PI3K/AKT信号通路在TGFβ1致人腹膜间皮细胞转分化中的作用

目的探讨磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)/Akt通路在转化生长因子β1(TGFβ1)体外诱导的人腹膜间皮细胞(HPMC)上皮-间质细胞转分化(EMT)过程中的作用。方法从人腹膜组织中分离和培养人原代腹膜间皮细胞。观察TGFβ1对人腹膜间皮细胞Akt磷酸化的影响,在不同时间点检测p-Akt的表达水平。采用免疫印迹方法检测应用PI3K特异性抑制剂Wortmannin对TGFβ1诱导后细胞内p-Akt、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)和E-钙黏附蛋白(E-Cadherin)表达的影响。结果10ng/mLTGFβ1刺激HPMC0.5h后p-Akt水平开始升高,1h后达到顶峰,2h后逐渐减弱。TGFβ1诱导HPMC48h后α-SMA表达显著升高,E-cadherin表达显著下降;同时加用Wortmannin则p-Akt、α-SMA表达明显抑制。结论PI3K/Akt信号系统参与TGFβ1介导的人腹膜间皮细胞EMT过程,提示对其通路的抑制可有效阻止TGFβ1介导的腹膜纤维化。     

磷脂酰肌醇3激酶/Akt通路参与TGF-β1诱导人肾小管上皮细胞间质转分化过程

目的：探讨磷脂酰肌醇3激酶（PI3K）／Akt通路在转化生长因子β1（TGF-β1）体外诱导的人肾小管上皮细胞（HKC）间质转分化（EMT）过程中的作用及意义。方法：将HKC细胞株细胞分成正常对照组、TGF-β1组及TGF-β1＋PI3K特异性抑制剂Wortmannin组，选取不同时相，免疫印迹（Western blot）测定总．Akt、磷酸化Akt（p-Akt）、α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）表达的变化；Akt磷酸化水平用磷酸化Akt和总Akt水平的比值表示。结果：正常体外培养的HKC有微量的p-Akt、α-SMA表达，加入10ng／ml TGF-β1刺激0．5h后p-Akt水平显著升高，1h升至顶峰后逐渐减弱；α-SMA在10ng／mlTGF-β1诱导48h后表达显著升高。同时加用Wortmannin 10nmol／L组p-Akt、α-SMA表达明显抑制。结论：PI3K／Akt信号系统参与TGF-β1介导的EMT过程，PI3K特异性抑制剂wo永mannin可有效抑制TGF-β1介导的HKC的EMT过程。     

PI3K/AKT信号通路在促进口腔鳞癌侵袭转移中的作用

目的:研究PI3K/AKT信号通路在TNF-α诱导上皮间质转化(EMT)发生时促口腔鳞癌侵袭转移中的作用。方法:采用免疫蛋白印迹实验(western blot)方法、实时荧光定量RT-PCR,分别从蛋白质、mRNA水平检测炎症微环境中PI3K/AKT信号通路抑制剂作用前后关键因子表达变化。结果:TNF-α作用后,PI3K/AKT信号通路中关键因子AKT蛋白表达升高,E-钙黏蛋白mRNA表达降低,而加入相应抑制剂LY294002后,AKT的蛋白表达被抑制,E-钙黏蛋白较前者表达升高。结论:抑制PI3K/AKT信号通路可降低TNF-α诱导EMT发生促口腔鳞癌细胞侵袭转移的作用。     

pcDU_6质粒载体介导的TGFβ_1 shRNA抑制TGFβ_1在人腹膜间皮细胞中的表达

目的 :研究pcDU6质粒载体介导的转化生长因子β1短发夹RNA(shorthairpinRNA ,shRNA)对人腹膜间皮细胞 (HPMCs)转化生长因子 β1(TGFβ1)表达的影响。方法 :针对TGFβ1的以GGCC开始的 2 1碱基大小的片段 ,分别设计 2对寡核苷酸 ,形成双链后将其依次连入带有U6启动子的 pcDNA3.1( )载体 (命名为 pcDU6) ,2对DNA双链通过BamHI酶切位点连接后形成中间由 6碱基序列间隔的反向互补序列 ,构建成TGFβ1短发夹RNA的产生质粒。采用胰蛋白酶消化法从人腹膜组织中分离间皮细胞 ,建立稳定的体外培养模型。用脂质体转染表达转化生长因子β1shRNA的pcDU6载体质粒和表达反义TGFβ1RNA的pcDNA3.1( )的载体质粒入 4 .2 5 %D 葡萄糖和LPS刺激下人腹膜间皮细胞。采用逆转录多聚酶链式反应 (RT PCR)半定量分析HPMC中TGFβ1mRNA的表达。采用双抗夹心法酶联免疫吸附实验检测HPMC培养液中TGFβ1蛋白质水平。结果 :HPMC在 4 .2 5 %D 葡萄糖和LPS的刺激下可明显上调TGFβ1的表达 (P <0 .0 1)。pcDU6载体质粒介导的转化生长因子 β1shRNA干扰组较 pc DU6空载体组明显下调TGFβ1的表达 (P <0 .0 1)。pcDU6载体质粒介导的转化生长因子 β1shRNA干扰组间比较 ,差异无显著性 (P >0 .0 5 ) ;pcDNA3.1( )的载体质粒介导的反义RNA组与 pcDU     

糖原合成酶激酶-3β磷酸化 促进人腹膜间皮细胞转分化的实验研究

目的：探讨糖原合成酶激酶（GSK）-3β磷酸化在人腹膜间皮细胞(HPMC)转分化中的作用。方法：从人腹膜组织中分离和培养人原代腹膜间皮细胞。观察GSK-3β抑制剂氯化锂（LiCl）对HPMC GSK-3β磷酸化的影响,在不同时间点（0,1,3,6,12 h）和不同浓度（0,5,10,20,40 mmol/L）LiCl下Western 印迹检测p-GSK-3β和总GSK-3β表达水平的变化。Western 印迹检测20 mmol/L LiCl作用HPMC不同时间,α-SMA和E-cadherin蛋白的表达。间接免疫荧光染色方法检测α-SMA的表达和分布。结果：LiCl促进HPMC GSK-3β磷酸化在一定范围内呈浓度依赖性和时间依赖性（P＜0.05）,但总GSK-3β水平不变（P＞0.05）。20 mmol/L LiCl干预HPMC 24 h后,α-SMA表达显著增高（P＜0.05）,E-cadherin表达显著下调（P＜0.05）。间接免疫荧光结果显示20 mmol/L LiCl作用24 h后α-SMA表达显著增高（P＜0.05）。结论：GSK-3β磷酸化能诱导HPMC发生上皮-间质细胞转分化,为治疗腹膜纤维化提供了新的思路。     

PI3K/AKT信号通路调控心肌细胞凋亡的研究进展

凋亡作为一种发生在生物体内程序性死亡的过程,受多种基因的调控,对生物的正常发育和组织细胞稳态至关重要。凋亡参与了多种心血管疾病的病理过程,并且是缺血性心功能障碍的主要原因之一。磷酸肌醇3激酶(PI3K)是一种脂质激酶,在细胞存活、心电生理和能量代谢等方面发挥着重要作用,是治疗和预防心脏疾病相关损伤的重要靶点。PI3K可产生磷脂酰肌醇-3,4,5-磷酸膜磷脂(PIP3),进而激活3-磷酸肌醇依赖激酶-1(PDK-1)和AKT,发挥对心脏疾病中心肌损伤的调控作用。通过对PI3K/AKT信号通路的干预,可减轻心肌凋亡程度,表现出对心肌细胞的保护作用。文章对此通路及其与心肌细胞凋亡关系的研究进展作一综述。     

TGF-β1对大鼠腹膜间皮细胞转分化的影响及其机制

目的:研究转化生长因子(transforming growth factor β1,TGF-β1)对大鼠腹膜间皮细胞(rat peritoneal mesothelial cells,RPMCs)转分化的影响,并探讨其可能的机制.方法:体外培养SD大鼠原代腹膜间皮细胞,静止24 h后,随机分为正常对照组和TGF-β1(10 μg/L)刺激组.用TGF-β1(10 μg/L)刺激RPMCs不同时间,分别用RT-PCR方法和Western免疫印迹法检测α-平滑肌肌动蛋白(α-smooth muscle actin,α-SMA)、E-钙黏素、Ⅰ型胶原的mRNA和蛋白的表达.用Western免疫印迹法检测总RhoA的蛋白表达水平,活化的RhoA由膜蛋白提取试剂盒提取,并用Western免疫印迹法评估.结果:TGF-β1刺激RPMCs能导致E-钙黏素mRNA和蛋白表达下调;α-SMA,Ⅰ型胶原mRNA和蛋白表达上调,同时RhoA蛋白表达上调,呈时间依赖性.结论:TGF-β1诱导了大鼠腹膜间皮细胞转分化,其机制可能通过RhoA介导的信号通路.     

PI3-K的激活在TGF-β1诱导GMC基质分泌过程中的作用

目的探讨磷脂酰肌醇3-激酶的激活在转化生长因子β1体外诱导人肾小球系膜细胞基质过度分泌中的作用及意义。方法GMCs体外培养,刺激1h后检测p-Akt及总Akt水平,48h检测FN的表达。结果Westernblot结果显示,加入TGF-β1刺激后磷酸化Akt水平显著升高,并且随着TGF-β1浓度升高而增加,人GMCs中p-Akt水平也逐渐升高,同时加入等浓度的Wortmannin(10nmol/L)后,磷酸化Akt水平较单纯加入TGF-β1显著减弱,且差异有显著性(P<0.05),但与正常对照组比较差异无显著性(P>0.05),刺激GMCs24h,TGF-β1刺激组蛋白质GMCs分泌的FN量明显增加。结论PI3-K也可被TGF-β1激活,并且在由TGF-β1所引起的GMCs基质过度分泌过程中发挥重要作用。     

PI3K/AKT/GSK-3β信号通路与心肌缺血/再灌注损伤的相关性研究

磷脂酰肌醇-3-激酶/蛋白激酶B(PI3K/AKT)信号通路在肿瘤细胞中被发现。随着分子医学的发展,研究发现,该通路通过调控下游的多种效应分子对器官的缺血/再灌注损伤起保护作用,其中糖原合成酶激酶3β(GSK-3β)是主要效应分子,两者联合被称为PI3K/AKT/GSK-3β信号通路。该通路在心肌细胞缺血/缺氧培养、心肌暖缺血/再灌注损伤及离体心脏心肌缺血/再灌注损伤中的保护作用已经得到证实,但在心脏移植中对于心肌缺血冷保护及移植后的再灌注损伤的作用报道较少,需要进一步探讨。     

PI3K/AKT/GSK-3β信号在脑缺血预处理中的作用及对海马细胞凋亡的影响

目的 研究脑缺血预处理(CIPC)中PI3K/AKT/GSK-3β信号通路调节变化及对海马细胞凋亡的影响.方法 制作脑缺血、CIPC及LY294002干预模型.进行神经功能缺损评分;TTC染色计算脑梗死体积;TUNEL法检测海马细胞凋亡;Western blot检测p-PDK1、AKT、p-AKT、GSK-3β、p-GSK-3β(ser9)、Mcl-1的蛋白表达,RT-PCR检测GSK-3β的转录.结果 ①与脑缺血组比较,CIPC组在神经功能缺损评分、脑梗死体积、细胞凋亡、GSK-3β蛋白表达及转录水平均降低(均P＜0.05),但脑缺血组与LY294002组比较,上述各检测值差异均无统计学意义(均P＞0.05);②与脑缺血组比较,CIPC组的p-PDK1、p-AKT、p-GSK-3β(ser9)、Mcl-1的蛋白表达均增高,LY294002组各蛋白表达较CIPC组均降低(均P＜0.05),LY294002组与脑缺血组比较各蛋白表达差异均无统计学意义(均P＞0.05).结论 脑缺血预处理降低GSK-3β的转录和蛋白表达,增加p-PDK1、p-AKT、p-GSK-3β(ser9)、Mcl-1的表达,减少神经元凋亡.LY294002可抵消脑缺血预处理的保护作用.     

PI3K/AKT/mTOR信号通路在卵巢癌中的研究进展

卵巢癌的发生过程中存在磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(PI3K/AKT/m TOR)信号通路的激活,该通路的异常激活可促进细胞增殖、抑制细胞凋亡、促进肿瘤侵袭和转移。PI3K/AKT/m TOR通路靶向抑制剂对卵巢癌显示出一定的疗效,目前该靶向药物的临床试验已开展,并显示出良好的安全性和有效性。针对PI3K/AKT/m TOR的靶向药物将为卵巢癌的治疗指明新方向。     

PI3K/AKT/mTOR信号通路及其相关抑制剂在急性髓系白血病中的作用

目前已经发现有多种信号通路参与急性髓系白血病的生长、增殖及凋亡,PI3K/AKT/mTOR信号通路是其中比较重要的一种。本文就PI3K/AKT/mTOR信号通路的组成、调控以及其相关抑制剂在AML中的研究现状进行阐述,并简要介绍其应用前景。     

PI3K/Akt信号通路与卵巢癌耐药关系的研究

目的研究磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)和磷酸化Ak(tp-Akt)蛋白在卵巢上皮癌中的表达情况及其与卵巢癌化疗原发耐药的关系。方法采用免疫组织化学方法检测PI3K和p-Akt蛋白在40例原发性上皮性卵巢癌组织中的表达情况;应用MTT比色分析法检测卵巢癌细胞对紫杉醇(PTX)、表阿霉素(EADM)、顺铂(CDDP)和卡铂(CBP)4种临床常用化疗药物的敏感性。结果65例卵巢癌标本进行体外药敏试验,25例失败,可评价标本为40例。卵巢癌组织中PI3K蛋白的阳性率为60%(24/40),p-Akt蛋白的阳性率为65%(26/40),二者呈正相关(r=0.578,P<0.01)。PI3K蛋白表达阳性组和阴性组相比,化疗药物的平均抑制率均下降,耐药率均升高,其中CDDP的平均抑制率差异显著(z=-3.567,P<0.01)。p-Akt蛋白表达阳性组和阴性组相比,化疗药物的平均抑制率均下降,耐药率均升高,其中CDDP、CBP两种药物的平均抑制率差异均显著(z=-2.201和z=-2.298;P<0.05和P<0.05)。结论在卵巢上皮癌组织中,铂类药物的原发性耐药可能与PI3K/Akt信号通路异常活化有关。     

Hsulf-1介导PI3K/AKT信号通路抑制肝癌细胞侵袭转移的作用机制研究

目的 探讨人硫酸酯酶-1(Hsulf-1)基因介导磷脂酰肌醇-3-激酶/蛋白激酶B(PI3K/AKT)信号通路抑制肝癌细胞侵袭转移的作用机制.方法 将构建成功的pcDNA 3.1(+)-Hsulf-1质粒及Hsulf-1 siRNA质粒分别转染肝癌细胞系SMMC7221细胞,应用PI3K/AKT通路抑制剂LY29400...     

PI3K/Akt通路与肿瘤的化疗耐药关系研究

肿瘤细胞耐药性的产生是导致肿瘤化疗失败的重要因素,其产生的机制尚未完全清楚。研究发现,PI3K/Akt通路不仅与细胞的增殖、凋亡有关,而且在肿瘤的生长、对化疗的反应方面都扮演着重要角色。特异性抑制PI3K/Akt通路的活性可减少肿瘤细胞的化疗耐药性,通路抑制剂联合化疗可增强化疗效果,这提示了PI3K/Akt通路可作为肿瘤治疗的潜在靶点。     

PI3K/AKT/mTOR信号通路与类风湿关节炎的相关性

目的 探讨类风湿关节炎(RA)不同活动期进程与PI3K/AKT/mTOR信号通路的相关性,为临床寻找诊疗RA新的理论依据.方法 按RA疾病活动指数(DAS28)分为低、中、高度活动期共60例,其中低度活动期(L组)22例,中度活动期(M组)20例,高度活动期(H组)18例,同时采集同期门诊25例健康体检者外周血作为健康对照组,通过FQ-PCR检测外周血单个核细胞(PBMC)中PI3K/AKT/mTOR信号通路PI3K、AKT、mTOR基因 mRNA表达水平;并通过蛋白免疫印迹法检测PI3K/AKT/mTOR蛋白表达变化.结果 L组、M组、H组中PI3K的mRNA分别为2.04±0.74、4.05±0.46、2.18±0.25,均高于健康对照组0.49±0.13,差异有统计学意义(P=0.020、0.009、0.019).M组高于L组、H组,差异有统计学意义(P=0.018、0.031).L组、M组、H组中AKT的mRNA分别为0.46±0.32、0.83±0.42、0.65±0.38,均高于健康对照组0.23±0.21,差异有统计学意义(P=0.030、0.017、0.027).L组、M组、H组中mTOR的mRNA分别为0.94±0.12、1.12±0.23、0.94±0.30均高于健康对照0.32±0.06,差异有统计学意义(P=0.003、0.002、0.001).与健康对照组比较,L组、M组、H组RA患者PBMC中PI3K蛋白表达降低,分别为0.44±0.11、0.14±0.02、0.06±0.01,差异有统计学意义(P=0.008、0.005、0.001).与健康对照组比较,L组、M组、H组RA患者PBMC中AKT蛋白表达升高,分别为2.51±0.11、18.29±4.52、15.13±3.28,差异有统计学意义(P=0.035、0.001、0.002).与健康对照组比较,M组、H组RA患者PBMC中mTOR蛋白表达升高,分别为31.5±7.52、35.13±8.62,差异有统计学意义(P=0.002、0.001).L组(1.25±0.13)与健康对照组比较,差异无统计学意义(P>0.05).结论 PI3K/AKT/mTOR信号通路在RA不同活动组表达有差异,可能与RA的病情严重程度相关.     

PI3K信号通路调控中枢敏感化的研究进展

PI3K被激活后可通过产生的第二信使作用于其下游的相关蛋白或激酶,激活不同的效应子,参与多种生物学效应.目前研究发现PI3K-TRPV1、PI3K-PKB/Akt和PI3K-AChRs等多种信号通路可调控痛觉超敏,PI3K信号通路后既可促进炎性疼痛易化的产生和维持,又有助于神经病理性疼痛的发展.     

PI3K/Akt信号通路在增生性瘢痕中的调控作用

目的 探讨PI3K/AKT信号通路在增生性瘢痕中的调控作用。方法 构建兔耳增生性瘢痕模型,并随机分为4组：正常兔耳皮肤组（A）、瘢痕模型组（B）、DMSO刺激模型组（C）、PI3K特异性抑制剂（LY294002）刺激模型组（D）。通过组织病理学观察兔耳瘢痕的形态学变化;免疫组化和Western blot检测pAkt[S473]和p-Akt[T308]的表达量;免疫荧光双染色评估p-Akt[S473]和p-Akt[T308]的共定位情况;以及TUNEL评估皮肤组织中成纤维细胞的凋亡水平。结果 D组中瘢痕厚度及成纤维细胞数明显高于B和C组。免疫组化和Western blot检测结果表明,p-Akt[T308]和p-Akt[S473]在B组中的表达量明显高于A组,但在D组中显著低于C组。免疫荧光表明,p-Akt[T308]和p-Akt[S473]主要定位于瘢痕组织中的细胞浆内,且在D组中的共表达量低于B组。TUNEL检测结果证实,与A组相比,B组皮肤组织中细胞凋亡水平明显下调,且D组中细胞凋亡水平高于C组（P <0.01）。结论 阻断PI3K/Akt信号通路可通过抑制Akt磷酸化,导致...