化浊行血汤含药血清血管内皮保护作用及其体内给药时效差异的研究

目的 观察化浊行血汤含药血清对缺氧内皮细胞的保护作用,以及其药理作用与动物灌胃给药的量-时效关系.方法 以化浊行血汤不同给药方案、药后不同取血时间所得的药物血清为受试对象,培养血管内皮细胞,进行缺氧复氧实验,复氧同时给予不同化浊行血汤含药血清干预,采用MTT法观察不同含药血清对缺氧内皮细胞活性的影响.结果 含药血清各组与模型组比较有显著差异(P<0.05).给药后不同时间取血所获得的药物血清对缺氧内皮细胞活力的影响存在一定差异,以2次/d灌胃连续3 d,并在末次灌胃90 min后取血所得药物血清药理效应最佳.结论 化浊行血汤含药血清具有保护缺氧内皮细胞的作用,其血清药效与动物给药方法存在一定时效关系.     

双参通冠方药物血清对心肌细胞缺氧复氧损伤Ca~(2+)超载的影响

双参通冠方(SSTG)由人参、丹参、元胡3药的有效组分提取物组成,前期工作表明,该方是治疗心肌缺血再灌注损伤的有效中药制剂[1]。本实验运用血清药理学方法,在进行双参通冠方时-效、量-效及血清中含药成分研究后,确定SSTG含药血清制备的最优灌胃剂量、最佳取血时间,制备含药血清。复制心肌细胞缺氧复氧模型,观察SSTG含药血清对缺氧复氧损伤中Ca2+超载及心肌细胞膜ATPase活性的影响,阐明SSTG作用机制和作用环节。1材料与方法1·1     

紫芪方含药血清对肠上皮细胞缺氧复氧损伤的保护效应

目的:探讨紫芪方对IEC-6肠上皮细胞缺氧复氧损伤的保护效应。方法:建立IEC-6细胞缺氧复氧损伤模型;采用血清药理学方法,在细胞培养液中加入不同给药剂量制备的紫芪方药物血清(给药1次和间隔1 h两次给药10 g.kg-1DJ-1,SJ-1;给药1次和间隔1 h两次给药20 g.kg-1;DJ-2,SJ-2),和参附药物血清(间隔1 h两次给药20 g.kg-1SF)及对照血清(C)。测定LDH漏出量和其细胞生长曲线。结果:与对照组比较,SJ-1,SJ-2两组制备的药物血清能明显减少IEC-6细胞LDH的漏出量,其中SJ-1(P<0.05),SJ-2(P<0.01);SJ-2组24 h细胞活力明显高于缺氧复氧细胞损伤组及参附血清组(P<0.05),并随时间而逐渐增强。结论:紫芪方对IEC-6肠上皮细胞缺氧复氧损伤具有显著保护效应。     

基于中药血清化学及血清药理学方法探讨香青兰保护心肌细胞缺氧/复氧损伤物质基础

目的:利用中药血清化学及血清药理学方法探讨香青兰保护心肌细胞缺氧/复氧损伤的物质基础。方法:测定和比较香青兰提取物及其灌胃给药前后大鼠空白血清和含药血清的HPLC,寻找香青兰入血成分;体外培养乳大鼠原代心肌细胞及H9c2细胞,用Na2S2O4或N2为缺氧剂建立缺氧/复氧损伤模型,以细胞活力、LDH释放量、T-SOD活力、MDA产量及细胞凋亡为指标,考察香青兰提取物及其含药血清、香青兰提取物不同给药剂量及不同给药时间段所采血清的处理物对细胞损伤的影响。结果:香青兰在血清中出现4个移行成分,其中3个为原型成分,1个可能为代谢产物;与模型组或空白血清组相比,香青兰提取物、含药血清及不同因素影响下的血清处理物显著降低缺氧/复氧心肌细胞LDH释放量和MDA产量(P<0.05,P<0.01),显著升高T-SOD及细胞活力(P<0.05,P<0.01),明显抑制细胞凋亡。结论:香青兰提取物4个入血成分可能为香青兰保护心肌细胞缺氧/复氧损伤的物质基础。     

民族药余甘子冻干粉免疫调节作用的血清药理学研究

目的实验旨在应用中药血清药理学研究方法,研究民族药余甘子对小鼠脾淋巴细胞增殖的影响,对小鼠S180腹水肿瘤细胞存活率的影响以及对小鼠腹腔巨噬细胞细胞活化作用的研究。方法余甘子采用鲜果榨汁经冷冻干燥冻干保存。小鼠随机分6组,其中时效关系研究2组,量效关系研究4组。按0.2 m l/10 g体重用余甘子溶液灌胃。灌胃后30~180 m in内不同时相无菌取血,利用中药血清药理学方法对实验血清作时效关系研究及量效关系研究。结果与结论时效关系研究表明,用余甘子冻干粉溶液灌胃后30~180 m in内不同时相含药血清对小鼠脾淋巴细胞具有活化作用,并在给药2 h时实验血清活化作用明显;量效关系研究表明,余甘子大剂量组实验血清对促进小鼠脾淋巴细胞增殖,促进小鼠腹腔巨噬细胞细胞活化作用以及小剂量组实验血清对小鼠S180腹水肿瘤细胞存活率的影响均具显著差异性。     

含药血清的制备方法研究

研究不同给药方式不同采血时间含复方丹参血清中吵性粒细胞释放活性氧的影响。探讨含药血清的制备方法。结果发现给药１５次后不同采血时间含复方丹参血清对中性粒细胞释放活性氧具有较高而且相似的抑制作用强度,与给药１次后各采血时间含药血清抑制作用强度有明显差异,提示重复多次给药使血药浓度达到稳态后,在一定时间范围内采血进行血清药理学实验均可获得较高而且相似的药理作用强度。     

冠心止痛胶囊含药血清内皮保护作用与体内给药时效关系研究

目的:观察冠心止痛胶囊含药血清对过氧化氢(H2O2)损伤内皮细胞的保护作用与体内给药的时效关系。方法:建立体外培养的HUVECs细胞H2O2氧化损伤模型,以冠心止痛胶囊不同给药方案所制备的含药血清对氧化损伤内皮细胞存活率、乳酸脱氢酶活性、一氧化氮、内皮素-1、组织型纤溶酶原激活物、组织型纤溶酶原激活物抑制剂的含量为指标,评价不同方案制备的含药血清对内皮细胞的保护作用。结果:不同方案所制备冠心止痛胶囊含药血清对H2O2诱导的HUVECs损伤均具有保护作用,连续3 d、5 d、7 d给药组含药血清的药效明显强于单次给药,连续5 d、7 d组的含药血清作用强于3 d组,但连续5 d、7 d组含药血清药效无统计学差异。结论:冠心止痛胶囊含药血清的药效与给药时间存在一定时效关系,以2次/d连续5 d给药后所制备的含药血清药理效应最佳。     

复方丹参多元释药微丸对心肌细胞缺氧/复氧损伤的保护作用研究

目的:运用血清药理学的方法,探讨复方丹参多元释药微丸对心肌细胞缺氧/复氧损伤的保护作用,评价复方丹参多元释药微丸制剂的有效性。方法:单次灌胃给予市售复方丹参片和复方丹参多元释药微丸(折算生药材2911.14 mg/kg),于给药后0.25,0.5,0.75,1,2,4,8,12 h眼眶取血制备含药血清,并将不同时间点的含药血清作用于心肌细胞,检测心肌细胞的活性。结果:与模型组比较,市售复方丹参片4,8 h的含药血清对缺氧/复氧损伤心肌细胞有促增殖作用,而复方丹参多元释药微丸0.25,0.5,0.75,1,4,8,12 h的含药血清均能够显著促进缺氧/复氧损伤心肌细胞的增殖。结论:复方丹参多元释药微丸对心肌细胞缺氧/复氧损伤具有良好的保护作用,相对于复方丹参片,具有起效快,作用时间长的特点。     

运用药效动力学研究方法观察中药含药血清药理与整体药效的相关性

以抑制小鼠肝组织过氧化脂质生成作用为指标,通过单次灌胃给药的量效关系和时效关系的研究,估算了当归补血汤含药血清和当归补血汤整体给药抑制小鼠肝组织过氧化脂质生成作用的药效动力学参数,从定量的角度对当归补血汤含药血清和当归补血汤整体给药抑制小鼠肝组织过氧化脂质生成的作用进行了比较研究。结果表明,当归补血汤血清药理与整体药效抑制小鼠肝组织过氧化脂质生成作用的K_e、t_(1/2(ke))、K_a、t_(1/2(ka))、t_d、t_p等药效动力学参数均较为接近。当归补血汤血清药理与整体药效在抑制小鼠肝组织过氧化脂质生成作用上的一致性,反映出了血清药理作用与整体药效作用时相过程的良好相关性。     

脑血宁注射液血清药物化学及药动学研究

目的对脑血宁注射液的血清药物化学及药动学进行初步研究。方法建立脑血宁注射液及其静脉给药后人血清HPLC指纹图谱的分析方法,鉴定给药后血清中的主要药物化学成分及来源生药,并对主要化学成分的药物动力学进行研究。结果静脉滴注脑血宁注射液后,从人血清中检测到3种化合物,其中2种为脑血宁注射液所含原形成分,分别为丹皮酚和栀子苷;1种为新产生的代谢产物。丹皮酚和栀子苷人体内的药物动力学研究显示,静脉注射给药后,栀子苷在人体内血药浓度迅速下降,其药时过程符合一室模型,给药后70%以原型由肾脏清除;丹皮酚在人体的血浆药物浓度时间曲线过程符合二室模型,给药后,在体内广泛代谢,只有占给药量0.04%的丹皮酚以原形从尿液排出。结论血中所含化学成分为脑血宁注射液体内直接作用物质,对其进行深入的研究将有助于阐明脑血宁注射液的有效成分及作用机制。     

双参通冠方药物血清抗缺氧复氧损伤心肌细胞Ca2+超载的机制研究

目的:探讨双参通冠方药物血清对培养心肌细胞缺氧复氧损伤Ca²⁺超载的影响及其机制。方法:培养心肌细胞,建立缺氧复氧损伤模型。运用血清药理学方法研究双参通冠方药物血清对缺氧复氧损伤心肌Ca²⁺超载的影响。荧光分光光度法测定心肌细胞胞浆[Ca²⁺]i,激光扫描共聚焦显微法观察高K+及Thapsigargin诱导的细胞内Ca²⁺变化。结果:正常心肌细胞[Ca²⁺]i值较低,缺氧复氧后显著增高,高K⁺及Thapsigargin可诱导细胞内Ca²⁺的快速增多,双参通冠方药物血清能降低缺氧复氧心肌细胞Ca²⁺升高,并能抑制高K⁺及Thapsigargin所致的细胞内Ca²⁺荧光升高。结论:缺氧复氧损伤、高K⁺及Thapsigargin均可导致心肌细胞Ca²⁺增高,双参通冠方药物血清可抗心肌细胞Ca²⁺超载,其机制可能与其抑制细胞外Ca²⁺内流和促进内Ca²⁺吸收有关。     

川楝子致小鼠肝毒性时效、量效关系研究

目的研究川楝子致小鼠肝毒性的时效、量效关系。方法小鼠灌服不同剂量川楝子,测定其LD50。另取小鼠按不同时间点或不同剂量分组,检查血清ALT,AST,计算肝、脾、胸腺脏器指数,并观察肝组织形态变化。结果小鼠灌服川楝子的LD50为200 g.kg-1。ALT,AST在给药后1 h达到高峰,24 h可恢复近正常值。与正常组比较,川楝子81,166 g/kg剂量组对肝组织产生明显损伤,且随着剂量增大,ALT,AST升高显著(P<0.05或P<0.01)。结论小鼠单次灌服一定剂量川楝子可造成急性肝损伤甚至死亡,并显示有毒性时效、量效关系。     

当归红芪超滤膜提取物对急性心肌缺血大鼠AST、LDH和LDH1的影响

目的:探讨当归红芪超滤物对急性心肌梗死大鼠天冬氨酸氨基转移酶(aspartate aminotrans-ferase,AST),乳酸脱氢酶(actate dehydrogenase,LDH)和乳酸脱氢酶同工酶(lactate dehydrogenase,LDH1)活性的影响,阐明当归红芪超滤物对缺血心肌的保护作用。方法:结扎左前降支建立大鼠心梗模型。将80只雄性Wistar大鼠随机分成5组,每组16只,分别为造模组(myocardial infarction,MI)、假手术组(sham-operation,SH)、低剂量组(low-dose drug,LD)、中剂量组(middle dose group,MD)、高剂量组(high-dose drug,HD),分别检测给药24h和72h后外周血AST、LDH和LDH1的活性。结果:与SH组比较,MI组大鼠可见血清AST、LDH及LDH1活性明显增高(P0.05);与MI组比较,药物各剂量组AST、LDH及LDH1活性明显降低(P0.05),且峰值前移。结论:当归红芪超滤物可通过抗氧化作用降低AST、LDH及LDH1活性从而抗心肌缺血损伤,对大鼠心肌有明显的保护作用,且与用药时间及剂量密切相关。     

三草降压汤对自发性高血压大鼠降压作用的量效与时效关系研究

目的:探讨三草降压汤(SCD)降压作用的量效与时效关系特点。方法:采用清醒状态下大鼠尾动脉间接测压法,分别测定三草降压汤小、中、大三个剂量组对自发性高血压大鼠不同时间点的血压。结果:SCD给药后2h血压开始降低,小、中、大3个剂量组的降压作用效果与剂量之间呈现出较好的相关性;给药后4h,大、中剂量组具有量效相关性,而小剂量组无降压作用。选择中剂量组进一步研究表明,在给药后1h即出现血压下降,并在1-4h内保持较稳定的降压效果,6h时血压开始回升,8h后基本恢复到用药前水平。结论:SCD选择中剂量10.4g生药量/kg体质量,给药后2h作为检测点较为合适。该结果为今后更为深入的研究SCD降压药效评价和作用机制奠定了基础。     

吴茱萸致小鼠肝毒性时效、 量效关系研究

目的:研究吴茱萸致小鼠肝毒性的时效、量效关系。方法:将KM小鼠随机分为空白组和吴茱萸组,吴茱萸组分为5个不同时间组和3个不同剂量组。不同时间组动物在连续ig吴茱萸水煎液50 g.kg-1后于8,15,20,25,30 d处理,不同剂量组以100,50,25 g.kg-1连续ig 8 d后处理,各组动物均检测血清丙氨酸氨基转移酶(ALT),天冬氨酸氨基转移酶(AST),计算肝脏指数,并观察肝组织病理学变化。结果:与正常组相比,吴茱萸50 g.kg-1能够升高小鼠ALT,AST水平、肝脏指数(P<0.01),且ALT,AST水平在给药后第20 d达高峰,ALT从(31.7±9.1)U.L-1升高至(621.4±244.9)U.L-1,AST从(120.0±31.8)U.L-1升高至(407.6±132.8)U.L-1,肝脏指数和病理形态学的改变也具有时间依赖性;给予不同剂量的吴茱萸后,小鼠血清ALT,AST水平、肝脏指数均有上升,中高剂量组ALT分别为(127.2±42.0),(320.0±131.3)U.L-1,AST分别为(282.1±69.8),(471.4±143.7)U.L-1,与正常组相比ALT,AST水平和肝脏指数差异非常显著,病理形态学改变随剂量增大而损伤严重,毒性呈剂量依赖性。结论:小鼠连续ig给予吴茱萸水煎液可以造成肝脏的损伤,毒性与时间、剂量呈一定相关性。     

一种复合萃取物降尿酸量效与时效关系研究

目的研究一种复合萃取物(主要由葡萄皮、葡萄籽、红酒萃取物及人参、枸杞萃取物组成)体内降尿酸作用的量效和时效关系。方法雄性昆明种小鼠随机分为对照组,模型组,别嘌醇组及复合萃取物高、中、低剂量(400、200、100 mg/kg)组。时效关系研究中,各组分别连续给药2、4、7、10、13、16、20 d后,ip氧嗪酸钾溶液20 m L/kg造模;量效关系研究中,各组连续ig给药7 d后,ip氧嗪酸钾溶液20 m L/kg造模;按照试剂盒方法分别测定小鼠血清及尿液中尿酸水平及肝组织中黄嘌呤氧化酶(XOD)活性。结果时效关系研究发现,复合萃取物组给药4 d即显示出明显的降尿酸活性,连续给药7 d后,其低、中、高3个剂量组均表现出显著的活性,且在连续20 d的实验过程中,小鼠生理和精神状态都非常好。量效关系研究表明,复合萃取物低剂量(100mg/kg)时即显示良好的降尿酸活性,并存在一定的量效关系,以高剂量组最为显著,且高剂量组还显示出显著的抑制肝脏XOD的活性。结论复合萃取物在体内具有良好的降尿酸活性,呈现一定的量效和时效关系,其降尿酸作用与抑制XOD活性有关。     

用药物的量效关系和时效关系计算中药和中药制剂的半衰期

因多数药物都有随着剂量加大作用增强,作用达峰值后,随着时间延长作用减弱。所以在一定条件下,药物的量效关系和时效关系均可用直线回归方程表达。本文根据药物的量效关系和时效关系,研究了党参水溶性部分抑制小鼠自主活动和灭炎灵对小鼠退热作用的效量半衰期,药效半衰期(或半效期)以及它们在不同时间内的体存量,并依据体存量求其表观半衰期。结果表明,药物的上述三种半衰期都比较接近。其中以药效半衰期最长。     

四逆散冻干粉改善果蝇睡眠作用的量效时效关系研究

目的:研究四逆散冻干粉改善果蝇睡眠作用的量-效与时-效关系。方法:选取野生型Canton S品系黑腹果蝇为试验对象,利用自动红外果蝇活动监测系统,以果蝇24 h总睡眠时间为观察指标,分别进行四逆散冻干粉改善睡眠作用的量-效与时-效关系的研究。结果:雌雄果蝇的24 h总睡眠时间随着给药剂量的增加而增加,具有一定的剂量依赖关系,雌果蝇的最大有效剂量是4%,而雄果蝇的最大有效剂量为2%,雌果蝇连续给药4 d果蝇24 h总睡眠时间最长,而雄果蝇连续给药7 d,其24 h总睡眠时间最长。结论:四逆散冻干粉能促进果蝇的睡眠,但对雌、雄果蝇睡眠的影响程度不同。雌果蝇给药高浓度短时间效果较好,雄果蝇给药低浓度长时间效果好。     

肝豆汤对Wilson病模型高铜诱导的SH-SY5Y细胞自噬效应的影响及其作用机制

目的:研究肝豆汤对高铜诱导的人神经母细胞瘤(SH-SY5Y)细胞自噬效应的影响及其作用机制,为中医药防治脑型Wilson病(Wilson disease,WD)提供新的治疗靶点和研究思路。方法:噻唑蓝(MTT)比色法筛选硫酸铜(CuSO_4)造模浓度(0,100,200,400,800,1 600μmol·L-1)及时间; MTT比色法筛选含药血清浓度(5%,10%,15%,20%)及时间;乳酸脱氢酶(LDH)释放实验检测细胞LDH漏出率;流式细胞法检测细胞内活性氧(ROS)的含量;荧光染料JC-1检测细胞线粒体膜电位;流式细胞仪对自噬进行定量分析。蛋白免疫印迹法(Western blot)检测肝激酶B1(LKB1),腺苷酸活化蛋白激酶(AMPK),自噬微管相关蛋白轻链3A/B(LC3A/B),哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR),unc-51样激酶1(ULK1),磷酸化ULK(p-ULK),磷酸化AMPK(p-AMPK)蛋白的表达。结果:MTT结果显示,CuSO_4对细胞的损伤呈现一定的量效和时效关系(P 0. 01),随着CuSO_4作用浓度及时间的增加,细胞存活率呈现下降趋势; 10%含肝豆汤兔血清可显著抑制CuSO_4诱导的细胞死亡(P 0. 01)。LDH释放实验显示,与正常组比较,CuSO_4作用细胞后LDH漏出率显著增加(P 0. 01),与模型组比较,含肝豆汤兔血清明显降低CuSO_4损伤细胞的LDH漏出率(P 0. 05)。DCFH-DA荧光染色显示,与正常组比较,CuSO_4可显著增加细胞内ROS生成(P 0. 01),与模型组比较,含肝豆汤兔血清可显著抑制CuSO_4诱导的细胞内ROS产生(P 0. 01)。JC-1染色结果显示,与正常组比较,CuSO_4诱导细胞线粒体膜电位Δψm显著降低(P 0. 01),与模型组比较,含肝豆汤兔血清明显抑制CuSO_4诱导的线粒体膜电位降低Δψm(P 0. 05)。Western blot结果显示,与正常组比较,模型组细胞内LKB1,AMPK,LC3A/B,ULK1及p-AMPK蛋白的表达显著增加,mTOR及p-ULK蛋白的表达显著降低(P 0. 01)。与模型组比较,含肝豆汤兔血清组LKB1,AMPK,LC3A/B,ULK1及p-AMPK蛋白表达显著降低,mTOR及p-ULK蛋白表达显著增加(P 0. 01)。结论:高铜可通过诱导细胞内线粒体氧化应激,上调自噬相关蛋白LKB1,p-AMPK,AMPK,LC3A/B及ULK1的表达,下调自噬相关蛋白mTOR及p-ULK的表达,导致细胞发生自噬性死亡,而肝豆汤可通过调控LKB1/AMPK信号通路,下调自噬相关蛋白LKB1,p-AMPK,LC3A/B,ULK及AMPK的表达,上调自噬相关蛋白及基因mTOR及p-ULK的表达,抑制自噬的发生,阻断高铜诱导的神经元损伤,从而发挥神经保护作用。