灵孢多糖对M146L细胞APP mRNA表达的影响研究

目的：探讨灵孢多糖(GLPS)对M146L细胞APP mRNA表达的影响,寻找潜在的能够抑制Aβ分泌的中药单体,以达到治疗阿尔茨海默病(AD)的目的。方法：以可过表达β淀粉样蛋白42(Aβ₄₂)的β淀粉样蛋白前体蛋白(APP)/突变型早老素1(PS1)双转基因的CHO细胞(M146L细胞)为体外AD治疗药物筛选模型。经不同浓度的GLPS(100,200,300μg/mL)处理后,采用MTT比色法检测细胞活性;应用逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)检测灵孢多糖对M146L细胞APP mRNA表达的影响;蛋白质免疫印迹法(Western blot)检测M146L细胞中APP,Aβ₄₂,Bax, Bcl-2等蛋白表达情况;酶联免疫吸附法(ELISA)检测M146L细胞外Aβ₄₂的表达情况。结果：低、中剂量GLPS组细胞活性与对照组比较差异无统计学意义(P>0.05);高剂量GLPS组相比于对照组,细胞活性明显下降(P<0.05)。相比于对照组,低、中、高剂量GLPS组APP mRNA,APP,Aβ_42<...     

五味子乙素抑制M146L细胞Aβ42生成的机制研究

目的研究五味子乙素抑制M146L细胞Aβ₄₂生成的机制。方法体外培养高效表达Aβ42的M146L细胞株，分别加入不同浓度的五味子乙素(1.67，5.00和15.00 μg·mL^-1)、 β分泌酶抑制剂(S4562，100.00 μg·mL^-1)和γ分泌酶抑制剂(S2188，13.68 μg·mL^-1)。用CCK-8(cell counting kit-8)比色法检测不同处理对M146L细胞活性的影响；用ELISA法测定M146L细胞所分泌的Aβ₄₂的变化；用Western blotting检测APP的β分泌酶剪切产物C99蛋白的含量变化，结合用β和γ分泌酶活性试剂盒，检测五味子乙素对这两种酶活性的影响。结果不同处理因素对M146L细胞的存活率均无影响，不具有细胞毒作用。中、高剂量的五味子乙素均不同程度地抑制M146L细胞分泌Aβ₄₂及γ分泌酶的活性，但都不改变M146L细胞C99蛋白的含量及β分泌酶的活性。结论五味子乙素可抑制γ分泌酶活性，其降低Aβ₄₂生成是通过抑制γ分泌酶的活性来实现的。     

去痴灵脂溶性提取物血清抑制M146L细胞分泌β淀粉样蛋白

目的：研究中药复方去痴灵脂溶性提取物血清对转染人类β淀粉样前体蛋白（amyloid beta-proteinprecursor,APP）基因和早老素-1（prsenilin-1,PS-1）基因的M146L细胞分泌β淀粉样蛋白42（amyloid beta-protein42,Aβ42）的抑制作用.方法：采用血清药理学方法,制备去痴灵脂溶性提取物的含药血清.体外培养高效表达Aβ42的M146L细胞株,建立Aβ42过度表达的细胞模型.加入不同浓度（1%,3%和9%）的含药血清,用CCK-8（cell counting kit-8）比色实验检测含药血清对M146L细胞毒作用,用ELISA法（enzyme-linked immunosorbent assay）测定M146L细胞分泌Aβ42的变化.结果：3个浓度的去痴灵脂溶性提取物血清对M146L存活率没有影响,不具有细胞毒作用.3个浓度的含药血清均能显著抑制M146L细胞分泌Aβ42,以高浓度组最为明显.结论：一定浓度（1%,3%,9%）的去痴灵脂溶性提取物血清对M146L细胞分泌Aβ42有明显的抑制作用.     

阿尔茨海默病中β淀粉样蛋白清除的研究进展

老年性痴呆最常见的是阿尔茨海默病（AD），它是老年人致残和死亡的第4位病因。普遍认为淀粉样蛋白（Aβ）是AD的发病原因，已提出数种清除Aβ的机制，包括受体介导的通过血脑屏障的Aβ转运，酶介导的Aβ降解。此外，免疫反应也与Aβ清除有关。在AD病人中，这些清除机制似乎受到损害。近来，已开发了靶向免疫清除Aβ分子的方法。本文讨论了清除Aβ机制的研究进展及其治疗药物的开发策略。     

五味子乙素对缺血诱导人牙髓细胞的影响及作用机制研究

目的研究五味子乙素对缺血诱导人牙髓细胞的影响及作用机制。方法采用不同浓度的五味子乙素分别处理细胞24、48、72 h后,观察牙髓细胞形态并用波形蛋白染色和角蛋白染色鉴定细胞,检测细胞增殖率和细胞凋亡情况,荧光定量聚合酶链式反应(RT-PCR)检测牙髓细胞中碱性磷酸酶(ALP)、牙本质涎磷蛋白(DSPP)、丝氨酸蛋白酶(HtrA1)、转化生长因子(TGF)-β1 mRNA的表达量,蛋白免疫印迹法(Western blot)检测牙髓细胞中局部黏着斑激酶(FAK)、细胞外调节蛋白激酶(ERK)、蛋白激酶B(AKT)的表达。结果化学染色鉴定结果发现,传代后的细胞波形蛋白染色结果显示阳性,角蛋白染色结果显示阴性,说明此细胞来源于中胚层,具有牙髓细胞的生物学特性;随着五味子乙素浓度的增加牙髓细胞的增殖率呈现上升趋势(P<0.01),而牙髓细胞凋亡率明显下降(P<0.01),且与药物浓度和时间呈现一定的依赖性;不同浓度五味子乙素处理牙髓细胞后,细胞中的ALP、DSPP、TGF-β1 mRNA相对表达量以及FAK、ERK、AKT的表达均高于空白对照组,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论五味子乙素可以促进牙髓细胞增殖并抑制其凋亡,这一效应可能是通过FAK、ERK、AKT信号通路实现的。     

五味子乙素对慢性酒精中毒大鼠海马突触相关蛋白表达的影响

目的 研究五味子乙素对慢性酒精中毒大鼠学习记忆能力及突触相关蛋白表达的影响.方法 连续用白酒以灌胃的方式建立动物慢性酒精中毒模型,随机将中毒模型制备成功后的大鼠分为模型组和低、中、高剂量实验组,每组均8只;另取8只正常大鼠作为空白组.低、中、高剂量实验组分别按10,20,40 mg·kg-1的剂量给予0.01 g·mL...     

不同治疗方法对阿尔茨海默病患者血浆β-淀粉样蛋白含量的影响

目的　通过检测血浆 β 淀粉样蛋白 (β AP) ,比较不同药物治疗阿尔茨海默病 (AD)的效果。 方法　用放射免疫分析法测定 4 0例患者和 2 0例正常对照者β AP含量 ,并按不同药物分组。 结果　AD组血清β AP含量均明显高于正常对照组 (P <0 0 1) ;治疗后治疗组 β AP含量均低于治疗前 (P <0 0 5～ 0 0 1) ;脑活素组和脑复康组均有一定的疗效 ,但前者好于后者。结论　阿尔茨海默病患者血浆β AP含量测定 ,对病情预测和疗效评定有一定的帮助。     

五味子乙素对两种神经瘤细胞的抑制作用

目的初步探讨不同浓度的五味子乙素(Sch B)对人神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞及C6胶质瘤细胞生长及增殖的影响。方法体外培养人神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞及C6胶质瘤细胞,分别以1~13μmol/L Sch B作用于SH-SY5Y细胞及C6细胞48 h。倒置显微镜下观察两种肿瘤细胞的形态学及数量变化,四唑盐比色法(MTT法)观察不同浓度的Sch B对细胞生长增殖的影响,酶标仪检测各组吸光度。结果与对照组相比,9~13μmol/L Sch B作用48 h均可引起SH-SY5Y细胞生长增殖抑制,1~7μmol/L Sch B对SH-SY5Y细胞没有毒性作用;而5μmol/L Sch B即可对C6胶质瘤细胞的生长增殖产生抑制作用。结论 Sch B对SH-SY5Y细胞及C6胶质瘤细胞的生长增殖均有明显的抑制作用,且C6胶质瘤细胞对Sch B的增殖抑制作用更为敏感。     

五味子乙素保护神经细胞作用及其可能机制

目的探讨五味子乙素对β淀粉样蛋白25-35(Aβ25-35)诱导褐家鼠肾上腺嗜铬瘤PC12细胞损伤的保护作用及可能机制。方法 20μmol.L-1Aβ25-35诱导PC12细胞损伤,加入5,10,25μmol.L-1五味子乙素,四甲基偶氮唑盐比色法(MTT法)检测细胞存活率,逆转录-聚合酶链式反应法(RT-PCR法)检测PC12细胞β淀粉样前体蛋白(APP)基因及空泡分选蛋白35(VPS35)基因在mRNA水平的表达,免疫细胞化学法测定APP及VPS35在蛋白水平的表达。结果 MTT结果显示,5,10,25μmol.L-1五味子乙素组PC12细胞存活率较Aβ25-35组高(P<0.05);RT-PCR、免疫细胞化学染色结果显示,Aβ25-35组较正常对照组APP、VPS35 mRNA和蛋白表达均上调(P<0.05);不同浓度五味子乙素组APP及VPS35 mRNA和蛋白表达较Aβ25-35组减少(P<0.05),VPS35与APP变化趋势一致。结论 5,10,25μmol.L-1五味子乙素可降低Aβ25-35对PC12细胞的损伤,该作用呈浓度依赖性,其机制可能与降低VPS35表达、减少sorLA含量、延长APP运输时间相关。     

人淀粉样前体蛋白高表达抑制SH-SY5Y细胞M胆碱受体结合

目的观察阿尔茨海默病(AD)致病相关基因淀粉样前体蛋白(APP)基因的高表达及β-淀粉样肽(Aβ)高度生成对人神经母细胞瘤细胞SH-SY5Y胆碱能功能的影响，探讨AD脑内Aβ与胆碱能变化的联系。方法将携带野生型人APP基因的pCMV695质粒转染至人神经母细胞瘤细胞SH-SY5Y细胞中，稳定表达后根据APP蛋     

五味子乙素对CYP450药物代谢酶诱导作用的体外研究

目的 研究五味子乙素对细胞色素P450(CYP450)酶活性和mRNA表达是否有诱导作用.方法 采用底物法测定人肝原代细胞CYP1A2、CYP2B6和CYP3A4酶的活性,荧光定量PCR检测mRNA的表达.结果 五味子乙素对CYP1A2和CYP3A4的酶活性均低于阳性对照的40%,高浓度的五味子乙素对CYP2B6的酶活性均高于阳性对照的40%;五味子乙素对CYP1A2的mRNA表达小于阴性对照的4倍,高浓度的五味子乙素对CYP2B6和CYP3A4的mRNA表达大于阴性对照的4倍.结论 五味子乙素对CYP1A2和CYP3A4的酶活性没有诱导作用,对CYP2B6的酶活性有潜在诱导作用;五味子乙素对CYP1A2的mRNA表达没有诱导作用,对CYP2B6和CYP3A4的mRNA表达有潜在诱导作用.     

不同产地的五味子中五味子乙素含量测定

目的：五味子中有效成分为五味子乙素，因此我们对该成分进行测定。方法：采用高效液相法进行测定。结果：B法最好。结论：用高效液相法测定不同产地五味子中五味子乙素含量方法简便、可靠。     

黄芩素对β-淀粉样蛋白纤维化及其细胞毒性的影响

目的探讨黄芩素对致病性β-淀粉样蛋白(Aβ1-42)纤维形成及细胞毒性作用的影响。方法采用硫黄素-T(Th-T)荧光分析法观察黄芩素对抗Aβ1-42纤维化效应;应用噻唑蓝(MTT)法,观察黄芩素对抗Aβ1-42对PC12细胞毒性的影响。结果 Th-T荧光分析显示:黄芩素对Aβ1-42纤维形成和聚集有浓度依赖性抑制作用,对预聚集的Aβ1-42纤维也有明显解聚作用(P<0.01);MTT法显示:黄芩素能显著降低Aβ1-42对PC12细胞的毒性作用(P<0.01)。结论黄芩素在体外能有效抑制Aβ1-42纤维形成和聚集,并显著降低Aβ1-42对PC12细胞的毒性作用,提示黄芩素有可能成为防治阿尔茨海默病的药物之一。     

五味子乙素对心肌梗死后大鼠心肌细胞凋亡的影响

目的 研究五味子乙素对心肌梗死大鼠的保护作用及其作用机制。方法 将SD大鼠随机分为假手术组、模型组、阳性对照组(10 mg·kg^-1卡托普利)、低剂量实验组(30 mg·kg^-1五味子乙素)、高剂量实验组(60 mg·kg^-1五味子乙素),每组10只,连续给药14 d后检测心功能相关指标。以试剂盒检测血清心肌损伤标志物及血清炎症因子水平,以原位末端标记(TUNEL)法和蛋白质印迹法分别检测大鼠心肌细胞凋亡和相关蛋白的表达水平。结果 假手术组、模型组、阳性对照组、低剂量实验组、高剂量实验组大鼠的左心室射血分数(LVEF)水平分别为(78.42±4.32)%、(41.65±2.94)%、(59.76±5.35)%、(49.13±3.92)%和(67.04±3.00)%,肌酸激脢同工酶(CK-MB)含量分别为(33.95±2.68)、(100.51±3.92)、(48.27±3.70)、(70.34±2.93)和(49.13±3.67)U·L^-1,白细胞介素-1β(IL-1β)水平分别为(1.02±0.1...     

β-淀粉样蛋白对大鼠脑神经细胞凋亡及白介素2表达的影响

目的 研究β－淀粉样蛋白的神经毒性机制,特别是对大鼠海马和额叶皮层细胞凋亡相关基因ｂｃｌ－２表达的影响,以及尼莫的平的作用。方法 将ＳＤ大鼠随机分模型组、治疗组和对照组。在立体定位下于迈内特基底核注入Ａβ１０μｇ建立Ａｌｚｈｅｉｍｅｒ病模型,治疗组在建立模型后每天腹腔注射尼莫的平至实验结束。对照组ＮＢＭ注入等容积生理盐水。流式细胞仪ＤＮＡ含量分析和免疫荧光法检测来测定细胞群中细胞凋亡的比例和Ｂｃｌ     

正交试验法优选五味子甲素和五味子乙素的超声提取工艺

目的:通过正交试验确定了五味子甲素和五味子乙素的超声提取工艺。方法:采用超声提取法提取五味子甲素和五味子乙素,以提取溶剂、超声时间、超声次数、溶剂用量为因素,以五味子甲素和五味子乙素提取率为考察指标,采用L9(34)正交表设计,用正交实验确定最佳提取条件,采用HPLC法分析2种成分。结果:在所考察的因素中,以五味子甲素与五味子乙素含量的均值为主要指标,确定最佳超声提取工艺为:以8倍体积甲醇为溶剂,超声提取3次,每次10min。结论:确定五味子最佳超声提取工艺,此法简单、快速、提取效率高;HPLC分析方法准确,灵敏度高,重现性好,可用于五味子有效成分的分析。