年龄对小鼠IVF早期胚胎发育的影响

目的比较不同年龄小鼠体外受精胚胎发育的结局,探讨以年龄因素为背景的IVF胚胎发育的影响。方法采用相同超数排卵方案,在相同的培养条件和培养时间下,对4-8周龄和44-48周龄小鼠进行体外受精和胚胎培养,观察并记录双原核卵率、≥4细胞率、囊胚率以及孵化囊胚率。结果老龄组在受精率、卵裂率以及孵化囊胚率上与年轻组比较存在极显著性差异（P〈0.01）,但在囊胚形成率上的差异无统计学意义;老龄鼠超数排卵后获卵数明显少于年轻小鼠。结论年龄对卵子数量以及IVF胚胎早期发育有较大影响。     

线粒体能量代谢和DNA复制对小鼠卵子体外成熟、受精及发育的影响

目的 探讨胞质线粒体的氧化磷酸化（OXPHOS）活性或线粒体DNA复制在卵子成熟、受精和胚胎发育过程中的作用。方法 通过在小鼠体外成熟培养液中引入不同浓度的羰基氰4-(三氟甲氧基)苯腙 (FCCP, 10 nmol/L和100nmol/L)或2′,3′-双脱氧胞苷(ddC,10μmol/L和100μmol/L),抑制线粒体OXPHOS活性或线粒体DNA复制,统计分析各组卵子的体外生发泡破裂（GVBD）率、核成熟率、受精率及囊胚形成率,以分析线粒体功能抑制对卵子成熟、受精和胚胎发育的影响。 结果 线粒体OXPHOS活性和DNA复制功能在卵子和胚胎中所发挥的作用并不完全相同。FCCP抑制线粒体OXPHOS活性可显著降低卵子的核成熟率和囊胚形成率;但对卵子的GVBD的发生率和受精率无显著影响。而ddC抑制线粒体DNA复制不影响卵子的体外成熟和受精,但可显著抑制囊胚的形成。 结论 OXPHOS活性主要影响卵子成熟及胚胎发育;线粒体DNA复制则主要影响胚胎发育;而线粒体功能抑制不影响卵子的成熟启动和体外受精。     

男性抗精子抗体对体外受精一胚胎移植的影响

目的;评价男性抗精子抗体对体外受精-胚胎移植(IVF-ET)的影响。方法:以ELISA方法测定施行IVF-ET的150对不育夫妇中男方精浆抗精子抗体(AsAb)并分组:AsAb阳性组22例,AsAb阴性组128例。对比分析抗精子抗体及抗体类型对体外受精、卵裂和早期胚胎发育的影响,同时对移植后的妊娠率和流产率进行分析。结果:AsAb阳性组体外受精数明显低于AsAb阴性组(P<0.01),两组的卵裂数则无明显差异(P>0.05),而在阳性组中,不同抗体类型间体外受精、卵裂及胚胎质量无明显差异(P>0.05)。在移植日,AsAb阳性组的I级胚胎较阴性组低,而ⅢⅣ级胚胎和2原核受精细胞(2PN)明显增加(P<0.01)。两组移植后临床妊娠流产率无显著差异(P>0.05)。结论:AsAb能明显降低精子体外受精能力,对早期胚胎发育有损害。精子体处理不能完全清除AsAb对IVF影响。     

血管内皮生长因子受体-2在植入前小鼠胚胎发育中的表达变化

目的：探讨植入前小鼠胚胎血管内皮生长因子受体-2（VEGFR-2/Flk-1）的表达规律及其在小鼠胚胎发育中的作用。方法:对0.5－3.5 d小鼠胚胎行全胚免疫荧光染色及反转录－聚合酶链反应，观察胚胎发育过程中Flk-1表达时相及其变化；取8细胞期胚胎行体外培养，加入5 mg/L Flk-1中和抗体，分析36 h囊胚形成率。结果:在植入前小鼠胚胎中Flk-1 mRNA于4细胞期开始表达，8细胞期达高峰，桑椹胚期和囊胚期无表达；Flk-1蛋白表达定位于胚胎外缘和细胞交界处，于4细胞期和8细胞期表达呈阳性，桑椹胚期、囊胚期表达呈阴性；于体外培养的8细胞期培养液中加入5 mg/L中和抗体后，36 h囊胚形成率降低。结论:在小鼠植入前胚胎发育不同阶段Flk-1表达不尽相同，其作用可能与Flk-1促进植入前胚胎发育有关。     

胚胎的形态学指标与囊胚形成的相关性分析

目的研究胚胎的形态学指标与囊胚形成的关系。方法收集321对行辅助生殖技术助孕的夫妇D3移植和冷冻后剩余胚胎共1208枚,放入培养液中继续培养至囊胚期,观察囊胚形成率和优质囊胚形成率。结果共形成囊胚210枚,囊胚形成率17.4%,优质囊胚62枚,优质囊胚形成率为5.1%。D3卵裂球数目为6-10细胞组囊胚形成率和优质囊胚形成率极显著高于其它组(P0.01)。不同胚胎碎片组比较差异不显著(P0.05)。胚胎发育迟缓组囊胚形成率和优质囊胚形成率比正常发育组低,差异极显著(P0.01),其中延时受精组、发育阻滞组的囊胚形成率极显著低于发育迟缓组(P0.01)。结论 D3剩余胚胎仍有继续发育成囊胚的潜能,D3细胞数和胚胎发育速度与囊胚形成密切相关。     

早期卵裂胚胎的发育和妊娠结局

目的探讨胚胎早期卵裂与胚胎发育速度、胚胎质量、临床妊娠结局之间的关系。方法这项回顾性研究对2012年8月至2013年5月共690个IVF/ICSI周期进行了比较分析。试验组于受精后25-27h观察早期分裂情况,将胚胎分为早期分裂胚胎,原核破裂胚胎和2原核合子期胚胎。胚胎发育至受精后66-68 h(第3天)对胚胎进行形态学评级,根据移植胚胎中早期卵裂胚胎的数目分为三组:2 EC组(2枚早期卵裂胚胎),2 Non-EC组(2枚非早期卵裂胚胎),混合组(1枚非早期卵裂胚胎和1枚早期卵裂胚胎)。结果早期卵裂胚胎发育速度要快于原核破裂胚胎和2原核合子期胚胎,而且早期卵裂胚胎和原核破裂胚胎的优胚率显著高于2原核合子期胚胎。2 EC组、2 Non-EC组和混合组三组的临床妊娠率和种植率无统计学差异。早期卵裂观察组与非早期卵裂观察组之间的临床妊娠率和种植率也没有显著差异。结论虽然早期卵裂与胚胎发育速度和优胚率有着密切的关系,但形态学评分均优的胚胎优先选择早期卵裂的移植策略尚不能明显改善临床妊娠结局。     

延时摄像技术在判断早期受精和胚胎发育潜能的应用

目的探讨延时摄像技术在判断早期受精和胚胎发育潜能的应用价值。方法对体外受精/卵胞浆内单精子显微注射(IVF/ICSI)后行培养的21个周期共145个胚胎进行观察,分析早期受精第二极体释放时间和原核消失时间对胚胎发育潜能的预测作用、卵裂期不同的时间点与胚胎的优胚率的关系、培养基类型对培养结果的影响。结果动态监测的结果分析显示(1)ICSI后第二极体释放时间3h为77.4%,4h为92.7%,5h为100%。(2)原核消失较早(受精后小于24h)的胚胎第2天4细胞比率、D3 8细胞比率、优质率均高于原核消失时间较晚组(受精后大于24h)。(3)t3、t4、t5、s2和cc2组最佳时间范围内的优胚率显著高于最佳时间范围外的优胚率(P0.01),而t2组最佳时间范围内外之间的优胚率差异不显著(P0.05)。(4)全程培养基与序贯培养基培养可以获得相似的临床结果,全程培养基培养囊胚获得更高的囊胚形成率。结论第二极体的释放可以作为早期受精判断的标准之一;原核消失的时间将会是评测胚胎发育能力的一个重要指标,原核消失较早的胚胎比原核消失时间较晚的胚胎有更好的发育潜能;t3、t4、t5、s2和cc2最佳时间范围内的优胚率显著高于最佳时间范围外的优胚率,全程培养基更便于Time-lapse监测。延时摄像技术能够对胚胎体外发育过程进行全程监控的行为学指标,可更有效地评估胚胎的发育潜能。     

短时受精不同脱颗粒细胞方式对体外受精结局的影响

目的探讨体外受精-胚胎移植（IVF-ET）治疗中几种短时受精脱颗粒细胞方式对胚胎质量及临床结局的影响。方法将261个IVF-ET周期根据脱颗粒细胞时间分为：短时受精后18小时脱颗粒细胞组（A组）94个周期、短时受精后5h脱颗粒细胞组（B组）95个周期和短时受精5h后部分（1/3-1/2）脱颗粒细胞组（C组）72个周期。分别比较三组的受精率、多精受精率、卵裂率、优胚率、胚胎利用率、临床妊娠率、种植率和流产率。结果三组的受精率、正常受精率、多精受精率、卵裂率、临床妊娠率和流产率差异无统计学意义（P〉0.05）,A组的优胚率、胚胎利用率和胚胎种植率显著高于B组（P〈0.05）。结论短时受精后即刻剥除部分卵子颗粒细胞观察第二极体,在确保受精的情况下剩余卵母细胞保留自体卵周颗粒细胞共培养,可以提高常规IVF的胚胎质量,从而提高常规IVF总的临床妊娠率和胚胎种植率。     

兔卵巢组织冷冻移植后卵母细胞成熟及受精发育能力的研究

目的 探讨兔卵巢组织冷冻复苏后移植对卵母细胞生长、成熟、受精发育潜能的影响。 方法 25只性成熟新西兰雌兔随机分为对照组（5只）、新鲜移植组（10只）及冷冻复苏移植组（10只），卵巢组织均自体多点移植于子宫系膜内。卵巢移植90d后对兔联合使用促排卵、体外成熟培养和卵泡浆内单精子注射技术，观察卵子的成熟情况以及体内和体外成熟卵子的受精率、卵裂率和囊胚形成率。 结果 新鲜移植组和冷冻复苏移植组获卵数均低于对照组(P＜0.05），而两移植组间获卵数差异无显著性；各组未成熟卵子所占比率以及未成熟卵子体外成熟后的成熟率间均无显著性差异；各组间体内成熟卵子、体外培养成熟卵子的受精率、卵裂率和囊胚形成率的差异不明显；各组内体内成熟卵子与体外培养成熟卵子相比受精率、卵裂率间无显著性差异，但体外培养成熟卵子囊胚形成率明显低于体内成熟卵子(P＜0.05）。 结论 兔卵巢经冷冻复苏自体移植后，其卵泡能够重新生长发育；通过体外成熟和受精技术，体内和体外成熟卵子均可产生正常的胚胎。提示卵巢组织冻融移植结合辅助生殖技术可作为一种生育力保存的方法。     

胚胎早期卵裂观察在胚胎发育潜能评估中的应用分析

目的探讨取卵后第一天(Day1)胚胎早期卵裂的观察在胚胎发育潜能及临床妊娠结局的预测价值。方法分析2013年5月至2014年4月179个常规IVF周期,依据受精后28±1h双原核(2pn)受精卵早期卵裂情况,分为早期卵裂组(A组)、pn消失未早期卵裂组(B组)、pn未消失未早期卵裂组(C组),比较每组优质胚胎率、可利用囊胚形成率和临床妊娠率等,其中移植结局又根据移植胚胎来源分4组,a组全移植早期卵裂来源胚胎、b组1个为早期卵裂来源胚胎、c组为pn消失未早期卵裂来源胚胎、d组为pn未消失未早期卵裂来源胚胎。结果 1.Day3评分A组、B组、C组的优质胚胎率(61.3%vs 53.1%vs32.1%),差异有统计学意义(P0.05);胚胎可利用率为(72.2%vs 65.5%vs 39.1%),差异有统计学意义(P0.05);可利用囊胚形成率(41.6%vs 37.9%vs 22.2%),差异有统计学意义(P0.05)。2.早期卵裂细胞数为2且评分≤2级的胚胎形成优质胚胎率、可利用囊胚形成率均高于早期卵裂细胞数≥3或评分≥3级的胚胎,差异有统计学意义(P0.05)。3.移植a组、b组、c组、d组的临床妊娠率为63.5%、48.3%、50.0%、44.6%,移植a组的临床妊娠率明显高于其它组别,但差异无统计学意义(P0.05)。结论早期卵裂组的优质胚胎率、可利用囊胚形成率及胚胎移植结局明显高于非早期卵裂组,提示胚胎早期卵裂的观察有助于预测胚胎发育潜能,而早期卵裂细胞数为2且评分≤2级的胚胎发育潜能高。     

骨桥蛋白对小鼠胚泡黏附和扩展的影响及其机制

目的 探讨骨桥蛋白(OPN)对小鼠胚泡黏附、扩展的影响及机制. 方法 采用纤维蛋白铺板微滴培养法培养胚胎,观察并统计重组小鼠OPN(rmOPN)、OPN抗体及精氨酸-甘氨酸-天冬氨酸多肽(RGD)对胚泡的脱带、黏附和扩展的影响;采用24孔板培养胚胎,酶联免疫吸附测定(ELISA)法检测胚泡培养液基质金属蛋白酶2和9(MMP-2、-9)的浓度. 结果不同浓度的OPN组间胚泡的脱带率、黏附率与对照组相比无显著性差异(P>0.05);但1.0 mg/L和10.0 mg/L OPN组可促进小鼠胚泡提前扩展,72h囊胚扩展率与对照组相比差异有显著性,10.0 mg/L组72h的扩展率显著高于OPN 0.1 mg/L组(P<0.05).OPN抗体和RGD均显著抑制胚泡的脱带、黏附和扩展,与对照组相比,差异有显著性,且随着浓度的增加,抑制作用越明显.OPN促进胚泡分泌MMP-2及MMP-9,且存在时间和剂量依赖性. 结论 OPN在体外可通过促进小鼠胚泡的扩展和分泌MMP-2、-9来调节小鼠早期胚泡着床.     

淫羊藿苷对猪早期胚胎体外培养一氧化氮及丙二醛水平的影响

目的 研究淫羊藿苷(ICA)单体对猪体外受精早期胚胎体外发育过程中培养液内一氧化氮(NO)和丙二醛(MDA)生成量的影响,探讨其与猪胚胎体外发育效果的关系. 方法 以NCSU-23培养液为对照组,以添加0.6mg/L淫羊藿苷为实验组(ICA组),通过硝酸还原酶法和硫代巴比妥酸法测定猪体外受精卵体外培养0～48h、48～120h、120～168h培养液滴中NO和MDA水平. 结果 ICA组(342枚受精卵)48h卵裂率(74.84% vs 63.32%)、120h桑囊率(45.08% vs 34.10%)、168h囊胚率(23.38% vs 18.04%)均极显著高于对照组(349枚受精卵) (P<0.01).在猪体外受精卵体外培养0～168h整个过程中,培养液内NO、MDA水平总体均呈上升趋势,但在胚胎发育3个阶段中ICA组平均每枚胚胎NO生成量高于对照组,MDA生成量则低于对照组 (P> 0.05). 结论 ICA有利于促进猪体外受精早期胚胎的体外发育,可能与其在一定程度上提高NO水平,并同时抑制MDA的生成有关.     

骨桥蛋白在动情周期与妊娠早期小鼠输卵管上皮的表达 

目的 探讨骨桥蛋白(OPN)在动情周期和妊娠早期小鼠输卵管的表达。方法 70只昆明雌性小白鼠分为动情周期组、妊娠组和假孕组,昆明雄性小白鼠15只用于与雌鼠合笼。取雌鼠动情周期、妊娠和假孕第1～5天的输卵管,利用免疫组织化学染色及半定量分析检测OPN在小鼠输卵管的定位和表达情况。结果 整个动情周期小鼠输卵管上皮组织OPN的免疫染色均呈阳性,动情期的输卵管上皮OPN染色的平均吸光度值（AEM>A/EM>）最高,动情间期组AA值最低;妊娠和假孕第1～5天小鼠输卵管上     

铅对斑马鱼胚胎发育的毒性作用

目的 探讨铅对斑马鱼胚胎发育的毒性作用. 方法 野生型AB品系斑马鱼胚胎,自受精后1h(1 hpf)起,分别用醋酸铅质量浓度为0.1、0.5、2.5、12.5 μmol/L胚胎培养液染毒至胚胎孵出或死亡,每组胚胎50枚,相差显微镜下观察胚胎发育全程并记录毒性反应,于4、8、16、24、48、72hpf进行胚胎活体摄片,以不含铅培养液孵养的胚胎作为对照.另取各组36 hpf胚胎,电镜下观察间脑神经细胞超微结构. 结果 铅暴露组胚胎死亡率明显升高(P＜0.05),在胚胎发育早期有1个高峰,而且随着铅暴露浓度增高,胚胎死亡率总体呈上升趋势(P＜0.01);铅暴露胚胎发育异常主要见于胚胎发育早期,多表现为胚胎发育迟缓;铅暴露胚胎在发育过程中出现少数畸形,但无统计学意义;除12.5μmol/L铅暴露组外,其他铅暴露组胚胎的平均孵出时间较对照组滞后(P＜0.05);电镜观察显示,铅暴露可引起胚胎神经细胞核固缩,细胞水肿,细胞器结构受损. 结论 铅对斑马鱼胚胎发育有明显的毒性作用,在胚胎发育早期尤为敏感;即使较低水平的铅暴露,仍可引起胚胎神经细胞的损害.     

麻黄素对仔鼠肝脏组织结构和相关活性物质的影响

目的 探讨麻黄素对仔鼠肝组织结构、Bax蛋白的表达和超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)活力、丙二醛(MDA)含量及血清中谷草转氨酶(GOT)和谷丙转氨酶(GPT)活力的影响。方法 对48只仔鼠采用递增剂量腹腔连续注射麻黄素溶液(2.0g/L、3.0g/L 和4.0g/L)和等量的生理盐水,分别于注射5d、10d和15d称量检测仔鼠肝重的变化,用比色法测定仔鼠肝组织中SOD、CAT活性、MDA含量及血清中GOT和GPT活性的变化,用光学显微镜观察肝脏组织结构的变化,用免疫组织化学法检测肝组织中Bax蛋白表达的变化。结果 注射麻黄素5d、10d、15d仔鼠的肝重低于对照组;随着给药时间的延长和药剂量的增加,SOD和CAT的活性先升高后降低,实验组仔鼠5d时 SOD、CAT的活性高于对照组,差异显著(P <0.05),10d、15d 时SOD、CAT的活性低于对照组,差异显著或极显著(P <0.05或P <0.01);MDA含量则先降低后升高,实验组仔鼠5d 时MDA含量低于对照组,差异显著(P <0.05),10d、15d时 MDA含量高于对照组,差异极显著(P <0.01)。注射麻黄素后仔鼠血清内GOT和GPT活性高于对照组,差异显著或极显著(P <0.05或P <0.01)。注射麻黄素后仔鼠肝脏有不同程度的损伤,肝板萎缩,肝血窦扩张,细胞界限模糊,内皮细胞脱落;Bax蛋白阳性表达数高于对照组,差异显著或极显著(P <0.05或P <0.01)。 结论 麻黄素影响发育期仔鼠肝脏的组织结构,这可能与肝组织中抗氧化物酶活性降低和MDA含量升高有关。     

创伤后应激障碍模型大鼠内侧前额皮质磷酸化细胞外信号调节激酶1/2及EM>c-fos/EM>的变化

目的 探讨创伤后应激障碍（PTSD）模型大鼠内侧前额皮质（mPFC）磷酸化细胞外信号调节激酶1/2（pERK1/2）和c-fos的表达变化。 方法 将30只成年健康雄性Wistar大鼠随机分为对照组（15只）和PTSD模型组（15只）,采用无连续单一应激（SPS）方法制备PTSD模型。用免疫组织化学和免疫印迹法检测mPFC pERK1/2的表达变化,RT-PCR检测c-fos mRNA表达变化。 结果 免疫组织化学分析显示,对照组和模型组pERK1/2阳性细胞数分别为10.4±2.07、48.8±10.08,阳性信号吸光度值分别为24.955±3.691、110.810±10.643,差异有统计学意义（P<0.01）;免疫印迹分析显示,对照组和模型组pERK/2相对表达量分别为0.510±0.052和1.109±0.106,差异有统计学意义（P<0.01）;RT-PCR分析结果显示,对照组和模型组c-fos mRNA相对表达分别为0.267±0.067和1.049±0.131,差异有统计学意义（P<0.01）。 结论 mPFC pERK1/2和c-fos表达增高,可能参与了PTSD模型大鼠的病理生理过程。     

PI3K/Akt在线粒体ATP敏感性钾通道开放抑制缺氧复氧大鼠心肌微血管内皮细胞FKN表达中的作用 

目的 观察PI3K/Akt信号在线粒体ATP敏感性钾通道（mito-KATP）开放抑制缺氧复氧大鼠心肌微血管内皮细胞（MMECs）fractalkine(FKN)表达中的作用。方法 培养SD大鼠离体MMECs,建立缺氧复氧损伤模型24皿,随机分为4组( EM>n /EM>=6)：正常对照组（N组）、缺氧/复氧组（H/R组）、二氮嗪预处理+缺氧/复氧组（DZ组）、LY294002+二氮嗪预处理+缺氧/复氧组（LY294002+DZ组）。DZ组加入100μmol/L二氮嗪预处理2h,LY294002+DZ组在加入 100μmol/L LY294002预处理2h后再加入100μmol/L二氮嗪预处理2h,然后和缺氧复氧组同样进行缺氧2h、复氧2h。Hoechst染色观察凋亡细胞显微结构,四甲基偶氮唑盐（MTT）法测定细胞活力,RT-PCR检测Akt和FKNmRNA水平, Western blotting检测Akt蛋白水平。结果 与N 组比较,H/R组细胞增殖率显著降低（EM>P /EM><0.01）、凋亡率显著升高（EM>P/EM> <0.01）, FKN mRNA和FKN蛋白表达显著增加（P <0.01）、Akt mRNA和Akt蛋白升高（ EM>P/EM> <0.05）。与H/R组比较,DZ组细胞增殖率显著升高（EM>P/EM> <0.01）、凋亡率显著降     

糖尿病对大鼠股骨头生长板分化和成骨的影响

目的 探讨糖尿病对长骨发育的影响机制.方法 建立速发型链脲佐菌素(STZ)糖尿病大鼠模型,分为糖尿病5周组(DM1)、10周组(DM2)及15周组(DM3),每组10只,另设正常5周组(CON1)、10周组(CON2)及15周组(CON3),每组10只,共60只.对各组大鼠股骨头生长板,光镜下作组织病理学分析及组织计量...     

利用亮甲酚蓝染色筛选优质猪卵母细胞

目的 利用亮甲酚蓝(BCB)染色提高猪体外胚胎培养体系的效率.方法 对猪卵丘卵母细胞复合体(COCs)进行BCB染色,观察染色后猪卵母细胞成熟率和早期胚胎发育能力并进行分析. 结果 着色组(BCB+)猪卵母细胞达到减数分裂Ⅱ(MⅡ)期的比率(91.6%)显著高于未着色组(BCB-)(64.0%)和对照组猪卵母细胞(77.5%)(P<0.05);BCB+孤雌猪胚胎的囊胚率(34.9%)显著高于BCB-(9.5%)和对照组(23.1%)(P<0.05);BCB+核移植猪胚胎的囊胚率(23.0%)显著高于BCB-(5.0%)和对照组(14.1%)(P<0.05).结论 BCB染色是一种有效筛选具有较强发育能力猪卵母细胞的方法.     

三种含硒化合物对K562细胞的抑制作用

目的 研究比较3种新的含硒化合物在体内、外的抗癌作用和作用机制. 方法 通过四甲基偶氮唑盐(MTT)比色法和移植瘤生长抑制实验及形态学观察、流式细胞术以及激光扫描共焦显微镜,检测分析含硒化合物对K562细胞的抑制作用. 结果 3种含硒化合物能明显抑制K562细胞增殖(P<0.05)和S180、H22移植瘤(n=10)的生长(P<0.01);使K562细胞出现体积缩小,细胞膜完整,染色质高度凝集,边集,核浓染、碎裂,伴有出泡现象和凋亡小体出现等典型的凋亡特征;对K562细胞的周期分布有明显影响,且在大剂量时出现了明显的亚二倍体峰;能够明显增加K562细胞内Ca2+、Mg2+和细胞内活性氧(ROS)的荧光强度(P<0.01),但pH值和线粒体膜电位显著降低(P<0.01). 结论 3种含硒化合物均有体内、体外抗肿瘤作用,其作用机制可能与Ca2+、Mg2+、(活性氧ROS)、pH值和线粒体膜电位(MMP)诱导的细胞凋亡有关.