结直肠癌患者Kras基因突变与分化程度及组织类型的相关性研究

目的:探究结直肠癌KRAS基因突变与分化程度及组织类型的相关性研究.方法:选取结直肠癌患者89例,其中26例KRAS突变阳性患者纳入突变组,63例KRAS突变阴性且无其他突变患者纳入未突变组.采用荧光定量PCR Taqman-ARMS探针法测定KRAS基因突变,比较组间的差异性与相关性.结果:结直肠癌患者KRAS突变阳...     

结直肠癌KRAS、BRAF及PIK3CA基因突变状态分析

目的检测结直肠癌组织KRAS、BRAF及PIK3CA基因突变状态,分析突变与临床特征的关系。方法收集结直肠癌手术切除或穿刺活检标本177例,提取DNA经探针扩增阻滞突变系统聚合酶链反应扩增后,检测KRAS、BRAF及PIK3CA基因的突变状态,分析结直肠癌组织中3个基因间突变的内在关系,并分析KRAS突变与临床特征的关系。结果 KRAS基因突变率为37.9%,以Gly12Val突变最多,占总突变率的32.8%;BRAF基因突变率为4.0%;PIK3CA突变率为14.1%,以E542K突变最多,占总突变率的36.0%。BRAF基因突变者共7例,全部为KRAS和PIK3CA野生型的患者;PIK3CA基因突变者共25例,其中19例(76.0%)与KRAS存在共同突变。结论结直肠癌患者KRAS基因突变率较高,KRAS基因突变与淋巴结转移和肿瘤进展相关。联合检测KRAS、BRAF及PIK3CA基因对指导临床制定个体化治疗有重要意义。     

蓝白斑联合Sanger测序技术检测KRAS基因12位密码子突变

为研究蓝白斑联合Sanger测序检测KRAS基因12位密码子突变的可行性,将M12突变型质粒与WT野生型质粒按1∶30,1∶100,1∶300,1∶1 000的比例混合以模拟游离DNA(cDNA),利用蓝白斑技术联合Sanger测序对KRAS基因稀有突变进行检测。结果显示,蓝白斑技术联合Sanger测序,可以检测出达到0.1%的KRAS基因稀有突变,无假阳性。通过改变阅读框架,使密码子能转变为终止密码子TAA,TGA,TAG的体细胞突变,可采用蓝白斑技术联合Sanger测序技术进行检测。     

食管鳞癌组织中EGFR、KRAS及PIK3CA基因突变的检测及其临床意义分析

目的 分析食管鳞癌组织中表皮生长因子受体（EGFR）、Kirsten鼠类肉瘤病毒癌基因（KRAS）和磷脂酰肌醇3激酶（PIK3CA）基因的突变情况及其与患者临床特征的关系。方法 选取2006年1月至2012年12月在新疆医科大学第一附属医院确诊的210例食管鳞癌患者的组织标本进行DNA提取和目标位点扩增,再利用一代测序的方法对EGFR18号和21号外显子、KRAS2号外显子、PIK3CA9号外显子进行测序,探讨各基因突变情况及其与临床病理特征的关系,并分析不同基因突变之间的相关性。结果 210例食管鳞癌标本中EGFR基因突变率为27.14%,KRAS基因突变率为14.29%,PIK3CA基因突变率为18.59%,EGFR和KRAS双基因联合突变率为4.76%,EGFR和PIK3CA双基因联合突变率为5.71%,EGFR、KRAS、PIK3CA三基因联合突变率为1.43%。EGFR基因突变与性别、肿瘤直径、分化程度具有相关性（P<0.05）,KRAS基因突变与肿瘤直径、分化程度、T分期、临床分期具有相关性（P<0.05）,PIK3CA基因突变与性别、肿瘤直径、分化程度具有相关...     

西妥昔单抗可能有助于治疗KR4S基因密码子13突变的肿瘤

基于观察性证据,最近的指南建议存在KRAS基因突变的转移性结直肠肿瘤患者不使用抗表皮生长因子受体单克隆抗体（西妥昔单抗和帕尼单抗）治疗。然而,一项基于多个研究的汇合分析结果显示西妥昔单抗对KRAS基因密码子13突变的癌症患者疗效好于其他KRAS基因突变。     

ctDNA检测KRAS基因在结直肠癌预后中价值的临床研究及Meta分析

目的通过临床病例数据研究,探讨ctDNA检测结直肠癌患者外周血中KRAS等基因突变在患者预后中的意义,并根据探索的结果做进一步的Meta分析,分析ctDNA检测KRAS突变对结直肠癌患者术后无病生存期的影响。方法采集30例患者外周血标本,通过探索队列和验证队列,分析KRAS等基因突变与患者的临床病理特征、疗效及预后的关系。收集多个Ⅲ期临床试验中KRAS突变与结直肠癌患者术后无病生存期的数据,应用Stata MP.17软件进行Meta分析,评估KRAS突变对结直肠癌患者术后无病生存期的影响。结果30例临床病例中,共有12例发现RAS突变情况,其中KRAS突变10例,是突变频率最高的基因,探索队列分析显示RAS、TP53、SMAD4基因共突变患者无病生存期较短。按关键词共检索文献513篇,最终纳入6项临床试验(PETACC-3、CALGB、N0147、QUASAR2、NSABP-8、NSABP-C07),共9152例患者,其中KRAS突变患者3090(33.8%)例,野生型患者6062(66.2%)例。Meta分析结果显示,KRAS突变患者的无病生存期较野生型患者差(合并效应值HR=1.33,95%CI: 1.11~1.59,P<0.01),提示KRAS突变患者预后可能不良。亚组分析显示,未使用靶向药物治疗组KRAS突变组和KRAS野生型组预后无显著差异［I2=0%,P=0.899;DFS合并效应值HR(95%CI)为1.09(0.96~1.24),P=0.172］,而使用靶向药物治疗组KRAS突变组较KRAS突变组预后差［I2=23.6%,P=0.270;DFS合并效应值HR(95%CI)为1.58(1.35~1.83),P<0.001］,表明是否使用靶向药物治疗可能是部分异质性的来源。结论KRAS突变与较短的无病生存期相关,通过ctDNA检测结直肠癌患者KRAS等基因的突变状态,可用于判断结直肠癌患者的预后并指导治疗。     

KRAS基因状态对晚期结直肠癌一线化疗联合贝伐珠单抗疗效的预测价值

目的研究KRAS基因状态对晚期结直肠癌（mCRC）给予一线化疗联合贝伐珠单抗疗效的预测价值。方法选取mCRC病人216例,进行KRAS基因检测,给予一线化疗联合贝伐珠单抗的治疗方案。拟定4~8周期化疗。每4周期化疗后,通过结肠镜、腹部B超、增强CT等检查,根据实体瘤疗效评价标准（RECIST 1.0）,观察KRAS基因突变状态与治疗的应答率（RR）、无进展生存时间（PFS）和总生存时间（OS）的相互关系。结果mCRC病人中34.2%存在KRAS基因突变。KRAS基因突变组转移至肺与肝多于KRAS基因野生组（P < 0.05和P < 0.01）。KRAS基因突变型与野生型比较,低分化型多于中/高分化型（P < 0.01）。2组总体RR、PFS差异均无统计学意义（P>0.05）。KRAS基因突变组比基因野生型组OS减少,但差异无统计学意义（P>0.05）。2组出现中性粒细胞减少、消化道反应、疲乏感、蛋白尿等不良反应情况类似（P>0.05）。Cox生存分析模型显示,KRAS基因突变不能作为PFS和OS的预后因素（P>0.05）。结论mCRC给予一线化疗联合贝伐珠单抗治疗,KRAS基因突变状态对疗效尚无预测作用。     

结直肠癌KRAS、BRAF及PIK3 CA基因突变的检测及内在关系

目的：检测结直肠癌组织KRAS、BRAF及PIK3CA基因突变情况,并分析其内在关系。方法：收集内蒙古巴彦淖尔市医院普外一科2011年3月至2011年8月结直肠癌手术切除标本41例,提取DNA经PCR扩增后,检测KRAS、BRAF和PIK3CA基因的突变情况,分析结直肠癌组织KRAS、BRAF及PIK3CA基因突变间的内在关系。结果：（1）15例患者的KRAS基因发生突变,突变率36．6％,5例患者的BRAF基因发生突变,突变率12．2％,7例患者的PIK3CA基因发生突变,突变率17．1％。（2）BRAF基因突变者共5例,全部为KRAS野生型的患者;PIK3CA基因突变者共7例,其中3例（42．9％）为KRAS野生型的患者,4例（57．1％）为KRAS突变型的患者;BRAF与PIK3CA基因不存在共突变。结论：（1）结直肠癌患者KRAS基因突变率较高,有必要进行常规检测。（2）KRAS野生型患者中部分患者的BRAF基因突变可能是促进结直肠癌发生发展的原因之一。 PIK3CA与KRAS基因的共突变可能促进了结直肠癌发生发展。     

中国汉族与蒙古族结肠癌患者KRAS, NRAS, PI3KCA, BRAF基因突变频率及分布测定

目的：测定中国汉族与蒙古族结肠癌患者KRAS, NRAS, PI3KCA, BRAF基因突变频率及分布情况,进而评估基因突变与临床病理特征的关联。 方法：在内蒙古自治区人民医院收集需手术治疗的汉族及蒙古族结肠癌患者。术中切取肿瘤组织,石蜡包埋,DNA提取。基因突变检测试剂盒测定KRAS, NRAS, PI3KCA, BRAF基因突变情况。 结果：汉族右半结肠癌KRAS及PI3KCA基因突变频率显著高于左半结肠癌（P<0.05）。T3+T4组蒙古族结肠癌患者KRAS基因突变显著高于T1+T2组（P= 0.029）。此外,汉族右半结肠KRAS基因突变频率明显高于蒙古族突变频率（P= 0.025）。 结论：汉族与蒙古族结肠癌患者KRAS, NRAS, PI3KCA, BRAF基因突变频率相似,然而,汉族右半结肠KRAS基因突变率明显高于蒙古族突变率。后续的研究应着重于评估这种差别对右半结肠癌靶向治疗有效率及预后情况的影响。 关键词：结肠癌, 基因突变,汉族,蒙古族     

KRAS基因突变及靶向药物的研究进展

Kirsten大鼠肉瘤病毒癌基因（Kirsten rat sarcoma viral oncogene,KRAS）突变是多种肿瘤中最常见的致癌因素之一,会导致KRAS的持续活化,进而促使细胞增殖癌变。多年来针对KRAS基因突变的靶向药物一直是研究的热点,但至今仍未能研发出有效针对KRAS基因突变的临床药物。目前靶向KRAS的研究主要通过直接抑制突变的KRAS基因、改变膜定位、靶向KRAS效应信号通路及抑制KRAS突变协同致死基因等机制。本文即对KRAS基因突变肿瘤靶向治疗药物的研究进展进行简要综述。     

结直肠癌组织中错配修复蛋白基因表达与临床病理及KRAS BRAF基因突变的相关性分析

目的 分析结直肠癌肿瘤组织中错配修复蛋白（MMR）表达与临床病理因素及KRAS、BRAF基因突变的相关性。方法 采用免疫组织化学法和扩增阻滞突变系统对212例结直肠癌根治标本石蜡组织的MMR蛋白表达及KRAS、BRAF基因突变状态进行回顾性分析。结果 212例结直肠癌肿瘤组织中错配修复蛋白表达缺失率为11.3%(24/212)。212例结直肠癌组织中KRAS、BRAF基因的突变率分别为40.6%(86/212)、3.3%(7/212)。结论 错配修复蛋白联合KRAS、BRAF突变检测可为结直肠癌患者预后评估及个体化治疗提供依据。     

肺癌患者呼出气冷凝液与血液中EGFR、KRAS基因及其变异的检测

目的:研究肺癌患者检测呼出气冷凝液(EBC)中表皮生长因子受体(EGFR)、KRAS基因及其变异的可行性,与肺癌患者血液中EGFR、KRAS基因及其变异的检测进行对比研究,并结合病理及影像学等临床资料分析其临床意义。方法:将收治的30例肺癌患者作为研究组,选取同一时间健康志愿者30例作为对照组。分别采集两组研究对象的EBC和血液标本,检测EBC和血液EGFR、KRAS基因表达及变异性情况。结果:研究组和对照组对象EBC标本中,通过多种检测方法均未提取到EBC样本基因组DNA,无法扩增出检测目的基因。研究组中EGFR基因中有18例发生突变,其中有15例样本中19外显子缺失敏感型突变,仅3例发现21外显子L858R突变,KRAS基因仅1例发生突变,为Gly12Asp突变。15例19外显子缺失敏感型突变中腺癌12例,鳞癌3例。对照组中EGFR基因中均未发生突变。KRAS基因中均未发生突变。研究组EGFR基因野生型和突变型比例与对照组比较,差异有统计学意义(P<0.05);KRAS基因野生型和突变型两组差异无统计学意义(P>0.05)。结论:用EBC标本检测肺癌患者中EGFR、KRAS基因是一个理想的无创的方法,但目前因多种原因及条件限制无法完成。血液中EGFR、KRAS基因及其变异性是目前比较实用的方法,创伤小。     

新疆维吾尔族、汉族结直肠癌患者中KRAS及BRAF基因突变差异及其与预后的关系研究

目的探讨新疆维吾尔族(维族)、汉族结直肠癌伴肝转移患者中KRAS基因及BRAF基因突变差异及其与临床病理特征和预后的关系。方法选择新疆医科大学第一附属医院2005年1月-2010年12月收治的100例新疆维、汉族结直肠癌伴肝转移患者,应用PCR及Pyrosequencing测序法检测分析KRAS基因及BRAF基因突变情况,分析其与临床病理特征和预后的关系。结果维、汉族结直肠癌伴肝转移患者的KRAS与BRAF基因突变率分别为28%(28/100)与5%(5/100)。50例汉族患者中KRAS基因突变18例,BRAF基因突变2例;50例维吾尔族患者中KRAS基因突变10例,BRAF基因突变3例。原发肿瘤组织学分级、区域淋巴结转移、脉管瘤栓、肝外侵犯或转移、KRAS和BRAF为结直肠癌的预后影响因素(P<0.05);多因素分析显示,脉管瘤栓(P=0.035)、KRAS基因(P=0.001)为结直肠癌的独立的预后因素。结论在新疆维、汉族结直肠癌伴肝转移患者中,脉管瘤栓及KRAS基因具有主要的预后价值。积极检测KRAS基因,可望延长患者生存期。     

EGFR和KRAS在肺腺癌和肺鳞癌中的突变差异和临床意义

目的:分析表皮生长因子受体(EGFR)与鼠类肉瘤病毒癌基因(KRAS)在肺腺癌和肺鳞癌患者的突变差异,并探讨其临床意义.方法:荧光PCR法检测120例非小细胞肺癌(NSCLC)患者手术切除标本癌组织中EGFR和KRAS突变状态,分析EGFR和KRAS突变状态与NSCLC患者临床病理特征和预后的关系.结果:45例(37.50％)患者检出EGFR基因突变,以21外显子L858R突变22例(48.89％)和19外显子Del突变18例(40.00％)为主,共占88.89％ (40/45);EGFR基因突变率在不同年龄、临床分期、分化程度患者比较,差异均无统计学意义(P＞0.05),女性患者EGFR突变率高于男性患者(52.17％ vs.28.38％,P＜0.05),腺癌患者EGFR基因突变率高于鳞癌患者(44.44％ vs.4.76％,P＜0.05),无吸烟史的患者EGFR突变率高于有吸烟史者(47.69％ vs.25.45％,P＜0.05).11例(9.17％)检出KRAS基因突变,均为外显子2突变;KRAS基因突变在不同年龄、临床分期、分化程度患者比较,差异均无统计学意义(P＞0.05),男性患者KRAS突变率高于女性患者(13.51％ vs.2.17％,P＜0.05),腺癌患者KRAS基因突变率高于鳞癌患者(11.11％ vs.0.00％,P＜0.05),有吸烟史的患者KRAS突变率高于无吸烟史者(16.36％ vs.3.08％,P＜0.05);Kaplan-Meier生存分析结果显示EGFR突变型和EGFR野生型的患者术后2年无病生存率(71.11％ vs.57.33％)比较,KRAS突变型和KRAS野生型的患者术后2年无病生存率(45.46％ vs.64.22％)比较,差异均无统计学意义(P＞0.05).结论:EGFR和KRAS基因突变均好发于NSCLC腺癌患者,且EGFR突变好发于女性、无吸烟史人群,而KRAS基因突变好发于男性、有吸烟史人群.     

KRAS突变非小细胞肺癌可能获益于索拉非尼

KRAS突变在非小细胞肺癌中的发现先于EGFR突变,然而肿瘤学家一直对它束手无策,KRAS突变患者难以受益于表皮生长因子受体抑制剂和传统化疗药物,似乎成为了预后不良的代名词。人们一直期待的评估不同生物标志物和靶向药物关系的BATTLE研究最近透露了结果。KRAS突变的病人可能受益于索拉非尼（疾病控制率61％）。     

焦磷酸测序技术检测63例晚期NSCLC患者血浆KRAS基因突变

目的探讨应用焦磷酸测序技术检测血浆KRAS基因突变的实用性,了解晚期非小细胞肺癌(NSCLC)血浆KRAS基因突变率和突变特征。方法收集63例晚期NSCLC患者的外周血标本,分离血浆并提取DNA,采用巢式PCR结合焦磷酸测序分析KRAS基因12和13号密码子突变。结果在63例晚期NSCLC患者中,3例存在血浆KRAS基因突变(4.76%),突变率较低,与亚裔组织KRAS突变率一致,低于西方人KRAS突变率,其突变类型均为单碱基替换突变。其中2例为12密码子突变,1例为13密码子突变。统计学分析未发现血浆KRAS突变与性别、吸烟史、年龄、病理类型、肿瘤分期、体力状况(PS)评分存在相关性。结论焦磷酸测序技术操作简便,可以快速、高通量地进行外周血循环KRAS基因突变检测,可广泛用于筛选对酪氨酸激酶抑制剂耐药的NSCLC患者,更有利于指导患者的个体化分子靶向治疗。     

南方红豆杉水提物抑制 Ras/MAPK信号通路调控HER2阳性胃癌移植瘤生长实验研究

目的:初步探讨南方红豆杉水提物抑制Ras/MAPK信号通路上相关靶点蛋白调控裸鼠HER2阳性胃癌移植瘤生长及其机制。方法：建立荷瘤裸鼠模型，将80只BALB/c裸鼠接种人HER2阳性胃癌NCI-N87细胞株并随机分组给药及取瘤，采用Western Blot检测HER2、KRAS蛋白表达情况，RT-PCR定量检测其mRNA表达水平。结果：Western blot检测HER2、KRAS蛋白，与空白组比，各给药组HER2、KRAS蛋白表达均显著下调，低剂量联合组HER2蛋白下调显著（0.554+0.110 vs 1.482+0.101；P＜0.01），中剂量红豆杉组KRAS蛋白表达下调显著（1.015+0.033 vs 0.630+0.049；P＜0.01）。2、RT-PCR检测HER2、KRAS蛋白，中剂量红豆杉组HER2及KRAS mRNA表达下调（P＜0.01），联合后下调明显。结论：南方红豆杉水提物可部分下调HER2、KRAS mRNA及蛋白表达水平，联合赫赛汀可增强其抑制作用。     

结肠癌组织和转移灶中KRAS基因突变的临床意义

目的 研究晚期结肠癌组织与转移灶中KRAS基因突变对临床治疗和用药的意义.方法 整群收集该院2014年1-12月手术的68例原发晚期结肠癌组织和转移灶.用直接测序法检测KRAS基因突变情况.结果 ①癌组织中KRAS基因突变率60.29%(41/68),转移灶为55.88%(38/68),癌组织的突变率高,二者差异无统计学意义(P>0.05).②肝转移KRAS基因突变率58.62%(34/58)较肺转移26.67%(4/15)患者高,差异有统计学意义(P<0.05);③癌组织与转移灶的KRAS基因突变同时存在的有36例,一致率为89.71%(61/68),一致性较高(Kappa=0.89).结论 结直肠癌患者中,癌组织KRAS基因突变率高于转移灶,一致率为89.71%.KRAS基因突变提示侵袭转移风险高,易耐药复发预后不良.建议原发灶和转移灶同时检测.     

外泌体检测KRAS突变在结直肠癌中的研究进展

虽然内镜能早期诊断结直肠癌,但因其存在有创、侵入等局限性,世界范围内仍有大部分患者确诊时已经是晚期甚至伴有转移。西妥昔单抗等抗表皮生长因子受体(epidermal growth factor receptor,EGFR)单克隆抗体丰富了转移性结直肠癌的治疗,然而其治疗效果与KRAS基因是否突变相关,因此使用前检测KRAS基因是否突变十分有必要。对外泌体的大量研究使得我们思考能否通过外泌体检测来确定患者是否存在KRAS突变。本文重点对依靠外泌体检测KRAS突变指导结直肠癌患者使用EGFR单抗治疗的潜在可能性进行综述。     

sARMS-PCR 检测非小细胞肺癌肿瘤组织中KRAS、BRAF 基因突变研究

目的：针对非小细胞肺癌（NSCLC）患者组织标本鼠类肉瘤病毒癌基因同源基因（KRAS）和鼠类肉瘤滤过性毒菌致癌同源体 B1（BRAF）驱动基因突变使用特异引物双扩增实时蝎形探针扩增阻滞突变系统（sARMS-PCR）检测的可行性;了解 KRAS 和 BRAF 基因突变患者临床病理特征,为NSCLC 患者个体化治疗提供理论依据。方法收集89例NSCLC 患者肿瘤组织甲醛固定石蜡包埋标本（FFPE）,采用FFPE 样品 DNA 分离试剂盒（离心柱型）提取 DNA,使用sARMS-PCR 同时进行 KRAS 及 BRAF 基因突变检测。结果① KRAS 基因突变21例（21／89）;其中KRAS 基因7种热点突变中,检出6种热点突变,均位于第12、13位密码子,1例同时检出存在G12D 及G12V 位点突变,1例同时检出存在G12C 及G12V 位点突变;未发现G12S 突变型;② BRAF 基因突变1例（1／89）,突变位点为V600E,为女性,黏液腺癌;③未见KRAS 和BRAF 基因同时突变现象。结论临床使用sARMS-PCR 技术检测NSCLC 患者KRAS 和BRAF 基因突变有较强敏感性,且石蜡组织标本取材方便,可以作为两种基因的临床检测方法;KRAS 和BRAF 基因突变与年龄、吸烟史、病理分型等均无明显相关性,KRAS 基因突变与性别相关,男性高于女性;KRAS 与BRAF 基因是独立存在的。