内皮抑素对人肺腺癌A549细胞周期及HIF-1表达的影响

目的研究内皮抑素在体外对人肺腺癌细胞A549的影响及机制。方法流式细胞术（FCM）检测内皮抑素治疗后,肺腺癌细胞A549的细胞周期分布;酶联免疫吸附法（ELISA）检测处理前后细胞中HIF-1的表达情况。结果内皮抑素处理肺腺癌A549细胞,可以使该细胞S期和G₂/M期细胞比例增多,抑制HIF-1的表达,且随处理时间的延长,HIF-1的抑制率不断提高。结论内皮抑素可以使A549细胞阻滞在G2/M期及S期的比例明显增加,从而为其他手段抑制A549细胞的增殖或直接杀伤A549细胞提供了基础;内皮抑素可以抑制肿瘤细胞的HIF-1表达,HIF-1是肿瘤细胞耐受放化疗的因素之一,因此联合内皮抑素治疗有可能提高放、化疗疗效。     

大黄素对人肺腺癌A-549细胞增殖周期影响的实验研究

目的：观察大黄素对人肺腺癌A-549细胞增殖及周期的影响。方法：设计空白对照组及不同浓度的大黄素溶液作用于A-549细胞，MTT比色法测定A-549细胞生长的抑制率；流式细胞仪分析A-549细胞增殖周期的变化。结果：大黄素对人肺腺癌A-549细胞有明显的生长抑制作用，其抑制作用呈浓度依赖性，其抑制率随药物浓度升高而增加。400mg／L时达到83．33％，实验组与对照组之间差异有统计学意义，P=0．000；对A549细胞具有细胞周期阻滞作用，可将其阻滞于G0／G1期，阻止细胞进入S期。结论：大黄素对人肺腺癌A549细胞的增殖生长具有显著的抑制作用；并可使A-549细胞增殖周期停滞于G0／G1期，而阻止其进入S期。     

苯丁酸钠对体外人肺腺癌细胞A549的影响

目的观察苯丁酸钠（PB）对体外人肺腺癌细胞A549的影响。方法采用MTT法观察不同浓度PB对人肺腺癌细胞A549增殖的抑制作用,流式细胞术分析不同浓度PB对生长期人肺腺癌细胞A549的细胞周期及凋亡情况的影响。结果 PB作用后人肺腺癌细胞A549的生长缓慢,细胞阻滞于G0/G1期（P〈0.05）,凋亡增加（P〈0.05）,其抑制作用呈时间和浓度依赖性。结论 PB能抑制人肺腺癌细胞A549的生长,促进其凋亡。     

榄香烯对人肺腺癌细胞A549作用机理的初步研究

目的：研究榄香烯对体外培养的人肺腺癌细胞株A549的作用及其机制。方法：采用MTTI地检测药物对细胞的抑制作用。流式细胞术检测细胞周期变化以及电镜观察细胞的形态变化，结果：榄香烯能明显抑制肺腺癌细胞A549的生长，其半数生长抑制剂量为124．61μg/ml，流式细胞术证实榄香烯能阻滞肺腺癌细胞从S期进入G2／M期；透射电镜超微结构可见细胞浆内脂滴增多和坏死细胞明显增多的形态变化。结论：榄香烯能抑制肺腺癌细胞的生长，并阻滞肺腺癌细胞从S期进入G2／M期。     

α-干扰素与肉桂酸对人肺癌细胞增殖的抑制作用

背景与目的:有研究表明肉桂酸对肿瘤细胞有抑制作用。本实验拟进一步研究α-干扰素(alpha-interferon,α-IFN)与肉桂酸(cinnamicacid,CINN)单独及联合作用对人肺腺癌细胞增殖的抑制作用。方法:用α-IFN和CINN处理人肺腺癌A549细胞,通过绘制生长曲线、软琼脂集落形成实验、甲基绿-派洛宁染色、流式细胞术(FCM)测定等方法来研究其对细胞的增殖抑制作用。结果:与对照组相比,α-IFN和CINN能明显抑制A549细胞增殖(P<0.05),促进细胞分化(P<0.05),α-IFN和CINN联合应用时抑制作用较二者单独作用时强;细胞在软琼脂中集落形成率明显下降(P<0.05);FCM显示细胞周期移行被阻滞于G1/G0期。结论:CINN联合α-IFN能抑制肺腺癌细胞增殖,α-IFN和CINN两药联合作用效应强于α-IFN或CINN单独作用。     

重组人血管内皮抑素对肺腺癌A549细胞生长及凋亡的影响

目的：探讨重组人血管内皮抑素（恩度）对肺腺癌A549细胞生长及凋亡的影响。方法：应用四甲基偶氮唑蓝（MTT）法检测恩度对肺腺癌A549细胞的生长抑制作用,流式细胞仪检测肺腺癌A549细胞的凋亡率,比较各浓度药物对肺腺癌A549细胞的诱导凋亡作用。结果：恩度可以抑制肺腺癌A549细胞的生长,且呈时间剂量依赖性。恩度可以诱导肺腺癌A549细胞的凋亡,随浓度增加、作用时间的延长,凋亡率增加,与对照组相比,差异有统计学意义（P〈0．001）。结论：恩度对肺腺癌A549细胞的生长具有明显的抑制作用,主要通过诱导肺腺癌A549细胞的凋亡引起。     

重组人血管内皮抑素联合放疗对人类肺癌A549细胞株生长抑制及凋亡的影响

目的研究重组人血管内皮抑素（ES,商品名：恩度）联合放射治疗对肺腺癌A549细胞的生长抑制以及血管内皮生长因子（VEGF）分泌水平和细胞凋亡的影响。方法将培养至对数生长期的A549细胞分为空白对照组、单纯放疗组、单用ES组、联合治疗组,其中在联合治疗组中根据使用放疗和内皮抑素处理的时序不同又分为先ES后放疗组（ES—RT）、先放疗后ES组（RT—ES）、ES与放疗同时进行组（RT＋ES）。放疗处理时给予^60Co照射,2Gy,单次照射;ES处理时在细胞培养液中给予ES10ul。ELISA法测定ES联合放疗对肺癌A549细胞株VEGF分泌的影响并绘制细胞生存曲线,Hoechst染色观察细胞凋亡。结果ES和放疗均对肺癌A549细胞有生长抑制作用,但联合治疗组的抑制作用较其他各组更加明显且差异性具有统计学意义（P〈0．05）。处理后的A549细胞VEGF表达量在ES组、联合治疗的各亚组均较空白对照组明显减少（P〈0．05）。ES组、RT组、联合治疗的各亚组的凋亡率均较空白对照组明显升高（P〈0．05）。结论ES联合放疗与单用ES和单纯放疗相比较,前者在抑制肿瘤细胞生长以及促进A549细胞的凋亡方面效果更好。使用ES下调肺癌A549细胞VEGF的表达,具有增加放射治疗敏感性的作用。ES与放疗联合时序的不同,对放疗增敏作用的影响无明显区别。     

转染外源CC10对肺腺癌细胞系A549的CyclinD1蛋白及mRNA的影响(英文)

目的研究转染外源性CC10基因对肺腺癌A549细胞株的细胞周期及周期蛋白CyclinD1蛋白和mRNA表达影响。方法用脂质体法分别将外源性抑癌基因CC10转染到人肺腺癌细胞株A549中,8h、16h、24h、36h、48h后,分别用Western blot法检测转染CC10基因的A549细胞CC10蛋白表达,用流式细胞仪观察细胞周期的变化,用免疫细胞化学及RT-PCR检测转染CC10基因对周期蛋白CyclinD1蛋白、mRNA的影响。结果转染外源CC10基因对A549细胞生长具有抑制作用,细胞生长阻止于G0／G1,细胞周期S期+G2／M期比例下降。转染外源 CC10基因的A549细胞CC10蛋白表达增高,而CyclinD1的蛋白及mRNA表达明显降低。结论转染外源CC10基因对肺癌细胞G0／G1周期的抑制作用可能与CyclinD1基因表达下调有关。     

HDAC1 siRNA转染对肺腺癌A549细胞增殖及凋亡的影响

背景与目的:多项研究表明组蛋白去乙酰化酶(histone deacetylases,HDACs)抑制剂对人非小细胞肺癌细胞株有抑制增殖和诱导凋亡作用.而HDAC抑制剂对HDAC Ⅰ型和Ⅱ型均有抑制作用,在非小细胞肺癌细胞株中尚未明确HDACs中哪一类受抑制能影响肿瘤生长.本研究通过HDAC1 siRNA转染肺腺癌细胞株A549,观察HDACs中HDAC1对肺腺癌细胞增殖、周期和凋亡的影响,明确HDAC1在肺腺癌细胞生长中的作用.方法:MTT法检测不同时间点HDAC1 si RNA转染对A549细胞体外增殖的影响,流式细胞术检测RNA干扰后细胞周期及凋亡率的变化;Western blot法检测细胞内组蛋白H4乙酰化水平的变化.结果:HDAC1 siRNA转染A549细胞后,HDAC1在转录和表达水平均下降,组蛋白H4乙酰化表达增高.siRNA干扰后A549细胞的体外生长抑制呈时间依赖性,流式细胞术检测结果显示细胞阻滞于G2/M期,细胞凋亡增加.结论:HDAC1 siRNA转染能有效地抑制HDAC1在A549细胞中的表达,增加A549细胞中组蛋白的乙酰化,并影响A549细胞相关生物学行为,抑制肺腺癌细胞的生长,为HDAC1基因治疗应用于肺腺癌奠定了基础.     

rm hTNF-α联合吉西他滨杀伤人肺腺癌细胞A549作用研究

背景与目的 目前,晚期非小细胞肺癌患者化疗效果已达平台,生物治疗与化疗联合使用可明显改善此类患者的治疗效果.本课题旨在研究rmhTNF-α联合吉西他滨对人肺腺癌细胞A549的杀伤作用及其作用机制.方法 应用CCK-8法检测不同浓度rmhTNF-α及吉西他滨对A549细胞抑制率,应用细胞生长曲线描述经rmhTNF-α、吉西他滨干预过的A549细胞增殖情况,应用流式细胞仪检测各药物处理组48 h的细胞周期分布及凋亡率,并用光学显微镜及透射电子显微镜观察A549细胞形态及超微结构.结果 CCK-8检测结果及细胞生长曲线均提示rmhTNF-α不仅具有抑制A549细胞生长作用,而且可以增强吉西他滨对A549细胞杀伤作用;FCM显示两药联合组可促使A549细胞阻滞在S期,降低G2/M期比率;凋亡比率以吉西他滨 rmhTNF-α组最明显,光镜及电镜下观察结果均能明显观察到A549细胞呈凋亡形态学改变.结论 rmhTNF-α通过诱导人肺腺癌细胞A549细胞凋亡及细胞周期阻滞,从而增强吉西他滨对其的杀伤作用.     

内皮抑素对NSCLC细胞系中VEGF受体2表达的影响及其放射增敏效应机制研究

目的 研究内皮抑素对NSCLC细胞(人肺腺癌A549细胞、人肺鳞癌Calu-1细胞)中VEGF受体2(VEGFR₂)表达影响,并探索其放射增敏效应的可能机制。方法 CCK8法检测内皮抑素对细胞增殖抑制作用,计算24 h的20%药物抑制浓度(IC₂₀);采用RT-PCR及蛋白印迹法检测各组VEGFR₂、相关信号通路及HIF-1α mRNA与蛋白表达变化;克隆形成实验检测各组细胞放射敏感性,流式细胞术检测凋亡及周期分布。多样本均数比较采用单因素方差分析,组间比较采用两样本均数t检验。结果 经内皮抑素处理后,Calu-1细胞增殖活力明显下降(F=50.36,P<0.01),IC₂₀=296.5 μg/ml;VEGFR₂和HIF-1αmRNA与蛋白表达水平均受抑制(F=25.43、10.44,P值均<0.05);同时Akt、ERK1/2和p38的蛋白磷酸化水平均减低(F=2.89、0.24、1.09,P值均<0.05);其放射增敏比为1.38;凋亡率、G₂+M期阻滞增加(F=44.15、104.24,P值均<0.01)。此外,与Calu-1细胞相比,内皮抑素对A549细胞放射增敏比为1.09。结论 内皮抑素能促进VEGFR₂高表达Calu-1细胞凋亡并能增强放射敏感性,对低表达的A549细胞效果有限。     

125I粒子植入联合放射治疗对A549裸鼠移植瘤生长及HIF-1表达的影响

 【摘要】　目的　研究125I粒子植入联合放射治疗对A549裸鼠移植瘤生长及乏氧诱导因子-1α（HIF-1α）表达的影响。方法　应用裸鼠建立肺腺癌A549移植瘤模型,待平均瘤体积达到（300±50）mm3时40只裸鼠随机分成4组（每组10只）,对照组 ：不做任何处理;单纯放射治疗组 ：第1天予单次外照射,6 MV-X线,10 Gy;125I粒子植入组 ：肿瘤中心植入1枚活度27.75 MBq的125I粒子;放疗加125I粒子植入组（联合治疗组）：第1天在肿瘤中心植入1枚活度27.75 MBq的125I粒子的同时予单次外照射,6MV-X线,10 Gy。治疗后共观察15 d,绘制肿瘤生长曲线,测量各组肿瘤体积并计算抑瘤率,分别用免疫组织化学及蛋白免疫印迹方法测定HIF-1α的表达。结果　治疗第8天起,瘤体积联合治疗组（209±21）mm3与对照组（322±30）mm3相比差异有统计学意义（t＝46.4,P＝0.000）。第15天后,单纯放射治疗组、125I粒子植入组、联合治疗组抑瘤率依次为45.9 %、44.4 %、69.4 %,联合治疗组与单纯放射治疗组比较差异有统计学意义（t＝52.03,P＝0.000）,联合治疗组与125I粒子植入组比较差异有统计学意义（t＝53.98,P＝0.000）,单纯放射治疗组和125I粒子植入组相比,差异无统计学意义（t＝0.591,P＝0.596）。联合治疗组与其他各组相比HIF-1α改变差异均无统计学意义（P＝0.342）。结论　放射治疗联合125I粒子植入能显著抑制转染人类肺腺癌A549裸鼠移植肿瘤的生长,但未抑制肿瘤细胞HIF-1α的表达。     

Recombinant human endostatin combined with radiotherapy inhibits colorectal cancer growth

Background

To examine the effects of recombinant human endostatin combined with radiotherapy on colorectal cancer HCT-116 cell xenografts in nude mice.

Methods

Forty male BALB/c nude mice were injected with human colorectal cancer HCT-116 cells to form xenografts and then randomized into the following 4 groups (each group comprised ten mice): a control group, an endostatin group (20 mg/kg endostatin once a day for 10 days), a radiotherapy group (a 6-Gy dose was administered via a 6-MV X-ray on day 5 post-inoculation), and a combination therapy group (radiotherapy with endostatin treatment). The tumor growth inhibition rate were detected. CD31, vascular endothelial growth factor (VEGF), and hypoxia inducible factor-1α (HIF-1α) expression and microvascular density (MVD) were evaluated by immunohistochemistry. The expression of VEGF protein was also detected by western blotting.

Results

The tumor growth inhibition rate in the radiotherapy with endostatin treatment group was significantly higher than those in endostatin group or radiotherapy group (77.67% vs 12.31% and 38.59%; n?=?8 per group, P?<?0.05). The results of immunohistochemistry showed that treatment with radiotherapy induced significant increases in CD31, VEGF, and HIF-1α expression and MVD compared with treatment with saline, while treatment with endostatin or radiotherapy with endostatin induced reductions in CD31, VEGF, and HIF-1α expression and MVD compared with treatment with saline (n?=?8 per group, P?<?0.05). The results of western blotting showed that VEGF protein expression in radiotherapy group was significantly increased compared with that in the control group. However, VEGF protein expression in the endostatin or radiotherapy with endostatin groups was significantly decreased compared with that in the control group (n?=?8 per group, P?<?0.05).

Conclusions

Endostatin combined with radiotherapy can significantly inhibit HCT-116 cell xenograft growth, possibly by inhibiting angiogenesis and attenuating tumor cell hypoxia.

     

雷帕霉素联合缺氧诱导肺腺癌A549细胞凋亡及其分子机制

目的:探讨哺乳动物雷帕霉素靶向(mammalian target of rapamycin, mTOR)通路抑制剂雷帕霉素联合缺氧诱导人肺腺癌细胞株A549细胞凋亡的分子机制.方法:应用雷帕霉素联合缺氧处理人肺腺癌细胞株A549后,Hoechst 33258染色法观察细胞凋亡情况,实时定量PCR和Western印迹法分别检测A549细胞中survivin mRNA和蛋白的表达变化,Western印迹法检测缺氧诱导因子1α(hypoxia-inducible factor 1α, HIF1α)表达的改变.结合染色质免疫共沉淀技术,探讨雷帕霉素通过诱导细胞凋亡而发挥抗肺癌效应的分子机制.结果:雷帕霉素联合缺氧可在体外诱导A549细胞凋亡,雷帕霉素联合缺氧可诱导A549细胞中survivin mRNA(P＜0.01)和蛋白的表达水平明显下调.雷帕霉素通过抑制缺氧条件下诱导的HIF-1α表达增加,进而抑制survivin的表达.结论:雷帕霉素通过抑制缺氧条件下A549细胞中HIF-1α的表达,降低HIF-1α与survivin核心启动子的结合,下调缺氧引发的凋亡抑制基因survivin表达,进而发挥抗肿瘤的生物学效应.     

JAK2/STAT3信号通路对A549细胞株中HIF-1ɑ、VEGF蛋白表达的影响

目的：研究人肺腺癌细胞A549细胞中JAK2/STAT3信号通路对HIF-1ɑ、VEGF蛋白表达的影响。方法：AG490处理在氧含量正常及缺氧条件下（CoCl2200μmol/L）48h后Westernblot法测定A549细胞中HIF-1ɑ、VEGF蛋白表达变化（分组为对照组、AG49050μmol/L、AG490100μmol/L、CoCl2、CoCl2＋AG49050μmol/L和CoCl2＋AG490100μmol/L组）。IL-6（3.85nmol/L）处理A549细胞24h后,检测细胞中STAT3、p-STAT3、HIF-1ɑ、VEGF蛋白表达变化（分组为对照组,IL-6组）。结果：JAK2特异性抑制剂AG490作用48h后,相对于对照组AG490能够下调HIF-1ɑ、VEGF的蛋白表达,且呈浓度依赖性;随浓度的升高,抑制作用更明显。缺氧条件下（CoCl2200μmol/L）能够上调HIF-1ɑ、VEGF的蛋白表达。AG490也能够下调CoCl2诱导的HIF-1ɑ、VEGF的蛋白表达,且呈浓度依赖性,随浓度的升高,抑制作用更显著。IL-6能够上调HIF-1ɑ、VEGF的蛋白表达。结论：在人肺腺癌细胞A549细胞中,缺氧可上调HIF-1α和VEGF蛋白表达。JAK2/STAT3信号通路对HIF-1α和VEGF蛋白的表达具有调节作用。     

放疗联合周剂量重组人血管内皮抑素对A549肺腺癌裸鼠移植瘤生长抑制作用的研究

目的:研究放疗联合周剂量重组人血管内皮抑素(recombinant human endostatin, rh-Endostatin)对肺腺癌A549裸鼠移植瘤生长的抑制作用.方法: 40 只裸鼠A549细胞移植瘤模型随机分成4组:空白对照组、rh-Endostatin治疗组、放射治疗组和放疗联合rh-Endostatin治疗组,观察并绘制肿瘤生长曲线图,计算肿瘤体积抑制率;肿瘤组织行常规HE病理学检查,免疫组织化学法检测肿瘤组织中微血管内皮CD31的表达及肿瘤微血管密度(microvessel density, MVD)的变化;采用免疫组织化学及Western印迹法检测血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor, VEGF)的表达;TUNEL法检测肿瘤细胞的凋亡. 结果:治疗第8天起,放疗联合rh-Endostatin治疗组的肿瘤体积与对照组相比,差异有统计学意义(P＜0.05).15 d后,rh-Endostatin治疗组、放射治疗组和放疗联合rh-Endostatin治疗组小鼠的肿瘤体积的抑制率依次为68.35%、90.78%和106.56%; rh-Endostatin治疗组小鼠的MVD较放射治疗组下降明显(P＜0.05);但rh-Endostatin治疗组与对照组、放疗联合rh-Endostati治疗组及放射治疗组相比,VEGF的改变差异均无统计学意义;放疗联合rh-Endostatin治疗组细胞凋亡明显.结论:放疗联合周剂量rh-Endostatin能抑制肿瘤的生长,较早诱导肿瘤退缩,可能与减少放射治疗后肿瘤血管再生及增加肿瘤细胞和内皮细胞的凋亡相关;各治疗组小鼠均未出现急性不良反应,因此该方法具有短疗程的优势,可用于临床推广.     

川芎嗪通过减少肺癌A549细胞内活性氧的生成抑制细胞增殖及侵袭

目的:探讨川芎嗪(tetramethylpyrazine,TMP)对人肺癌A549细胞生长侵袭的干预作用与活性氧（reactive oxygen species,ROS）及其调控蛋白表达水平的相关性。方法:采用CCK-8法检测川芎嗪对A549细胞生长的影响,采用Transwell小室实验检测川芎嗪对A549细胞侵袭能力的影响,采用DCFH-DA荧光探针检测川芎嗪对A549细胞内ROS水平的影响,Western-blot法检测川芎嗪对HIF-1α、VEGF-C、MMP-9蛋白表达水平的影响。结果:川芎嗪呈浓度依赖性抑制肺癌A549细胞增殖和侵袭能力（P＜0.05）,同时减少细胞内ROS生成（P＜0.05）,抑制HIF-1α、VEGF-C、MMP-9蛋白表达（P＜0.05）。结论:川芎嗪可降低人肺癌A549细胞ROS水平,减轻氧化应激损伤,从而抑制肿瘤细胞的增殖及侵袭。     

沉默HOXC8增加A549细胞对放射敏感性作用机制研究

目的 探讨HOXC8对非小细胞肺癌A549细胞放射敏感性影响及潜在机制,以期为临床联合治疗提供新思路。方法 慢病素感染构建稳定沉默HOXC8的A549细胞,qPCR和蛋白印迹法进行验证;克隆形成实验检测A549稳转株对放射敏感性影响;蛋白印迹法检测沉默HOXC8后TGF-β1及其下游信号蛋白表达变化。结果 成功构建沉默HOXC8的A549稳转株;沉默HOXC8后A549细胞活力和克隆形成能力显著降低;沉默HOXC8后也增加了A549细胞对放射的敏感性;沉默HOXC8显著抑制了TGF-β1及其下游信号蛋白p-Smad2/3表达。结论 沉默HOXC8可能通过抑制TGF-β1信号转导增加A549细胞对放射的敏感性,HOXC8可能在其中起重要作用。     

沉默HOXC8增加A549细胞对放射敏感性作用机制研究

目的 探讨HOXC8对非小细胞肺癌A549细胞放射敏感性影响及潜在机制,以期为临床联合治疗提供新思路。方法 慢病素感染构建稳定沉默HOXC8的A549细胞,qPCR和蛋白印迹法进行验证;克隆形成实验检测A549稳转株对放射敏感性影响;蛋白印迹法检测沉默HOXC8后TGF-β1及其下游信号蛋白表达变化。结果 成功构建沉默HOXC8的A549稳转株;沉默HOXC8后A549细胞活力和克隆形成能力显著降低;沉默HOXC8后也增加了A549细胞对放射的敏感性;沉默HOXC8显著抑制了TGF-β1及其下游信号蛋白p-Smad2/3表达。结论 沉默HOXC8可能通过抑制TGF-β1信号转导增加A549细胞对放射的敏感性,HOXC8可能在其中起重要作用。