纳米粒子介导Egr-1 DNA酶转染抑制移植静脉内膜增生**☆

背景：应用基因防治移植血管狭窄、闭塞现已被普遍公认,但如何增加其转染效率现已成为焦点及热点问题。 目的：观察以纳米粒子为载体的外源性Egr-1 DNA酶局部转染对移植静脉内膜增生的影响。 方法：构建Egr-1 DNA酶,应用聚乳酸聚乙醇酸共聚物和聚乙烯醇包载Egr-1 DNA酶,制备纳米级粒子混合物。建立自体静脉移植模型210只,随机分成3组,转基因组转染以纳米粒子为载体的Egr-1 DNA酶,空载体组单纯转染纳米粒子包载的空载体,对照组不予特殊处理。 结果与结论：转基因组内膜中Egr-1基因的mRNA及蛋白产物表达较其他两组明显减少(P < 0.05);在术后7,14,28 d,转基因组内膜增生厚度较其他两组明显减少(P < 0.01);转基因组血管平滑肌细胞凋亡百分比较其他两组明显增高(P < 0.05)。结果表明Egr-1 DNA酶的表达能有效抑制自体移植静脉内膜的增生及促进血管平滑肌细胞凋亡。 关键词：纳米粒子;DNA酶;移植静脉;转染;血管平滑肌细胞 doi:10.3969/j.issn.1673-8225.2012.08.006     

70例腔镜大隐静脉获取术的手术者学习曲线分析

目的探讨在冠状动脉旁路移植术(CABG)中应用腔镜获取大隐静脉技术获得桥血管的学习曲线特征。方法横断面研究。纳入2019年7月—2020年7月南京大学医学院附属鼓楼医院心胸外科冠脉组70例接受CABG的冠心病患者, 其中男55例、女15例, 年龄49～82岁。70例患者CABG术中腔镜获取大隐静脉的操作均由同一名医生完成。按照患者接受手术的先后次序, 将患者每10名分为一组, 共分7组, 依次为S1～S7组;观察并比较7组患者基线资料, 以及获取大隐静脉长度(L)、获取大隐静脉时间(T)、大隐静脉损伤数量和L/T比值。应用Pearson相关分析找出学习曲线拐点, 根据学习曲线拐点将70例患者分为拐点前组与拐点后组, 比较2组患者基线资料以及上述各指标。结果 S1组～S7组患者性别、年龄、合并糖尿病和高血压病等基线资料组间比较, 差异均无统计学意义(P值均>0.05)。各组获取大隐静脉时间、大隐静脉损伤数量以及L/T比值比较, 差异均有统计学意义(F=4.95、3.85、5.12, P值均<0.001), 其中S7组获取大隐静脉时间最短、大隐静脉损伤数量最少、L/T比值最高,...     

Notch和HES蛋白表达在大鼠静脉桥狭窄中的作用

目的 研究Notch和HES蛋白表达在大鼠静脉桥狭窄中的作用.方法 将大鼠颈外静脉移植至颈总动脉建立静脉桥移植模型,术后随机分为对照组、DAPT组和DMSO组,在术后28 d收集移植静脉,行HE染色后分别观察静脉壁中层厚度和PCNA阳性指数,用Western blot测定Notch1和HES1蛋白的表达.结果 Notch和HES蛋白在静脉桥狭窄中的表达显著高于对照组(P＜0.05).同时与安慰剂DMSO相比,DAPT不但能够显著抑制Notch和HES蛋白表达,也可显著抑制vSMCs增生(P＜0.05).结论 抑制Notch信号蛋白可以缓解静脉桥狭窄.     

肝素抑制低氧性肺动脉高压大鼠肺血管内皮生长因子1的表达

目的： 观察肝素抑制大鼠低氧性肺动脉高压过程中,血管内皮生长因子1（VEGF-1）在肺小动脉血管内皮细胞和肺组织中的表达变化。方法：成年雄性SD大鼠24只,随机分为对照组（A组）、低氧4周组（B组）和低氧+肝素4周组（C组）,每组8只。测各组大鼠平均肺动脉压（mPAP）、右室肥大指数（RVHI）和血管形态学指标;HE染色观察肺动脉血管形态学改变,免疫组化法检测肺动脉血管内皮细胞VEGF-1蛋白表达;RT-PCR检测肺组织VEGF-1基因表达。结果：mPAP、RVHI、肺小动脉重塑指标、肺小动脉血管内皮细胞VEGF-1蛋白表达和肺组织VEGF-1基因表达水平在C组高于A组,低于B组。相关分析表明,VEGF-1蛋白表达与肺血管重塑呈正相关（r=0.974,P<0.01）。VEGF-1mRNA与VEGF-1蛋白呈正相关（VEGF120 mRNA,r=0.919, P<0.01;VEGF164 mRNA,r=0.896, P<0.01）。结论：肝素可能在转录和翻译水平抑制VEGF-1的表达,从而抑制大鼠低氧性肺动脉高压的形成。     

人肝癌及相关组织中Egr—1基因的转录表达及其意义

目的：探讨Egr-1在肝癌癌变过程中的作用。方法：采用原位杂交和免疫组化技术,检测了肝癌及相关组织中Egr-1的mRNA转录水平和蛋白表达,以人乳腺和小鼠肝及大脑组织为对照。结果：在肝癌组织和正常肝组织中,Egr-1的转录水平明显减低或无转录信号;癌旁组织如肝癌癌旁的异型增生（LCD）和“萎缩样肝索”中Egr-1的转录水平明显增高。Egr-1基因在肝癌组织的表达与mRNA检测结果基本一致。在乳腺及小鼠脑组织Egr-1的表达明显增高。结论：Egr-1在肝癌中的缺失表达可能在其癌变过程中正常生长失调方面起作用;Egr-1在正常肝、乳腺及细胞中的表达差异可能与这些细胞的增殖、分化状态及细胞类型特异性有关。     

Egr-1基因剔除减少炎性相关因子在实验性胰腺炎中的表达

目的：探讨Egr-1基因剔除对实验性胰腺炎小鼠胰腺组织中炎性相关因子表达的影响。 〖HTH〗方法：利用Egr-1基因剔除小鼠，采用大剂量雨蛙素诱导的实验性胰腺炎模型，观察Egr-1基因剔除后，胰腺组织水肿、MPO水平、血清淀粉酶水平、肺组织MPO水平的改变。并利用定量PCR的方法，检测胰腺组织中炎症相关因子组织因子（TF）、纤维蛋白溶酶原激活因子抑制因子（PAI-1）、单核细胞趋化吸引蛋白1（MCP-1）、Gro-1、IL-6和细胞间黏附分子-1（ICAM-1） mRNA的表达。 〖HTH〗结果：Egr-1基因剔除小鼠胰腺组织水肿明显轻于野生型，但组织MPO水平与血清淀粉酶与野生型组间相比无明显差异；肺组织MPO水平明显低于野生型。定量PCR检测结果表明， Egr-1基因剔除组，胰腺组织中TF、PAI-1，以及MCP-1、ICAM-1和IL-6　mRNA的表达，明显少于野生型组。 〖HTH〗结论：Egr-1基因剔除可明显减轻急性胰腺炎的严重程度，其作用可能通过减少胰腺组织中TF、PAI-1，以及MCP-1、ICAM-1和IL-6的表达而实现。     

二氧化硅活化巨噬细胞中核转录因子早期生长反应基因-1的表达

目的 研究二氧化硅(SiO2)刺激的巨噬细胞中核转录因子早期生长反应基因-1(early growth response gene-1,Egr-1)表达和定位分布的动态变化,探讨Egr-1在硅沉着病发病机制中的作用。方法 用免疫组织化学方法观察大鼠实验性硅沉着病组织中肺巨噬细胞Egr-1表达的动态变化;用逆转录-聚合酶链反应(RT—PCR)、Western印迹和免疫荧光方法分别检测体外SiO2刺激的巨噬细胞系RAW264．7中Egr-1 mRNA、蛋白表达及其定位。结果 大鼠实验性硅沉着病中肺巨噬细胞Egr-1表达明显上调,阳性反应强度在14d时达到高峰。体外SiO2作用RAW264．7细胞15～240min,Egr-1 mRNA表达均明显增高,峰值位于15min,480min时仅微量表达。Egr-1蛋白于60min时核移位最明显,持续至120min,随后减少;在60～120min时间内,Egr-1核蛋白及总蛋白的表达量亦达峰值,其后开始下降。结论 SiO2能激活巨噬细胞中核转录因子Egr-1,提示Egr-1可能在硅沉着病的发生发展中起重要的调控作用。     

氯沙坦对动脉粥样硬化兔的MCP-1及基因表达的实验研究

为了探讨血管紧张素Ⅱ的Ⅰ型受体(AT1R)拮抗剂氯沙坦(Losartan)的抗动脉粥样硬化(AS)作用及观察其是否能抑制单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)的蛋白及基因表达,我们通过高脂饮食及内皮损伤术建立兔AS模型,一组用Losartan(25mg/kg/d),另一组不用,喂养4个月,观察血管内膜的变化;同时做免疫组化及原位杂交,分别观察MCP-1蛋白及基因的表达。结果发现Losartan治疗组兔主动脉内膜面积及内、中膜面积之比均小于未治疗组,其MCP-1的蛋白及mRNA的表达亦明显减少,表明Losartan可通过抑制MCP-1的产生而具有抗AS作用。     

核转录因子在二氧化硅刺激巨噬细胞产生细胞因子中的作用

目的 探讨二氧化硅(SiO2)刺激巨噬细胞生成肿瘤坏死因子(TNF)-α、转化生长因子(TGF)-β1增多的分子机制及核转录因子Egr-1和NF-κB介导的信号通路在硅肺发生发展中的作用。方法 Egr-1或NF-κB抗体和反义寡核苷酸分别处理巨噬细胞后,用ELISA法检测细胞上清液中TNF-α蛋白的含量;免疫细胞化学链霉素抗生物素蛋白-过氧化物酶(SP)法检测细胞中TGF-β1蛋白的表达;逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测TNF-α和TGF-β1mRNA的表达。结果 与非抗体处理组比较,SiO2刺激下抗体处理组巨噬细胞生成TNF-α蛋白和TGF-β1蛋白减少,其mRNA表达也相应下降(P<0.05);与未转染和转染正义寡核苷酸的细胞相比,Egr-1或NF-κB反义寡核苷酸转染细胞后,在SiO2刺激下巨噬细胞生成TNF-α蛋白和TGF-β1蛋白减少,二者mRNA表达也相应下降(P<0.05)。结论 SiO2刺激巨噬细胞生成TNF-α和TGF-β1可能主要是经核转录因子Egr-1和NF-κB介导,Egr-1与NF-κB抗体和反义寡核苷酸的应用可能会导致早期肺泡炎的活动性下降,延缓或阻止肺纤维化的形成。     

流体剪切力调节内皮细胞组织因子表达的初步探讨

目的探讨流体剪切力调节内皮细胞组织因子(tissue factor,TF)表达的机制。方法将脐静脉内皮细胞置于平行板流动腔中接受1．2 Pa(1 dyn／cm2=0．1 Pa)剪切力作用20 min后,采用凝胶电泳迁移率改变法(electorohoretic mobility shift analysis,EMSA)和蛋白免疫印迹分析(Western Blot,WB)检测转录因子Egr-1和Sp1在TF基因表达过程中的表达情况。结果 (1)静止组可见Sp1表达而无Egr-1表达;(2)剪切力组Sp1磷酸化水平和Egr-1表达水平均明显增高;(3)EMSA显示,对于Sp1／Egr-1结合位点,Egr-1对Sp1具有较强的竞争抑制作用。结论流体剪切力调节TF基因表达过程中,不同转录因子起着不同的作用:Sp1主要维持内皮细胞TF基因的基础表达;Egr-1竞争靶位点上的Sp1和磷酸化Sp1可能共同参与流体剪切力诱导TF基因表达。     

冠状动脉旁路移植术后急性肾损伤的危险因素分析

目的 对比冠状动脉旁路移植术(coronary artery bypass grafting,CABG)后急性肾损伤(acute kidney injury,AKI)诊断标志物的表达水平,分析CABG后AKI的危险因素.方法 选取73例CABG患者作为研究对象,以CABG是否发生AKI分组为AKI组与对照组;对比两组患者术后24h血清肌酐(serum creatinine,Scr)、血清尿素氮(serum urea nitrogen,BUN)、尿液胱抑素C(urine cystatin C,Cys C)及肾损伤分子-1(kidney injury molecule-1,KIM-1)的表达水平;以AKI为作因变量,而患者的临床资料作为自变量,分析CABG后AKI的危险因素,并进行多因素及单因素Logistic回归分析,为CABG后AKI的预防策略提供依据.结果 AKI组与对照组术前Scr、BUN、Cys C及KIM-1的表达水平对比,差异均无统计学意义(P ＞0.05);AKI组术后Scr、BUN、Cys C及KIM-1的表达水平均显著高于对照组,两组数据差异具有统计学意义(t分别为3.586、3.728、4.325、3.089,P均小于0.05);单因素Logistic回归分析显示,年龄、高血压、移植血管桥数量、机械通气时间及术后低心排作为CABG后AKI的危险因素;多因素Logistic回归分析显示,年龄、移植血管桥数量及术后低心排作为CABG后AKI的独立危险因素,具有统计学意义(P＜0.05).结论 CABG后应密切监测患者的Scr、BUN、Cys C及KIM-1的表达水平,作为AKI的诊断标志物;年龄、移植血管桥数量及术后低心排作为CABG后AKI的独立危险因素,应严格进行术前评估、降低手术风险、围术期保护及改善肾功能,降低CABG后AKI发生的风险.     

EB病毒潜伏膜蛋白1对鼻咽癌细胞P53蛋白表达的影响

目的:研究EB病毒潜伏膜蛋白1(LMP1)对鼻咽癌细胞P53蛋白表达的影响。方法:将LMP1基因真核表达质粒转染至鼻咽癌CNE1细胞,脂质体介导端粒酶反义核酸处理转染细胞,MTT法检测细胞增殖能力,免疫组化法检测LMP1和P53蛋白表达,原位杂交技术检测端粒酶逆转录酶(hTERT)mRNA表达。 结果:对照组,转染并表达LMP1基因的细胞的增殖能力、P53蛋白和hTERT mRNA表达水平均显著高于未转染细胞和转染空载质粒的细胞。端粒酶反义核酸作用组,LMP1基因转染细胞的LMP1蛋白表达水平显著低于对照组(P＜0.01);LMP1基因转染细胞与未转染细胞和转染空载质粒的细胞的增殖能力、P53蛋白和hTERT mRNA表达水平均显著低于对照组(P＜0.01),但LMP1基因转染细胞的增殖能力和P53蛋白表达水平仍显著高于未转染细胞和转染空载质粒的细胞(P＜0.01)。 结论:EB病毒LMP1可促进鼻咽癌细胞P53蛋白的表达。     

冠状动脉与冠脉搭桥术常用自体血管的比较研究进展

冠脉搭桥术 (coronaryarterybypassgrafting ,CABG)在发达国家已成为心外科常规手术而普遍开展 ,在我国 ,自北京阜外医院开展第一例冠脉搭桥手术至今已 2 0多年 ,该手术在全国的开展正逐步增多。冠状动脉狭窄部位好发于前室间支 ,其次为右冠状动脉和旋支 ,CABG手术的目的是为阻塞的部位建立侧支循环恢复其血供。目前临床应用的冠脉搭桥移植材料有自体血管和人造血管两种 ,人造血管因有较多的并发症 ,只是在采用病人自体血管有禁忌症时作替代使用[1] ;常用的自体血管桥有大隐静脉、胸廓内动脉、胃网膜右动脉和桡动脉 4种。现就冠状动脉与…     

大鼠脊髓压迫损伤后COX-2基因和蛋白的表达

目的观察大鼠脊髓压迫损伤后COX-2mRNA和蛋白在脊髓组织内表达的时间特征,以及COX-2的空间分布特点。方法以压迫装置致脊髓损伤后,在伤后不同时间点(30min、3h、6h、24h、72h、1w)分别应用RT-PCR、Western blotting、免疫组化技术检测COX-2mRNA和蛋白表达和分布。结果RT-PCR和Western blotting显示,COX-2mRNA和蛋白伤后30min表达开始增加,于伤后6h达到峰值,伤后1w表达接近基础水平。免疫组化提示,COX-2蛋白在假手术组表达仅见于脊髓血管内皮细胞,伤后COX-2蛋白表达见于损伤区附近脊髓灰质内的神经元和血管内皮细胞,损伤中心部位COX-2免疫阳性细胞少见。结论脊髓压迫损伤早期可快速诱导COX-2基因的表达上调和蛋白的合成,伤后COX-2蛋白分布发生变化,主要位于脊髓神经元和血管内皮细胞。     

冠状动脉旁路移植术后静脉桥再狭窄的基因治疗研究进展

冠状动脉旁路移植术是治疗缺血性心脏病安全、有效的方法.自体大隐静脉是术中最常用的移植血管材料.但是血栓形成、内膜增厚和粥样硬化导致的静脉桥再狭窄严重影响了其通畅率,而且至今尚无有效的治疗药物.分子生物学技术理论的发展为冠状动脉旁路移植术后静脉桥再狭窄的防治提供了新思路,基因治疗静脉桥再狭窄已成为目前研究的热点.本文主要从静脉桥再狭窄防治的目的基因、基因导入方式、基因载体等方面,对静脉桥再狭窄基因治疗的研究进展进行综述.     

慢性肾功能衰竭促进小鼠动静脉瘘内膜增生

目的观察慢性肾功能衰竭对小鼠动静脉内瘘术后血管内膜增生的影响及单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)在内膜增生中的作用。方法将24只C57小鼠分为对照组(n=12)与实验组(n=12),实验组行左肾全切及右肾上极动脉结扎,对照组行假手术,术后6周行左侧颈总动脉-颈外静脉端吻合建立动静脉瘘(AVF)模型,AVF术后3周取瘘口静脉端血管组织。观察各组小鼠AVF内膜组织的病理改变及小鼠血液尿素氮(BUN)水平与内膜增生程度的关系;免疫组化法、RT-PCR及Western blot检测各组静脉组织α平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、Ki-67、NF-κB及MCP-1的蛋白及mRNA的表达。结果 1)实验组较对照组小鼠血BUN水平明显上升(P0.05),静脉端内膜增生更显著,管腔更狭窄(P0.05)。2)实验组血管增生内膜α-SMA表达明显增加,血管平滑肌细胞(VSMC)增殖显著,NF-κB及MCP-1表达明显上升(均P0.05)。3)MCP-1促进体外培养VSMC增殖。结论慢性肾功能衰竭可明显增高NF-κB及MCP-1表达,从而促进动静脉瘘内膜增生及VSMC增殖。     

生物钟蛋白CRY1抑制Ang Ⅱ诱导的小鼠主动脉平滑肌细胞表型蛋白标志物变化

目的 探讨生物钟(circadian clock)相关蛋白隐花色素1(CRY1)在血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)诱导的小鼠主动脉血管平滑肌细胞(VSMCs)表型转化中的作用。方法 将VSMCs分为对照(control)组和实验组,用不同浓度AngⅡ处理VSMCs不同时间,RT-PCR和Western blot检测收缩型标志物α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、合成型标志物骨桥蛋白(OPN)及CRY1 mRNA和蛋白的表达;分别构建CRY1的干扰RNA(siCRY1)、YAP1的干扰RNA(siYAP1)进行基因沉默,构建CRY1的过表达质粒(pcDNA-CRY1)进行过表达,RT-PCR、Western blot双重验证各基因组mRNA和蛋白的表达;将VSMCs分为4组,对照组、AngⅡ组、AngⅡ+siCRY1组、AngⅡ+pcDNA-CRY1组,将siCRY1、siYAP1、pcDNA-CRY1转染至经AngⅡ处理VSMCs中,RT-PCR和Western blot检测α-SMA、OPN、CRY1、YAP1 mRNA和蛋白的表达及CCK-8法检测细胞增殖情况。结果 不同浓度AngⅡ刺激VS...     

Egr-1基因转染对糖尿病小鼠肾脏炎症反应的影响

目的:观察Egr-1基因转染对糖尿病小鼠肾组织肿瘤坏死因子α(TNF-α)及细胞间黏附分子1(ICAM-1)表达的影响,探讨Egr-1在糖尿病肾病发病机制中的作用。方法:制备糖尿病小鼠模型,成模后随机选取10只作为糖尿病组,剩余40只每周1次经尾静脉分别注射空质粒、Egr-1表达质粒和Egr-1 siRNA质粒,并设立正常对照组。实验共4周,于第4周末收集各组小鼠肾组织标本,分别应用western blot和免疫组织化学染色测定肾组织中Egr-1、TNF-α和ICAM-1的表达;应用电镜观察肾小球超微结构的改变。结果:糖尿病小鼠肾组织Egr-1、TNF-α及ICAM-1表达增强,基底膜普遍增厚,系膜区基质增多,上皮细胞足突融合;Egr-1基因转染后上述变化趋势更加显著。siRNA质粒转染组上述变化较糖尿病组明显减轻。结论:Egr-1可上调TNF-α及ICAM-1表达,促进系膜细胞增殖及系膜外基质积聚,可能是加速肾小球硬化的可能机制之一。     

组织蛋白酶L及其抑制剂Cystatin C在曲张大隐静脉平滑肌细胞中的表达

目的:组织蛋白酶L(Cat L)及其抑制剂Cystatin C在曲张大隐静脉平滑肌细胞(SMC)中的表达。方法:术中收集曲张及正常大隐静脉标本,采用免疫组织化学、荧光免疫组织化学染色方法及计算机图像分析技术观察检测。结果:免疫组化染色可见Cat L、Cystatin C分别在曲张、正常大隐静脉中免疫反应阳性,阳性细胞主要位于SMC胞质;曲张组SMC中Cat L阳性细胞平均光密度值明显增高,Cystatin C明显降低,与正常组间差异显著;荧光免疫组织化学染色可见Cat L与曲张大隐静脉SMC共定位,Cystatin C与正常大隐静脉SMC共定位。结论:在曲张大隐静脉的SMC中Cat L表达增强,Cystatin C表达下降。这一改变可能作为大隐静脉曲张的生物学标志。     

双大隐静脉一例

在大隐—股静脉端侧吻合性畸桥转流术治疗髂股静脉栓塞中,解剖健侧大隐静脉时,发现有2条等粗(3.5mm)大隐静脉同时汇入股静脉,内侧1条大隐静脉在近端有阴部外浅静脉和股内侧静脉汇入,外侧条大隐静脉有腹壁浅静脉、旋髂浅静脉和股外侧静脉汇入。术后将两条