舒拉明联合bcl-2基因反义寡核苷酸对前列腺癌细胞增殖的影响

[目的]探讨舒拉明联合bcl-2基因反义寡脱氧核苷酸对前列腺癌细胞(LNCaP细胞)增殖的影响.[方法]采用3H-TdR掺入法观察舒拉明和反义寡脱氧核苷酸对LNCaP细胞增殖的影响,流式细胞荧光免疫法检测bcl-2基因表达,放射免疫分析法检测PSA表达.[结果]舒拉明和反义寡脱氧核苷酸单独作用LNCaP细胞后,细胞3H-TdR掺入率、bcl-2蛋白表达以及PSA水平明显低于对照组,呈现剂量依赖效应,二者联合应用抑制作用明显增强.[结论]舒拉明和bcl-2基因反义寡脱氧核苷酸联合应用,可明显增强对前列腺癌细胞增殖的抑制,减少舒拉明用药剂量.     

能抑制乳腺癌细胞生长的基因被发现

衡阳医学院生理学教研室研究人员经过研究发现，ｃ－ｍｙｃ反义寡脱氧核苷酸能抑制人乳腺癌ＭＣＦ－７细胞系生长和增殖。肿瘤的发生是细胞增殖和凋亡失调的结果，ｃ－ｍｙｃ基因是调控细胞增殖和凋亡的一个重要基因。为了探讨研究反义寡脱氧核苷酸对人乳腺癌细胞生长及其...     

原位杂交技术检测增殖细胞核抗原反义寡脱氧核苷酸对BIU-87细胞体外增殖的影响

运用原位杂交技术检测脂质体介导增殖细胞核抗原(PCNA)反义寡脱氧核苷酸抑制人膀胱癌细胞BIU-87PCNA mRNA的表达水平.结果表明脂质体介导PCNA反义寡脱氧核苷酸处理组中BIU-87细胞PCNA mRNA的表达水平明显低于对照组.结果提示脂质体介导PCNA反义寡脱氧核苷酸可抑制人膀胱癌细胞BIU-87体外增殖活性,其抑制作用可通过阻断PCNA蛋白表达来实现.     

HTR反义寡核苷酸抑制鼻咽癌细胞生长及对其致瘤能力的影响

目的:研究针对端粒酶RNA(Human telomerase RNA,HTR)的反义寡核苷酸(Antisense oligodeoxynucleotide,ASODN)抑制鼻咽癌HNE-1细胞株生长及对其致瘤能力的影响.方法:PCR-ELISA法检测细胞内端粒酶活性.MTT法及平板集落形成实验评价细胞增殖活性.电镜观察细胞超微结构的改变.将经AS-ODN处理的HNE-1细胞接种于裸鼠皮下,观察其致瘤情况.结果:HTR反义寡核苷酸作用HNE-1细胞后,细胞端粒酶活性受到明显抑制;细胞增殖受到明显抑制,此作用有剂量、时间依赖性和序列特异性;电镜发现少量细胞肿胀坏死,但未见细胞凋亡和大片坏死灶.AS-ODN降低了HNE-1细胞的致瘤能力,裸鼠成瘤时间延长,肿瘤生长速度变慢.结论:HTR反义寡核苷酸可通过抑制鼻咽癌HNE-1细胞端粒酶活性而抑制细胞的生长,并抑制其对裸鼠的致瘤能力.     

MMP-2反义寡脱氧核苷酸对人膀胱癌 BIU-87细胞株侵袭能力影响的初步研究

目的应用反义核酸技术,探讨阳离子脂质体介导的MMP-2反义寡脱氧核苷酸对膀胱癌细胞侵袭能力的影响。方法人工设计合成一段硫代修饰型互补于MMP-2的反义寡脱氧核苷酸序列(antisenes oligodeoxynucleotide,ASODN),并设计与其碱基组成相同,但碱基顺序随机排列的无义寡脱氧核苷酸序列(nonsense oligodeoxynucleotide,NS-ODN)作为对照。以阳离子脂质体介导将不同浓度的ASODN及NS-ODN转染至膀胱癌细胞系BIU-87细胞中,应用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)技术检测转染前后BI-U-87细胞中MMP-2mRNA表达;以四甲基偶氮唑蓝(MTT)试验检测细胞的增殖能力;采用MTT比色法与transwell小室侵袭试验相结合的方法测定肿瘤细胞的体外侵袭力。结果转染MMP-2ASODN可以显著降低BIU-87细胞中的MMP-2mRNA表达。MMP-2ASODN处理细胞24h,于1.0μmol/L的MMP-2ASODN浓度条件下即可显著抑制BIU-87细胞的体外侵袭,而且这种抑制作用随ASODN浓度的增加而增强。结论以MMP-2反义寡脱氧核苷酸阻遏MMP-2在膀胱癌BIU-87细胞株中表达可以成功地抑制BI-U-87细胞侵袭能力,提示应用反义核酸技术等方法抑制MMP-2活性可能可以应用于临床治疗膀胱癌。     

原位杂交技术检测增殖细胞核抗原反义寡脱氧核苷酸对BIU—87细胞体外增殖的影响

运用原位杂交技术检测脂质体介导增殖细胞核抗原（PCNA）反义寡脱氧苷酸抑制人膀胱癌细胞BIU－87 PCNA mRNA的表达水平。结果表明脂质体介导PCNA反义寡脱氧核苷酸处理组中BIU－87细胞PCNA mRNA的表达水平明显低于对照组。结果提示脂质体介导PCNA反义寡脱氧核苷酸可抑制人膀胱癌细胞BIU－87体外增殖活性,其抑制作用可通过阻断PCNA蛋白表达来实现。     

hCG-β反义寡脱氧核苷酸对人绒癌JAR细胞hCG分泌作用的研究

目的 :探讨人绒毛膜促性腺激素 -β反义寡脱氧核苷酸 (h CG-β AS-ODN)抑制 JAR绒癌细胞株 h CG的分泌。方法 :设计 h CG-β m RNA的 AS-ODN,作用于体外培养的 JAR绒癌细胞株 ,细胞浓度为 1× 1 0 5/个。ODN的浓度分别为 5 μmol/ L、1 0 μmol/ L、2 0 μmol/ L 与 JAR细胞共培养在96孔培养板中 ,2 4h、48h、72 h和 96 h,取上清测 h CG-β含量。结果 :1 0μmol/ L浓度的 h CG-βAS-ODN对 JAR细胞在体外作用 2 4h,h CG-β分泌呈下降趋势 ,48h下降达 5 7% ,此后 ,抑制作用略有减弱 ,而 2 0 μmol/ L的正义和随机的 ODN,分泌也受抑制。结论 :5～ 1 0 μmol/ L 的 AS-ODN明显抑制体外培养的 h CG分泌细胞 h CG蛋白的分泌 ,且该 AS-ODN有希望作为 h CG分泌抑制物应用。     

C-myc反义寡脱氧核苷酸抑制人乳腺癌细胞系生长的研究

采用胎盼蓝染色法，３Ｈ－ＴｄＲ掺入试验和流式细胞计数分析技术研究了ｃ－ｍｙｃｍＲ－ＮＡ帽区反义寡脱氧核苷酸对人乳腺癌ＭＣＦ－７细胞系增殖及其ｃ－ｍｙｃ蛋白表达的影响，结果表明：ｃ－ｍｙｃ反义寡脱氧核苷酸能抑制人乳腺癌ＭＣＦ－７细胞系生长和增殖，这种抑制作用有明显的剂量依赖性，同时也能抑制ＭＣＦ－７细胞ｃ－ｍｙｃ蛋白的表达。此外，本文对ｃ－ｍｙｃ基因调控细胞增殖及反义核苷酸的可能机制进行了探讨。     

双嵌段磷酸胆碱基聚合物作为c-myc AS-ODN基因运输载体研究

目的 探讨双嵌段磷酸胆碱基聚合物MPC30-DEA70 作为反义寡核苷酸（AS-ODN）运输载体的安全性和有效性.方法 将载体MPC30-DEA70（N）与c-myc AS-ODN（P）在不同N/P比值的条件下复合,应用DNA凝胶电泳法、荧光显微镜、流式细胞术和四甲基偶氮唑盐（MTT）法对复合物溶液进行检测,观察复合物在HeLa细胞中的转染情况.结果 c-myc AS-ODN能与载体MPC30-DEA70电性中和,N/P比值越大复合物正电性越强;MPC30-DEA70/AS-ODN复合物能够进入细胞,转染效率随着N/P比值增大而增大;同时随着N/P比值增大复合物对细胞的增殖抑制作用显著增强.结论 MPC30-DEA70可以有效负载和运输c-myc AS-ODN,抑制HeLa细胞增殖,是一种新型的、安全有效的非病毒类转基因载体.     

EGFR靶向纳米载体荷载c-erbB2反义寡脱氧核苷酸对人乳腺癌SK-BR3细胞的体外研究

目的：探讨利用表皮生长因子偶联牛血清白蛋白纳米载体介导c-erbB2反义寡脱氧核苷酸以增加人乳腺癌SK-BR3细胞对其的摄取.方法：采用超声乳化-化学交联及羧和反应制备EGF偶联白蛋白靶向纳米载体.99mTc通过乙酰双半胱氨酸标记于c-erbB2反义寡脱氧核苷酸,研究其稳定性,结合靶基因的特异性,并探讨人乳腺癌SK-BR3细胞对其的摄取及滞留.结果：EGF靶向纳米载体包载99mTc-乙酰双半胱氨酸-c-erbB2反义寡脱氧核苷酸组的摄取率及滞留率均高于正义寡脱氧核苷酸组和无义寡脱氧核苷酸组.同时99mTc-乙酰双半胱氨酸-c-erbB2反义寡脱氧核苷酸使用纳米载体荷载组的摄取率及滞留率均高于未使用纳米载体组,差异有统计学意义（P〈0.05）.结论：EGF靶向纳米载体能够提高乳腺癌SK-BR3细胞对99mTc-乙酰双半胱氨酸-c-erbB2反义寡脱氧核苷酸的摄取和滞留,能达到更好的靶向作用.     

c-myc反义寡核苷酸对HL-60细胞增殖及c-myc基因表达的影响

目的：观察c-myc基因反义寡核苷酸(ASODN)对HL-60细胞增殖及c-myc基因表达的抑制作用．探讨ASODN作为药物进行白血病基因治疗的可行性、方法：应用c-myc反义寡核苷酸封闭HL-60细胞c-myc基因、RTPCR方法检测该基因表达抑制情况．流式细胞仪进行细胞周期分析,倒置显微镜观察细胞形态变化．绘制细胞生长曲线,MTT法检测细胞增殖状态。结果：c-myc基因反义寡核苷酸转染HL-60细胞后,c-myc基因表达明显受抑;S期细胞比值由55.6％降至16．7％;细胞生长受抑,增殖能力减弱,其抑制作用具有序列特异性及剂量依赖性。结论c-myc基因反义寡核苷酸对HKL-60细胞增殖及c-myc基因的表达具有明显的抑制作用,有望成为抑制白血病细胞增殖的核酸药物。     

反义寡核苷酸抑制端粒酶活性对喉癌细胞Hep-2增殖的影响

目的:检测端粒酶的反义寡核苷酸对喉癌细胞的影响。Hep-2方法:采用法及平板集落形成实验检测靶向于端MTT粒酶的反义寡核苷酸对喉癌细胞株增殖的抑制作用。用法检测反义寡核苷酸对喉癌细胞株细胞内端粒Hep-2 PCR-ELISAHep-2酶活性的影响。结果:反义寡核苷酸明显抑制了喉癌细胞的增殖,此作用有剂量、时间依赖性。反义寡核苷酸可抑制喉Hep-2癌细胞端粒酶活性,此作用有浓度依赖性。结论:靶向于端粒酶的反义寡核苷酸能抑制喉癌细胞的增殖。Hep-2     

7-二氟亚甲基-5, 4'-二甲氧基染料木黄酮对宫颈癌细胞增殖和凋亡的影响及其机制

目的：检测7-二氟亚甲基-5, 4'-二甲氧基染料木黄酮(7-difluoromethoxy-5, 4'-dimethoxygenistein,DFMG)对宫颈癌HeLa细胞增殖和凋亡的影响并探讨其可能机制。方法：体外培养宫颈癌HeLa细胞,MTT法检测HeLa细胞的增殖;AO/EB染色检测HeLa细胞凋亡形态学改变;FCM检测HeLa细胞凋亡率;DNA琼脂糖电泳检测HeLa细胞凋亡的DNA条带;RT-PCR和Western 印迹检测DFMG对HeLa细胞凋亡相关蛋白表达的影响。结果：DFMG在体外呈浓度(0.25~64 μg/mL)和时间(24~72 h)依赖性抑制HeLa细胞增殖,其作用48 h的IC50值为4.62 μg/mL,HeLa细胞出现典型的凋亡形态学改变,典型的凋亡DNA条带,凋亡率呈浓度依赖性增高,伴随c-myc mRNA和蛋白表达增高,其下游蛋白bax,cyto-c,caspase-9表达增高,而bcl-2蛋白表达降低。用siRNA干扰沉默c-myc基因,能部分抵消DFMG对HeLa细胞增殖抑制和凋亡诱导效应,而用c-myc cDNA转染HeLa细胞,则能协同DFMG对细胞增殖的抑制作用及对凋亡的诱导作用。结论：DFMG在体外具有抑制HeLa细胞增殖和诱导凋亡作用,其机制可能与钝化c-myc基因,启动线粒体凋亡途径有关。     

三氧化二砷对类风湿关节炎滑膜细胞的影响

目的类风湿关节炎(rheumatoid arthritis,RA)的滑膜B型细胞(成纤维细胞样细胞)是增殖滑膜的增殖细胞,表达c-myc基因。本项实验研究三氧化二砷(arsenic trioxide,As2O3)是否影响体外培养的RA滑膜B型细胞的增殖及c-myc基因表达。方法分离、培养RA滑膜B型细胞;用含As2O3浓度分别为2μmol/L和5μmol/L的培养液,分别作用于培养细胞24h和48h;采用流式细胞仪测定细胞死亡情况;采用流式细胞仪测定c-myc蛋白水平。结果2μmol/L As2O3和5μmol/L As2O3作用于RA滑膜B型细胞24h均可使死亡细胞百分率增加,2μmol/L As2O3致细胞死亡率高于5μmol/L As2O3致细胞死亡率,而48h死亡细胞百分率较24h减少,;5μmol/L As2O3作用于细胞48h促进RA滑膜B型细胞增殖,并使c-myc蛋白水平增高。结论As2O3依据作用时间和浓度的不同既可诱导RA滑膜B型细胞死亡,又可促进RA滑膜B型细胞增殖,并上调c-myc基因表达。     

Mcl-1反义寡核苷酸调控Hela细胞生物学功能及对化疗敏感性的影响

目的:探讨髓样细胞白血病-1(myeloid leukemia-1,Mcl-1)基因对宫颈癌Hela细胞增殖与凋亡的调控作用及其对宫颈癌化疗敏感性的影响.方法:通过脂质体瞬时转染Mcl-1反义寡核苷酸(antisense oligonucleotide,AS-ODN)至Hela细胞;用Western印迹检测Mcl-1表...     

全反式维甲酸对宫颈癌细胞的生物学作用

目的:探讨全反式维甲酸(all-trans-retinoic acid,ATRA)宫颈癌HeLa细胞增殖与分化的影响及其作用途径。方法:用MTT法检测ATRA作用下HeLa细胞增殖,电镜下观察细胞超微结构,集落形成实验观察集落形成能力,流式细胞术检测细胞周期,半定量RT-PCR检测c-myc mRNA水平变化。结果:ATRA能抑制HeLa细胞增殖,诱导分化,降低c-myc mRNA的水平。结论:ATRA对宫颈癌HeLa细胞的生物学作用是多方面的。     

慢性阻塞性肺病患者肺内细胞增殖与凋亡的研究

目的研究细胞增殖、凋亡及其调节基因在慢性阻塞性肺病（ＣＯＰＤ）继发肺动脉高压中的作用。方法应用免疫组化及原位缺口末端ＤＮＡ碎片标记技术检测ＣＯＰＤ患者肺内细胞增殖及凋亡,并用Ｎｏｒｔｈｅｒｎ杂交检测ＣＯＰＤ患者肺内ｃｍｙｃ、ｂｃｌ２及ｐ５３基因表达。结果ＣＯＰＤ患者及对照组肺内（包括肺小血管壁）均存在着一定比率的增殖及凋亡细胞。两组相比,ＣＯＰＤ组增殖指数增高而凋亡指数减少,增殖与凋亡比值显著增高,约为对照组４倍。在ＣＯＰＤ患者肺内,增殖细胞绝大部分位于肺小血管壁,而凋亡细胞在肺小血管壁上较对照组少见。ｃｍｙｃ、ｂｃｌ２及蛋白表达在ＣＯＰＤ肺内比对照组明显增高,主要在肺小血管壁。ｃｍｙｃｍＲＮＡ表达量约为对照组３倍,ｂｃｌ２ｍＲＮＡ三条带表达量约为对照组２５～３５倍,ｐ５３基因ｍＲＮＡ表达量比对照组显著减少,约为１／３倍。结论可能由于ｃｍｙｃ、ｂｃｌ２及ｐ５３基因异常表达所致的细胞增殖与凋亡异常参与了ＣＯＰＤ时的肺血管结构改建的调节,亦即参与了ＣＯＰＤ继发的肺动脉高压过程     

壳多糖抑制兔主动脉平滑肌细胞增殖机制的探讨

目的：探讨壳多糖抑制平滑肌细胞（SMC）增殖的作用机制。方法：通过随机引物法标记c-myc探针，应用Northern印迹技术，观察壳多糖对小牛血清（NBS）刺激的兔主动脉SMCc-mycmRNA表达的影响。结果：当NBS刺激血管SMC24h后，c-mycmRNA表达较对照组明显增高；当壳多糖与NBS合用时，c-mycmRNA表达较NBS组明显降低。结论：壳多糖有可能通过抑制NBS刺激的血管SMCc-mycmRNA表达而达到抑制血管SMC增殖的作用。     

Inhibitory effect and mechanism of chuanxiongzine on multiplication of VSMC

Objective: To study the inhibitory effect of chuanxiongzine on vascular smooth muscle cell (VSMC) proliferation and explore its molecular biology basis. Methods: we selected the VSMC cultured 4～8 generation from rat aorta thoracalis as research object.The objects were divided into four groups( Ⅰ )control group, ( Ⅱ )chuanxiongzine(50 μg/ml)group, ( Ⅲ )chuanxiongzine (100 μg/ml) group and( Ⅳ ) chuanxiongzine (200 μg/ml) group. The inhib itory effect of chuanxiongzine on VSMC proliferation was investigated by cell counting, MTT and 3H-TdR incorporation assay. In order to illuminate the molecular biology mechanism of chuanxiongzine inhibiting VSMCs proliferation, the expression of proliferating cell nuclear antigen (PCNA) and C-myc were detected.Results: Chuanxiongzine could inhibit the proliferation of VSMC significantly in a dose- and time-dependent manner, compared with control group (P ＜ 0.05). The expression of PCNA and c-myc were inhibited obviously and correlated with the concentration of chuanxiongzine (P ＜ 0.05). Conclusion: Chuanxiongzine may play a considerable role in VSMC proliferation process. The inhibitory effect of chuanxiongzine in a dose- and time-dependent manner can be realized via down regulating the expression of PCNA and c-myc. In this study, The great theoretical fundament about Chinese medicine, which is used to treat atherosclerosis (AS), has been obtained.     

重组腺病毒介导的反义c-myc基因对HL-60细胞增殖及细胞周期的影响

目的:观察重组反义c-myc腺病毒(Ad-Asc-myc)对急性早幼粒白血病HL-60细胞周期及增殖的影响,探讨其作用的分子机制.方法:将Ad-Asc-myc与鱼精蛋白硫酸盐(Protamine sulfate)混合后转染HL-60细胞,MTF法观察细胞生长曲线,流式细胞仪检测细胞增殖周期,RT-PCR检测c-myc转录变化,免疫细胞化学检测c-myc及增殖细胞核抗原(PCNA)表达变化.结果:Ad-Asc-myc转染HL-60细胞后,细胞生长受抑,细胞周期呈现G1期延长、S期缩短,增殖指数逐渐下降,出现大量凋亡细胞.c-myc基因转录及表达下降,PCNA表达降低.结论:Ad-Asc-myc可使HL-60细胞的生长减缓,增殖能力降低,凋亡细胞增加.其生物学活性与HL-60细胞c-myc和PCNA表达受抑有关.