胡桃醌通过调节Wnt/β-catenin/Snail通路抑制前列腺癌细胞上皮-间充质转化

目的:探讨胡桃醌对人前列腺癌细胞上皮-间充质转化的抑制作用及其机制。方法:培养人前列腺癌LNCaP细胞,实验设置对照组(无胡桃醌)、12. 5μmol/L胡桃醌组和25μmol/L胡桃醌组,后2组用胡桃醌作用LNCaP细胞24 h。采用Transwell实验检测细胞侵袭能力; Western blot实验检测上皮钙黏蛋白(E-cadherin)、波形蛋白(vimentin)、β-连环蛋白(β-catenin)和Snail的蛋白表达水平;使用LiC l和胡桃醌联合作用LNCaP细胞后,Western blot实验检测Snail和E-cadherin的蛋白表达。结果:Transwell实验结果表明,与对照组相比,胡桃醌作用LNCaP细胞后侵袭能力下降(P 0. 01)。Western blot的结果表明,胡桃醌作用LNCaP细胞后E-cadherin的蛋白表达升高,vimentin和Snail及细胞核中β-catenin蛋白的表达降低(P 0. 01)。与胡桃醌组比较,胡桃醌与LiC l联合作用LNCaP细胞后Snail蛋白表达升高,E-cadherin蛋白表达降低(P 0. 01)。结论:胡桃醌可能通过抑制Wnt/β-catenin/Snail信号通路而抑制LNCaP细胞上皮-间充质转化。     

褪黑素通过激活典型Wnt/β-catenin信号通路促进许旺细胞迁移

背景:褪黑素主要是由松果体分泌的一种神经内分泌激素,能够促进许旺细胞增殖并促进周围神经损伤后再生。目的:探究褪黑素对许旺细胞迁移活性的影响及其相关分子机制。方法:体外培养大鼠许旺细胞RSC96细胞株并鉴定;CCK-8检测褪黑素对许旺细胞增殖活性的影响;采用Transwell细胞迁移小室,观察0,100 nmol/L,1μmol/L,10μmol/L褪黑素作用20 h对许旺细胞迁移活性的影响;采用qRT-PCR和Western-blot检测褪黑素受体1,2在许旺细胞上的表达情况;通过Transwell细胞迁移实验,观察褪黑素受体拮抗剂luzindole或典型Wnt/β-catenin信号通路抑制剂IWR-1对褪黑素促进许旺细胞迁移活性的影响。Western-blot检测褪黑素对许旺细胞中Wnt/β-catenin信号通路活性的调控作用。结果与结论:①贴壁培养的RSC96细胞具有许旺细胞的典型形态,细胞呈纺锤状或三角形,细胞两极伸出细长的突起;许旺细胞标志物S-100免疫荧光染色阳性;②相较于空白对照组,1,10μmol/L褪黑素能够显著促进许旺细胞迁移,对其产生化学性吸引作用,其中1μmol/L褪黑素作用最显著;③许旺细胞主要表达褪黑素受体1;Transwell细胞迁移实验表明,和单纯褪黑素处理组比较,luzindole和褪黑素共同干预组迁移的细胞数无显著性改变,而IWR-1和褪黑素共同干预组许旺细胞迁移的细胞数显著低于单纯褪黑素处理组(P<0.05);④qRT-PCR和Western-blot结果表明,相较于空白对照组,褪黑素组许旺细胞中P-Lrp6,LEF-1和细胞核β-catenin蛋白表达水平显著上调(P<0.05);⑤单纯褪黑素组和IWR-1+褪黑素组许旺细胞中LEF-1和核β-catenin蛋白表达量均显著高于空白对照组和单纯IWR-1组(P<0.05),表明褪黑素在一定程度上拮抗IWR-1对Wnt/β-catenin信号通路活性的抑制作用;⑥上述数据证实,褪黑素能够通过激活Wnt/β-catenin信号通路促进许旺细胞迁移。     

Wnt7b/β-catenin信号通路分子在肺泡Ⅱ型上皮细胞转分化过程中的变化

目的探讨Wnt7b/β联蛋白(β-catenin)信号通路分子在胎鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞(f AEC2)分化过程中的变化。方法取孕19 d胎鼠肺组织,分离、纯化得到fAEC2。培养细胞48、72、96 h,倒置显微镜观察fAEC2形态变化,免疫荧光染色观察β-联蛋白(β-catenin)的表达,实时定量PCR检测细胞中Wnt7b、细胞周期蛋白D1(cyclin D1)、表面蛋白C(SP-C)和水通道蛋白5(AQP5)的mRNA变化,Western blot法检测cyclin D1、细胞核β-catenin、SP-C、AQP5蛋白的表达。结果 fAEC2培养48 h,β-catenin在细胞膜表达;培养72 h,β-catenin在细胞膜的表达较前减弱,在细胞质、细胞核中表达增强;培养96 h,全细胞β-catenin表达下调。Wnt7b、cyclin D1 mRNA的表达在72 h时显著增高,96 h时下降明显;SP-C mRNA的水平随培养时间的延长逐渐下降,AQP5 mRNA的水平逐渐升高。Cyclin D1、细胞核β-catenin蛋白在72 h时表达上调,96 h时表达下调;SP-C蛋白的表达量逐渐降低;AQP5蛋白的水平逐渐升高。结论 Wnt7b/β-catenin信号通路可能在fAEC2转分化中起重要作用。     

SCUBE2过表达通过Wnt/β-catenin抑制结直肠癌细胞上皮-间质转化

目的:研究信号肽-CUB-EGF结构域蛋白2(SCUBE2)对结直肠癌细胞上皮-间质转化(EMT)的影响及可能的分子机制。方法:首先,用real-time PCR与Western blot法检测人结直肠癌HCT116细胞和正常人结直肠上皮FHC细胞SCUBE2的表达;HCT116细胞转染GV144-SCUBE2质粒过表达SCUBE2后,MTT、Transwell和流式细胞术分别检测其对细胞活力、迁移和凋亡的影响。转染GV144-SCUBE2质粒6 h后加入10μg/L重组转化生长因子(TGF)-β1蛋白继续培养48 h,real-time PCR或者Western blot法检测EMT标志物[E-钙黏蛋白(E-cadherin)、波形蛋白(vimentin)和Snail]、β-catenin、c-Myc和细胞周期蛋白(cyclin)D1的表达。随后,在HCT116细胞中使用Wnt/β-catenin通路激活剂氯化锂(Li Cl)或抑制剂XAV93920并加入TGF-β1且过表达SCUBE2,检测Wnt/β-catenin通路激活或阻断后对HCT116细胞EMT的影响。结果:HCT116细胞中SCUBE2的表达明显低于FHC细胞;过表达SCUBE2能够抑制HCT116细胞的活力与迁移,但是对其凋亡影响不大;SCUBE2增加了E-cadherin的表达,降低了TGF-β1诱导的vimentin、Snail、β-catenin、c-Myc和cyclin D1的表达,XAV93920增强了SCUBE2对EMT的影响,而Li Cl阻碍SCUBE2对EMT的影响。结论:过表达SCUBE2能够抑制结直肠癌细胞的生长与迁移,抑制其EMT的发生,这一过程可能是通过抑制Wnt/β-catenin信号通路发挥作用的。     

鸦胆子油对三阴性乳腺癌细胞Wnt/β-catenin通路及上皮间质转化的影响

目的 探讨鸦胆子油对三阴性乳腺癌(TNBC)细胞Wnt/β-连环蛋白(β-catenin)通路及上皮间质转化(EMT)等生物学过程的影响.方法 将细胞分为对照组(仅添加培养基)、鸦胆子油组(1 mg/mL鸦胆子油)和AZD2858组(1mg/mL 鸦胆子油+2μmol/LAZD2858),蛋白免疫印迹(Western ...     

PRRX2通过调控Wnt/β-catenin信号通路促进胃癌细胞活力和迁移

目的:研究配对相关同源框2(paired-related homeobox 2,PRRX2)基因对胃癌细胞活力和迁移能力的影响,并分析其调控Wnt/β-catenin信号通路的机制。方法:通过生物信息学分析在线数据库中胃癌和正常胃组织的PRRX2表达水平及PRRX2在胃癌组织中的表达与胃癌患者总生存率的相关性;将PRRX2小干扰RNA(si RNA)和过表达质粒分别转染到胃癌细胞MGC-803和SGC-7901中,敲低和过表达PRRX2基因;MTT法和Transwell实验检测胃癌细胞的活力和迁移能力;Western blot和TOPflash/FOPflash双萤光素酶报告基因实验检测Wnt/β-catenin信号通路的活化情况;免疫共沉淀实验检测PRRX2与β-catenin蛋白的相互作用。结果:敲低PRRX2能够减弱胃癌细胞MGC-803的活力和迁移能力(P0.05)。过表达PRRX2能够增强胃癌细胞SGC-7901的活力和迁移能力(P0.05),增加β-catenin、c-Myc和cyclin D1的蛋白的表达水平(P0.05),增强TOPflash/FOPflash双萤光素酶报告基因活性(P0.05)。PRRX2与β-catenin蛋白存在相互作用。结论:PRRX2可促进胃癌细胞的活力和迁移,其机制可能与Wnt/β-catenin信号通路有关。     

山荷叶素通过阻断Wnt/β-catenin信号通路抑制卵巢上皮癌细胞侵袭和迁移

目的 探讨山荷叶素(DP)在卵巢上皮癌中的作用及潜在调控机制.方法 采用CCK-8法检测卵巢上皮癌细胞增殖活性、TranswellTM实验检测其侵袭和迁移、划痕实验检测细胞迁移.Western blot法检测其对Wnt/β联蛋白(β-catenin)通路及凋亡相关蛋白,构建异种移植瘤模型,观察其体内抗肿瘤作用,最终建立...     

GDF-5和Dex通过Wnt/β-catenin信号通路促进rBMSCs体外成软骨分化

目的利用生长分化因子(GDF-5)联合地塞米松(Dex)诱导大鼠BMSCs成软骨分化,并探讨Wnt/β-catenin信号通路在其中的作用。方法用全骨髓贴壁法分离培养SD大鼠BMSCs,取P3代细胞随机分成6组:BMSCs组、BMSCs+Dex组、BMSCs+GDF-5组、BMSCs+GDF-5+Dex组、BMSCs+GDF-5+Dex+SB216763组和BMSCs+GDF-5+Dex+XAV-939组。连续诱导培养14 d,倒置相差显微镜观察细胞形态,Alcian blue染色检测细胞的蛋白聚糖,RT-PCR检测成软骨分化相关基因aggrecan、Col2、Sox9、Col1,Wnt/β-catenin信号通路相关基因Dvl1、Gsk3β、β-catenin mRNA表达,Western blot检测Ⅱ型胶原蛋白和β-catenin蛋白表达。结果与BMSCs组相比,BMSCs+GDF-5+Dex组能够使诱导的细胞蛋白聚糖分泌明显增加;Aggrecan、Col2、Sox9基因表达明显增加(P0.05);Ⅱ型胶原蛋白表达增加(P0.05);β-catenin mRNA及蛋白表达水平也增加(P0.05)。与BMSCs+GDF-5+Dex组相比,添加SB216763组蛋白聚糖,Ⅱ型胶原基因和蛋白表达增加(P0.05);相反,添加XAV-939组相应的成软骨分化基因及蛋白表达下降(P0.05)。结论 GDF-5联合地塞米松(Dex)可诱导大鼠BMSCs成软骨分化,Wnt/β-catenin信号通路可能在其中发挥促进作用。     

五味子乙素通过Wnt/β-catenin信号通路调节人胰腺癌细胞增殖、凋亡和侵袭

目的 研究五味子乙素对人胰腺癌细胞Panc-1细胞增殖,凋亡和侵袭的调控作用及对Wnt/β-catenin信号通路的影响.方法 不同、浓度的五味子乙素(12、24、48μg/ml)处理胰腺癌Panc-1细胞后,采用CCK8法检测Panc-1细胞增殖变化,Transwell法检测细胞侵袭情况,流式细胞术检测细胞凋亡的变化...     

鞣花酸通过Wnt/β-catenin信号途径调节成骨代谢

目的探索鞣花酸是否能够通过Wnt/β-catenin信号通路调节BMSCs成骨代谢。方法 CCK-8实验观察鞣花酸对BMSCs增殖的影响。碱性磷酸酶染色和油红O染色检测鞣花酸对BMSCs成骨分化和成脂分化的调节作用。通过Western blot和real time PCR分析鞣花酸对BMSCs中RUNX2、ALP、Col1、PPARγ、Adipoq和β-catenin的调节作用。结果与对照组相比,鞣花酸可以在一定程度上抑制BMSCs的增殖;通过促进BMSCs中RUNX2、ALP和Col1的表达,促进BMSCs的成骨分化;通过抑制BMSCs中PPARγ和Adipoq的表达,抑制BMSCs的成脂分化。鞣花酸可以上调BMSCs中的β-catenin,发挥促进Wnt通路的作用。结论鞣花酸能够通过激活Wnt/β-catenin信号通路促进成骨代谢。     

姜黄素调控Wnt信号通路抑制胃癌细胞上皮间质转化的研究

目的探讨姜黄素对人胃癌细胞株BGC-823上皮间质转化(EMT)的影响机制。方法将细胞分为姜黄素干预组、TGF-β组、BGC-823细胞对照组、GES-1细胞对照组。采用姜黄素(10μmol/L)干预人胃癌细胞株BGC-823,通过MTT试验检测胃癌细胞增殖能力;通过Transwell小室试验检测胃癌细胞侵袭功能改变;通过Western blot检测各组细胞E-cadherin、Vimentin蛋白及Wnt信号通路相关蛋白表达。结果 TGF-β诱导能够促进人胃癌细胞株BGC-823增殖(P 0.05),胃癌细胞表现出更高的侵袭能力(P 0.01),而姜黄素干预后胃癌细胞的增殖及侵袭能力均明显受抑制。Western blot检测表明,TGF-β诱导干预后,BGC-823细胞E-cadherin、Vimentin蛋白水平升高,与此同时GSK3β、β-catenin及c-Myc的表达明显上调(P 0.01);姜黄素干预能有效抑制胃癌细胞EMT作用,Wnt信号通路蛋白水平显著下调(P 0.05)。结论姜黄素可以通过调控Wnt/β-catenin信号通路抑制胃癌细胞EMT作用,从而抑制肿瘤细胞的侵袭、转移,实现抗肿瘤作用。     

SAFB通过调节Wnt信号通路活性促进结直肠癌增殖

目的 探讨SAFB在结直肠癌增殖过程中的作用及相关分子机制。方法 采用免疫组化、Western blot和RT-PCR检测结直肠癌石蜡组织和新鲜配对组织中SAFB的表达,分析SAFB表达与肿瘤分期的关系;采用MTT、平板克隆及裸鼠皮下成瘤等实验检测SAFB对结直肠癌细胞增殖能力的影响;利用公共数据库(GEO数据库等),通过基因富集分析(gene set enrichment analysis, GSEA)检测SAFB基因表达相关信号通路的富集情况;采用双荧光素酶报告基因实验、Western blot法及免疫荧光实验检测Wnt信号通路的活性。结果 Oncomine及TCGA在线数据库分析结果显示,结直肠癌组织中SAFB表达水平降低(P<0.01),且随着Dukes分期的增高,表达水平明显下降(P<0.05)。MTT、平板克隆及裸鼠皮下成瘤实验结果显示,SAFB高表达在体内外均能显著抑制肿瘤细胞的增殖。GSEA及双荧光素酶报告基因实验结果显示,SAFB低表达与Wnt通路激活密切相关。结论 SAFB在结直肠癌中低表达,并与Wnt信号通路激活密切相关,可能通过Wnt信号通路调节肿瘤...     

NMDA通过Wnt/β-catenin通路促进大鼠神经元中神经连接蛋白3表达

目的:探讨N-甲基-D-天冬氨酸(NMDA)对大鼠神经元来源的细胞系H19-7细胞中神经连接蛋白3(NLGN3)表达的影响及分子机制。方法:分别利用NMDA、NMDA受体(NMDAR)特异性拮抗剂D-AP5和β-catenin特异性siRNA处理大鼠海马神经元细胞系H19-7细胞,通过Western Blot和real time RT-PCR检测β-连环蛋白(β-catenin)、NLGN3及c-Myc的表达变化。结果:NMDA刺激后H19-7细胞中β-catenin蛋白上调,与此同时NLGN3和c-Myc表达增加;使用D-AP5阻断NMDAR以及特异性siRNA沉默β-catenin均能抑制NLGN3的表达。结论:NMDA能够通过Wnt/β-catenin通路促进大鼠神经元中NLGN3表达。     

外源性神经生长因子对APP/PS1转基因小鼠Wnt/β-catenin信号通路的调节

目的:探讨外源性神经生长因子(NGF)对APP/PS1转基因小鼠Wnt/β-catenin信号通路的调节。方法:鼻腔给予小鼠NGF治疗14周,应用免疫组织化学检测小鼠脑内β淀粉样蛋白(Aβ)老年斑的分布,应用免疫印迹检测小鼠脑内糖原合酶激酶3β(GSK3β)、p-GSK3β、β-连环蛋白(β-catenin)和p-β-catenin的表达。结果:Aβ免疫组织化学显色结果显示,与对照组小鼠大脑内的Aβ老年斑相比较,NGF治疗组转基因小鼠大脑内的Aβ老年斑数量减少了30.22%,沉积减少了35.85%,差异有统计学意义。免疫印迹结果显示,外源性NGF减少APP/PS1转基因小鼠脑内GSK3β的表达,增加β-catenin的表达。结论:外源性NGF可能通过抑制GSK3β的活性和增加β-catenin的活性,激活Wnt/β-catenin信号通路,对神经元起保护作用。     

Wnt/β-catenin 信号通路在肿瘤干细胞中作用研究进展

 Wnt 信号通路是调控细胞生长、运动和分化的关键途径，在胚胎和器官发育以及维持干细胞的自我更新方面起重要作用。近年来的研究表明^[1]，Wnt/β-连环蛋白（β-catenin）信号通路的不恰当激活，参与了肿瘤的发生及其侵袭转移的过程，而且还与肿瘤干细胞（tumor stem cells，TSC）的关系密切，该通路可能通过作用于TSC而引起肿瘤产生耐受及复发，作用机制与其作用于干细胞的机制类似，从而为肿瘤的治疗提供了新的突破口。本文就 Wnt 通路中最为常见的 Wnt/β-catenin 信号通路在干细胞、肿瘤和 TSC 中作用的研究现状做一简要概述。......     

丙戊酸钠通过上调Wnt/β-catenin信号通路促进培养神经元的生长(英文)

目的:丙戊酸盐(丙戊酸valproic acid,VPA)在过去数十年应用于临床治疗癫痫和偏头痛。然而,母亲怀孕早期使用VPA将大大增加子代罹患孤独症群谱障碍的易感性。鉴于Wnt/β-catenin信号通路对神经元增殖、分化、突起生长及凋亡的重要作用,本文旨在研究VPA在原代培养神经元中对Wnt/β-catenin信号通路的影响。方法:用VPA处理原代培养神经元,以生理盐水处理为对照,运用Western Blot检测Wnt/β-catenin通路相关信号分子Wnt1,Wnt2,WIF-1,Dickkopf 1及效应分子β-catenin的表达变化,同时运用免疫荧光技术观察神经元形态变化。结果:与对照组比较,VPA处理显著增加Wnt1及Wnt2的表达(P<0.05~0.01),而未增加WIF-1及Dickkopf 1的表达(P>0.05);VPA处理也导致Wnt/β-catenin通路活性上调,表现为神经元内β-catenin含量显著上升。此外,与对照组比较,VPA处理促进神经元生长,表现为神经元突起数目(P<0.05~0.01)及总长度显著增加(P<0.05~0.01);Wnt/β-catenin通路抑制剂能部分抑制VPA引起的Wnt/β-catenin通路活性上调及神经元生长。结论:VPA通过上调Wnt/β-catenin信号通路促进神经元生长,可能是VPA增加子代罹患孤独症群谱障碍易感性的原因。     

miR-494通过激活Wnt/β-catenin信号通路促进胰岛β细胞增殖、抑制其凋亡增加胰岛素分泌

目的 探究微小RNA-494 (miR-494)与胰岛β细胞功能和妊娠糖尿病之间的关系.方法 选择20例妊娠糖尿病患者和健康体检者,反转录PCR测定其外周血miR-494的含量;培养INS-1胰岛细胞瘤细胞,分别采用含低糖(3.3 mmol/L)和高糖(16.7 mtmol/L)处理后,采用ELISA测定胰岛素含量来评...     

Wnt/β-catenin信号通路在牙损伤修复中的作用

目的 通过构建牙本质-牙髓损伤小鼠模型,探讨Wnt/β-catenin信号在其修复中的作用。方法 选择雌性昆明小鼠40只,鼠龄6～8周,体质量18～22 g。将其随机分为Control组、Model组、Li Cl组和DKK1组,每组10只。Control组常规饲养至实验结束,Model组、LiCl组和DKK1组均建立牙本质-牙髓损伤模型并通过牙周膜分别注射0.9%氯化钠溶液（生理盐水）、LiCl（激活Wnt/β-catenin信号通路）和DKK1（抑制Wnt/β-catenin信号通路）干预。损伤后7 d处死小鼠,通过苏木精-伊红（HE）染色,从形态学上观察牙损伤后的情况;Western blot和实时定量聚合酶链式反应（PCR）分别检测Wnt10a、胞内-β连锁蛋白（β-catenin）、支架蛋白Axin2及牙本质涎磷蛋白（DSPP）的mRNA和蛋白水平改变。结果实验成功构建了牙本质-牙髓损伤小鼠模型。使用LiCl和DKK1进行干预,HE染色结果显示LiCl组损伤部位得到良好的修复,Model组的牙本质、牙髓损伤修复不明显,DKK1组的损伤部位则几乎未修复。Western blot和...     

RAGE调节Wnt/β-catenin信号通路对DM大鼠主动脉保护作用的研究

检测2型糖尿病(type 2 diabetes, D2M)大鼠主动脉组织中Wnt/β-catenin信号通路相关蛋白以及晚期糖基化终末产物受体(receptor for advanced glycation end product, RAGE)表达水平,分析RAGE对Wnt/β-catenin信号通路的调节作用以及对大鼠主动脉病变的影响;检测血脂相关指标水平,分析血脂水平与糖尿病之间的关系。构建D2M大鼠模型,在第2、4、8、12周随机分组大鼠模型并设置空白对照组,检测空腹血糖、血清总胆固醇(serum total cholesterol,TC)、甘油三酯(triglyceride,TG)、高、低密度脂蛋白胆固醇(high density lipoprotein-cholesterol,HDL-C)(low density lipoprotein-cholesterol,LDL-C)、胰岛素等指标,HE染色观察主动脉组织病理结构;RT-PCR、Western blotting检测主动脉组织Wnt2、β-catenin、T细胞因子4(T cell factor 4,TCF4)、RAGE等相关指标mRNA及蛋白表达情况。结果显示,与空白对照组相比,D2M大鼠TC、TG、LDL-C水平显著升高,HDL-C水平显著下降;D2M大鼠不同时间段与第2周相比,TC、TG、LDL-C水平显著升高,HDL-C水平显著下降(P0.01,P0.05)。HE染色显示D2M大鼠主动脉局部内皮细胞发生不同程度的空泡变性或坏死。D2M大鼠在第2周与12 w内主动脉组织Wnt2和β-catenin mRNA及蛋白水平与空白对照组相比差异有统计学意义(P0.01),8 w后维持在较高水平;TCF4、RAGE水平较空白对照组持续上升(P0.05);分泌型卷曲相关蛋白2(secreted frizzled-related protein 2,sFRP2)水平较对照组持续下降(P0.01)。由此,RAGE通过调节Wnt/β-catenin信号通路影响D2M大鼠主动脉相关蛋白表达,可能对相关主动脉病变有保护作用。