日本血吸虫抗体检测试剂盒(IHA法)的研制与应用

目的 目的 研制日本血吸虫抗体检测试剂盒 （IHA法）。方法 方法 按 《药品生产质量管理规范》 要求, 研究日本血吸虫抗 体检测试剂盒 （IHA法） 组成成份、 制备方法及程序, 并对研制的试剂盒进行诊断效果评价。结果 结果 研制的日本血吸虫抗体 检测试剂盒 （IHA法） 检测慢性血吸虫病患者敏感性为94.49%, 检测健康人群特异性为97.14%, Youden指数为0.92; 与并殖 吸虫和旋毛虫病患者血清交叉反应率分别为15.00%和10.00%。与市售日本裂体吸虫抗体检测试剂盒 （ELISA法） 和日本 血吸虫抗体检测试剂盒 （IHA法） 平行检测流行区居民血吸虫抗体的总体符合率分别为93.06%和92.25%。结论 结论 日本血 吸虫抗体检测试剂盒 （IHA法） 敏感性高、 特异性强, 适合疫区现场血吸虫病筛查, 具有推广应用价值。     

金标法用于献血员弓形虫感染现场筛查效果的观察

目的 观察评价金标法用于献血员弓形虫感染现场筛查的效果。 方法 收集ALT、 HBV、 抗?HCV、 抗?HIV和抗? TP均为阴性的献血员血液, 经抗凝离心后分离出血浆, 采用金标法与ELISA法平行检测血浆中弓形虫IgG阳性率, 分析、 评价检测效果。 结果 金标法与ELISA法检测弓形虫IgG阳性率分别为5.46% （49/898） 和4.90% （44/898）, 2种方法的阳性检出率间差异无统计学意义 （χ2 =0.610, P＞0.05）; 检测结果同为阳性者占4.45% （40/898）, 同为阴性者占94.1% （845/898）,总符合率为98.6% （885/898）; Kappa值为0.843, 2种方法检测献血员的结果一致。 结论 金标法检测献血员血浆中弓形虫 IgG抗体符合率高, 且具有操作简单快速等优点, 可用于献血员的现场筛查。     

金标渗滤法检测疟疾抗体的研究

目的建立一种适用于现场使用的疟疾抗体快速检测方法。方法以恶性疟原虫可溶性抗原作为包被抗原,胶体金标记羊抗人IgG为第二抗体,建立快速检测疟疾抗体的金标渗滤法(DIGFA)。采用双盲法,与间接荧光法(IFAT)平行检测23份恶性疟和45份间日疟患者血清以及101份健康对照者血清,比较敏感性、特异性、Youden指数以及其他试验条件,以评价检测效果。结果DIGFA对恶性疟和间日疟的检测敏感性分别为95.65%和71.11%,对健康对照者的特异性为97.03%,Youden指数分别为0.93和0.68;IFAT的敏感性分别为95.65%和84.44%,特异性为96.04%,Youden指数分别为0.92和0.80。两法总Youden指数分别为0.76和0.84,总符合率为90.48%。结论DIGFA操作简易,适用于现场疟疾抗体的检测和监测。     

弓形虫抗体免疫印迹试剂盒的研制

目的 研制敏感、特异的检测弓形虫IgM和IgG抗体免疫印迹试剂盒。 方法 收集人工感染RH株弓形虫速殖子昆明系小鼠的腹腔液，提取弓形虫胞质蛋白，采用十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）分离弓形虫可溶性抗原，并经电泳转印至硝酸纤维膜，以无毒灵敏的四甲基联苯胺（TMB）为底物分别检测30份弓形虫IgM和28份IgG阳性血清，40份健康人血清。通过比较抗原制备方法和使用剂量、封闭剂、洗涤和稀释剂、工作浓度、作用时间以及反应带出现率，选择最佳实验条件，以敏感性、特异性、Youden指数以及稳定性作为试剂盒评价标准。 结果 用免疫印迹试剂盒检测30份弓形虫IgM和28份IgG阳性血清，敏感性分别为90.0%（27/30）和85.7%（24/28），40份健康对照者血清的弓形虫IgM和IgG抗体均为阴性，特异性均为100%，Youden指数分别为0.9和0.86。试剂盒于4℃ 保存约6个月的检测结果一致。 结论 该免疫印迹试剂盒敏感性和特异性均较高，且操作简便、快速。     

5种市售弓形虫抗体检测试剂盒的评价

目的　评价国内公司研制的 5种弓形虫抗体检测试剂盒。方法　以敏感性、特异性、符合率和Youden指数作分析指标 ,比较 5种试剂盒对国外进口的 2种弓形虫抗体试剂盒筛选出的弓形虫IgG或IgM阳性血清和正常人血清的检测结果。结果　A、B、C 3种IgM试剂盒的检测敏感性和特异性分别为 0和 92 1%、6 7%和 10 0 %、以及 13 3%和 85 7% ,Youden指数分别为 - 0 0 8、0 0 7和 - 0 0 1,基本无诊断价值。A’、B’ 2种IgG试剂盒的检测敏感性分别为 96 4 %和 32 1% ,特异性为 98 4 %和 96 8% ,Youden指数为 0 95和 0 2 9。A’试剂盒与进口IgG试剂盒的符合率达到 97 8% ,诊断价值较大 ,而B’试剂盒与进口试剂盒的符合率仅为 76 9% ,A’、B’ 2种试剂盒之间的符合率也只有 76 9%。结论　国内研制的市售弓形虫试剂盒的检测效果与质量存在一定的问题 ,尤以IgM试剂盒为甚。     

普洱市部分地区人群弓形虫感染血清流行病学调查

目的 目的 掌握云南省普洱市人群弓形虫感染状况, 为制定弓形虫病防治策略提供依据。 方法 方法 选择普洱市景 东、 景谷和孟连3个县作为调查点, 采用ELISA试剂盒检测人群血清弓形虫IgG抗体。 结果 结果 共检测血清906人份, 弓形 虫IgG抗体阳性率为24.17%。其中30～岁年龄组和60～岁年龄组IgG抗体阳性率较高, 分别为30.30% （60/198） 和 32.08% （17/53）; 不同年龄组间IgG抗体阳性率差异有统计学意义 （χ2 =17.77, P＜0.01）。不同性别、 文化程度、 生活习惯 之间阳性率差异无统计学意义 （P 均＞0.05）。农民、 学生和其他职业的IgG抗体阳性率分别为26.58% （194/730）、 15.49% （22/142） 和8.82% （3/34）, 差异有统计学意义 （χ2 =12.51, P＜0.01）; 猪饲养具有圈养和散养习惯人群的阳性率分别为 23.32% （198/849） 和36.84% （21/57）, 差异有统计学意义 （χ2 =5.33, P＜0.05）。结论 结论 普洱市部分地区人群弓形虫IgG抗 体阳性率较高, 应加强弓形虫病的防控和防治知识的健康教育。     

河北省廊坊市育龄期妇女与孕妇弓形虫感染状况调查

目的 目的 了解河北省廊坊市育龄期妇女及孕妇弓形虫感染状况。方法 方法 以2013年3月至2015年6月在廊坊四院 就诊的276例孕妇和462名育龄期妇女为调查对象, 采用ELISA法进行血清学检测, 以了解弓形虫感染状况。结果 结果 孕 妇弓形虫IgG、 IgM抗体阳性率分别为 11.59% （32/276） 和5.43% （15/276）; 育龄期妇女弓形虫IgG、 IgM抗体阳性率分别为 8.87% （41/462） 和0.87% （4/462）。孕妇IgM抗体阳性率高于育龄期妇女, 差异有统计学意义 （χ2 =14.32, P＜0.01）。适龄 孕妇 （≤ 35岁） 和高龄孕妇 （＞35岁） 弓形虫抗体阳性率分别为10.09% （22/218） 和25.86% （15/58）, 差异有统计学意义 （χ2 = 9.81, P＜0.01）。有、 无宠物密切接触史者弓形虫抗体阳性率分别为18.67% （14/75） 和10.26% （68/663）, 差异有统 计学意义 （χ2 = 4.82, P＜0.05）。结论 结论 廊坊市育龄期妇女与孕妇弓形虫抗体阳性率较高, 多为隐形感染; 孕妇新近感染 率高于育龄期妇女。     

海南地区消化道恶性肿瘤患者弓形虫感染调查

目的　了解海南地区消化道恶性肿瘤患者血清抗弓形虫抗体水平,为消化道恶性肿瘤患者弓形虫病防控提供参考依据。方法　2016–2019年收集海南省1 932例消化道恶性肿瘤患者作为调查对象,其中食管癌患者376例、胃癌患者475例、结直肠癌患者401例、肝癌患者427例、胰腺癌患者253例,以400例健康体检者作为对照。采用酶联免疫吸附试验检测消化道恶性肿瘤患者和健康体检者血清抗弓形虫IgG和IgM抗体,比较组间抗体阳性率差异。结果　消化道恶性肿瘤患者总体血清抗弓形虫IgG抗体阳性率为19.82%,显著高于健康对照的3.75%（χ2 = 60.49,P < 0.01）,两者总体抗弓形虫IgM抗体阳性率差异无统计学意义（1.09%和0.50%;χ2 = 1.17,P > 0.05）。食管癌、胃癌、结直肠癌、肝癌和胰腺癌患者抗弓形虫IgG抗体阳性率分别为15.16%、19.58%、21.70%、23.65%和17.79%,均显著高于健康对照（χ2 = 29.97、50.29、58.03、67.85、36.59,P均< 0.01）;抗弓形虫IgM抗体阳性率分别为1.06%、1.47%、0.75%、1.17%和0.79%,与健康对照差异均无统计学意义（χ2 = 0.80、2.02、0.20、1.11、0.21,P均> 0.05）。不同类型消化道恶性肿瘤患者抗弓形虫IgG抗体阳性率差异有统计学意义（χ2 = 10.65,P < 0.05）,但抗弓形虫IgM抗体阳性率差异无统计学意义（χ2= 1.33,P > 0.05）。结论 　海南地区消化道恶性肿瘤患者血清抗弓形虫IgG抗体阳性率较高,不同类型消化道恶性肿瘤患者抗弓形虫IgG抗体阳性率间存在显著差异。建议今后应加强消化道恶性肿瘤患者弓形虫感染筛查,从而有效防控弓形虫感染对消化道恶性肿瘤患者造成的危害。     

海南地区消化道恶性肿瘤患者弓形虫感染调查

目的　了解海南地区消化道恶性肿瘤患者血清抗弓形虫抗体水平，为消化道恶性肿瘤患者弓形虫病防控提供参考依据。方法　2016–2019年收集海南省1 932例消化道恶性肿瘤患者作为调查对象，其中食管癌患者376例、胃癌患者475例、结直肠癌患者401例、肝癌患者427例、胰腺癌患者253例，以400例健康体检者作为对照。采用酶联免疫吸附试验检测消化道恶性肿瘤患者和健康体检者血清抗弓形虫IgG和IgM抗体，比较组间抗体阳性率差异。结果　消化道恶性肿瘤患者总体血清抗弓形虫IgG抗体阳性率为19.82%，显著高于健康对照的3.75%（χ2 = 60.49，P < 0.01），两者总体抗弓形虫IgM抗体阳性率差异无统计学意义（1.09%和0.50%；χ2 = 1.17，P > 0.05）。食管癌、胃癌、结直肠癌、肝癌和胰腺癌患者抗弓形虫IgG抗体阳性率分别为15.16%、19.58%、21.70%、23.65%和17.79%，均显著高于健康对照（χ2 = 29.97、50.29、58.03、67.85、36.59，P均< 0.01）；抗弓形虫IgM抗体阳性率分别为1.06%、1.47%、0.75%、1.17%和0.79%，与健康对照差异均无统计学意义（χ2 = 0.80、2.02、0.20、1.11、0.21，P均> 0.05）。不同类型消化道恶性肿瘤患者抗弓形虫IgG抗体阳性率差异有统计学意义（χ2 = 10.65，P < 0.05），但抗弓形虫IgM抗体阳性率差异无统计学意义（χ2= 1.33，P > 0.05）。结论 　海南地区消化道恶性肿瘤患者血清抗弓形虫IgG抗体阳性率较高，不同类型消化道恶性肿瘤患者抗弓形虫IgG抗体阳性率间存在显著差异。建议今后应加强消化道恶性肿瘤患者弓形虫感染筛查，从而有效防控弓形虫感染对消化道恶性肿瘤患者造成的危害。     

杭州市肝病患者弓形虫感染调查

目的 了解杭州市肝病患者弓形虫感染情况,为弓形虫病防治提供参考依据。方法 选择肝癌、乙型肝炎、肝纤维化和肝脂肪变性4类肝脏疾病患者各300例,以1 200例体检健康人群作为对照,检测并比较肝病患者和健康对照人群抗弓形虫IgG和IgM抗体阳性率。结果 1 200例肝病患者中,抗弓形虫IgG抗体阳性288例,阳性率为24.00%;抗弓形虫IgM抗体阳性14例,阳性率为1.17%。1 200例健康对照中,抗弓形虫IgG抗体阳性137例,阳性率为11.42%;抗弓形虫IgM抗体阳性13例,阳性率为1.08%。肝病患者和健康对照抗弓形虫IgG抗体阳性率差异有统计学意义（[χ2] = 65.19,P < 0.01）,但两者抗弓形虫IgM抗体阳性率差异无统计学意义（[χ2] = 0.04,P > 0.05）。肝癌、乙型肝炎、肝纤维化和肝脂肪变性患者抗弓形虫IgG抗体阳性率分别为26.00%、25.00%、23.33%和21.67%,差异无统计学意义（[χ2] = 1.79,P > 0.05）。 结论 杭州市肝病患者抗弓形虫IgM抗体阳性率较高,应加强肝病患者弓形虫病防治和健康教育。     

日本血吸虫抗体检测试剂盒（IHA法）现场筛查效果的评估

目的评估日本血吸虫抗体检测试剂盒（IHA法）的现场筛查效果。方法选择安徽省长江流域3个血吸虫病流行区7个流行村的6～65岁居民为查病对象,在用改良加藤厚涂片法（Kato—Katz法,一粪三检）合并尼龙绢集卯孵化法进行病原学检测的同时,采用日本血吸虫抗体检测试剂盒（IHA法）进行血清特异抗体检测,评估其现场筛查效果,并与胶体染料试纸条法（DDIA）和酶联免疫吸附试验（ELISA）检测结果比较。结果7个村共有3004人同时接受2种病原学检测和3种血清免疫学检测,IHA、DDIA和ELISA法的阳性率分别为40．81％、59．79％和59．25％,与病原学检测阳性率2．46％比较差异有统计学意义（P〈0．005）。以病原学检测为金标准,IHA法的特异度、约登指数、一致率和阳性预测值高于DDIA和ELISA法,分别为60．48％、52．37％、61．25％和5．55％;敏感度和阴性预测值分别为91．89％和99．66％,均介于DDIA法和ELISA法之间。IHA法与DDIA和ELISA法的一致率分别为65．25％和69．91％,IHA检测结果与DDIA和ELISA比较差异均有统计学意义（P〈0．05）;病原学检测阳性者中,IHA法与DDIA和EI,ISA法的一致率均为90．54％,IHA检测结果与DDIA和ELISA比较差异无统计学意义（P〉0．05）。结论日本血吸虫抗体检测试剂盒（IHA法）适用于血吸虫病流行区人群筛查,但需进一步提高该试剂盒的特异度,最大限度地排除阳性者中已经治愈的中远期感染者。     

ELISA法检测血清包虫IgG抗体试剂盒的应用评价

目的对ELISA(酶联免疫吸附试验)法检测血清包虫IgG抗体试剂盒进行评价,为其应用提供参考。方法收集2012-01-12就诊的1242位可疑包虫病患者的血清标本,采用ELISA检测血清棘球蚴IgG抗体。结果1242例中就诊患者中对包虫感染有明确诊断(确诊或排除包虫病)的有1130例,其中棘球蚴IgG抗体阳性159例(14.07%),棘球蚴IgG抗体阴性971例(85.93%);以临床诊断为标准得到灵敏度87.06%,特异性91.87%,Youden指数为0.78。结论ELISA法检测棘球蚴IgG抗体的灵敏度和特异性较高,可用于包虫病患者的流行病学调查;并结合B超等影像学检查用于临床包虫病的辅助诊断。     

胶体金免疫层析法快速诊断血吸虫病的研究

目的研发一种血吸虫病快速诊断试剂。方法应用血吸虫病病人和健康人血清测试胶体金免疫层析法(GI-CA)试剂的敏感性、特异性、交叉反应、重现性和稳定性;并与DIGFA及IHA方法比较。结果血吸虫病胶体金免疫层析法(GICA)试剂敏感性和特异性分别为92.5%和95.8%,Youden指数为0883。检测结果与DIGFA及IHA比较三者无统计学意义(P>0.05)。未发现与乙肝病人血清有交叉反应。并具有很好的重现性和稳定性。结论胶体金免疫层析法(GICA)具有试剂敏感、特异和稳定;方法简便、快速和微量的特点,试剂为固态,携带方便,保存期长,适合于血吸虫病流行病学调查及现场应用。     

检测华支睾吸虫特异性IgG4生物素-亲和素复合酶联免疫吸附法的建立及检测效能分析

目的探讨亲和素-生物素复合酶联免疫吸附法(ABC-ELISA)检测特异性Ig G4抗体用于诊断华支睾吸虫病的效果。方法建立检测华支睾吸虫特异性抗体Ig G4的ABC-ELISA法(Ig G4-ABC-ELISA),以此方法检测华支睾吸虫病、日本血吸虫病、卫氏并殖吸虫病、弓形虫病、棘球蚴病、囊尾蚴病和曼氏裂头蚴病患者血清样本。以Ig G4-ELISA和Ig GELISA法为对照,比较3种方法用于诊断华支睾吸虫病的敏感性、特异性、阳性预测值、阴性预测值及诊断效率。结果成功建立了用于检测华支睾吸虫特异性抗体的Ig G4-ABC-ELISA法,用此方法检测华支睾吸虫病患者血清特异性抗体Ig G4的敏感性为90.0%,特异性为98.2%,阳性预测值为93.8%,阴性预测值为97.0%,诊断效率为96.3%;Ig G4-ELISA法检测华支睾吸虫病患者血清特异性抗体敏感性为86.0%,特异性为98.2%,阳性预测值为93.5%,阴性预测值为95.9%,诊断效率为95.4%;Ig G-ELISA法检测华支睾吸虫病患者血清特异性抗体Ig G的敏感性为94.0%,特异性为88.1%,阳性预测值为70.1%,阴性预测值为98.0%,诊断效率为89.4%。Ig G4-ABC-ELISA法检测华支睾吸虫病患者血清特异性抗体的敏感性高于Ig G4-ELISA法(P0.05),特异性高于Ig G-ELISA法(P0.05)。结论 Ig G4-ABC-ELISA法检测华支睾吸虫特异性抗体IgG4具有高度敏感性与特异性,在华支睾吸虫病诊断中具有较好应用价值。     

基于胆结石患者胆汁、粪便和血清标本的4种诊断华支睾吸虫感染方法的评价

目的 比较并评价粪便改良加藤厚涂片法（Kato-Katz法）、胆汁离心镜检法、血清胶体金免疫层析法（colloid gold labeled immunochromatographic,CGIA）和酶联免疫吸附试验（enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA）检测粪便、胆汁、血清诊断华支睾吸虫感染的价值. 方法 收集92例胆结石患者的胆汁、血清和粪便,分别采用镜检法检查胆汁华支睾吸虫卵、用Kato-Katz法检查粪便华支睾吸虫卵,用CGIA法和ELISA法检测血清华支睾吸虫IgG抗体,计算并分析各检测方法的阳性率、灵敏度、特异性、阳性预测值、阴性预测值和Youden指数. 结果 Kato-Katz法联合胆汁离心镜检法共确诊感染49例,阳性率为53.3％.与之相比,Kato-Katz法、胆汁离心镜检法、CGIA和ELISA的符合率分别为80.4％、84.8％、90.2％和96.7％.Kato-Katz法、胆汁离心镜检法、CGIA和ELISA法的灵敏度分别是63.3％、93.9％、98.0％和93.9％;特异性分别为100％、100％、69.8％和86.0％;阳性预测值则分别是100％、100％、78.7％和88.5％,阴性预测值分别为70.5％、93.5％、96.8％和92.5％,Youden指数为0.63、0.94、0.68和0.80. 结论 胆汁离心镜检是胆结石手术患者诊断华支睾吸虫感染的首选方法;但对于无法获得胆汁的受检者而言,血清IgG抗体检测在排除华支睾吸虫感染、粪便Kato-Katz法在确诊感染方面有较好的临床应用价值.     

肺吸虫特异性IgG4快速检测方法的建立与应用

目的创建简易、快速、准确的肺吸虫病免疫诊断方法。方法用卫氏并殖吸虫成虫粗提液为抗原,以胶体金标记抗人IgG4单抗为检测探针,采用自行设计的垂直流渗滤装置,创建快速检测人血清肺吸虫特异性IgG4方法(P-IgG4-DIGFA),平行检测IgG作比较分析;以经典ELISA为对照,评价其诊断价值,应用P-IgG4-DIGFA检测有效治疗后病人血清,评价其疗效考核价值。结果P-IgG4-DIGFA检测人血清中肺吸虫特异性IgG4的敏感性和特异性分别为95.2%(40/42)、100%(50/50),与血吸虫病患者血清的交叉反应率仅为2%(1/50),未发现与华支睾吸虫病有交叉反应。P-IgG4-DIGFA的敏感性和特异性略高于经典ELISA,差异无统计学意义(χ2=0.25,P>0.05);应用P-IgG4-DIGFA检测有效治疗后3个月、6个月和12个月病人血清特异性IgG4,阴转率分别为0%、16.7%(1/6)和100%。结论金标渗滤法快速检测肺吸虫特异性IgG4,不仅操作简便、快速,而且敏感性高、特异性强,适用于临床检验和现场查病,对治疗后1年病人具有疗效考核价值,有待进一步开发应用。     

血吸虫病不同流行程度流行区IHA法阳性诊断阈值的研究

目的 探讨日本血吸虫病不同流行程度流行区IHA法的阳性诊断阈值。方法 选择江西省鄱阳湖区湖沼型血吸虫病流行区2个县（余干和星子）共55个自然村作为研究现场,对5岁以上常住居民采用病原学方法（Kato?Katz法+尼龙绢集卵孵化法）和血清学方法（IHA法）进行平行检测;检测结果采用相关分析和ROC曲线等方法分析,计算不同流行程度流行区IHA抗体水平阳性临界值。结果 血吸虫病流行区人群粪检阳性率与人群IHA血吸虫病特异性抗体水平分布趋势一致（r = 0.588, P ＜ 0.05）,与IHA阳性人群抗体水平无相关性（r = 0.221,P ＞ 0.05）;流行区2008-2011年连续4年血吸虫粪检阴性人群的IHA阳性抗体水平呈逐年下降趋势,年间差异有统计学意义（F = 3.650,P ＜ 0.05）,2008-2011年中任意1年血吸虫粪检阳性人群的IHA阳性抗体水平在4年内均维持较高水平且年间差异无统计学意义（F = 2.461,P ＞ 0.05）。流行村人群粪检阳性率< 1%、1%～5%和> 5%时,对应IHA的阳性诊断阈值分别为1∶80、1∶20和1∶10时,可提高IHA检测结果的特异性。结论 不同程度流行区采用IHA筛查血吸虫病或选择化疗对象时,可考虑选择不同的IHA阳性诊断阈值。