转运蛋白多药耐药相关蛋白2在胆道再通大鼠肝脏中的表达及意义

目的探讨肝细胞毛细胆管面胆红素主要转运子多药耐药相关蛋白2(Mrp2)在胆道再通过程中的表达变化机制。方法对96只胆道梗阻及再通大鼠动物模型的286份肝组织样本进行放免检查TNF-α;进行免疫荧光和RT-PCR,在肝细胞毛细胆管面上染色定位Mrp2,计算机图像分析测定,半定量比较肝细胞毛细胆管面上Mrp2表达情况,并与肝组织匀浆TNF-α、血清胆红素作相关分析。结果Mrp2转运蛋白特异性定位于肝细胞膜的毛细胆管面,荧光染色呈线条形勾勒出毛细胆管轮廓,CBDL术后1、3、7和14 d其Mrp2表达(相对灰度)逐渐下降,由223.0±14.2降为211.0±13.7、167.0±8.7、112.0±11.2、78.0±7.2;RBF术后1、37、和14 d其Mrp2表达缓慢恢复,分别为102.0±9.7、143.0±8.1、177.0±12.4和212.0±15.4。并且随着肝组织匀浆TNF-α、血清胆红素的升高或降低而发生变化。结论胆道再通后肝细胞代谢胆红素的恢复与Mrp2转运蛋白的变化密切相关,且TNF-α可能是影响Mrp2变化的主要因素。     

胆道梗阻肝细胞膜Na+/K+ATP酶的变化

目的动态观察在胆道梗阻和梗阻缓解过程中,肝细胞膜Na+/K+ATP酶活性变化的规律。方法对130只胆道梗阻大鼠模型的260份样本进行组织化学染色,结合免疫电镜方法,在肝细胞膜上染色定位Na+/K+ATP酶,计算机图像分析测定,半定量比较肝细胞膜Na+/K+ATP酶活性。结果Na+/K+ATP酶广泛存在于肝细胞膜上,但其活性(相对灰度比值)在肝细胞血窦面、肝细胞间面和肝细胞毛细胆管面呈不均匀分布,分别为107.60±16.64、74.40±9.37、90.30±8.04。反映了肝细胞分泌胆汁的正常极性。Na+/K+ATP酶活性在胆道梗阻和梗阻缓解过程中随着胆红素水平的升高或降低而发生变化,并且随着梗阻和缓解的时间延长而明显下降或改善。在梗阻14d时,分别降为84±10、60±7、65±15;在梗阻14 d缓解1 d时,Na+/K+ATP酶活性分别为86±14、62±6、68±19,而在缓解7 d时其活性分别恢复为96±8、65±6、85±7。结论胆道梗阻对肝细胞膜Na+/K+ATP酶活性的影响可能与胆道梗阻时肝细胞代谢胆红素障碍有关。     

鼠肝缺血再灌注后胆汁淤积发生的分子机制

目的探讨鼠肝缺血再灌注后胆汁淤积发生的分子机制。方法应用70%的鼠肝缺血35 min再灌注模型,检测胆汁、血浆中胆红素、胆酸的含量；荧光定量聚合酶链反应(PCR)、免疫组织化学方法分析毛细胆管膜上胆盐输出泵(Bsep)、多耐药相关蛋白2(Mrp2)的表达；激光共聚焦方法分析Mrp2定位的改变。结果再灌注后6 h、1、3 d,Bsep的表达明显下调(mRNA表达水平分别为0．189±0．044、0．240±0．078、0．224±0．068),与胆汁、血浆中胆酸的异常改变一致。Mrp2表达的明显下调仅发生于再灌注后的6h(mRNA表达水平为0．038±0．032),与再灌注后1 h～5 d胆红素的异常变化不相符。再灌注后6h—5d,Mrp2在毛细胆管膜上定位减少、向胞浆内分布。结论Bsep表达的减少以及Mrp2定位的异常是鼠肝缺血再灌注后胆汁淤积发生的主要分子机制。     

大鼠肝缺血再灌注后高胆红素血症与Mrp2、Mrp3表达及定位改变的关系

目的 研究大鼠肝脏缺血再灌注后多耐药相关蛋白2(Mrp2)、多耐药相关蛋白3(Mrp3)表达及定位的改变,探讨肝缺血再灌注后发生高胆红素血症的分子机制.方法 实验分为假手术组(Sham组)和肝缺血30 min再灌注组(IR组).检测血浆和胆汁中DBIL含量.RT-PCR和免疫组织化学方法检测毛细胆管膜上Mrp2和基底膜...     

葡萄糖-6-磷酸酶和磷酸烯醇式丙酮酸羧激酶mRNA在梗阻性黄疸及胆道再通大鼠中的表达及意义

目的研究梗阻性黄疸及胆道再通大鼠肝脏葡萄糖-6-磷酸酶(G-6-P)和磷酸烯醇式丙酮酸羧激酶(PEPCK)mRNA表达的改变及意义,探讨梗阻性黄疸影响糖代谢的分子机制。方法 30只健康雄性大鼠随机分为5组:假手术组(A组)、梗阻性黄疸1周组(B组)、梗阻性黄疸2周组(C组)、梗阻性黄疸1周再通1周组(D组)、梗阻性黄疸2周再通1周组(E组)。检测各组动物血清丙氨酸氨基转移酶(ALT)、直接胆红素(DBIL),总胆红素(TBIL)水平;光镜观察肝脏形态学改变;采用RT-PCR方法检测大鼠肝脏葡萄糖-6-磷酸酶(G-6-P)和磷酸烯醇式丙酮酸羧激酶(PEPCK)mRNA的表达。结果胆道梗阻后,B、C两组血清TBIL、DBIL、ALT水平较A组明显升高,尤其是C组升高的更明显;光镜下可见B组和C组肝细胞肿胀,炎性细胞浸润,汇管区可见胆管增生,C组较B组除以上改变更加严重外,还可见典型的片状肝细胞坏死;B、C两组肝组织G-6-P、PEPCK的mRNA表达显著升高。相比,D、E两组血清TBIL、DBIL、ALT水平均分别低于B、C两组,肝脏形态改变也明显趋于正常,肝组织G-6-P、PEPCK的mRNA表达亦均低于B、C两组,且D组在血清、肝组织mRNA表达及光镜下肝细胞损伤方面与E组比较均降低。结论梗阻性黄疸模型形成后,大鼠肝脏分泌的胆汁排泄不畅形成淤积。肝脏中G-6-P、PEPCK mRNA表达开始增强且随梗阻时间延长其表达增强趋势更加明显,加强了糖异生的过程,可导致血糖浓度的升高。梗阻解除后,受损肝脏形态及肝功能开始恢复,肝脏G-6-P、PEPCKmRNA表达开始降低,及早解除梗阻,恢复越快。提示肝组织G-6-P、PEPCK的mRNA表达升高可能是梗阻性黄疸时糖代谢紊乱的主要原因之一。     

诱生型一氧化氮合酶在胆道感染大鼠肝细胞中的表达

目的　了解诱生型一氧化氮合酶 (induciblenitricoxidesynthase ,iNOS)在胆道感染大鼠肝细胞中表达的情况及其规律。方法　制作大鼠胆道感染模型 ,采用还原型辅酶Ⅱ黄递酶组织化学法检测大鼠肝细胞中iNOS的表达。结果　大鼠胆道感染 2h后肝细胞即有iNOS的表达切片积分光度(13 5 8± 0 6 4) ,与对照组切片积分光度 (3 5 9± 0 2 8)相比 ,P <0 0 1。 8h达到峰值切片积分光度(2 9 2 7± 0 90 ) ,2 4h至 48h仍有较高表达切片积分光度分别为 (19 47± 0 6 5 )和 (19 96± 0 78)。结论　胆道感染时肝细胞可持续高效地表达iNOS ,提示胆道感染时肝脏是合成NO的重要器官 ,并可能对胆道感染的转归具有重要影响     

雌二醇对大鼠肝细胞胆汁分泌及细胞骨架再建的影响

目的 探讨雌激素对大鼠肝细胞胆汁分泌及细胞骨架再建的影响。方法 从F344大鼠肝脏分离肝细胞，行单层培养或肝细胞球状体三维培养，培养基中加入雌二醇，行位相差显微镜观察；进行肝细胞荧光素排泌实验及Rhodamine-Phallodin染色观察，细胞间粘连相关蛋白质和胆汁分泌相关的Pgp糖蛋白测定采用免疫印记杂交。结果 雌二醇(E2)使单层培养的肝细胞间毛细胆管样结构显著扩张，三维培养的肝细胞球状体中央出现空泡样改变，肌动蛋白在肝毛细胆管壁及球状体空泡壁周围聚集，荧光代谢物在扩张的毛细胆管及空泡中聚集，E2促进Pgp和Rho A和radixin的表达，其水平与空泡形成率相一致。结论 E2促进大鼠三维培养的肝细胞胆汁分泌，在Rho A和radixin介导下肌动蛋白重新分布，细胞骨架再建，调节紧密连接功能和聚集，导致毛细胆管样结构的扩张和三维培养时球状体空泡样结构的形成。     

解偶联蛋白-2、PPARγ在梗阻性黄疸及胆道再通大鼠肝脏氧化损伤中的作用

目的 研究解偶联蛋白-2(UCP-2)、过氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPARγ)在梗阻性黄疸及胆道再通大鼠肝脏中的表达与肝功能及超微结构改变的关系.方法 将30只雄性Wistar大鼠随机分为3组:假手术组(A组)、梗阻性黄疸1周组(B组)、梗阻性黄疸1周胆道再通1周组(C组),检测各组大鼠血清中直接胆红素(DBIL)、总胆红素(TBIL)和丙氨酸转氨酶(ALT)水平.免疫组织化学法检测UCP-2、PPARγ蛋白在肝脏中的表达.结果 血清DBIL、TBIL、ALT水平:B组明显高于A组,C组明显低于B组.PPARγ的表达:B组明显低于A组,C组较B组明显增强;UCP-2的表达:B组明显强于A组,C组较B组明显减弱.在电镜下可见B组超微结构改变较A组显著,C组超微结构改变较B组明显减轻.结论 梗阻性黄疸氧化损伤,造成肝功能及超微结构的改变,解除梗阻有利于肝功能及超微结构的恢复.PPARγ可能参与梗阻性黄疸及胆道再通肝脏的氧化与抗氧化反应,UCP-2可能参与肝脏氧化损伤时氧自由基的清除,减轻肝脏氧化损伤.     

重组人生长激素对肝硬化大鼠肝部分切除术后生长激素/胰岛素样生长因子-1轴的影响

目的探讨rhGH对肝硬化大鼠肝部分切除术后GH/IGF-1轴的影响。方法6只正常大鼠作为正常对照组,24只肝硬化大鼠随机分为术前组6只,肝部分切除术后1d组6只,肝部分切除后行PN5d组6只,肝部分切除术后行rhGH+PN5d组6只。测大鼠肝功能、血糖及血清GH、IGF-1、IGFBP-3水平,用RT-PCR法检测肝ALBmRNA、IGF-1mRNA、IGFBP-3mRNA的表达。肝组织行Ki67免疫组化染色。结果与PN组比较,rhGH+PN组血清ALP显著下降(P<0·05),血清ALB显著升高(P<0·05),血糖显著升高(P<0·05),血清GH、IGF-1、IGFBP-3水平显著升高(P<0·05),肝ALBmRNA、IGF-1mRNA表达水平显著升高(P<0·05),肝Ki67指数也显著升高(P<0·05)。且血清GH水平与血糖呈正相关(P<0·05),血清IGF-1、IGFBP-3水平与血清AST、ALT、ALP呈负相关(P<0·05),与血清ALB量正相关(P<0·05)。结论rhGH可以改善肝硬化大鼠肝部分切除术后GH/IGF-1轴,血清IGF-1、IGFBP-3水平有助于判断营养支持的效果。     

梗阻性黄疸胆红素代谢的实验研究

目的：探讨胆道梗阻及缓解过程中肝脏代谢胆红素的机制。方法：利用Wistar大鼠梗阻性黄疸模型，动态观察胆道梗阻不同时间及梗阻缓解后，血清胆红素变化规律。结果：实验结果表明，血清胆红素水平在梗阻早期（＜14d)明显升高，特别是血清δ-胆红素；梗阻2周后及梗阻缓解后，血清胆红素水平下降，但δ-胆红素/总胆红素比值升高。结论：胆道梗阻解除后可能存在的高胆红素血症期，并不提示预后不良。     

重组人生长激素对大鼠免疫损伤性肝纤维化的影响

目的 研究重组人生长激素对肝纤维化发生和发展过程的影响。方法 应用尾静脉攻击注射人血白蛋白方法诱导大鼠形成免疫损伤性肝纤维化模型。基础免疫后，在尾静脉攻击注射白蛋白即肝纤维化模型形成的过程中，同时给予外源性的重组人生长激素来干预肝纤维化的发生和发展。攻击注射10周后，观察肝组织病理肝纤维化分级；测定肝组织胆原蛋白含量；检测血清层粘连蛋白和透明质酸的含量和肝功能指标。结果 重组人生长激素能够减轻肝组织病理肝纤维化分级（P＜0．01）；降低胶原蛋白、层粘连蛋白和透明质酸的含量（P＜0．05）；同时改善肝功能（P＜0．05）。结论 重组人生长激素能够阻断或延缓大鼠免疫损伤性肝纤维化的发生和发展，具有一定程度的抗肝纤维化的作用。     

术后应用肠外营养对肝细胞癌合并肝硬化病人的影响

目的探讨肝细胞癌合并肝硬化病人术后的营养支持。方法24例行根治性切除的肝癌病人随机分为PN组（n=12）和rhGH＋PN组（n=12）。术前、术后1d和术后6d测肝功能、血糖、AFP、血清前白蛋白、转铁蛋白及血清GH、IGF-1、IGFBP-3，用RT—PCR法检测肝组织（包括癌组织，癌旁组织和术后6d肝穿刺组织）ALBmRNA、IGF-1mRNA、IGFBP-3mRNA的表达，肝组织行Ki67免疫组织化染色。同时选12例因胆石症或肝血管瘤行手术的病人作为正常对照。结果肝细胞癌合并肝硬化病人血清前白蛋白，转铁蛋白低于正常对照组，血清GH水平高于正常对照组，而血清IGF-1、IGFBP-3水平低于正常对照组；术后6d，rhGH＋PN组血糖、血清前白蛋白、转铁蛋白、血清GH、IGF-1、IGFBP-3水平、肝ALBmRNA、IGF—1mRNA、IGFBP-3mRNA表达水平、肝Ki67指数均高于PN组。血清GH水平与血糖呈正相关，血清IGF1、IGFBP-3水平与血清AST、ALT、TBIL呈负相关，与血清ALB、前白蛋白，转铁蛋白呈正相关。结论rhGH＋PN有利于肝细胞癌合并肝硬化病人术后生长激素／胰岛素样生长因子-1轴的恢复，检测血清IGF-1、IGFBP-3水平有助于了解短期营养支持的效果和选择营养素。     

The preventative role of growth hormone on acute liver injury induced by cardiopulmonary bypass in a rat model

Objective: Cardiopulmonary bypass (CPB)-induced acute liver injury is a life-threatening complication after cardiac surgery and is thought to be associated with inflammatory response and acute-phase response (APR). Recombinant human growth hormone (rhGH) can modulate the APR and inflammatory response. Here, we tested the protective effect of GH on CPB-induced liver injury in the rat. Methods: Adult male Sprague–Dawley rats (group G, received 2.5 mg/kg of rhGH intramuscularly at 8 a.m. every 24 h for 3 days and just before the initiation of CPB; group C served as control) underwent CPB (120 min, 120 ml/kg per minute, 34 °C) and were killed 3 h after the termination of CPB. Results: Administration of rhGH markedly increased serum insulin-like growth factor (IGF)-I and IGF-I-binding protein (IGFBP)-3 compared with group C. Group G showed significantly lower serum concentrations of alanine aminotransferase and total bilirubin after CPB termination. Those receiving rhGH demonstrated a significant increase in serum prealbumin and serum transferrin and a marked decrease in serum amyloid A and serum C-reactive protein compared with group C. rhGH significantly decreased serum tumor necrosis factor- (TNF-) and interleukin-1β (IL-1β), whereas no changes were found for serum IL-6 and IL-10 compared with group C. rhGH significantly increased total liver protein content, hepatocyte proliferation, and decreased hepatocyte apoptosis versus group C. Conclusions: These results suggest that GH administration in rats seems to play a preventative role in acute liver injury associated with CPB via the decrease in acute-phase proteins, proinflammatory cytokines TNF- and IL-1β, and hepatocyte apoptosis, which is associated with increase in constitutive hepatic proteins, total liver protein content, and hepatocyte proliferation.     

重组人生长激素在治疗肝硬变大鼠肝部分切除术后低白蛋白血症中的作用

目的探讨重组人生长激素(rhGH)在治疗肝硬变大鼠肝部分切除术后低白蛋白血症中的作用。方法30只大鼠按编号法随机分为正常对照组、肝硬变组(LC组)、肝硬变切肝组(LCH组)、PN组(于肝叶切除术后行PN治疗)及rhGH PN组(于肝叶切除术后行rhGH PN治疗)．每组6只。检测大鼠肝功能、血糖．用RT-PCR法检测肝组织ALB mRNA的表达．肝组织行Ki67免疫组化染色。结果与PN组比较．rhGH PN组血清ALP降低，ALB、血糖升高．肝组织ALBmRNA表达水平及肝组织Ki67指数均升高。结论重组人生长激素可以改善肝硬变大鼠肝部分切除后低白蛋白血症。     

Recombinant human growth hormone alters acute phase reactant proteins, cytokine expression, and liver morphology in burned rats.

BACKGROUND: The effects of exogenous recombinant human growth hormone (rhGH) on hepatic acute phase reactant proteins, cytokine expression, and liver morphology were studied in thermally injured rats to define whether rhGH alters the acute phase response. MATERIALS AND METHODS: Sprague-Dawley rats (56 males) receiving a 60% TBSA third-degree scald burn were randomly divided into two groups to receive either 2.5 mg/kg/day sc rhGH or saline. Rats were sacrificed on Postburn Days 1, 2, 5, and 7. Serum acute phase reactant proteins and cytokines TNF-alpha, IL-1alpha, IL-1beta, and IL-6 were measured. Hepatocyte proliferation, hepatic cytokine gene expression, and liver protein concentrations were determined. RESULTS: Recombinant hGH increased serum albumin on Days 5 and 7 after burn (P < 0.05). Serum haptoglobin and alpha1-acid glycoprotein levels decreased at 2, 5, and 7 days after burn compared to saline (P < 0.05). In rats treated with rhGH, serum IL-1beta decreased 1 day postburn, while serum TNF-alpha increased 5 days after burn compared to saline (P < 0.05). Serum IL-6 and IL-1alpha did not change. Hepatic RNA levels for TNF-alpha were significantly elevated on Day 1 postburn compared to saline (P < 0. 05). Hepatic protein content increased on Days 2, 5, and 7 postburn compared to saline (P < 0.05). Hepatocyte proliferation in rhGH-treated rats increased on Day 5 after burn (P < 0.05). CONCLUSION: Data indicate that rhGH alters the hepatic acute phase response by decreasing type I acute phase proteins and modulating IL-1-like cytokine expression. These changes are associated with increased hepatocyte mitosis and serum and total liver protein concentrations.     

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目的前瞻性地观察肝移植术后早期应用重组生长激素(rhGH)的有效性和安全性。方法将2003年1～10月在中山大学器官移植研究所肝移植中心接受原位肝移植的30例良性终末期肝移植病人随机分为观察组和对照组两组,观察组于术后第1天开始连续7d每天1次皮下注射重组人生长激素10U,其它治疗与对照组相同。术前及术后1、4、8、14天测定生化、免疫和营养等指标,并观察两组的感染率和排斥率。结果观察组术后第4、8、14天血清测定生长激素(GH)、胰岛素样生长因子-1(IGF1)水平较对照组显著升高(P<0.05);而术后4、8天谷丙转氨酶(ALT)、血清尿素氮(BUN)和转铁蛋白较对照组显著降低(P<0.05)。观察组感染率较对照组降低,但两组差异无显著性,同时两组血清IgG,IgM,IgA,IL2水平CD4/CD8值及急性排斥反应发生率差异均无显著性(P>0.05)。结论rhGH能促进肝移植术后肝细胞损伤的修复与GH-IGF-1轴的恢复,能适当降低术后感染率且未增加急性排斥反应发生率。     

Growth hormone and renal function

Summary: Recombinant human growth hormone (rhGH) has been recognized to be beneficial for improving growth retardation in uraemic children. the potential effect of growth hormone (GH) on renal haemodynamics results in an increase in glomerular filtration rate and renal plasma flow. However, in GH transgenic mice and uraemic rats treated with GH, GH has been reported to aggravate glomerular sclerosis and induce deterioration in renal function. Therefore, the potential of adverse effect of GH on deterioration in renal function has been of concern in uraemic children receiving rhGH. Growth hormone enhances protein anabolism and promotes a positive nitrogen balance. It is more likely that the anabolic effect of GH used at the conventional dose may reduce renal solute load and slow the progression of end-stage renal failure (ESRF) in rhGH-treated uraemic children. A low protein diet with adequate calories slows the deterioration of renal function in uraemic patients. the effects of GH on growth promotion, renal haemodynamics and protein anabolism are mainly mediated by insulin-like growth factor-I (IGF-I). Insulinlike growth factor-I enhances glomerular filtration rate and promotes glomerular hypertrophy, but IGF-I administration is unlikely to give rise to glomerular sclerosis. the efficacy and the safety of concomitant therapy of recombinant GH or IGF-I and low protein diet should therefore be considered in uraemic children.