用聚合酶链反应技术进行甲型血友病基因诊断

用聚合酶链反应技术进行甲型血友病基因诊断吴竞生，潘理明，张明华，罗菊珍，湛秀兰，王祖贻，丁浩，徐华梅我们用多聚合酶链反应（ＰＣＲ）技术及基因连锁分析限制性片段长度多态性（ＲＦＬＰｓ）对９个甲型血友病家族共３７个成员进行携带者及产前基因诊断。材料和方法...     

多聚酶链反应技术在甲型血友病基因诊断中的应用

本文就应用多聚酶链反应(PCR)技术检测因子Ⅷ缺乏的甲型血友病患者及其产前诊断,以及PCR结合寡核苷酸探针,结合Southern印迹法,结合核糖核酸裂解法,结合变性样度凝胶电泳和结合核苷酸顺序分析的原理及应用,进行文献综述。     

多聚酶链反应在输血医学中的应用

多聚酶链反应(polymerasechainreaction，PCR)技术最早由美国cetus公司人类遗传研究室KatyMullis及同事于1985年发现并研制成功的，最早的应用报道是由Saiki等于1985年描述，它是体外特异性合成某一特异性DNA片段的遗传学新方法。随着基本方法的不断完善，该技术将成为某些生物技术和临床诊断的标准方法。PCR在输血医学方面的应用日益广泛，特别是对输血引起的感染性疾病的诊断、HLA分型和血液学诊断尤为重要。本文就PCR的基本方法学以及PCR在输血医学中应用的现状和发展前景作一简要综述。     

甲型血友病基因诊断的研究

甲型血友病的基因诊断是其治疗的一个重要方面，近几年来随着基因分析技术的进步揭示ＣＰＧ岛等许多突变热点，并发现ＤＮＡ倒位是导致重型甲型血友病的主要原因，从而使甲型血友病的诊断水平不断得到提高。     

二氧化硅提取核酸用于多聚酶链反应

利用硫氰酸胍裂解病毒和二氧化硅颗粒能够特异性吸附核酸的特性，将二氧化硅悬液、裂解液及肝炎病毒感染血清共同保温，病毒裂解释放出的核酸结合在二氧化硅颗粒上，经过双蒸水洗脱，所得核酸直接作ＰＣＲ扩增。     

几种改良的多聚酶链反应在丙型肝炎病毒检测中的应用

本文综述了近年来几种改良的多聚酶链反应(PCR)在检测丙型肝炎病毒中的应用。包括巢式PCR、半巢式PCR、一步法PCR、定量PCR、链特异性PCR、RNA捕获法PCR及原位PCR。     

多聚酶链反应技术及其在医学检验中的应用

聚合酶链反应技术(Polymerase Chain Reaction简称PCR)是一种简便的、高效的在体外用聚合酶催化扩增核酸分子的新技术。由于用多聚酶催化能使核酸分子按几何级数递增,一般样品经20～30次催化后待检核酸分子可扩增百万倍以上,     

多聚酶链反应（PCR）技术诊断病毒性心肌炎的临床研究

本研究利用一对肠道病毒引物，对临床怀疑为病毒性心肌炎患者的血清及心肌组织进行ＲＮＡ─ＰＣＲ。同时用ＣｏｘＡ９、ＣｏｘＢ３、及ＥＣＨＯ６、ＥＣＨＯ９、ＥＣＨＯ１１感染的猴肾细胞株做为阳性对照进行检测。所有已知阳性细胞株都获得特异性扩增结果。两例心肌炎致死患者心肌组织的检测均获阳性结果．２１例临床确诊为病毒性心肌炎的成人患者血清检测阳性率为３３％，１２例婴儿患者血清检测阳性率为５８％。临床可疑为病毒性心肌炎的成人患者血清检测阳性率为２５％。     

用多聚酶链反应技术检测多发性骨髓瘤患者免疫球蛋白重链基…

用多聚酶链反应（ＰＣＲ）技术检测了３５例多刀生骨髓瘤（ＭＭ）患的外周血及１例未定性单克隆丙种球蛋白病（ＭＧＵＳ）患的外周血和骨髓的免疫球蛋白重链（ＩｇＨ）基因重排。８例ＭＭ的骨髓标本７例阳性，３５例外周血２３例阳性，阳性率为６５．７％。其中Ⅱ、Ⅲ期阳性率明显高于Ｉ期；ＩｇＧ型阳性率高于ＩｇＡ及ＩｇＤ型，另１例ＭＧＵＳ患的外周血及骨髓均未测出ＩｇＨ基因重排，作认为，ＩｇＨ基因重排的检测对ＭＭ     

多聚酶链反应对急性白血病巨细胞病毒感染的观察

多聚酶链反应对急性白血病巨细胞病毒感染的观察石奇珍吕联煌辛碧珍郭瑞官人类巨细胞病毒（ＨｕｍａｎＣｙｔｏｍｅｇａｌｏｖｉｒｕｓ，ＨＣＭＶ）是条件致病性病原体，免疫功能低下者极易感染。急性白血病（ＡＬ）患者是免疫功能低下的人群，多聚酶链反应（ＰＣＲ）是检...     

血友病A基因诊断和产前诊断技术的研究进展

血友病A(hemophilia A, HA)是一种常见的X连锁隐性遗传性出血性疾病,患病率为1/10000,约占先天性出血性疾病的85%.HA的主要病因是由于 FⅧ基因缺陷而引起的FⅧ含量不足或功能缺陷而不能发挥正常的凝血功能,病人出现自发性或轻微外伤后出血不止,目前对本病尚无根治疗法.因此开展HA家系基因诊断和产前诊断可避免新的HA病人或携带者出生,这对从基因水平咨询HA病人大有益处,现从以下几个方面进行阐述.     

血友病基因诊断的研究现状

血友病(hemophilia)分为血友病A(hemophilia A, HA)和血友病B(hemophilia B, HB)两型.我国大陆血友病的发病率缺乏详细的统计资料.据邵宗鸿的综合报道,我国血友病的发病率低于西方国家(平均5～10/105),为2.27～2.84/105,其中血友病A为1.95～2.40/105,血友病B为0.32～0.44/105.据我国11所大型医院截止1999年底统计,血友病共计4 655例,其中血友病A3999例(占86%),血友病B656例(占14%).另据我国台湾省截止2000年3月统计,血友病A 362例(占86%),血友病B59例(占14%).本文就我国血友病基因诊断的研究现状作一简述.     

重组人胰岛素基因真核表达质粒的多聚酶链反应

目的：鉴定重组人胰岛素基因真核表达质粒。方法：应用多聚酶链反应鉴定重组人胰岛素基因真核表达质粒pCMV．Ins。结果：显示insulin基因已经插入重组基因中，人胰岛素基因真核表达质粒已成功构建。结论：已成功构建真核表达载体pCMV．Ins，为进一步进行胰岛素基因转染糖尿病大鼠和非胰岛β细胞，使之产生胰岛素的研究奠定了坚实的基础。     

胸水多聚酶链反应诊断老年人结核性胸腔积液价值初探

我们检测３０例老年人结核性胸腔积液患者胸水ＰＣＲ－ＴＢ－ＤＮＡ以探讨ＰＣＲ技术对老年人结核性渗出性胸膜炎的诊断价值，以２４例老年人癌性胸腔积液作为对照。     

血友病B患者及其携带者基因诊断新进展

血友病B是X性连锁隐性遗传疾病，随着对其基因缺陷本质的认识及生物技术的发展，临床上已经能对患者及其携带者进行基因诊断及产前诊断，本文对此作一简要介绍。     

用多聚酶链反应分析干扰素对宫颈人乳头瘤病毒感染的疗效

采用多聚酶链反应检测了正常妇女，慢性宫颈炎妇女中人乳头瘤病毒（ＨＰＶ）的感染情况，结果表明，ＨＰＶ总阳性率为５８．６％，各型感染率分别为２９．３％、３０．７％、２８．６％、３４．３％、均显著高于正常妇女中的感水平。１６名患者经一个疗程干扰素局部用药治疗后，其中１５人出现不同程度好转，且ＨＰＶ－ＤＮＡ阴转。上述结果表明：（１）ＨＰＶ在宫颈炎的发生、发展中起子一定的作用；（２）ＨＰＶ对干扰素十分敏感，     

多聚酶链反应在临床诊断中的应用

<正> 多聚酶链反应(Polymerase chain Rea-ction 简称 PCR)。这是一种模拟天然 DNA复制过程,在体外扩增特异性 DNA 片段的新技术。该项技术于1985年由美国 Cetus公司和加利福尼业大学联合建立,它的出现被认为是分子遗传学上的一项突破性进展,仅1988年一年,美国引证该项技术的杂志就高达353种。PCR 技术的重要价值在于它能够通过一种预定的 DNA 延伸物来增殖和放大所需测定的 DNA 或 DNA 碎片,它可将500—2000个碱基配对的长度放大百万倍,而且只需要很短的时间就能自动完成。由于该项技术具有敏感、特异、产率高,操作简单,容易自动化的特点,可以从一滴血、一根头发,一个细胞扩增出足量的 DNA 供实验室分析诊断。DNA 的天然复制过程是半保留复制方式,因为每个子代 DNA 分子中的一条链是     

同时存在血友病A及血友病B患者家系的基因诊断

目的:对1个同时存在血友病A(HA)及血友病B(HB)患者的家系进行分子发病机制研究,并对家系女性成员进行携带者检测。方法:采用活化部分凝血活酶时间(APTT)、凝血酶原时间(PT)、凝血酶时间(TT)、纤维蛋白原(Fg)、凝血因子Ⅷ(FⅧ)活性(FⅧ:C)、FⅨ活性(FⅨ:C)及血管性血友病因子(vWF)等测定进行HA及HB表型诊断;用长链聚合酶链反应(LD-PCR)进行F8基因内含子22倒位检测,2组序列特异的PCR对F8基因内含子1倒位进行检测;采用直接核苷酸测序法对F9基因各外显子及其侧翼序列进行检测,联合F9基因相关的6个微卫星位点(DXS8094、DXS1211、DXS1192、DXS102、DXS1227及DXS8013)进行家系遗传连锁分析。结果:先证者1是由F8基因内含子22倒位引起的HA。先证者2是由F9基因突变nt32772A→T突变(p.Ser365Cys,GI:22385320)引起的HB,其突变基因遗传自其母亲,来源于先证者2外公的X染色体,其外公为该突变的体细胞和生殖细胞嵌合体,其阿姨口腔细胞DNA未检出该突变。结论:该家系2名先证者的基因诊断结果与表型诊断相符。单碱基延伸法可用于突变嵌合率的检测,并为血友病散发家系的突变来源提供可靠的信息。     

多聚酶链反应在输血医学中的应用

多聚酶链反应技术最早由美国ｃｅｔｕｓ公司人类遗传研究室Ｋａｒｙ Ｍｕｌｌｉｓ同事于１９８５年发现并研制成功的，最早的应用报道是由Ｓａｉｋｉ等于１９７８５年描述，它是体外特异性合成某一特异性ＤＮＡ片段的遗传学新方法。     

血友病B患者及其携带者基因诊断新进展

血友病B是X性连锁隐性遗传疾病 ,随着对其基因缺陷本质的认识及生物技术的发展 ,临床上已经能对患者及其携带者进行基因诊断及产前诊断 ,本文对此作一简要介绍。