株肺炎克雷伯菌中ESBLs阳性率分别为42．1％、23．1％，ESBLs阳性菌对头孢噻肟（CTX）、头孢曲松（CRO）、哌拉西林（PRL）、氨曲南（ATM）、复方新诺明（SXT）、头孢他啶（CAZ）的耐药率较高。对头孢吡肟（FEP）、阿米卡星（AK）、头孢西丁（FOX）、美洛培南（MEM）的耐药率较低，对左旋氧氟沙星（LEV）的耐药率大肠埃希菌则远高于肺炎克雷伯菌。结论在革兰阴性杆菌中，AmpC酶和ESBLs产生情况已相当严重，应重视对其的检测；产酶菌与非产酶菌对抗生素的耐药性有明显区别；临床用药以碳青霉烯类如美洛培南（MEM）为首选。     

E test监测监护病房中200株革兰阴性杆菌的耐药性

目的：调查我院监护病房革兰阴性杆菌耐药状况，了解起广谱β-内酰胺酶（ESBLs）菌株的发生率。方法：用E试验法测定2000株革兰阴性杆菌对13种抗生素的最低抑菌浓度（MIC）及细菌产ESBL的情况。结果：严胺培南对所有受试菌保持最高抗菌活性。细胞耐药率为6.5%；头孢哌酮/舒巴坦、阿米卡星、头孢吡肟、哌拉西林/他唑巴坦、头孢他定及阿莫西林/克拉维酸耐药率18%-30%之间，其他抗生素耐药率在44%-51%之间，筛选出ESBLs产生菌29株，以大肠埃希氏菌、肺炎克雷伯菌和鲍氏不动杆菌为主，ESBLs检出率分别为66.7%，47.1%和25.0%。亚胺培南对所有大肠埃希氏菌，肺炎克雷伯菌和鲍氏不动杆菌ESBLs菌杆都敏感。新药埃托培南（MK-0826）对2001年收集的100株革兰阴性杆菌有较强的抗菌活性，总抑菌率为85%，对ESBLs产生菌的抗菌活性与亚胺培南相似。两年资料相比，比头孢哌酮/舒巴坦耐药率由11%增加至26%，其他抗生素耐药率变化不大。结论：亚胺培南抑菌率最高，对ESBLs产生菌有较强的抗菌活性，而加酶抑制剂抗生素的滥用，巳造成细菌对其耐药率升高，且对付产酶耐药株感染逐渐失去优势。     

678株革兰阴性杆菌耐药监测分析

目的监测2006年本院临床分离的革兰阴性杆菌耐药性。方法采用Micro—Scan4半自动细菌分析仪及MIC药敏试剂对678株革兰阴性杆菌进行耐药性监测，并对结果进行回顾性分析。结果678株革兰阴性杆菌中，肠杆菌科424株（62．54％），较常见的为大肠埃希菌、肺炎克雷伯菌、阴沟肠杆菌；不发酵糖的革兰阴性杆菌254株（37．46％），较常见的为铜绿假单胞菌、鲍曼不动杆菌。这些菌株对临床常用抗生素均有不同程度的耐药，且呈多重耐药趋势；亚胺培南是最敏感的抗革兰阴性杆菌的药物之一。结论大肠埃希菌、肺炎克雷伯菌、阴沟肠杆菌、铜绿假单胞菌、鲍曼不动杆菌是临床感染的主要革兰阴性病原菌，其耐药性呈多重耐药趋势，应合理应用抗生素，并持续有效地开展药敏监测。     

儿童革兰阴性杆菌耐药状况及ampC基因的检测与分析

目的了解某儿童医院222株革兰阴性杆菌的耐药现状及ampC基因的分布情况.方法采用Microscanwalkaway-4.0鉴定222株革兰阴性杆菌的药敏情况,行PCR扩增检测222株革兰阴性杆菌中ampC基因.结果 222株菌对IPM、AK、CIP、FEP、CAZ、ATM、CRO、CN、SXT、PIP的药物敏感率从高到低依次为:IPM 90.5%、AK 79.3%、CIP 68%、FEP50.9%、CAZ46.4%、ATM43.2%、CRO41.1%、CN 37%、SXT 35.5%、PIP 20.7%.154株细菌ampC基因阳性(占69.4%),对所检测的各药物的敏感率从高到低依次为:IPM 92.9%、AK 81.1%、CIP69.5%、FEP 55.2%、CN45.5%、CAZ 41.6%、ATM37%、CRO 34.4%、SXT 33.8%、PIP 13.6%.在革兰阴性杆菌中对PIP的耐药性与ampC基因的分布有关.结论革兰阴性杆菌的耐药状况严重,明确ampC基因的分布状况有助于临床抗菌药物的选用.     

革兰阴性杆菌AmpC酶和AmpC耐药基因检测

目的检测革兰阴性杆菌临床分离株的AmpC酶和AmpC耐药基因,探讨产AmpC酶菌株的耐药情况。方法用超声破碎法提取102株细菌的β-内酰胺酶粗提物,进行三维试验,提取细菌总DNA,PCR扩增ampC结构基因和ACT-1、CMY-G1、CMY-G2、DHA、FOX耐药基因,MIC法药物敏感试验分析菌株的耐药性。结果 102株革兰阴性杆菌中三维试验和PCR检测AmpC基因同时阳性的有11株,确认产AmpC酶菌株11株,并全部为鲍曼不动杆菌。三维试验和PCR基因检测AmpC酶的检出率比较,差别无统计学意义（χ~2=1.125,P〉0.05）。ACT-1、CMY-G2、FOX、DHA、CMY-G1的检出率分别为14.7%、12.7%、4.9%、1.0%和0。对产AmpC酶菌株敏感度最高的是丁胺卡那霉素（90.1%）,其次是亚胺培南（54.6%）。结论三维试验和PCR基因检测对AmpC酶的检出率无明显差别,但仍存在假阳性与假阴性。产AmpC酶菌株耐药情况严重,提示临床慎重用药。     

革兰阴性杆菌产超广谱β-内酰胺酶的分布及基因型

目的:了解临床分离的革兰阴性杆菌中产ESBLs的流行特征及ESBLs基因型.方法:对我院临床分离的革兰阴性杆菌,采用改良三维试验检测产 ESBLs 菌株,用PCR对 ESBLs 基因进行分型.结果:175株革兰阴性杆菌分离出49株产ESBLs 菌,阳性率28%,包括大肠埃希菌、克雷伯菌属、阴沟肠杆菌、弗劳地枸椽酸杆菌、铜绿假单胞菌、鲍曼不动杆菌.其中,第一位是阴沟肠杆菌(34.7%,17/49),其次是大肠埃希菌(30.6%,15/49).每种细菌产ESBLs率前三位是阴沟肠杆菌(56.6%,17/30),大肠埃希菌(37.5%,15/40),肺炎克雷伯菌(25.0%,6/24).各病区中神经科产ESBLs菌分离率最高(32.7%).49株产ESBLs 菌携带TEM, SHV, CTX-M分别为34,5,16株,有17株同时携带两种β-内酰胺酶基因的菌株,占34.7%, 其中TEM CTX-M型13株,占基因双阳性菌株的76.5%.结论:我院产ESBLs菌以阴沟肠杆菌、大肠埃希菌为主.神经科是主要产ESBLs菌的病区.ESBLs基因以 TEM 型、CTX-M 型为主,携带双基因的菌株在我院有流行.     

长春地区部分医院革兰阴性杆菌超广谱β-内酰胺酶的基因类型及分布

目的:了解长春地区部分医院超广谱β-内酰胺酶 (ESBLs)基因在革兰阴性杆菌中的分布及类型,为合理使用抗生素提供依据。方法：对165株临床分离革兰阴性杆菌采用 PCR方法分别扩增SHV、TEM和CTX基因片段。PCR产物经测序后,登录GenBank查询并比较基因类型。结果：在165株革兰阴性杆菌中检出耐药基因及多重耐药基因68株, 其中 TEM型检出率最高（12.12%）,其余依次为CTX-M-1型（4.24%）,SHV型（3.64%）和CTX-M-9型（3.03%）;同时检出 SHV+TEM型、TEM+CTX-M-1型、TEM+CTX-M-9型、TEM+CTX-M-1+CTX-M-9型和 SHV+TEM+CTX -M-1+CTX-M-9型等多组多重耐药基因。随机选择扩增阳性的 PCR产物进行测序,得到 SHV-11亚型、TEM-1亚型、CTX-M-3亚型、CTX-M-15亚型、CTX-M-14和CTX-M-18亚型。结论:长春地区部分医院革兰阴性杆菌ESBLs的基因类型主要为TEM-1亚型、SHV-11亚型、CTX-M-14亚型和CTX-M-18亚型。     

革兰阴性杆菌的耐药情况分析

革兰阴性杆菌是院内感染及各种感染的主要致病菌。近年来 ,随着广谱抗菌药物的广泛应用 ,抗生素耐药日趋严重。为此 ,加强对临床分离的革兰阴性杆菌的耐药性监测 ,及时对常用抗菌药物的耐药性进行分析 ,可正确指导临床医生合理用药 ,并为其经验性用药提供可靠的依据。1　材料与方法1.1　材料1.1.1　菌株来源 :为本院 1999年 1月至 2 0 0 0年 6月分离的革兰阴性杆菌 ,同一病人 10ｄ以内分到的同一菌株不参与分析。从各类标本中分离细菌分别为痰 4 75株 (5 0 % ) ,尿 16 1株 (17% ) ,血 86株 (9% ) ,脓汁 70株 (7% ) ,胆汁 4 8株 (5 % )腹水 1…     

重症监护病房革兰阴性杆菌耐药分析

目的：调查重症监护病房（ICU）内革兰阴性杆菌的感染分布及其耐药特点,为临床合理选用抗菌药物提供依据。方法：采用纸片法或MIC法测定病原菌药物敏感性,使用WHONET 5.6软件分析我院ICU病房2010年1月至2011年1月的革兰阴性杆菌分布情况及耐药特点。结果：共分离出358株病原菌,其中革兰阴性杆菌240株（67%）,其次为革兰阳性菌和真菌,前4位病原菌为铜绿假单胞菌（35%）、鲍曼不动杆菌（23%）、肺炎克雷伯菌（14%）、大肠埃希菌（10%）。非发酵革兰阴性杆菌耐药情况严重,铜绿假单胞菌和鲍曼不动杆菌对亚胺培南耐药率分别高达47.5%和65.4%。肠杆菌科对亚胺培南及阿米卡星敏感性较高,大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌产超广谱β-内酰胺酶（ESBLs）试验的阳性率分别为91%和50%。结论：重症监护病房获得性感染多药耐药情况严重,尤其是非发酵革兰阴性杆菌。除了需要加强耐药性监测及优化抗菌药物使用外,还须强化感染预防控制措施。