用降钙素基因甲基化做白血病恶性克隆增殖的标志

微小残留病(MRD)的检测是当今白血病研究领域受人关注的问题之一。检测残留病的关键是寻找肿瘤性标志。降钙素基因高度甲基化为急性白血病,特别是急性髓细胞白血病的MRD提供了一新的基因标志,对研究白血病、骨髓增生异常综合征的发生发展.可能具有较大意义。     

慢性粒细胞白血病降钙素基因甲基化的研究

慢性粒细胞白血病降钙素基因甲基化的研究王顺清洪文德彭爱华罗绍凯戴木水戴丽君慢性粒细胞白血病（ＣＭＬ）是起源于多能干细胞的肿瘤性疾病，其急变发生的机制不清楚。近来有人报道人类降钙素基因（Ｃａｌｃｉｔｏｎｉｎｇｅｎｅ，ＣＴ基因）的高度甲基化与不少肿瘤性疾...     

降钙素基因甲基化对白血病前期基因诊断的研究

目的：探讨降钙素（ＣＴ）基因甲基化对白血病前期基因诊断的价值。方法：利用多聚酶链反应（ＰＣＲ），扩增ＣＴ基因５’端第４个甲基化位点附近的ＤＮＡ序列，所有样本ＤＮＡ在做ＰＣＲ前用过量的限制性内切酶ＨＰａⅡ消化。检测２１例骨髓增生异常综合征（ＭＤＳ）及１２例再障患者，细胞系ＨＬ－６０作阳性对照，５例正常人骨髓作正常对照组。结果：再障组与正常对照组ＣＴ基因处于正常甲基化状态。２１例ＭＤＳ中１６例ＣＴ基因高度甲基化。３例ＣＴ基因高度甲基化的ＭＤＳ转化成ＡＭＬ。ＣＴ基因高度甲基化与原始细胞计数无相关性（ｒ＝００４２）。结论：ＣＴ基因高度甲基化可作为ＭＤＳ基因诊断的一个指标，为探知ＭＤＳ的发病机理以及与白血病的关系提供了有价值的诊断方法。     

降钙素基因甲基化对白血病前期基因诊断的研究

探讨降钙素基因甲基化对白血病基因诊断的价值。方法：利用多聚酶链反应，扩增ＣＴ基因５‘端第４个甲基化位点的ＤＮＡ的序列，的有样本ＤＮＡ在做ＰＣＲ前用过量的这内切酶ＨＰａⅡ消化。检测２１例骨髓增生异常综合征及１２例再障患者，细胞系ＨＬ－６０作阳性对照，５例正常人骨髓作正常对照组。     

降钙素基因高甲基化与恶性血液病

降钙素基因及其甲基化 降钙素(calcitonin,CT)基因,又叫降钙素/α-降钙素基因相关肽(CT/α-CGRP)基因,定位于染色体11p15,长约39 kb,转译产物为CT和α-CGRP。1989年,Broad等详细分析了CT基因位点,其结构特点如下:①CT基因包含6个外显子,5’端有一个约1.8kb的侧翼区(flanking region);②第1,2,3和4外显子拼接产生CT mRNA,第1,2,3,5和6外显子拼接产生α-CGRP     

HpaⅡ—PCR检测急性白血病降钙素基因高度甲基化

应用聚合酶链反应结合ＨｐａⅡ限制性内切酶消化法检测７８例急性白血病患者降下素基因的甲基化状态。病例组待检细胞ＤＮＡ经ＨｐａⅡ消化后，再用两对ＣＴ基因特异性引物作ＰＣＲ扩增，分别产生长度为５６６ｂｐ和１．４ｋｂ特异片段。     

以降钙素基因高度甲基化为分子基因标志检测白血病微量残留病

目的:探讨以降钙素基因高度甲基化为白血病克隆的分子基因标志,检测白血病微量残留病,并预测预后的可能性。方法:用限制性内切酶消化 DNA,应用多聚酶链反应(PCR)技术检测29例急性白血病和8例慢性粒细胞白血病急变患者的降钙素基因的甲基化程度。对降钙素基因高度甲基化阳性者,以降钙素基因高度甲基化为白血病克隆的分子基因标志,应用PCR技术定期追踪检测骨髓微量残留病。结果:20例白血病完全缓解后均存在微量残留病。完全缓解后微量残留病持续阳性或转阴后再次出现阳性,提示将发生骨髓复发,能提早2～11个月预示疾病的复发。微量残留病较早转阴并持续长期阴性者可能获得长期生存。结论:以降钙素基因高度甲基化为白血病克隆的分子基因标志,应用PCR 技术能起到监测白血病骨髓微量残留病的作用,为预测白血病的预后开辟了一条新途径。     

降钙素及其基因高甲基化在血液恶性肿瘤中的诊断价值

本文综述降钙素族与急性白血病的关系，降钙素基因高甲基化与血液恶性疾病的关系及其发生机理和测定原理，以及降钙素基因高度甲基化作为一分子基因标志用来检测残留微小白血病病灶和预示疾病的发展。     

PCR检测恶性血液病降钙素基因高度甲基化

以甲基化敏感酶（ＨｐａⅡ）消化ＤＮＡ，应用ＰＣＲ扩增方法敏感地检测了７４例恶性血液病病人降钙素（ＣＴ）基因的甲基化程度，发现７０％（７／１０）ＡＬＬ，７２．７％（１６／２２）ＡＮＬＬ，５２％（１２／２３）ＣＭＬ，８０％（８／１０）ＭＤＳ，３例（３／３）恶性淋巴瘤（ＭＴ）和１例（１／１）恶性组织细胞增生症（ＭＨ）病人出现ＣＴ基因高度甲基化阳性。结果表明，ＣＴ基因高度甲基化可作为恶性血液病恶性克隆增殖     

恶性血液病降钙素基因高度甲基化的研究

目的 探讨降钙素(CT)基因高度甲基化在恶性血液病中的临床意义。方法 用限制性内切酶(HPaⅡ)消化 DNA,应用多聚酶链反应(PCR)技术检测了73例恶性血液病和对照组6例正常人以及24例非恶性血液病的 CT 基因的甲基化程度。结果 85.7%(12/14)急性淋巴细胞白血病(ALL)、60%(9/15)急性非淋巴细胞白血痛(ANLL)、80%(8/10)慢性粒细胞白血病(CML)、33.3%(5/15)淋巴瘤、2例(2/5)骨髓增生异常综合征(MDS)、1例(1/2)恶性组织细胞病(MH)、1例(1/3)慢性淋巴细胞白血病(CLL)和1例(1/9)多发性骨髓瘤(MM)的病人出现 CT基因高度甲基化阳性。而对照组6例正常人和24例非恶性血液病无1例阳性。结论 CT 基因高度甲基化可作为恶性血液病恶性克隆增殖的分子基因标志,为恶性血液病的诊断、微小残留病的监测及预示疾病的发展开辟了一条新途径。     

HpaⅡ—PCR检测小儿急性白血病降钙素基因高度甲基化

应用聚合酶链反应（ＰＣＲ）结合ＨｐａⅡ限制性内切酶消化法（ＨｐａⅡ－ＰＣＲ）检测５８例急性白血病（ＡＬ）患儿降钙素（ＣＴ）基因的甲基化状态。病例组待检细胞ＤＮＡ经ＨｐａⅡ消化后，再用两对ＣＴ基因特异性引物作ＰＣＲ扩增，分别产生长度为５６６ｂｐ和１．４ｋｂ特异片段。急性淋巴细胞白血病阳性率７１．４％（２５／３５），急性非淋巴细胞白血病７８．２％（１８／２３）。敏感性达１０－３。证明ＣＴ基因５′高度甲基化是白血病细胞克隆的特异标志。本课题受卫生部、四川省人民医院出国人员基金资助     

HpaⅡ—PCR检测急性白血病降钙素基因高度甲基化

应用聚合酶链反应(PCR)结合HpaⅡ限制性内切酶消化法(HpaⅡ—PCR)检测78例急性白血病(AL)患者降钙素(CT)基因的甲基化快态。病例组待检细胞DNA经 HpaⅡ消化后,再用两对CT基因特异性引物作 PCR扩增,分别产生长度为 566 bp和1.4 kb特异片段。急性淋巴细胞白血病阳性率 68.8％(33/48),急性非淋巴细胞白血病73.3％(22/30),敏感性达10~(-3)。证明CT基因5’高度甲基化是白血病细胞克隆的特异标志。本方法对恶性血液病的诊断治疗及其微小残留病(MRD)的检测都具有重要意义。     

小儿急性白血病患者血浆降钙素基因相关肽的变化

1982年由Ａｍａｒａ等发现降钙素基因相关肽(ＣＧＲＰ)以来,业已证明它具有广泛而重要的生理作用。过去主要关注它对心血管系统的影响。Ｐｆｌ櫣ｇｅｒ等于10年前报道了在急性白血病(ＡＬ)患者中,血浆ＣＧＲＰ升高者比例较高。我们观察了ＡＬ患儿中ＣＧＲＰ的变化,现报道如下。对象和方法1　研究对象11　急性白血病组:共49例,系1996年6月至1997年6月经骨髓检查确诊为ＡＬ的患儿。急性淋巴细胞白血病(ＡＬＬ)25例,其中标危型22例,高危型3例;初治9例,复发5例(该14例经诱导化疗完全缓解5例),巩固治疗11例;男19例,女6例,平均年龄(69±45)岁(5个…     

带有lacZ基因标志的大鼠粒细胞白血病细胞在微量残留白血病研究…

采用带有外源性β－半乳糖苷酶（ｌａｃＺ）基因标志的大鼠粒细胞白血病细胞ＬＴ１２ｎｌ接种ＢＮ大鼠，９天后给予大剂量环磷酰胺治疗，诱导出微小残留白血病状态。通过对骨髓细胞的Ｘ－ｇａｌ染色和白血病细胞集落培养，发现化疗早期虽有白血病细胞存在，但无增殖能力，是一种非功能性细胞，其中的绝大多数很快死亡；随病程的发展，白血病细胞的增殖能力逐渐增强。病理形态学动态观察发现白血病的复发由白血病细胞灶起始，其大小和     

PCR检测骨髓增生异常综合征降钙素基因的高度甲基化

ＰＣＲ检测骨髓增生异常综合征降钙素基因的高度甲基化禹华玮刘祥荣谭齐贤乔宏降钙素（ＣＴ）基因位于人类１１号染色体短臂１１ｐ１５。约９０％的非霍奇金Ｔ和Ｂ细胞淋巴瘤和９５％的急性非淋巴细胞白血病（ＡＮＬＬ）的肿瘤细胞，其ＣＴ基因５′端ＣＣＧＧ位点高度甲基...     

p73和DAPK基因启动子区CpG岛在不同类型白血病细胞基因组中存在特异甲基化位点的临床研究

目的探讨死亡相关蛋白激酶(DAPK)与肿瘤抑制基因p73基因启动子区Cp G岛在不同类型白血病细胞基因组中存在特异甲基化位点的情况。方法通过亚硫酸氢盐测序法,研究DAPK与p73基因启动子区Cp G岛在单核细胞系白血病细胞株U937、淋巴细胞系Jurkat、粒细胞系HL-60和正常人白细胞基因组中的甲基化状态,收集测序结果,并对不同Cp G位点甲基化率进行计算;对上述4种细胞来源基因组中的DAPK与p73基因Cp G岛甲基化模式图进行绘制,并对其特异甲基化位点组合进行筛选。在40例正常对照、82例白血病患者外周血标本和白血病细胞株中,采用甲基化特异性PCR法对基因异常甲基化模式的诊断价值进行验证。结果测序含有亚硫酸氢盐测序法产物转化质粒的菌株共106个,且成功绘制DAPK与p73基因Cp G岛甲基化模式图。白血病细胞株DAPK与p73基因去甲基化程度较正常细胞基因组明显升高。在白血病粒细胞系HL-60中,DAPK基因与其它白血病细胞株甲基化状态明显不同。在白血病细胞株和正常细胞中,p73基因甲基化状态完全相反。DAPK基因甲基化检测可有效鉴别粒细胞系与淋巴细胞系白血病,其对急性非淋巴细胞白血病临床诊断的敏感度为68. 57%(24/35),特异度为100. 00%(27/27),准确性为82. 26%(51/62); p73基因甲基化检测可有效鉴别白血病细胞与正常细胞,其对白血病的临床诊断敏感度为29. 03%(18/62),特异度为100. 00%(40/40),准确性为56. 86%(58/102)。结论在不同临床分型的白血病细胞基因组中,DAPK与p73基因启动子区Cp G岛具有特异性的甲基化位点,可用于初步评估白血病不同分型,因此可作为临床重要的潜在肿瘤标志物,能够为后期探究白血病肿瘤甲基化标志物提供可行的检测方法和良好的实验基础。     

白血病等恶性血液病中p15基因甲基化的检测及临床意义

p15基因位于染色体 9p2 1,是一种肿瘤抑制基因 ,其编码产物p15蛋白特异地抑制细胞周期素依赖激酶 4 6 (CDK4 6 ) ,使细胞不能通过G1 期和S期间的监测点 ,从而停留在G1 期。血液系统恶性肿瘤有高频率的p15基因失活[1 ] ,研究发现 5′启动子及转录启始区域内的CpG岛的异常甲基化是p15基因的主要失活方式[2 ] 。Herman等[3] 研究出甲基化特异性聚合酶链反应 (MSP) ,为基因CpG岛甲基化研究提供了有效的方法。对象和方法1　研究对象　急性白血病患者共 4 0例 ,男 2 2例 ,女 18例 ,年龄 14～ 76岁 ,均符合FAB诊断和分型标准 ;其中初治或…     

用于检测残留白血病细胞的基因标志

用于检测残留白血病细胞的基因标志四川省卫生管理干部学院（成都６１００４１）陶元鋆残留白血病细胞或称白血病微小残留病（ＭＲＤ），是指白血病经化疗或骨髓移植后达完全缓解（ＣＲ），骨髓中原始细胞已≤５％，但仍在体内残留的用传统方法检测不到的微量白血病细胞（...     

骨髓增生异常综合征降钙素基因甲基化的定量研究

目的：探讨降钙素（ＣＴ）基因高甲基化能否作为骨髓增生异常综合征（ＭＤＳ）向白血病转化的分子标志。方法：采用设有内、外参照的多聚酶链反应（ＰＣＲ），结合限制性内切酶和激光扫描技术，检测２７例ＭＤＳ和６例由ＭＤＳ转化的急性髓细胞白血病（ＡＭＬ）患者骨髓细胞的ＣＴ基因５′端甲基化率（ＣＴＭＲ）。结果：ＭＤＳ患者ＣＴＭＲ为３３．６５％±２３．３７％，显著高于对照组（８．０１％±４．２５％，Ｐ＜０．００１），其中ＲＡＥＢｔ组显著高于对照组和ＲＡ组，已随访３～１０年的ＲＡ患者５例均在正常范围，且无白血病转化。９例ＲＡＥＢｔ的ＣＴＭＲ均＞３０％，随访８例中７例于２个月内转化为ＡＭＬ。结论：ＣＴＭＲ对早期预测ＭＤＳ向白血病转化可能是一个有用的指标。     

p73基因与白血病

p73基因与经典的抑瘤基因p53高度同源。p73基因的过表达可诱导肿瘤细胞的生长阻滞并诱导其调亡。约1/3的急性淋巴细胞白血病和Burkitt淋巴瘤病人的p73基因由于高甲基化而表达缺失,但急性髓系白血病病人的p73表达水平高于正常白细胞。p73基因在白血病中的作用需要进一步的阐明。