Graves病患者外周血单个核细胞中 microRNA-142-3p的表达水平及其意义

目的 比较微小RNA-142-3p(microRNA-142-3p,miR-142-3p)在Graves病(Graves′ disease,GD)患者和正常健康对照者外周血单个核细胞(peripheral blood mononuclear cell,PBMC)中的表达水平变化,探讨miR-142-3p在Graves病发生、发展中的可能作用和机制。方法 用密度梯度离心法分别提取37例Graves病患者与15例正常健康志愿者的PBMC,用RT-qPCR分别检测两组PBMC中miR-142-3p的表达水平。分析miR-142-3p水平与TT₃、TT₄和TRAb的相关性。结果miR-142-3p在GD患者PBMC中表达水平(0.378±0.199)较正常健康对照组(1.104±0.421)明显下调,差异有统计学意义(P=0.003)。miR-142-3p与TRAb、TT4 、TT₃呈负相关(r=-0.364,P=0.027;r=-0.437,P=0.007;r=-0.337,P=0.042)。同时,通过分析受试者工作特征(receiver operating characteristic,ROC)曲线发现:miR-142-3p对Graves病有一定的诊断价值,ROC曲线下面积(AUC)=0.917(95% CI:0.806～1.028)。结论 miR-142-3p表达下调与Graves病相关,在疾病的发生、发展中可能起到重要作用。     

miR-142-5p通过CCND1调控胆囊癌细胞的增殖和转移

目的 研究miR-142-5p调控CCND1对胆囊癌细胞增殖和转移的作用,并阐明其具体作用机制。方法 采用RT-qPCR鉴定miR-142-5p在人胆囊上皮细胞和人胆囊细胞系中的表达差异。双荧光素酶报告基因实验用于验证miR-142-5p与CCND1的靶向关系。CCK-8用于检测人胆囊细胞增殖。Transwell和划痕实验检测胆囊细胞迁移。Western blot检测上皮间充质转化标志蛋白的表达水平。结果 miR-142-5p在胆囊癌细胞系中显著低表达,且在GBC-SD细胞中表达最低。双荧光素酶报告基因实验显示,miR-142-5p能够抑制野生型CCND1的荧光素酶活性。结论 功能试验表明,过表达miR-142-5p抑制GBC-SD细胞的增殖和转移,同时过表达miR-142-5p和CCDN1能够部分逆转过表达CCDN1对GBC-SD细胞增殖和转移的影响。证实miR-142-5p通过抑制CCND1表达,进而抑制胆囊癌细胞的增殖和转移。     

miR-519d-3p调控TLR4抑制脂多糖所致THP-1源性巨噬细胞炎症的机制研究

目的 探究miR-519d-3p在脂多糖(LPS)诱导的巨噬细胞炎症中的作用和分子机制.方法 用PMA诱导THP-1细胞分化为巨噬细胞,LPS刺激细胞产生炎症反应作为后续实验的细胞模型,应用荧光定量PCR检测miR-519d-3p表达;利用antago-miR-519d-3p及antago-NC或者miR-519d-3...     

p38蛋白激酶对脂多糖诱导肺泡巨噬细胞NF-κB活化的调控

目的探讨p38蛋白激酶对脂多糖（LPS）诱导肺泡巨噬细胞NF-κB活化的调控机制。方法分离培养肺泡巨噬细胞。设正常对照组、LPS刺激组、SB203580（p38蛋白激酶抑制剂）＋LPS组、PDTC（NF—κB抑制剂）＋LPS组和SB203580＋PDTC＋LPS组。分别采用免疫细胞化学（SP法）和Western blot检测NF—κB、p38蛋白激酶和NF—κB抑制蛋白（I-κB）的表达。结果与正常对照组相比，LPS刺激肺泡巨噬细胞后胞核NF-κB和p38蛋白激酶染色显著增强，而I—κB的表达显著降低（均P〈0．01）。SB203580、PDTC均可显著降低LPS刺激的肺泡巨噬细胞NF-κB，p38蛋白激酶胞核染色阳性细胞的百分比，并显著增强I—κB的表达（均P〈0．05）。同时应用PDTC和SB203580预孵育肺泡巨噬细胞，与LPS刺激组相比，p38蛋白激酶和NF—κB胞核染色阳性细胞百分比均显著降低（P〈0．05），I-κB的表达显著增强（P〈0．05），但分别与SB203580＋LPS和PDTC＋LPS组相比，差异均无显著性意义（均P〉0．05）。结论LPS刺激肺泡巨噬细胞p38蛋白激酶和NF—κB活化；p38蛋白激酶可能通过调节I-κB降解而调控NF—κB的活化，NF—κB可能是p38信号途径下游的最重要位点。     

绝经后骨质疏松患者骨组织中miR-124-3p、miR-328-3p、miR-338-3p的表达

目的：探讨绝经后骨质疏松患者骨组织中miR-124-3p、miR-328-3p、miR-338-3p表达。方法：选取30例绝经后骨质疏松妇女(PMOP组)和30例非骨质疏松的绝经后妇女(对照组),髂前上棘穿刺取骨组织300mg,研磨、匀浆,通过RT-qPCR方法分析检测两组miR-124-3p、miR-328-3p、miR-338-3p的表达水平。结果：miR-338-3p在PMOP组骨组织中的表达水平升高;miR-124-3p、miR-328-3p在PMOP组骨组织中的表达水平降低。结论：miR-124-3p、miR-328-3p、miR-338-3p可调节成骨、破骨引起PMOP,可通过调控其表达干预PMOP的发生和治疗。     

miR-495-3p调控BUB1表达对胆管癌细胞增殖和侵袭的影响

目的：探究miR-495-3p调控BUB1表达水平对胆管癌细胞增殖和侵袭的影响及机制。方法：qRT-PCR法测定人肝内正常胆管上皮细胞（HIBEpiC）、胆管癌细胞RBE、IHC-ST1、SNU-869、HUCCT1中miR-495-3p和BUB1mRNA表达水平;将SNU-869细胞分为空白对照组、阴性对照组、miR-495-3pmimics组、miR-495-3p mimics+pcDNA组、miR-495-3p+pc-BUB1组,比较各组SNU-869细胞增殖、迁移和侵袭能力情况、miR-495-3p及BUB1 mRNA表达水平以及BUB1、ki-67、Bcl-2、MMP-2蛋白表达情况。结果：与HIBEpiC细胞相比,RBE、IHC-ST1、SNU-869、HUCCT1细胞中miR-495-3p表达水平降低（P<0.05）,BUB1表达水平升高（P<0.05）。与空白对照组相比,miR-495-3p mimics组SNU-869细胞中miR-495-3p表达升高（P<0.05）,增殖能力、侵袭细胞数、迁移细胞数、ki-67、MMP-2、BUB1表达降低（P&l...     

IL-10对Aa-LPS刺激的兔肺泡巨噬细胞功能的影响

目的研究白细胞介素10(IL-10)在伴放线放线杆菌(Aa)脂多糖(LPS)刺激兔肺泡巨噬细胞(AM)产生炎症反应过程中的免疫调节作用及其机制。方法分离纯化AM,100ng/mL IL-10预孵2h,加入Aa-LPS刺激继续培养24h,流式细胞术检测AM对荧光标记Aa(FITC-Aa)的吞噬指数(PI)情况及AM的活性氧(ROS)水平;荧光定量PCR法检测CD14、TLR4、SRA和MHC-Ⅱ基因表达的变化;硝酸还原酶法检测AM的NO分泌情况。结果 IL-10上调Aa-LPS诱导的AM的PI(P<0.05),下调Aa-LPS诱导的AM膜表面受体CD14、TLR4、MHC-ⅡmRNA的表达(P<0.01),而SRA mRNA表达量升高(P<0.05);IL-10抑制Aa-LPS诱导的AM的ROS和NO水平(P<0.01)。结论 IL-10可以通过上调Aa-LPS诱导的AM SRA基因表达,下调CD14、TLR4、MHC-Ⅱ基因表达,并且抑制其产生ROS和NO的水平,从而调节免疫反应,限制炎症介质的大量释放,同时增强AM的吞噬作用,清除感染。     

miR-153-3p靶向调控CHI3L1对LPS所致人牙周膜干细胞炎症反应的影响

目的:探索miR-153-3p是否能通过靶向调控几丁质酶3样蛋白1(CHI3L1)改善脂多糖(LPS)所致人牙周膜干细胞(hPDLSCs)炎症反应。方法:分离培养hPDLSCs,采用LPS处理建立炎症细胞模型,并进行miR-NC、miR-153-3p mimics、si-NC、si-CHI3L1以及miR-153-3p mimics+pc-NC、miR-153-3p mimics+pcDNA-CHI3L1转染。转染48h后qRT-PCR法检测各组细胞中miR-153-3p、CHI3L1 mRNA表达,ELISA法检测细胞上清液中IL-6、IL-1β、TNF-α水平,流式细胞术检测细胞凋亡情况,Western Blot法检测细胞中CHI3L1蛋白表达。双荧光素酶报告基因实验检测miR-153-3p与CHI3L1的靶向关系。结果:LPS处理后hPDLSCs中miR-153-3p表达下调(P<0.05),CHI3L1 mRNA与蛋白表达均显著上调(P<0.05);过表达miR-153-3p或抑制CHI3L1表达可降低LPS诱导的hPDLSCs中IL-6、IL-1β、TNF-α水平...     

兔肺内、外源性急性呼吸窘迫综合征血清和支气管肺泡灌洗液中炎性介质的表达

目的：比较肺内、外源性急性呼吸窘迫综合征（ARDS）兔血清和支气管肺泡灌洗液（BALF）中炎性介质的表达。方法：健康新西兰家兔24只，随机分为肺内源性ARDS（ARDSp）组和肺外源性ARDS（ARDSexp）组，每组12只。稀盐酸气管内滴入法制作ARDSp动物模型，静脉注射油酸法制作ARDSexp模型。测定基础状态和注药后静脉血及肺泡灌洗液肿瘤坏死因子α（TNF-α），白细胞介素1β（IL-1β），IL-6水平。结果：两组动物均在注药后3h内达到ARDS诊断指标；损伤后两组动物血清及BALF炎性介质水平均有增高，ARDSp组动物以BALF中炎性介质表达为主，ARDSexp组动物以血清炎性介质表达为主。结论：由不同原因引起的ARDS由于其发病机制和损伤部位不同，其炎性介质表达和病理改变是不同的，ARDSp的炎性介质表达以BALF为主，病理改变以肺泡水肿、炎细胞浸润为主；ARDSexp的炎性介质表达以血清为主，病理改变以肺间质水肿为主。     

肺泡上皮细胞在ALI、ARDS中的研究进展

急性肺损伤／急性呼吸窘迫综合征是继发于多种疾病的严重威胁病人生命健康的临床综合征。近来研究表明，肺泡上皮细胞，作为肺脏结构和功能的基础，尤其是Ⅱ型肺泡上皮细胞，对肺泡内水份的清除能力，合成、分泌及损伤后的修复能力．以及对其生长、分化的调节在病程的进展和转归中起着重要作用。如何将肺泡上皮细胞的这些特性运用于临床治疗．将是解决急性肺损伤／急性呼吸窘迫综合征的重要方向。     

FOXO1对急性肺损伤小鼠肺泡上皮钠通道的调控作用及其机制

探讨叉头框蛋白O1（FOXO1） 对脂多糖（LPS）诱导的急性肺损伤小鼠肺泡上皮钠通道（ENaC）的调控作用,并阐明其可能的作用机制。     

Sirt1通过去乙酰化NF-κB/p65减轻小鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞脂多糖损伤

目的 研究酵母沉默信息调节因子2相关酶1(sirtuin type 1,Sirt1)在肺泡Ⅱ型上皮细胞(AECⅡ)脂多糖(LPS)损伤中对NF-κB的作用.方法 购买Sirt1过表达(Tg)小鼠和野生型(WT)小鼠,饲养、繁殖、鉴定新生小鼠基因型;通过qRT-PCR和Western blot鉴定Tg小鼠和WT小鼠肺组织Sirt1 mRNA和蛋白表达差异;两种不同Sirt1基因背景的小鼠LPS(15 mg/kg)腹腔注射12 h后,HE染色鉴定肺组织病理变化差异;分离纯化两种小鼠的AECⅡ并进行鉴定;两种不同Sirt1基因背景的AECⅡ用LPS 10 μg/mL处理后,分别在0、2、4、6、8、12、24 h用ELISA检测细胞上清液中白细胞介素石(IL-6)和肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)的水平;用LPS 10 μg/mL处理两种AECⅡ,同时设置生理盐水对照组,12 h后用Western blot鉴定细胞NF-κB/p65蛋白和乙酰化NF-κB/p65蛋白的表达差异.结果 新生小鼠有Tg和WT两种不同的基因型;Tg小鼠肺组织Sirt1 mRNA和蛋白的表达水平显著高于WT小鼠(P＜0.05);小鼠腹腔注射LPS 15 mg/kg 12 h后肺组织病理变化显示,Tg小鼠较WT小鼠肺组织损伤程度轻;两种AECⅡ用LPS 10μg/mL处理后,细胞上清液中IL-6和TNF-α的表达水平随时间推移呈现逐渐升高的趋势,Tg组AECⅡ细胞上清液中IL-6和TNF-α的表达水平在多个时间点都显著低于WT组(P＜0.05);两种AECⅡ经LPS(10 μg/mL)处理后,与各自的空白对照组相比Sirt1含量下降,且WT组AECⅡ下降更明显,LPS处理后WT组AECⅡ的NF-κB/p65和乙酰化NF-κB/p65的变化倍数均高于Tg组.结论 Sirt1可能通过去乙酰化NF-κB/p65参与调控AECⅡLPS炎症损伤,抑制急性呼吸窘迫综合征(acute respiratory distress syndrome,ARDS)小鼠肺部炎症反应.     

高迁移率族蛋白1在内毒素急性肺损伤大鼠肺泡巨噬细胞吞噬功能改变中的作用

目的探讨高迁移率族蛋白1（HMGB1）在内毒素急性肺损伤大鼠肺泡巨噬细胞吞噬功能改变中的作用。方法脂多糖（LPS）注射复制大鼠急性肺损伤模型，在LPS致伤后不同时相点（有或无正丁酸钠SB干预时）获取肺组织及肺泡巨噬细胞（AM）。RT—PCR检测肺组织HMGB1 mRNA表达，应用鸡红细胞吞噬实验检测AM的吞噬功能，并对二者做平行比较。结果与对照组比较，LPS致伤后6、12、24h时相点AM吞噬率及吞噬指数明显降低；SB干预组AM吞噬功能于24h时相点出现较明显下降。与LPS组比较，6～12h时相点AM吞噬功能无明显降低，差异有统计学意义（P〈0．01）；LPS致伤后6～24h肺组织HMGB1 mRNA表达明显增高。正丁酸钠（SB）处理组动物肺组织于伤后6～12h肺组织HMGB1 mRNA表达均显著抑制，与LPS组比较，差异有显著性意义（P〈0．05）；相关性分析显示，肺泡巨噬细胞吞噬率及吞噬指数与肺组织HMGB1表达水平呈显著负相关。结论HMGB1高表达可能参与AM吞噬功能改变；AM吞噬功能减低可能是HMGB1参与急性肺损伤发生、发展的机制之一。     

受体相互作用蛋白140在脓毒症急性肺损伤大鼠肺泡巨噬细胞中的表达及其作用

目的 探讨受体相互作用蛋白140 (receptor interacting protein140,RIP140)在脓毒症急性肺损伤(acute lung injury,ALI)大鼠肺泡巨噬细胞中的表达及其在炎症反应过程中的作用.方法 36只雄性SD大鼠按随机数字表法分为正常对照组、假手术组和盲肠结扎穿孔术(CLP)致脓毒症肺损伤3、6、12、24 h组.HE染色观察肺组织病理变化;免疫组化检测RIP140在肺组织的表达分布;Western blot及免疫荧光观察肺泡巨噬细胞RIP140的表达变化及定位;RT-qPCR测定肺泡巨噬细胞IL-1β、TNF-α、IL-6 mRNA水平变化.结果 CLP组可见明显肺损伤病理改变且随时间进展逐渐加重.RIP140在脓毒症肺损伤大鼠肺组织中主要表达于炎性渗出细胞,且随时间进展,表达RIP140的细胞数量逐渐增多.CLP术后6h大鼠肺巨噬细胞RIP140蛋白表达水平较正常对照组开始升高(P＜0.05),至12～24 h维持一较高水平,且主要表达于细胞核.CLP术后3h大鼠肺巨噬细胞IL-1β、TNF-α、IL-6 mRNA水平较正常对照组开始升高(P＜0.05),至12～24 h维持一较高水平,下调肺泡巨噬细胞RIP140的表达可明显抑制IL-1 β、TNF-α、IL-6 mRNA的表达.结论 脓毒症肺损伤大鼠肺泡巨噬细胞可通过上调RIP140表达增强肺组织炎症反应,从而参与早期急性肺损伤的炎症应答.     

烧伤血清对离体大鼠肺泡巨噬细胞CD14表达变化的影响

目的 :探讨烧伤血清对离体大鼠肺泡巨噬细胞 (AM )CD14的mRNA基因和膜蛋白 (mCD14 )表达变化及其对AM分泌细胞因子的影响。　方法 :分离并收集大鼠AM ,以烧伤血清及LPS刺激 ,再分别以抗CD14抗体作用后提取总RNA ,用RT PCR方法检测不同时相点CD14mRNA表达 ;用ELISA方法检测培养液中TNF α和IL 6浓度 ;免疫组化法检测AM膜CD14蛋白表达变化。　结果 :经烧伤血清和LPS刺激后 ,AM的CD14基因以及蛋白表达从 1h起就开始增加 ,2h达峰值 ,然后逐渐减弱。上述改变在伤后 12h内持续 ,细胞因子分泌相应增加 ;抗CD14抗体阻断CD14作用后 ,CD14的基因和蛋白表达显著降低 ,细胞因子分泌亦相应减少。　结论 :严重烧伤后可能随着LPS增加 ,通过激活内毒素信号传导通路 ,使AM分泌细胞因子增加。这种作用可以被抗CD14抗体所阻断 ,提示严重烧伤后可以通过调节CD14的作用而减少细胞因子的合成和分泌     

微小RNA在急性肺损伤中的研究进展

急性肺损伤是由各种直接或间接因素导致肺泡上皮细胞及毛细血管内皮细胞损伤,造成弥漫性肺间质和肺泡水肿,进而导致急性低氧性呼吸功能不全.微小RNA(microRNA,miRNA)与急性肺损伤的发生、发展关系密切,在肺泡上皮细胞、毛细血管内皮细胞及巨噬细胞等细胞的分化、增殖、凋亡、分解过程及对信号通路的调节中发挥重要作用.因...     

RNA干扰技术抑制糖皮质激素受体在大鼠肺泡巨噬细胞表达及活性的研究

目的利用RNA干扰技术,建立糖皮质激素受体(glucocorticoid receptor,GR)基因阻断的大鼠肺泡巨噬细胞模型.方法构建2个针对GR的RNAi表达载体,分别命名为psilencer 3.1-GR1和psilencer 3.1-GR2,经测序确认后,转染大鼠肺泡巨噬细胞.RT-PCR、Western Blot分别检测GR mRNA水平和蛋白水平表达变化;相对荧光素酶活性法检测GR转录激活功能的变化.结果经测序证实:成功构建2个针对GR的RNAi表达载体(psilencer 3.1-GR1和2);转染psilencer 3.1-GR2可明显降低细胞内GR mRNA的丰度及GR蛋白表达,细胞GR转录激活活性明显降低;转染psilencer 3.1-GR1与对照组相比无显著变化.结论成功地构建并筛选出一个特异而高效地阻断GR表达及功能的质粒表达载体,为进一步研究糖皮质激素受体的功能提供新方法.     

LBP多抗对内毒素急性肺损伤大鼠肺泡巨噬细胞IL-10、IL-18基因表达的影响

目的探讨脂多糖结合蛋白(lipopolysaccharide binding protein, LBP)多抗对内毒素急性肺损伤大鼠肺泡巨噬细胞IL-10、IL-18基因表达的影响,为LBP多抗治疗急性肺损伤提供实验依据.方法 Wistar 雄性大鼠40只,随机分段等分为5组,A组为正常对照组; B组为LPS处理组;C组为LPS注射前30 min加LBP多抗预处理组;D组为LPS和LBP多抗同时处理组;E组为LPS注射后30 min加LBP多抗处理组.分离培养各组大鼠肺泡巨噬细胞,用RT-PCR方法测定其IL-10、IL-18 mRNA表达.结果 LPS显著增加IL-10、IL-18 mRNA表达(B组);LBP多抗能显著降低二者的表达,尤以预处理组(C)更明显.结论 LBP多抗能显著降低内毒素急性肺损伤炎症因子的IL-10、IL-18表达.