实时荧光聚合酶链反应检测HBV基因型B～D方法的建立

目的 建立实时荧光聚合酶链反应检测乙型肝炎病毒(HBV)基因型B~D方法并验证其准确性。方法 比较GenBank中已发表的明确分型的143株HBV全序列,设计特异的组合引物探针,应用实时荧光聚合酶链反应HBV基因分型法对兰州地区128例慢性乙型肝炎患者血清标本进行基因型B、C、D检测,并随机对检测的基因型各3株标本进行S基因测序验证。结果 128例标本中B型检出率为20.3%(26/128),C型71.9%(92/128),D型7.8%(10/128);18株HBV克隆标本S基因测序结果与本分型法完全一致。结论 实时荧光聚合酶链反应HBV基因分型法能够简便、灵敏、快速、准确地鉴定HBV基因型,适宜用于HBV基因型的大规模临床和流行病学调查。     

拉萨地区乙型肝炎病毒携带者感染基因型的实验研究

【目的】研究拉萨地区乙型肝炎病毒携带者感染基因型的流行情况。【方法】采用聚合酶链反应(PCR)扩增乙型肝炎病毒S基因区,用末端标记方法对PCR产物标记并直接测序,测序结果和Gen Bank中的标准基因型序列相比较。【结果】60例标本中有46例可直接测序分型(76.7%),其中包括B型14例(少数民族5例)、C型12例(少数民族5例)、D型20例(少数民族3例);14例标本未能直接分型,考虑为混合型。【结论】拉萨地区HBV DNA基因型为B型、C型、D型和混合型,以D型为主,未发现A、E型。     

荧光定量聚合酶链反应分型法检测乙型肝炎病毒B、C基因型的研究

目的探讨用荧光定量聚合酶链反应(PCR)分型法检测乙型肝炎病毒(HBV)B、C基因型,了解不同类型HBV感染者中HBV基因型的分布特点。方法选取2010年9月至2012年10月在成都市第五人民医院就治的乙型肝炎患者135例作为研究对象,用荧光定量PCR分型法检测135例HBV感染者的HBV基因型。结果荧光定量PCR分型法成功分型131例(97.04%)样本,4例(2.96%)未检出,其中,B/C混合型28例(20.74%);C型17例(12.60%);B型86例(63.70%)。B基因型的病毒载量显著高于C基因型、B/C混合型(P<0.05)。B基因型在慢性乙型肝炎、慢性重型乙型肝炎和急性乙型肝炎患者中所占百分比显著高于C基因型与B/C混合型(P<0.05)。结论本地区的HBV基因型以B基因型为主,其次是C基因型、B/C混合型。     

荧光PCR法检测HBV感染者HBV基因型及其临床应用

目的:了解南通地区乙型肝炎病毒(HBV)基因型分布情况及其临床特点.方法:选取本地区HBV感染者共125例,其中无症状携带者(ASC)31例,慢性乙型肝炎(CHB)46例,乙型肝炎肝硬化(LC)23例,原发性肝细胞癌(HCC)25例.应用实时PCR技术对患者进行血清HBV基因分型测定,FAM波长检测B型HBV,JOE或HEX波长检测C型HBV;部分结果进行基因测序验证;以3例非乙型肝炎患者为对照.结果:3例非乙型肝炎患者HBVM、HBV-DNA、HBV B、C基因均阴性.6例患者双份标本荧光PCR法、基因测序检测HBV基因型结果完全一致均为HBV C型.125例HBV感染者中HBV-DNA阳性的104例标本HBV基因型显示:B基因型25例(24.0%),C基因型74例(71.2%),B+C混合基因型5例(4.8%),未检出非B非C型;其中ASC组HBV-DNA定量阳性患者中以B型为主90%(9/10);而其余3组感染者中以C型基因居多:CHB患者中C型为80.43%(37/46),LC患者中C型为69.57%(16/23),HCC患者中C型为80%(20/25).结论:荧光PCR法可特异性检测HBV基因型;南通地区HBV基因型主要以C型为主,其次为B型和少量B+C混合基因型.HBV基因C型与B型各有显著的临床特点,可为临床诊断及指导临床抗病毒治疗药物选择提供依据.     

乙型肝炎病毒基因分型与基因变异的临床相关性分析

目的 探讨乙型肝炎病毒(HBV)基因分型与基因变异的关系.方法 采用基因测序法检测102例HBV感染者血清标本,用特异的引物对待检标本HBV P区进行全序列测定,对测序结果分析有无突变产生和基因分型.结果 102例HBV感染者标本中基因型分布比例:B基因型12例,阳性率为11.8％;C基因型89例,阳性率为87.3％;D基因型1例,阳性率为0.9％.P区基因序列突变结果显示,102例标本中发生突变的有84例,其中YIDD 50例,占59.5％;YVDD 24例,占28.6％;181V 9例,占10.7％;202G 1例,占1.2％.HBV B、C两基因型间HBV基因变异类型差异无统计学意义.结论 ①天津地区流行的HBV基因型主要是B型和C型,其中C型为优势基因型.②本地区HBV p区基因序列突变与基因分型无明显关系.     

海南省汉族HBV基因型与肝功能关系的研究

目的了解海南省汉族人群中乙型肝炎病毒（HBv）基因型与肝功能之间的关系。方法采用实时荧光聚合酶链反应（RT—PCR）法对海南省83例HBV阳性而且未进行抗病毒治疗的汉族慢性乙型肝炎患者的血清进行检测和HBV基因分型。结果在83例患者中,B型38例（占45．78％）,C型34例（占40．96％）,D型7例（占8．44％）,基因型B＋C混合感染4例（占4．82％）,未发现其它基因型。受检者中,基因型C型的患者血清ALT（219．32±58．24U／L）、TBIL（57．74±24．87μmol／L）水平较B型增高（P〈0．01）。结论海南地区汉族人群中HBV基因型主要为B型和C型;存在D型及B、C混合感染。C型HBV的感染可能引起更严重的肝脏损害。     

实时荧光PCR法分析浙江省乙型肝炎病毒基因型的分布

目的 研究浙江省各地区乙型肝炎病毒(HBV)基因型分布状况.方法 采用实时荧光聚合酶链反应(FQ-PCR)检测240例HBVDNA病毒含量＞105拷贝/毫升的浙江籍(杭州、湖州、金华、绍兴、台州、宁波各40例)HBV感染者的基因型.结果 240例HBV感染者中基因B型82例占34.17%,基因C型140例占58.33%,基因B,C混合型15例占6.25%,基因D型3例占1.25%,未捡出基因型A、E、F.结论 浙江地区HBV基因以B、C型为主,B、C混合型次之,D型基因偶见.各地区间基因型分布未见差异.     

云南西双版纳傣族人群HBV基因型及亚型分布（inEnglish）

目的研究云南西双版纳傣族HBV感染人群基因型及基因亚型分布找出其优势基因型及基因亚型。方法采用型特异性引物巢式PCR结合聚合酶链反应-限制性片段长度多态性法（PCR—RFLP）对HBV感染者基因型及亚型分型鉴定。结果B基因型58％（25,43）,C基因型16％（7／43）,B＋C基因型21％（9／43）,B＋E型5％（2／43）,无A、D和F型：Ba亚型100％（16／16）,Cs亚型50％（2／4）,Ce亚型50％（2／4）。结论云南西双版纳傣族人群HBV基因型以B型为优势基因型Ba为优势基因亚型,国内首次发现B＋E型,可能为研究其他民族HBV感染提供理论依据。     

型特异引物PCR法分析238株乙肝病毒基因型

目的:研究乙肝病毒(HBV)感染者HBV基因型分布状况,并建立一套HBV病毒株分型的简便可靠的分析法.方法:设计型特异引物,采用基因型特异引物聚合酶链反应(PCR)法分型.结果:238株HBV中218株得到分型.其中B型149例(男115例、女34例);C型63例(男47例、女16例);B C混合型6例(男4例、女2例).B型、C型和B C混合型检出率分别为68.3%(男69.3%、女65.3%)、28.9%(男28.3%、女30.8%)和2.8%(男2.4%、女3.8%).未检出A、D、E、F、G、H基因型.结论:HBV感染者以B基因型为主.基因型B检出率显著高于其它基因型,其差异具有统计学意义(P<0.0).HBV各基因型分布与性别无关(P>0.01).     

乙型肝炎病毒耐药变异与基因型检测在临床上的应用

目的 建立直接测序法检测HBV P区耐药变异情况并分析基因型.探讨HBV基因型与临床病情的关系.方法 检测46例乙肝患者血清样本,采用特异的引物对待检标本HBV P区进行PCR扩增后作基因序列检测,利用Chromas2.23软件对测序结果 进行分析有无突变产生,测序结果 用软件clustalx1.81进行基因分型分析.结果 可通过一次测序反应完成对HBV.DNA P区的基因检测及基因型分析.检出YMDD变异株8例,其中YIDD 5例,YVDD 3例.在检测的46例标本中23例为B基因型,阳性率为50.0%;有21例为C基因型,其阳性率45.6;D基因型2例,阳性率4.4%.B基因型HBV感染者中HCC 2例,占8.7%;C基因型HBV感染者中HCC 8例,占38.1%.结论 直接测序法分析HBV常见耐药突变位点及基因型准确可行,B基因型乙肝患者预后优于C基因型患者.     

巢式PCR检测北京地区乙型肝炎病毒基因型的分布

目的了解北京地区乙型肝炎病毒(HBV)感染者HBV基因型分布情况。方法从前S1基因到S基因中的保守序列设计出10条内外引物,将其中8条内引物分成A、B组,分别扩增A、B、C、D、E、F型HBV,根据PCR产物片断判定HBV基因型。结果用此种方法检测HBV感染的不同转归类型患者血清728份,对HBV DNA阳性标本进行基因型分析。HBV DNA阳性者276例,其中自限性感染者阳性率为5.8%(14/243),慢性无症状HBV携带者血清HBV阳性率为42.6%(113/265),慢性肝炎患者HBV阳性率为67.7%(149/220)。慢性肝炎组HBV DNA检出率与其他2组比较差异有统计学意义(P<0.05)。在276例HBV DNA阳性标本中,各基因型在不同组分布不同,但差异无统计学意义。HBV基因型总检出率以C型为主,占76.8%,B型占21·7%,同时检出B型和C型为1.5%,未检出A、D、E、F基因型。结论北京地区感染HBV基因型为B型和C型,以C型为主,感染结局不同组间基因型分布比较差异无统计学意义。     

江苏地区不同类型乙型肝炎患者HBV基因分型研究

目的:了解江苏地区乙型肝炎病毒基因型分布特征,探讨HBV各基因型与血清HBV DNA水平的关系.方法:采用荧光定量PCR结合Taqman MGB探针技术,对江苏地区176份乙型肝炎患者血清中的HBV DNA进行基因分型和定量检测.结果:176例血清中,C型117人(66.5%),B, C型40人(22.7%),B型9人(5.1%),D型1人(0.6%),A型1人(0.6%).C型与B, C混合型在HBV DNA水平上存在统计学差异(P＜0.05),B, C混合型的HBV DNA水平明显高于C型.C基因型在慢性乙型肝炎患者中的所占比例(71.4%)比在急性乙型肝炎、肝硬化和肝癌患者中所占的比例较高,但差异无统计学意义.结论:江苏地区HBV基因型以C型为主, B, C混合型次之,B型较少,D型,A型极少;B, C混合型患者的HBV DNA数量水平高于C型.     

慢性乙型肝炎患者乙肝病毒B、C基因型和阿德福韦酯耐药基因的相关性

目的:研究本地区HBV基因型分布;探讨阿德福韦酯长期治疗的慢性乙型肝炎患者HBV基因型和阿德福韦酯耐药基因突变的关系。方法:选取320例阿德福韦酯治疗>3年,治疗前乙肝病毒载量>105拷贝/ml、无相关耐药基因的自然变异并符合其他入选标准慢性乙型肝炎患者进入此研究。PCR法检测HBV基因分型,305例单一B型或C型的患者中,36例可疑耐药的患者用基因芯片法检测乙型肝炎病毒阿德福韦酯相关耐药突变位点。结果:①慢性乙型肝炎患者中HBV基因型包括B型53.1%(170/320)、C型42.2%(135/320)、B和C混合型4.7%(15/320)、未检出其他型。②305例基因型为B型或C型的患者中36例发生病毒学突破,病毒学突破率为11.8%。③36例出现病毒学突破的患者中有35例检测出阿德福韦耐药突变基因型。B基因型患者阿德福韦酯相关基因突变占54%(19/35),C基因型患者阿德福韦酯相关基因突变占46%(16/35),B、C两种基因型耐药基因突变率无差别(P=0.854)。④C基因型患者阿德福韦酯相关基因突变主要为N236T及其混合突变型69%(11/16)。结论:皖南地区HBV基因型以B型为主;HBV基因型与阿德福韦酯耐药突变无关,但C基因型患者以N236T及其混合突变型为主;检测HBV基因型和相关耐药突变是评价慢性乙型肝炎临床治疗疗效的重要指标。     

多位点ARMS-PCR法进行HBVS区检测分型

目的：建立一种准确有效的PCR法HBV分型的实验方案。方法对80例包含了 HBV不同型别（B/C/D型）的血清样本进行了 HBV S区测序，通过分析国人 HBV B/C/D型S区碱基固有差异位点，设计得针对各种HBV 型别的高度特异性A RM S引物与探针，并用于另外120例HBV样本的PCR检测实验，同时进行测序进行检测准确度验证。结果多位点ARMS-PCR法与测序法的型别检出吻合率为99．5％，其中一例HBV B/C型混合感染由ARMS-PCR法检出并经追溯确认。结论经验证可见设计于S区型别固有差异位点之上的ARMS引物与探针于PCR检测中能以极高的特异性对 HBV 血清样本进分型，并能检出 HBV 混合型中的劣势病毒株。PCR法以其低成本、结果容易判定以及高灵敏度等优点，于临床HBV分型上是更为推荐的分子诊断学方法。     

Application of multiplex PCR in genotyping of hepatitis B virus prevailing in Guangdong Province of China]

OBJECTIVE: To establish a convenient method for the genotyping of hepatitis B virus (HBV) using multiplex PCR. METHOD: Based on the alignment of 114 complete nucleotide sequences of HBV DNA belonging to different genotypes, acquired from the GenBank, genotype-specific sequences were identified according to which 6 pairs of primers were designed corresponding to each genotype. Subsequent genotyping of HBV was performed using these primers that were added, either alone or in conjunction with others, into a multiplex PCR reaction tube, and HBV genotype was determined according to the length of amplified DNA. RESULT: The genotyping result of multiplex PCR was consistent with that produced by PCR- restriction fragment length polymorphism as established by Lindh. We found in this study that among the HBV carriers in the vicinities Guangzhou of City, about 45% belonged to B genotype, 38.75% to C genotype and 16.75% to D genotype. CONCLUSION: This multiplex PCR method is simple, convenient and more differential.     

检测HBV DNA基因型的方法学探讨

迄今发表的ＨＢＶＤＮＡ全序列已有６１株，根据其核苷酸序列的差异分为Ａ～Ｆ６个基因型。我们利用ＰＣＲ和限制性片段长度多态性分析技术，由慢性无症状ＨＢＶ携带者血清扩增病毒Ｓ基因区，建立了新的分型方法；用此方法对广州地区６１名慢性无症状携带者的ＨＢＶＤＮＡ进行分型，发现主要为Ｂ、Ｃ两种基因型。     

Genotyping of hepatitis B virus and its clinical significance in patients with chronic hepatitis B]

OBJECTIVE: To investigate the distribution of hepatitis B virus (HBV) genotypes in Guangdong and explore its clinical significance. METHODS: Fifty-five patients with chronic active hepatitis (CAH) from Guangdong province were included in this study. HBV surface gene amplified by PCR was analyzed by restriction fragments length polymorphism (RFLP) for HBV genotyping, and the relationship of HBV genotype with clinical, serological and histological data of the patients was analyzed. RESULTS: Twenty-eight out of 55 patients were infected with HBV strains of genotype B (51.0%), 18 with genotype C (32.7%), 4 with genotype D (7.3%), 4 with HBV classified as genotype B+C (7.3%), and 1 (1.8%) with HBV that did not conform to any of the genotypes from A to G. No significant differences in clinical, histological, or serological data of HBV DNA loading were detected between genotypes B and C. But in patients older than 30 years, the genotype C was accompanied by significantly higher HBV DNA loading and serum HBeAg level than genotype B (Fisher's exact test, P=0.002). CONCLUSIONS: HBV genotype B and C are the major genotypes prevalent in Guangdong Province. Genotype C is associated with the longer duration of HBeAg and higher HBV DNA level in patients older than 30 years, suggesting the higher risk of HBV genotype C infection to progress into chronic liver disease.     

莱芜地区HBV基因型分布及临床意义

目的了解莱芜地区乙型肝炎病毒（hepatitis B virus,HBV）基因型分布情况,探讨HBV基因型与临床的相关性。方法随机选择莱芜地区HBV感染患者231例,其中无症状HBV携带者45例,慢性乙型肝炎68例,乙型肝炎肝硬化65例,原发性肝癌53例。应用双波长实时荧光定量PCR技术,进行血清HBV基因分型测定。结果 231例标本中,216例（91.14%）可检出基因型,在阳性结果中B基因型39例（18.06%）,C基因型179例（82.87%）,B＋C混合基因型5例（2.31%）,未检出非B非C基因型。结论莱芜地区HBV感染者中,HBV基因主要存在C型,不同基因型与慢性乙型肝炎、肝硬化、原发性肝癌有相关性,C基因型HBV感染者较B基因型更易发展成肝硬化、原发性肝癌。