氨茶碱对TNF-α诱导下大鼠气道平滑肌细胞中RANTES的影响

目的:观察临床治疗范围内不同浓度的氨茶碱对肿瘤坏死因子-α(TNF-α)诱导下大鼠气道平滑肌细胞(ASMC)中活化正常T细胞表达和分泌的调节物(RANTES)的影响及相应浓度的氨茶碱作用下细胞内环磷酸腺苷(cAMP)的变化,了解趋化因子在哮喘发病机制中的作用,进一步阐明茶碱类药物在治疗哮喘中的抗炎机制。方法:将分离的大鼠ASMC进行传代培养,培养液中加入TNF-α(终浓度为10μg/L)诱导后,再加入不同浓度的氨茶碱,用ELISA方法检测上清液中RANTES的浓度,用放射免疫法检测培养液中cAMP的浓度。结果:经TNF-α诱导后,不加氨茶碱组中大鼠ASMC上清液中RANTES的浓度最高,为(13.799±0.250)×10-9g/L,不同浓度氨茶碱作用后,RANTES的浓度均有所减少,其中5(即氨茶碱终浓度为5 mg/L,下同),7.5,10,12.5,15和17.5 mg/L组RANTES的浓度分别为(13.088±0.252),(12.555±0.100),(10.425±0.502),(7.943±0.500),(5.465±0.500),(4.581±0.25)ng/L。除5 mg/L组和对照组相比无显著性差异(P>0.05)外,其余氨茶碱组与对照组组差异均具有统计学意义(P<0.05)。各氨茶碱组之间相比较,除5 mg/L组和7.5 mg/L组相比无显著性意义(P>0.05)外,其余氨茶碱组两两相比均有统计学意义(P<0.05)。TNF-α诱导下,细胞内cAMP的浓度随着氨茶碱浓度的增加而增高。结论:茶碱类药物可抑制大鼠ASMC中RANTES的产生,并可能呈浓度依赖性,而且这种抑制作用与细胞内cAMP的变化有一定的关系。     

氨茶碱对大鼠气道平滑肌细胞增殖抑制及促细胞凋亡样改变

目的 :探讨氨茶碱对大鼠气道平滑肌细胞 (ASMCs)增殖抑制和促凋亡作用及在哮喘发生、发展中的机制 .方法分离大鼠气道平滑肌 ,在含有 10 0mL·L -1胎牛血清的DMEM中培养 ,第 4～ 6代细胞用于实验 ,细胞用不同浓度氨茶碱 (0 ,5 0 ,10 0 ,2 0 0 ,30 0 ,4 0 0mg·L -1)诱导培养12～ 72h ;用光学显微镜观察其形态学凋亡改变 ;用琼脂糖电泳分析DNA片段 .结果 :①氨茶碱以时间和浓度依赖的方式降低存活的细胞数 ;②当氨茶碱浓度 >5 0mg·L -1时 ,光镜下可见细胞核皱缩、碎裂 ,随着药物浓度增加 ,凋亡小体形成 ;③当氨茶碱浓度 >5 0mg·L -1时 ,琼脂糖电泳显示了典型的梯状条带 .结论 :实验表明氨茶碱可以诱导体外大鼠ASMCs发生凋亡样改变     

沙丁胺醇对大鼠气道平滑肌细胞内eotaxin表达的影响及其机制探讨

目的 观察气道平滑肌细胞(ASMC)经致敏血清刺激后嗜酸性粒细胞趋化因子(eotaxin)的表达变化及沙丁胺醇对其表达的影响,探讨其可能的作用机制及β2受体激动剂在哮喘治疗中的作用.方法 无菌条件下分离SD大鼠气管段,组织块贴壁法体外培养ASMC.建立SD大鼠哮喘模型,采血收集血清.以致敏动物血清刺激体外培养的ASMC并收集培养上清及细胞.采用酶联免疫吸附法测定培养液上清中的eotaxin水平；放射免疫法测定培养细胞胞内环磷酸腺苷(cAMP)的表达；逆转录-聚合酶链反应半定量检测培养细胞中的eotaxin mRNA的表达.结果 哮喘大鼠被动致敏后,气道平滑肌细胞可表达eotaxin(n =4,P＜0.05),其表达水平与胞内的cAMP水平呈负相关(P＜0.01,r =0.788)；沙丁胺醇干预后,ASMC中eotaxin的表达明显下降(n=4,P＜0.05).结论 气道平滑肌细胞在致敏状态下eotaxin的表达显著增强,作为炎性分泌细胞参与哮喘发生过程,是哮喘发病机制的重要组成部分.沙丁胺醇可以在哮喘发病中有效抑制炎性细胞因子的表达.     

致敏血清诱导大鼠气道平滑肌细胞嗜酸粒细胞趋化因子的表达及机制探讨

目的观察气道平滑肌细胞经哮喘致敏血清刺激后嗜酸粒细胞趋化因子（Eotaxin）的表达变化,并探讨其可能的机制。方法贴壁法体外培养大鼠气道平滑肌细胞。建立大鼠哮喘模型,采血收集致敏血清。用致敏血清刺激体外培养的气道平滑肌细胞,或同时予以致敏血清和地塞米松干预。采用酶联免疫吸附法测定培养液上清中Eotaxin水平,放射免疫法测定细胞内环磷酸腺苷（cAMP）表达,逆转录聚合酶链反应半定量检测细胞中Eotaxin mRNA表达。结果致敏血清干预后,细胞培养上清Eotaxin水平和细胞内Eotaxin mRNA表达均较正常对照组显著升高[（107.09±7.12）ng/L比（0.63±0.56）ng/L,P〈0.05;1.39±0.04比0.05±0.01,P〈0.05],细胞内cAMP表达显著降低[（17.58±3.62）ng/L比（32.39±3.36）ng/L,P〈0.05]。地塞米松与致敏血清同时干预后,上清中Eotaxin水平[（64.18±4.04）ng/L]和胞内Eotaxin mRNA（0.77±0.19）表达较哮喘组显著降低,细胞内cAMP表达显著升高[（58.99±5.94）ng/L]（P〈0.05）。上清Eotaxin水平与胞内cAMP水平呈负相关（r=-0.788,P〈0.01）。结论气道平滑肌细胞在致敏状态下Eotaxin基因和蛋白表达均显著增强,可能作为炎性自分泌细胞分泌炎症因子,通过cAMP信号途径参与哮喘的发生。     

氨茶碱对大鼠气道平滑肌细胞增生的影响及其与基质金属蛋白酶的关系

目的探讨氨茶碱对大鼠气道平滑肌细胞(ASMCs)增殖抑制及其与基质金属蛋白酶(MMPs)的关系。方法分离大鼠气道平滑肌,在含有10％胎牛血清的DMEM中培养,第4～6代细胞用于实验,细胞用不同浓度氨茶碱诱导培养48h;采用细胞计数法观察并比较不同浓度氨茶碱对培养细胞的增殖抑制作用;明胶酶谱和Westernblot检测细胞MMP2、MMP9的活性及表达。结果氨茶碱以浓度依赖的方式降低存活的细胞数;2)Westernblot结果显示:含10％胎牛血清的细胞培养液内,有MMP2、MMP9表达,50、100、200mg/L氨茶碱作用48h后,细胞培养液内MMP2、MMP9蛋白水平较对照组显著降低(P<0.05),且呈剂量依赖效应;其中,100、200 mg/L氨茶碱作用后,较对照组降低非常显著(P相似文献   

氨茶碱对大鼠气道平滑肌细胞增殖抑制及其对c-fos表达的影响

目的:探讨氨茶碱对大鼠气道平滑肌细胞(ASMC)增生及原癌基因c-fos表达的影响.方法:分离大鼠气道平滑肌细胞,在含有100mL/L胎牛血清的DMEM中培养,第4～6代细胞用于实验,细胞用不同浓度氨茶碱(0,50,100,200,300,400mg/L)诱导培养12～72h;MTT法观察ASMCs的增殖情况;荧光显微镜形态学观察大鼠ASMCs凋亡;RT-PCR观察ASMCs的c-fosmRNA表达状况.结果:①氨茶碱以时间和浓度依赖的方式减少存活的细胞数;②当氨茶碱浓度大于50mg/L时,荧光显微镜下可见深染、浓缩的细胞核,随着药物浓度的增加,凋亡小体形成;③RT-PCR显示对照组及50～200mg/L氨茶碱组均有c-fosmRNA表达,而且随着氨茶碱浓度的提高,表达量逐渐减少,300和400mg/L氨茶碱组则未见有c-fosmRNA表达.结论:氨茶碱可能通过下调原癌基因c-fos表达来抑制大鼠ASMC增生.     

氨茶碱对大鼠气道平滑肌细胞分泌基质金属蛋白酶的影响

目的: 探讨氨茶碱对体外培养的大鼠气道平滑肌细胞(ASMC)分泌基质金属蛋白酶(MMPs)的影响及其与ASMC增殖抑制的关系 .方法: 分离大鼠气道平滑肌细胞,在含有100 mL/L胎牛血清的DMEM中培养,第4～6代细胞用于实验,细胞用不同浓度氨茶碱(0,50,100,200 mg/L)诱导培养12～72 h;采用细胞计数法观察并比较不同浓度氨茶碱对培养细胞的增殖抑制作用; Western blot和明胶酶谱法检测细胞MMP2,MMP9的活性及表达 . 结果: ① 100和200 mg/L浓度氨茶碱对体外培养大鼠ASMC增生较对照组有明显的抑制作用(P <0.05);②当氨茶碱浓度＞50 mg/L时,Western blot法检测到MMP2和MMP9表达显著降低(P <0.05),且呈剂量依赖效应;③明胶酶谱也显示,浓度＞50 mg/L的氨茶碱作用48 h后,明胶酶活性较对照组显著降低,也呈剂量依赖效应 .结论: 氨茶碱通过剂量依赖效应抑制大鼠ASMC分泌MMP2和MMP9,从而阻止气道平滑肌细胞增生和气道重塑.     

香烟对大鼠肺白介素-8、谷胱甘肽及组蛋白去乙酰化酶2的影响

目的:探讨香烟暴露及戒烟对大鼠肺白介素-8、谷胱甘肽(GSH)及组蛋白去乙酰化酶2(HDAC2)的影响。方法:健康雄性SD大鼠40只随机分对照组、吸烟组(1月、2月组)、戒烟组(1月、2月组)。每组8只,吸烟组及戒烟组大鼠每天给予烟熏两次,吸烟组烟熏1月、2月取材;戒烟组烟熏2月后再继续饲养1月和2月后取材,分别检测支气管肺泡灌洗液(BALF)中白介素-8和GSH、肺组织HDAC2的表达。结果:比较吸烟组、戒烟组和对照组BALF中白介素-8含量升高、GSH浓度下降,戒烟后GSH渐升高,但仍不能达到正常;吸烟组肺组织HDAC2含量逐渐降低,戒烟后HDAC2又逐渐升高,但与对照组比较,仍有下降。结论:香烟暴露可诱导气道氧化应激反应,导致GSH减少,HDAC2减少,戒烟可有所改善。     

曲古菌素A对K562细胞中HDAC1表达的影响

目的研究表明组蛋白去乙酰化酶(histone deacetylase,HDAC1)在多种肿瘤中高表达,曲古菌素A(trichostatin A,TSA)可以抑制肿瘤细胞的生长.该实验研究HDAC1在K562细胞的表达及TSA对其增殖的影响.方法50～400 nmol/L的TSA分别处理K562细胞8～48 h后用四甲基偶氮唑蓝(MTT法)比色检测K562细胞的生长活性;应用流式细胞仪法观察细胞凋亡.RT-PCR和蛋白印迹法(western blot)方法检测K562细胞在24 h不同浓度(50～400 nmol/L)的条件下HDAC1的mRNA和蛋白的表达以及TSA对其作用.结果TSA可显著抑制K562细胞的生长,诱导细胞发生凋亡,并呈时间及剂量依赖性.HDAC1的mRNA A值的半定量表达以及蛋白表达明显增强(P＜0.05),但随着浓度的增加而表达下调.结论TSA对K562细胞具有明显的增生抑制及诱导凋亡作用,抑制HDAC1的表达,可能是其重要作用机制之一.     

麻黄碱对TNF-α诱导人支气管上皮细胞eotaxin表达的影响

目的：观察麻黄碱对肿瘤坏死因子‐α（TNF‐α）诱导的人支气管上皮细胞（16HBE）中嗜酸性粒细胞趋化因子（eotax‐in）表达的影响,探讨中药麻黄治疗哮喘的机制。方法将体外培养的16HBE细胞随机分为对照组、TNF‐α刺激组（TNF‐α20 ng／mL）、TNF‐α＋麻黄碱组（TNF‐α20 ng／mL＋麻黄碱300μg／mL）,每组细胞均设3个复孔培养18 h;荧光定量PCR检测各组细胞eotaxin mRNA的表达;免疫细胞化学染色法和Western blot检测各组细胞eotaxin蛋白的表达;双抗体夹心酶联免疫吸附法（ELISA）测定各组细胞培养上清液中eotaxin的浓度。结果与对照组比较,TNF‐α刺激组上皮细胞eotaxin mRNA及蛋白表达、细胞培养上清液中eotaxin的浓度明显增高,差异均有统计学意义（P＜0．01）;与TNF‐α刺激组比较,TNF‐α＋麻黄碱组以上各项指标均明显降低,差异有统计学意义（P＜0．01）。结论麻黄碱能抑制前炎症因子 TNF‐α诱导的16HBE中eotaxin的表达及分泌,这可能是中药麻黄治疗哮喘的机制之一。     

PDGF对哮喘大鼠气道平滑肌细胞中ERK通路的影响研究

目的：研究血小板源性生长因子（PDGF）对哮喘大鼠气道平滑肌细胞（ASMC）中ERK信号通路的调控作用。方法建立哮喘大鼠模型,原代分离培养ASMC,设未干预组（A组）、ERK阻断剂组（B组）、PDGF组（C组）和PDGF＋ERK阻断剂组（D组）。A组不加干预;B组又分为B1、B2、B3、B4组,分别加入浓度为0.1、1、5、10μmol/L的ERK阻断剂U0126;C组又分为C1、C2、C3、C4组,分别加入浓度为1、10、25、50μg/L的PDGF同二聚体PDGF- BB;D组加入10μmol/L的U0126和50μg/L的PDGF- BB。以RT- PCR法检测各组ERK1和TGF-β1的mRNA表达,免疫组化法检测A、B4、C4和D组中以上蛋白的表达。结果 RT- PCR提示B1、B2、B3、B4组ERK1 mRNA表达均显著低于A组（均P＜0.01）,U0126以浓度依赖的方式抑制PDGF诱导的ASMC中ERK的活化,C1、C2、C3、C4组ERK1 mRNA表达均显著高于A组（均P＜0.01）,ERK1 mRNA的表达与PDGF- BB存在明显的浓度依赖关系,D组与A组比较无统计学差异（P＞0.05）。免疫组化提示B4组ASMC中ERK1蛋白表达显著低于A组,C4组显著高于A组（均P＜0.01）,D组与A组相比无统计学差异（P＞0.05）;B4组TGF-β1蛋白表达显著低于A组,C4组显著高于A组,同时C4组显著高于B4组（均P＜0.01）,D组与A组相比无统计学差异（P＞0.05）。结论 PDGF可剂量依赖性激活哮喘大鼠ASMC内的ERK通路,同时伴随TGF-β1信号通路的活化。ERK通路参与了ASMC增殖的细胞内信号转导过程,PDGF可能经ERK环节促进TGF-β1通路活化。     

IL-17A抑制Th2细胞分化减轻哮喘小鼠气道嗜酸性粒细胞炎症

目的 研究IL-17A对哮喘小鼠Th2细胞分化及其相关炎症的作用.方法 24只C57BL/6J小鼠按随机数字表法分为对照组、哮喘组和IL-17A处理组(n=8).哮喘组和IL-17A处理组予以卵清蛋白(ovalbumin,OVA)致敏及激发.每次雾化激发前1h,IL-17A处理组给予重组小鼠IL-17A气道滴入.各步对照均予以生理盐水.末次激发后24h处死小鼠,收集支气管肺泡灌洗液(bronchoalveolar lavage fluid,BALF)行细胞总数及分类计数.ELISA检测BALF中IL-4、IL-5、IFN-γ、IL-17A的浓度.HE和PAS染色及半定量评分评估小鼠肺部病理变化.流式细胞术检测脾脏和支气管淋巴结Th细胞分化.免疫磁珠分选健康小鼠幼稚CD4+T细胞,用Th2极化培养基体外培养,并给予IL-17A或等量PBS干预,检测Th2细胞的增殖、凋亡和分化.结果 哮喘组较对照组,BALF中细胞总数、嗜酸性粒细胞数及其比例(P＜0.05)、IL-4、IL-5、IL-17A浓度均显著增高(P＜0.05),IFN-γ浓度显著下降(P＜0.05);支气管、血管周围炎症细胞浸润和杯状细胞化生明显加重(P＜0.01);脾脏和淋巴结Th2细胞分化比例显著增高(P＜0.05).IL-17A处理组较哮喘组,BALF中的细胞总数[(26.00±5.43)×104/mLvs(58.40 ±26.93)×104/mL,P＜0.05]、嗜酸性粒细胞数[(8.04±1.98)×104/mL vs(31.95±12.28)×104/mL,P＜0.05]及其比例[(29.93 ±3.03)％ vs(53.47 ±6.62)％,P＜0.01]显著降低,而中性粒细胞数及其比例无明显变化;BALF中Th2相关因子IL-4浓度[(9.86 ±2.77) pg/mL vs(28.13 ±4.62) pg/mL,P＜0.01]、IL-5浓度[(7.30 ±0.50) pg/mL vs(10.50±1.10) pg/mL,P＜0.01]均显著降低;支气管、血管周围炎症细胞浸润减轻,HE染色半定量评分降低[(2.00 ±0.51)vs(3.12 ±0.64),P＜0.05],杯状细胞化生减少[(0.80 ±0.45)vs(2.40 ±0.55),P＜0.01];脾脏[(2.24±0.44)％vs(4.82±1.83)％,P＜0.01]和淋巴结[(7.05±0.58)％vs(10.57±1.35)％,P＜0.05]中Th2细胞分化比例显著减少.极化培养的幼稚CD4+T细胞,予IL-17A干预后,诱导分化的Th2细胞比例显著减少(P＜0.05),而增殖和凋亡无显著变化.结论 IL-17A有抑制Th2细胞分化,减轻哮喘小鼠气道嗜酸性粒细胞炎症的作用.     

小剂量氨茶碱对粉尘螨诱导的哮喘小鼠气道炎症及树突状细胞作用的研究

目的:研究氨茶碱对临床常见变应原粉尘螨致敏诱发的哮喘小鼠气道炎症及树突状细胞(DC)密度、分布的影响。方法:粉尘螨腹腔注射与雾化吸入诱发BALB/c小鼠哮喘发作,末次吸入24 h后采用免疫组织化学及计算机图像分析方法比较各组小鼠气道DC的分布及密度改变,并测定支气管肺泡灌洗液(BALF)中细胞总数、嗜酸性粒细胞(EOS)计数及IL-5(ELISA测定)浓度。结果:粉尘螨诱发后哮喘小鼠BALF中EOS计数(3.29±1.38)×1 06/L、IL-5水平(25±5)pg/ml均较正常组EOS计数(0.05±0.01)×106/L、IL-5水平(6±3)pg/ml显著升高(P<0.05、P<0.01),气道DC密度个数每平方毫米上皮面积(1542±28)个与正常组小鼠每平方毫米上皮面积(600±20)个比较,差异有显著性(P<0.01)。小鼠经小剂量氨茶碱处理后气道DC密度、BALF中EOS计数和IL-5水平与哮喘组比较,差异有显著性(P<0.05)。各组小鼠肺内DC分布未见明显变化。结论:小剂量氨茶碱抑制EOS性气道炎症,下调气道DC密度,未影响DC肺内分布。     

HDAC2 siRNA转染对人胰腺癌细胞增殖及凋亡的影响

［摘要］目的: 探讨RNA干扰沉默组蛋白去乙酰化酶2(histone deacetylase 2,HDAC2)基因表达对人胰腺癌细胞增殖和凋亡的影响。方法: 培养人胰腺癌PaTu8988细胞株,并将其随机分为5组:空白对照组,20 nmol／L HDAC2 siRNA阴性组,40 nmol／L HDAC2 siRNA阴性组,20 nmol／L HDAC2 siRNA组,40 nmol／L HDAC2 siRNA组。合成针对HDAC2基因的小干扰RNA(small interfering RNA,siRNA),利用阳离子脂质体将HDAC2 siRNA瞬时转染人胰腺癌PaTu8988细胞,分别采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)和蛋白质印迹法检测HDAC2基因及蛋白的表达;MTT比色法检测细胞的增殖率;流式细胞术测定细胞凋亡率。结果: 与空白对照组和阴性siRNA 组对比,HDAC2 siRNA组的HDAC2基因和蛋白的表达水平均明显下降(P均<0.05),细胞增殖率减慢(P<0.01),凋亡率明显升高(P<0.01)。结论: 采用RNA干扰沉默人胰腺癌细胞HDAC2基因表达,可抑制癌细胞增殖和诱导其凋亡。     

LTD4诱导大鼠气道平滑肌细胞收缩的机制

目的探讨LTD4对气道平滑肌细胞(ASMC)收缩的机制.方法以Fluo-3/AM作为细胞内游离Ca2+示踪剂,通过激光共聚焦显微镜观察LTD4对原代大鼠ASMC细胞内钙离子浓度([Ca2+]i)及细胞收缩的影响;观察胞外Ca2+、G蛋白、蛋白激酶C(PKC)、丝裂素活化蛋白(MAPK)在LTD4生理效应中的作用. 结果LTD4刺激后,[Ca2+]i上升前有一个潜伏期,随后缓慢增加.随着LTD4浓度上升,潜伏期逐渐缩短(P＜0.05).在无钙溶液中,LTD4诱导的[Ca2+]i上升明显抑制(P＜0.01).随LTD4浓度上升,ASMC收缩程度也有增强趋势(P＞0.05).LTD4诱导的[Ca2+]i上升与细胞收缩程度显著相关(P＜0.01).PTX对LTD4诱导ASMC[Ca2+]i上升和收缩均有明显抑制作用.Staurosporine对[Ca2+]i上升无明显影响,但对收缩有明显抑制作用.PD098059对[Ca2+]i上升无明显影响,对收缩有部分抑制.结论在大鼠ASMC中,LTD4诱导[Ca2+]i缓慢上升,并有潜伏期.[Ca2+]i在LTD4诱导ASMC收缩中起关键作用.G蛋白、PKC、MAPK在LTD4生理效应中起重要作用.     

阿奇霉素对哮喘大鼠气道平滑肌细胞生长的影响

目的 探讨阿奇霉素对哮喘大鼠气道平滑肌细胞（ASMCs）增殖的影响.方法 将20只SD大鼠随机分为对照组和哮喘组（哮喘组制备大鼠哮喘模型后,随机分为不同剂量的阿奇霉素组）,采用CCK-8法测定不同剂量的阿奇霉素组对哮喘大鼠气道平滑肌细胞的药物毒性反应,并分别采用琼脂糖凝胶电泳检测法和激光共聚焦显微镜观察法观察阿奇霉素各组的细胞凋亡情况,同时采用划痕法检测各阿奇霉素组平滑肌细胞的迁移能力.结果 （1）各剂量阿奇霉素组哮喘大鼠气道平滑肌细胞的生长率分别为（72.71±13.16）%、（66.42±4.90）%、（64.92±2128）%、（51.45±2.83）%;（2）与对照组比较,阿奇霉素各组均可以检测到气道平滑肌细胞染色体DNA发生片段化降解;（3）阿奇霉素各组均可显示典型的细胞凋亡形态学特征;（4）划痕法结果显示：阿奇霉素组的迁移数目和距离均较10%FBS血清刺激组减少和缩短（均P〈0.01）.结论 阿奇霉素可抑制哮喘大鼠气道平滑肌细胞增殖、迁移,促进细胞凋亡.     

维生素C对牙周膜干细胞中HDAC1和HDAC6表达的影响

目的:探究维生素C对牙周膜干细胞组蛋白去乙酰化酶（HDAC）1和HDAC6表达的影响。方法:收取临床上因正畸需要拔除的无龋坏前磨牙,分离并培养人牙周膜干细胞。流式细胞仪测定牙周膜干细胞表面标志物。qPCR检测添加5、20、80、320 mmol/L维生素C后,人牙周膜干细胞中HDAC1和HDAC6 mRNA的表达情况。结果:维生素C促进HDAC1（F=45.76,P<0.01）、HDAC6（F=119, P<0.01）的表达,且随着浓度的增加,HDAC1、HDAC6表达显著增加。结论:维生素C促进牙周膜干细胞中HDAC1和HDAC6表达。     

哮喘大鼠肺T细胞中组蛋白去乙酰基酶1的表达及对组蛋白修饰的影响

目的明确哮喘大鼠肺T淋巴细胞中的组蛋白去乙酰基酶1(HDAC1)蛋白表达水平及组蛋白整体乙酰化和甲基化水平,探讨其在哮喘发病机制中的作用。方法 16只Wistar大鼠随机分为对照组和哮喘组(每组8只),用卵白蛋白(OVA)致敏并激发建立哮喘大鼠模型。通过哮喘临床表现、气道高反应性测定、肺组织HE染色、血清和BALF中细胞因子IL-4、γ干扰素(IFN-γ)及IgEELISA测定,判断哮喘大鼠模型是否成功。分离肺T细胞并进行纯度鉴定。Western blot检测肺T细胞HDAC1蛋白表达水平,组蛋白H3、H4整体乙酰化,以及H3k9整体二甲基化水平。结果与对照组比较,哮喘组HDAC1蛋白表达水平低于对照组(P0.05),组蛋白H3、H4整体乙酰化水平和H3k9整体二甲基化水平差异均无统计学意义。结论肺T细胞HDAC1可能参与了支气管哮喘的发病环节,组蛋白整体乙酰化和甲基化水平与哮喘发病无明显相关性,HDAC1对组蛋白修饰作用可能是一个基因转录特异性事件。