AMIGO2通过激活PI3K/AKT/mTOR信号通路促进鼻咽癌细胞的增殖

目的：探讨Ig 样结构域 2 黏附分子（adhesion molecule with Ig like domain 2,AMIGO2）在鼻咽癌（nasopharyngeal carcinoma,NPC）细胞增殖中的作用及其机制。方法: 选用2017年9月至11月福建省肿瘤医院收集的10例NPC组织和10例正常鼻 咽黏膜上皮组织标本,以及NPC细胞系CNE-1、CNE-2、SUNE-1、 6-10B、 C666-1和人永生化鼻咽黏膜上皮细胞株NP69, 用qPCR法 检测NPC组织和细胞中AMIGO2 mRNA的表达。构建慢病毒载体干扰AMIGO2表达, 用qPCR法验证其干扰效率; 用CCK-8 法、克隆形成及流式细胞术检测干扰AMIGO2表达对NPC细胞增殖、克隆形成和凋亡的影响, 用 Western blotting 检测干扰 AMIGO2 表达对 NPC 细胞增殖及 PI3K/AKT/mTOR 信号通路相关标志蛋白表达的影响。结果: AMIGO2在NPC组织和 CNE-2和SUNE-1细胞中高表达（均P<0.01）。慢病毒AMIGO2感染后,CNE-2和SUNE-1细胞的AMIGO2干扰效率均达50%以 上。干扰AMIGO2表达,显著降低CNE-2和SUNE-1细胞增殖及克隆形成能力（均P<0.01）、明显提高细胞的凋亡率（均P<0.01）; 降低 SUNE-1 细胞中PI3K、AKT和mTOR磷酸化蛋白的表达水平 （均P<0.01）、下调survivin 和 PCNA 蛋白的表达水平（均P<0.01）。 结论：AMIGO2通过激活PI3K/AKT/mTOR信号通路促进NPC细胞增殖并抑制其凋亡,提示AMIGO2可能是NPC治疗的潜 在靶点。     

脂肪抑制素对宫颈癌细胞增殖、克隆形成、侵袭、迁移的抑制作用及相关机制研究

目的:探究脂肪抑制素对宫颈癌细胞增殖、克隆形成能力、侵袭及迁移能力以及细胞周期、细胞凋亡的影响。方法:选取宫颈癌细胞系SiHa,利用不同浓度脂肪抑制素进行培养。通过MTT实验、平板克隆形成实验、Transwell实验及流式细胞术检测实验分别检测脂肪抑制素对宫颈癌细胞增殖、克隆形成能力、侵袭/迁移能力以及细胞周期/细胞凋亡的影响,探究脂肪抑制素对宫颈癌细胞的抗肿瘤作用。结果:MTT实验显示,脂肪抑制素对SiHa细胞的增殖/生长具有明显抑制作用,存在时间和剂量依赖性(P＜0.05);根据细胞增殖率得出72 h时SiHa细胞的IC50为16.98 μmol/L。平板克隆形成实验显示,脂肪抑制素明显降低了SiHa细胞的克隆形成能力,具有剂量依赖性（P＜0.01）。Transwell实验显示,脂肪抑制素也明显降低SiHa细胞侵袭/迁移能力,具有剂量依赖性（P＜0.001）。流式细胞术检测实验显示,较高浓度脂肪抑制素可诱导宫颈癌细胞SiHa的细胞周期停滞在G2/M期,促进其细胞凋亡（P＜0.05）。结论:脂肪抑制素对宫颈癌细胞具有明显抗肿瘤作用,可作为宫颈癌治疗的新药物。     

姜黄素对人鼻咽癌CNE-2Z细胞的放射增敏作用及其作用机制

目的:研究姜黄素(curcumin)对人鼻咽癌CNE-2Z细胞放射增敏作用并初步探讨其作用机制。方法:应用MTT法检测姜黄素药物毒性,用克隆形成实验观察其对放射敏感性的影响,用流式细胞仪(FCM)技术分析对CNE-2Z细胞周期分布和姜黄素联合辐射引起的细胞周期阻滞的影响。结果:不同浓度的姜黄素作用于CNE-2Z细胞后,其细胞毒性呈剂量依赖性,在较低浓度(10μmol/L)时,即可降低放射后CNE-2Z细胞的克隆形成率,其放射增敏比为1.52±0.25。姜黄素以及姜黄素联合辐射作用CNE-2Z细胞24h后,细胞周期主要阻滞在辐射敏感时相G2/M期。结论:姜黄素对CNE-2Z细胞有放射增敏作用,其机制可能与其引起的细胞周期阻滞等因素有关。     

塞来昔布对人鼻咽癌CNE-2细胞放疗的增敏作用

目的:探讨塞来昔布对人鼻咽癌CNE-2细胞的放射增敏作用及其可能机制。方法:四唑盐比色法（MTT）测定塞来昔布对人鼻咽癌CNE-2细胞株的抑制率。采用克隆形成实验检测塞来昔布处理的CNE-2细胞经不同剂量X 线(0、2、4、6、8 和10Gy)照射后的存活分数(SF),并通过单击多靶模型拟合细胞存活曲线,计算增敏比(SER)。流式细胞仪（FCM）分析细胞周期分布及凋亡率。结果:MTT实验显示塞来昔布在（10～80）μg/ml范围内对CNE-2细胞有抑制作用,抑制率与浓度、时间呈依赖关系;在2～10Gy照射范围内,10、20、40、80μg/ml塞来昔布处理后的SF均低于0μg/ml(P<0.05),且SF随塞来昔布浓度的增加而降低;相对于0μg/ml,10、20、40、80μg/ml塞来昔布处理后的SER分别为1.06、1.79、2.29 和3.34;流式细胞仪测得塞来昔布可呈浓度依赖的方式诱导CNE-2细胞凋亡(P<0.05),S期细胞比例降低,G2/M期细胞比例升高。结论:塞来昔布能抑制人鼻咽癌CNE-2细胞增殖,诱导CNE-2细胞细胞周期阻滞,促进细胞凋亡,具有放疗增敏作用。     

沉默CDKN1A基因对鼻咽癌放射抗拒性CNE-2R细胞放射敏感性的影响

目的：探讨CDKN1A基因的表达与鼻咽癌放射敏感性的关系。方法构建慢病毒表达载体LV-CDKN1A-RNAi并转染鼻咽癌放射抗拒性CNE-2R细胞,设转染LV-CDKN1A-RNAi慢病毒的CNE-2R细胞为实验组,转染阴性对照慢病毒的CNE-2R细胞为阴性对照组,未转染的CNE-2R细胞为空白对照组。用CCK-8法、细胞克隆形成实验及流式细胞术分别检测各组细胞增殖、放射敏感性及细胞周期的变化。结果成功构建了CDKN1A基因沉默的CNE-2R细胞,CCK-8法检测显示实验组CNE-2R细胞在照射6 Gy后生长受到抑制,且随时间延长其抑制作用更为明显。细胞克隆形成实验显示实验组CNE-2R细胞放射敏感性增强（放射增敏比为SER=1.24）。流式细胞术检测显示实验组与对照组细胞相比, G0/G1期和G2/M期细胞分布在X射线照射6 Gy前后明显改变（P约0.05）。结论 CDKN1A基因沉默能增强鼻咽癌放射抗拒性CNE-2R细胞的放射敏感性,CDKN1A基因的表达可能与鼻咽癌放射敏感性相关,有望成为鼻咽癌治疗的新靶点。     

抗VEGF发夹状核酶基因对人鼻咽癌细胞株VEGF表达及细胞增殖的影响

目的 探讨抗血管内皮生长因子发夹状核酶基因对人鼻咽低分化鳞癌细胞株CNE—2的VEGF表达及其细胞增殖的影响。方法 采用脂质体介导法将抗VEGF发夹状核酶基因真核表达载体转染CNE-2细胞；RNA斑点杂交检测核酶基因在CNE-2细胞中的表达；免疫组化、间接免疫荧光染色及流式细胞仪结合免疫荧光检测转染前后CNE-2细胞中VEGF表达；MTT法、细胞贴壁克隆形成实验、软琼脂克隆形成实验及流式细胞仪进行细胞周期分析，观察其对CNE-2细胞增殖的影响。结果 转染后的CNE—2细胞VEGF表达明显降低；细胞生长减慢，细胞贴壁克隆形成及软琼脂克隆形成率明显降低；Go／G1期细胞显著增多，S期细胞显著减少（P〈0．01）。结论 抗VEGF发央状核酶基因可显著抑制CNE-2细胞的VEGF表达和ENE-2细胞增殖。     

海芋粗提物对人肝癌细胞的细胞毒和凋亡诱导作用

目的:探讨海芋粗提物对人肝癌细胞的细胞毒和凋亡诱导作用及其作用机制.方法:用海芋粗提物处理人正常肝细胞(L02)及肝癌细胞(SMMC-7721),用细胞增殖试验(MTT法)、克隆形成试验、EdU掺入试验研究海芋粗提物对人正常肝细胞和肝癌细胞的增殖抑制作用;吖啶橙/溴乙啶(AO/EB)染色检测细胞凋亡;流式细胞术检测海芋粗提物对细胞周期的影响;RT-PCR检测细胞周期及凋亡相关基因PPARγ、Cyclin D1、Rb、P21、Bax、Bcl-2基因mRNA表达.结果:用不同浓度海芋粗提物处理后,肿瘤细胞增殖活性降低(P＜0.05),呈时间-剂量-效应关系;克隆形成下降(P＜0.05);EdU标记指数降低(P＜0.05);AO/EB染色凋亡细胞增多(P＜0.01);细胞周期分布改变,凋亡指数显著增加(P＜0.01),G0/G1期细胞增加(P＜0.05),S期和G2/M期细胞减少(P＜0.05);RT-PCR结果显示,海芋粗提物(400μg/ml)处理后,PPARγ表达增加46.0%(P＜0.01)、Cyclin D1降低43.7% (P＜0.01)、Rb增加283.3%(P＜0.01)、Bax增加77.1% (P＜0.01)、Bcl-2降低24.8% (P＜0.05).结论:海芋粗提物对肝癌细胞具有细胞毒和诱导凋亡作用,其作用机理可能与激活PPARγ,上调Rb、Bax基因表达,下调Cyclin D1、Bcl-2基因表达有关.     

慢病毒介导ITGB4 shRNA对H460SM细胞增殖的抑制作用

目的 体外实验研究β4整合素shRNA对非小细胞肺癌H460SM细胞增殖的抑制作用,为非小细胞肺癌早期诊断和治疗提供新的靶点.方法 实时定量RT-PCR验证β4整合素表达水平的变化,显微镜下观察细胞形态的变化.通过细胞计数和MTS实验分析抑制β4整合素表达对H460SM细胞增殖的影响;流式细胞术分析抑制β4整合素表达对H460SM细胞凋亡和细胞周期的影响.结果 与阴性对照组(H460SM-NS)比较,稳定表达β4整合素shRNA的实验组(H460SM-68、H460SM-71)细胞β4整合素表达水平明显降低(P＜0.01);与阴性对照组比较,实验组细胞的增殖受到明显抑制(P＜0.05);实验组细胞凋亡率明显高于阴性对照组,差异有统计学意义(P＜0.01);实验组细胞增殖指数PI明显低于阴性对照组(P＜0.05),G0/G1期细胞数明显高于阴性对照组(P＜0.05),提示抑制β4整合素的表达,细胞周期可能被阻滞在G1/S检测点,导致细胞增殖受到抑制.结论 抑制β4整合素的表达,可以抑制非小细胞肺癌H460SM细胞增殖,并可能诱导H460SM细胞凋亡.癌细胞增殖受到抑制可能与细胞周期调控有关.抑制β4整合素的表达,可能不影响非小细胞肺癌细胞凋亡.     

CD166对鼻咽癌CNE-2细胞放射敏感性的影响

目的 探讨CD166对鼻咽癌CNE-2细胞放射敏感性的影响.方法 采用流式细胞术检测鼻咽癌CNE-2细胞膜CD166阳性表达率,免疫磁珠分选技术获得CNE-2-CD166(+)、CNE-2-CD166(-)细胞亚群,克隆形成实验验证其放射敏感性,CCK-8法及流式细胞术检测10 Gy剂量照射前后的细胞增殖率及细胞凋亡率.结果 CNE-2细胞膜CD166阳性表达率为(24.27±5.31)％,分选后CNE-2-CD166(+)细胞CD166阳性表达率为96.5％,CNE-2-CD166(-)细胞为0.6％.克隆形成实验结果显示,CNE-2-CD166(-)细胞相对CNE-2-CD166(+)细胞的放射增敏比(sensitization enhancement ratio,SER)为1.24.10Gy照射后24 h、48 h和72 h,CNE-2-CD166(+)细胞的存活分数分别为(76.66±3.36)％、(62.44± 1.66)％和(55.21±3.39)％,CNE-2-CD166(-)细胞为(60.34±5.13)％、(41.11±3.00)％和(35.28±4.36)％,同时段内两组细胞的存活分数比较,差异均有统计学意义(P＜0.05).10 Gy照射前,CNE-2-CD 166(+)细胞和CNE-2-CD166(-)细胞凋亡率分别为(5.87±1.14)％和(6.67±1.68)％,差异无统计学意义(P＞0.05);10 Gy照射后48 h,CNE-2-CD166(+)细胞凋亡率为(19.37±2.54)％,显著低于CNE-2-CD166(-)细胞的(28.90±4.04)％,差异有统计学意义(P=0.026).结论 CD166表达阳性的鼻咽癌CNE-2细胞对放射更具抗拒性,可能与减少细胞受照射后的凋亡率降低有关.     

siRNA抑制VEGF基因表达对鼻咽癌细胞生物学行为的影响

目的:应用RNA干扰(RNAi)技术抑制人鼻咽低分化鳞状上皮细胞癌细胞株CNE-2中血管内皮生长因子(VEGF)的表达,研究VEGF对鼻咽癌细胞生物学行为的影响.方法:构建针对VEGF的siRNA真核表达载体pU-VEGF-siRNA,将其表达载体经脂质体LipofectamineTM2000转染至CNE-2细胞,荧光显微镜下观察转染效率,采用RT-PCR、Western blot方法检测转染后CNE-2细胞中VEGF mRNA和蛋白的表达.通过流式细胞仪分析细胞周期的分布,并应用平板克隆形成实验、Transwell侵袭小室模型观察转染后CNE-2细胞恶性生物学行为的变化.结果:pU-VEGF-siRNA转染后CNE-2细胞株中VEGF mRNA和蛋白表达较pU-siCONT组、空白对照组显著下降(P＜0.05),细胞周期被阻滞在G1期,细胞生长缓慢,体外侵袭能力下降.结论:通过RNAi技术阻断VEGF的表达,可抑制CNE-2细胞的生长、增殖、迁徙,提示VEGF在鼻咽癌的发生、发展过程中起重要作用.     

miRNA-381表达及其与鼻咽癌放疗敏感性的关系

目的:观察人鼻咽癌细胞及组织中miRNA-381的表达变化,探讨其与放射敏感性的关系.方法:采用RT-PCR法测定正常鼻咽部上皮细胞株NP460,人鼻咽癌细胞株CNE-2,放疗抵抗细胞株CNE-2R及20例符合纳入标准的鼻咽癌组织中miRNA-381的表达.完成放疗后3个月接受影像学复查,分析患者的近期放疗疗效.所有病例都有2年或2年以上随访记录,根据随访记录制定放疗敏感性评估标准.采用克隆形成实验检测细胞的放疗敏感性.结果:入组患者根据放疗敏感性评估标准,分为放疗抵抗组(7例)和放疗敏感组(13例),放疗抵抗组的miRNA-381表达显著低于放疗敏感组(P＜0.01).克隆形成实验结果显示细胞的放疗敏感性为NP460＞ CNE-2＞CNE-2R,且有显著统计学差异(P＜0.01).RT-PCR结果显示正常鼻咽部上皮细胞株NP460中miRNA-381表达量高于鼻咽癌细胞株,放疗抵抗细胞株CNE-2R中miRNA-381表达量远低于其亲代细胞株CNE-2.近期疗效和鼻咽癌组织中miRNA-381相对表达量的相关性分析显示miRNA-381相对表达量与近期疗效呈正相关(r=0.77,P ＜0.000 1).结论:miRNA-381在放疗抵抗的鼻咽癌细胞及临床标本中的表达量显著低于放疗敏感的细胞及组织.miRNA-381相对表达量越高的鼻咽癌患者接受根治性放疗后的近期疗效越好.     

血管紧张素Ⅱ受体阻滞剂联合放射对鼻咽癌细胞增殖和侵袭能力的影响

目的 研究血管紧张素Ⅱ受体(ATlR)阻滞剂缬沙坦对鼻咽癌细胞系(CNE-2)是否具有放射增敏作用,以及它与放射联合对CNE-2细胞侵袭能力的影响.方法 用成克隆分析法观察缬沙坦与放射联合对CNE-2细胞体外存活效应的影响,用流式细胞术和体外侵袭实验(小室法)检测对细胞凋亡和侵袭能力的影响.结果 CNE-2细胞经10-9、10-8、10-7 mol/L缬沙坦与放射联合作用后,放射增敏比(SER)分别为1.10、1.20、1.36;侵袭能力抑制率分别为8.11%、16.49%、16.77%.改变缬沙坦作用时间,SER随作用时间延长而增加.经10-8mol/L缬沙坦和放射处理24 h后,CNE-2细胞凋亡率为1.89%±0.09%,与单纯放射组1.62%±0.06%相比有所提高(t=4.79,P＜0.05).结论 ATlR阻滞剂缬沙坦在体外对CNE-2细胞有放射增敏作用,与放射联合能抑制细胞侵袭能力和在一定程度诱导细胞凋亡,为缬沙坦体内实验的放射增敏效应提供基础.     

微小RNA hsa-miR-93靶向STAT3提高鼻咽癌对放疗敏感性的机制研究

目的 研究hsa-miR-93在鼻咽癌放疗抗拒过程中的作用及分子机制。方法 以人鼻咽癌细胞株CNE-1、CNE-2、CNE-2R、HONE1、C666.1以及鼻咽上皮永生细胞NP460为研究对象,采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)法检测各组细胞经放疗后hsa-miR-93的表达;采用Western blot法检测各组细胞经放疗后STAT3蛋白的表达;通过miRWalk软件和RNAHybrid软件预测hsa-miR-93和STAT3的结合作用及结合位点;通过双荧光素酶报告基因法检测hsa-miR-93对STAT3靶向结合情况;瞬时转染小分子模拟物或抑制剂调控hsa-miR-93的表达后,采用qRT-PCR和Western blot法检测STAT3的表达;转染siSTAT3沉默STAT3的表达后,通过细胞集落形成实验检测鼻咽癌细胞经放疗后的集落形成能力。结果 与CNE-1、CNE-2细胞(相对放疗敏感)相比,hsa-miR-93在HONE1、CNE-2R细胞(相对放疗抗拒)中表达降低(P＜0.001),且各组鼻咽癌细胞经放疗后hsa-miR-93的表达呈剂量及时间依赖性降低(P＜0.05);与CNE-1、CNE-2细胞相比,STAT3在HONE1、CNE-2R细胞中表达升高,且各组鼻咽癌细胞经放疗后表达呈剂量及时间依赖性升高;经预测,hsa-miR-93可直接靶向结合STAT3。过表达hsa-miR-93可以在mRNA以及蛋白水平上显著抑制STAT3的表达(P＜0.05),而抑制hsa-miR-93的表达可以显著上调STAT3的表达(P＜0.05);过表达hsa-miR-93或沉默STAT3均使鼻咽癌细胞的集落形成显著减少(P＜0.001);抑制hsa-miR-93减弱了鼻咽癌对放疗的敏感性,而同时抑制hsa-miR-93和STAT3后,可提高鼻咽癌对放疗的敏感性。结论 hsa-miR-93可能通过靶向STAT3提高鼻咽癌对放疗的敏感性。     

Changes of hMSH2 and hMLH1 Expression in Nasopharyngeal Carcinoma Cells after X-Radiation

OBJECTIVE To study the effect of X-radiation on expression of hMSH2 and hMLH1 in nasopharyngeal carcinoma （NPC） CNE-1 cells, and explore the mechanism of DNA mismatch repair after radiation. METHODS The cells were divided into experimental and control groups. Experimental cells were exposed to 10 Gy radiation administered as 2 Gy per fraction. Control cells were not radiated. The distribution of cells in the cell cycle was analyzed using flow cytometry. The expression of hMSH2 and hMLH1 was examined by RT-PCR and Western blots. RESULTS The expression of hMSH2 mRNA in experimental cells was significantly greater compared to control cells at 0-3rd weeks and decreased at the 4th week following radiation （P〈0.01）. The expression of hMSH2 protein in experimental cells was up-regulated and significantly greater compared to control cells at the 2nd-4th weeks after radiation （P〈0.01）. There were no significant differences in hMLH1 mRNA and protein expression between experimental and control cells （P 〉0.05）. CONCLUSION Radiation induces hMSH2 expression; hMSH2 has a role in the process of DNA repair, which maybe responsible for reduction of radiosensitivity after radiation.     

DNA-PKcs反义寡核苷酸对不同p53功能状态的鼻咽癌细胞株辐射抗性的影响

背景与目的:DNA依赖性蛋白激酶(DNA-dependent protein kinase,DNA-PK)是一种双链断裂修复蛋白,可以修复细胞的DNA双链断裂损伤。本研究通过转染DNA-PKcs反义寡核苷酸入鼻咽癌细胞株,探讨DNA-PKcs反义寡核苷酸对不同p53功能状态的鼻咽癌细胞株的放射敏感性的影响。方法:利用LipofectamineTM2000转染DNA-PKcs反义寡核苷酸入鼻咽癌细胞株CNE-1和CNE-1-wtp53;设0、0.5、1、2、4、6、8Gy7个放射剂量点,用集落形成法分析转染反义寡核苷酸前后细胞的存活情况,并分别用线性二次模型和单击多靶模型拟合出细胞的剂量存活曲线,求出放射生物学参数α、β、α/β、SF2、D0、Dq和N值,评价细胞放射敏感性的变化。结果:转染DNA-PKcs反义寡核苷酸前,CNE-1和CNE-1-wtp53的α值分别为0.03、0.05,SF2值分别为0.73、0.50,D0值分别为2.08Gy、1.13Gy,Dq值分别为2.04Gy、1.36Gy。转染DNA-PKcs反义寡核苷酸后,CNE-1和CNE-1-wtp53的α值分别为0.04、0.26,SF2值分别为0.45、0.21,D0值分别为1.07Gy、0.83Gy,Dq值分别为1.24Gy、0.73Gy。转染DNA-PKcs反义寡核苷酸后,鼻咽癌细胞的α值增大,SF2、D0、Dq值均减小。结论:DNA-PKcs反义寡核苷酸可逆转CNE-1的辐射抗性,该逆转作用不依赖细胞的p53功能状态。     

下调VEGF表达影响鼻咽癌细胞放射敏感度的机制

目的　应用RNA干扰技术抑制人鼻咽低分化鳞状上皮细胞癌细胞株CNE-2中血管内皮生长因 子（VEGF）表达,研究阻断VEGF基因表达对鼻咽癌细胞放射敏感度的影响及机制。方法 构建针对 VEGF的siRNA真核表达载体pU-VEGF-siRNA（CNE-2组）、1个阴性对照质粒（CNE-2/Neg-siRNA 组）、经脂质体转染至CNE-2细胞（CNE-2/VEGF-siRNA组）,用平板克隆形成实验检测在6MV-X线 0、2、4、6、8、10 Gy照射后克隆形成能力及通过单击多靶模型、线性二次模型拟合放射生物学参 数,流式细胞检测分析细胞周期和细胞凋亡的变化,用RT-PCR定量分析三组细胞中Cyclin D1、Cyclin E、P16和P53的mRNA表达。结果 经6MV-X线0、2、4、6、8、10 Gy照射后细胞存活率显著下降, CNE-2/VEGF-siRNA组细胞经D0和2 Gy照射后的存活分数明显低于CNE-2组、CNE-2/Neg-siRNA组; CNE-2/VEGF-siRNA组中G1/S期细胞周期阻滞更为明显。在Cyclin D1、Cyclin E、p16和p53基因中, Cyclin D1mRNA表达在放疗后6、12和24 h进行性升高,差异有统计学意义,而其他基因变化差异无统 计学意义,Western blot检测显示Cyclin D1蛋白表达在放疗后24 h明显升高。结论 下调VEGF表达可 增加鼻咽癌细胞的放射敏感度,其机制可能是通过Cyclin D1信号通路途径使细胞周期发生G1/S期阻滞。     

盐霉素对鼻咽癌CNE-2细胞放射敏感性的影响

目的:体外实验研究盐霉素对鼻咽癌CNE-2细胞放射敏感性的影响。方法:通过CCK-8法检测盐霉素作用后鼻咽癌CNE-2细胞的增殖情况。利用克隆集落形成实验观察鼻咽癌细胞成活情况,单击多靶模型拟合剂量存活曲线,计算放射增敏指数（SER）;Chou-Talalay数学模型绘制联合指数（CI）曲线,判断盐霉素和放射的作用关系。利用γ-H2AX焦点形成检测DNA分子损伤情况。结果:盐霉素能够抑制鼻咽癌细胞的增殖,并且具有明显的时间和剂量依赖性;盐霉素作用鼻咽癌细胞的IC50值在24 h时为17.81 μmol/L,48 h时为3.98 μmol/L。根据单击多靶模型拟合细胞的存活曲线,可知在鼻咽癌细胞CNE-2中盐霉素浓度为0.1 μmol/L和0.5 μmol/L时SER分别为1.19和1.21,均大于1.0,表明盐霉素对鼻咽癌细胞具有明显的放射增敏作用。制作联合指数（CI）曲线,可知在盐霉素浓度为0.1 μmol/L时,放射剂量为2 Gy时,CI值≈1,盐霉素和放射对CNE-2的作用接近相加作用,放射剂量为4、6、8 Gy时,CI值均＜1,二者为协同作用;在盐霉素浓度为0.5 μmol/L时,放射剂量为2、4、6、8 Gy时,CI值均＜1,二者均为协同作用。相对于照射组,盐霉素+照射组能增加DNA损伤数目。结论:盐霉素能提高鼻咽癌细胞的放射敏感性,为一种潜在的放射增敏药物。     

Icotinib Enhanced Radiosensitization of Nasopharyngeal Carcinoma by Inhibiting the Expression of Epidermal Growth Factor Receptor

Epidermal growth factor receptor (EGFR) is frequently overexpressed in multiple malignancies. Icotinib (IH), a new EGFR tyrosine kinase inhibitor, enhances radiosensitivity in various types of cancer, but its effect on nasopharyngeal carcinoma (NPC) remains unclear. Total 115 NPC tissue sections and 30 nasopharyngitis tissue sections were enrolled. The correlation of EGFR expression and clinicopathologic features of NPC was analyzed. Survival analysis was calculated by using univariate and multivariate regression analysis. A radioresistant NPC cell line, CNE-2R, was established with a gradient irradiation schedule. Cell viability, colony formation and EGFR expression of CNE-2/2R cells were examined. Significant higher expression of EGFR was observed in NPC tissues than chronic nasopharyngitis lesions. EGFR expression was significantly correlated with both tumor stage (P < 0.001) and tumor-node-metastasis stage of NPC (P = 0.006). EGFR expression was an independent prognostic factor of disease-free survival (P = 0.047) and the overall survival of NPC (P = 0.016). Cell viability was higher in CNE-2R than CNE-2 on days 1, 2, 4, and 6 after radiation of 4 Gy. The colony number of CNE-2R was significantly higher than that of CNE-2 (P < 0.05), while IH enhanced the radiosensitizing effect of CNE-2R with lower survival fraction (P < 0.05). EGFR mRNA and protein expression levels were significantly higher in CNE-2R cells compared to CNE-2 cells, but significantly decreased after IH treatment (all P < 0.05). In conclusion, high EGFR expression is a poor prognostic factor for NPC patients. IH enhances the radiosensitivity of CNE-2R cells and reduce EGFR expression.