金花茶对衰老大鼠脂代谢及肝细胞凋亡的影响

目的 探讨金花茶调节衰老大鼠脂代谢及抗肝凋亡的作用.方法 健康雄性SD大鼠40只随机分为4组.1组为空白对照组,2～4组予D-半乳糖腹腔注射法建立大鼠亚急性衰老模型后,其中2组作为衰老模型组,3、4组再分别以高、低浓度金花茶灌胃干预40天.测大鼠尾静脉血总胆固醇、甘油三酯、高密度脂蛋白和低密度脂蛋白含量,测肝脏组织总胆固醇、甘油三酯含量和Bcl-2、Bax mRNA表达水平.结果 与衰老模型组相比,高、低浓度金花茶干预组大鼠血清高密度脂蛋白浓度和Bcl-2 mRNA显著升高(P＜0.05);血清总胆固醇、甘油三酯、低密度脂蛋白浓度和肝组织总胆固醇、甘油三酯含量、Bax mRNA表达水平显著降低(P＜0.05).高、低浓度金花茶组间比较,上述指标有统计学差异(P＜0.05).结论 金花茶可调节衰老大鼠的血脂,减少肝脏脂肪堆积,降低肝细胞凋亡水平,以降低动脉粥样硬化发病风险.     

脑神康胶囊对培养大鼠海马神经元缺氧复氧损伤的保护作用

目的 观察益气补肾中药脑神康胶囊对体外培养大鼠海马神经元缺氧复氧损伤的保护作用.方法 原代培养大鼠海马神经元,随机分为对照组,损伤组,脑神康胶囊高、中、低浓度组.对照组正常培养,损伤组及脑神康胶囊各浓度组建立缺氧复氧损伤模型,其中脑神康胶囊各浓度组于复氧时换以不同浓度(5%、10%、20%)含药血清的培养液,检测各组细胞超氧化物歧化酶(SOD)、乳酸脱氢酶(LDH)活力及丙二醛(MDA)含量,测定细胞存活率及凋亡率,RT-PCR法检测bcl-2 mRNA和bax mRNA的表达及两者比值.结果 与对照组比较,损伤组SOD活性及细胞存活率均明显下降(P＜0.01),MDA含量、LDH活力及细胞凋亡率均显著升高(P＜0.01),bcl-2 mRNA表达下降,bax mRNA表达升高,bcl-2/bax降低(均P＜0.01);脑神康胶囊各浓度组均较损伤组SOD活性及细胞存活率均升高(P＜0.01),MDA含量及细胞凋亡率均降低(P＜0.01),LDH活力及bax mRNA表达降低(P＜0.01,P＜0.05),bcl-2 mRNA表达升高,bcl-2/bax增加(均P＜0.01),且呈明显的剂量依赖性.结论 脑神康胶囊对海马神经元缺氧复氧损伤有明显的保护作用,其作用机制可能与其提高神经元抗氧化能力、调节凋亡相关蛋白、减少凋亡密切相关.     

肾气丸对衰老大鼠睾丸抗氧化能力和生精细胞凋亡的影响

目的观察肾气丸对衰老大鼠睾丸抗氧化能力和生精细胞凋亡的影响。方法 Wistar大鼠分成4组,制备D-半乳糖亚急性衰老大鼠模型,分别灌胃相应剂量的肾气丸或生理盐水;6 w后,检测血清睾酮和睾丸组织超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)水平及睾丸凋亡曲细精管数和凋亡细胞百分率。结果与正常组比较,模型组比较正常组,大鼠血清睾酮和睾丸组织SOD水平显著下降(P<0.01),睾丸组织MDA水平及凋亡曲细精管数和凋亡细胞百分率均显著升高(P<0.01);肾气丸可明显升高衰老模型大鼠血清睾酮和睾丸组织SOD水平(P<0.05或P<0.01),明显降低睾丸组织MDA水平及凋亡曲细精管数和凋亡细胞百分率(P<0.05,P<0.01)。结论肾气丸可通过提高衰老大鼠血清睾酮水平、增强睾丸组织抗氧化能力及降低其生精细胞的凋亡指数,发挥延缓性腺衰老的作用。     

促红细胞生成素对脂肪肝大鼠模型肝脏缺血再灌注损伤凋亡基因bcl-2、bax mRNA表达的影响

目的探讨促红细胞生成素(EPO)对脂肪肝大鼠模型肝脏缺血再灌注损伤凋亡基因bcl-2、bax mRNA表达的影响。方法成年雄性SD大鼠100只,高脂饮食饲料喂养12周。造模成功后,软件法随机将脂肪肝大鼠平均分为5组,每组18只:假手术组(SHAM)组、缺血再灌注(IR)组、IR+EPO低剂量组(EPO-1组)、IR+EPO中剂量组(EPO-2组)、IR+EPO高剂量组(EPO-3组)。IR模型通过术中完全阻断肝中叶及左肝叶血流建立,造成70%大鼠肝脏缺血,缺血时间控制在80 min。各组于缺血80 min再灌注1、3、6 h三时相处死,RT-PCR法检测并比较肝组织中bcl-2、bax mRNA的表达水平。计量资料多组间比较采用单因素方差分析,进一步两两比较采用LSD-t法。结果与IR组相比,EPO-1、EPO-2、EPO-3组肝脏中bcl-2 mRNA表达水平在各时相(1、3、6 h)的表达水平均明显升高(P值均0. 05); bax mRNA的表达水平均明显下降(P值均0. 05)。SHAM组、EPO组肝组织中bcl-2/bax mRNA的比值在各时相(1、3、6 h)均显著大于IR组(P值均0. 05)。结论 EPO对脂肪肝大鼠肝脏缺血再灌注损伤具有保护作用。其可能是通过促进抗凋亡基因bcl-2 mRNA的表达和抑制促凋亡基因bax mRNA的表达实现。高剂量EPO的抗细胞凋亡作用效果优于中低剂量。     

p75NTR介导神经细胞凋亡对老龄鼠学习记忆的影响及补肾方药的作用

目的观察左归丸及熟地黄对衰老大鼠学习记忆能力以及与凋亡相关的脑源性神经生长因子前体(pro BDNF)、p75NTR、sortilin、caspase-3、bcl-2及bax蛋白表达的影响。方法以大剂量D-半乳糖腹腔注射复制大鼠衰老模型,随机分为衰老模型组、衰老左归组、衰老熟大组和衰老熟小组,另设青年对照组。采用Morris水迷宫法观察大鼠空间学习记忆能力、透射电镜检测大鼠海马神经细胞凋亡情况、Western印迹法观察海马组织pro BDNF、p75NTR、sortilin、caspase-3、bcl-2及bax蛋白表达变化。结果与青年对照组比较,衰老大鼠空间学习记忆能力明显降低(P0.05);神经细胞存在凋亡,海马组织pro BDNF、caspase-3、bax蛋白表达显著增加(P0.05),p75NTR及sortilin蛋白表达有升高的趋势,bcl-2蛋白表达明显减少(P0.05)。左归丸及熟地黄对上述指标的异常变化存在一定的调节作用。结论左归丸及熟地黄可能是通过调节凋亡相关分子的表达,从而改善衰老大鼠空间学习记忆能力,延缓衰老。     

灰树花多糖对四氯化碳致急性肝损伤的保护作用

目的探讨灰树花多糖(Polysaccharide of Grifola Frondosa,PGF)对四氯化碳(Carbon tetrachloride,CCl4)急性肝损伤的保护作用。方法 72只昆明种小鼠随机分为8组:正常对照组、CCl4损伤组、PGF保护组(4.5、9、18、36、72、144mg/kg),每组9只。CCl4腹腔注射建立小鼠急性肝损伤模型。观察肝组织病理学改变;测定血清丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天门冬氨酸氨基转移酶(AST)的活性,肝组织匀浆测超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)的含量及凋亡相关蛋白bcl-2、bax的表达。结果与CCl4损伤组比较,PGF保护组肝组织病理改变明显减轻;血清ALT、AST活性明显降低(P0.05);肝组织匀浆SOD含量明显升高(P0.05);MDA含量明显降低(P0.05);凋亡相关蛋白bcl-2的表达量明显增加、bax的表达量明显降低。综合各指标以72mg/kg保护组效果最佳。结论PGF对CCl4急性肝损伤有明显保护作用,其机制可能与抑制脂质过氧化,清除自由基,调节凋亡相关蛋白bcl-2、bax的表达有关。     

天年饮对亚急性衰老大鼠睾丸生精细胞增殖与凋亡的影响

目的　观察天年饮对亚急性衰老大鼠血清超氧化物歧化酶 (SOD)活性、睾酮含量及睾丸生精细胞增殖与凋亡的影响。方法　 D-半乳糖连续腹腔注射制作亚急性衰老大鼠模型 ,检测各组大鼠天年饮灌胃前后血清 SOD的活性、睾酮的含量以及睾丸生精细胞增殖和凋亡的情况。结果　 D-半乳糖致亚急性衰老大鼠血清 SOD活性、睾酮含量及睾丸生精细胞 PCNA阳性表达率均明显下降 ,与正常组比较差异显著 (P<0 .0 1 ,P<0 .0 5) ;经天年饮灌胃后 ,三者均有明显提高。 D-半乳糖致亚急性衰老大鼠睾丸生精小管凋亡百分率及凋亡阳性细胞率均增高 ,与正常组比较差异显著 (P<0 .0 5) ;经天年饮灌胃后 ,二者均降低。结论　天年饮可显著提高亚急性衰老大鼠血清 SOD活性、睾酮含量及睾丸生精细胞 PCNA的表达水平 ,降低睾丸生精细胞的凋亡指数 ,因此 ,天年饮具有延缓性腺衰老的作用。     

液压脑损伤后老龄和幼龄大鼠NGF、bcl-2和bax基因表达差异及其意义

目的观察衰老因素对颅脑损伤后神经生长因子(NGF)和凋亡相关基因(bcl-2,bax)表达的影响,寻求改善老年颅脑损伤预后的新药物.方法采用侧方液压打击颅脑损伤模型,应用免疫组化和原位杂交方法,观察老龄(15个月以上)和幼龄(2～3个月)大鼠脑损伤后12 h脑内NGF、bcl-2、bax蛋白和mRNA表达水平的差异;使用β2受体激动剂克仑特罗(CLE)为干预手段,观察CLE对液压脑损伤后老龄和幼龄大鼠NGF、bcl-2和bax基因表达的影响.结果液压脑损伤后12 h老龄组大鼠伤侧皮质不仅NGF蛋白和mRNA表达低于幼龄组(P<0.05), 而且bcl-2/bax蛋白和mRNA表达比率也显著低于幼龄组(前者P<0.05,后者P<0.01),CLE可显著提高老龄大鼠NGF基因表达并从转录水平开始提高老龄大鼠bcl-2/bax比率.结论 NGF基因表达低下以及bcl-2/bax表达比率降低,提示老龄大鼠受损神经元自我修复和抗凋亡能力的减退;CLE可能具有促进受损神经元修复和抗凋亡的作用,并因此对老年颅脑损伤患者具有潜在的治疗价值.     

丹参、人参及蛤蚧组方对大鼠肺纤维化凋亡基因作用的研究

目的 研究丹参、人参及蛤蚧组方对博莱霉素致大鼠肺间质纤维化模型凋亡基因的表达,探讨该组方抗肺纤维化的作用机制.方法 SD雄性大鼠50只随机分为对照组、模型组、醋酸泼尼松组、治疗Ⅰ组(低剂量组:丹参83 mg/kg、人参50mg/kg及蛤蚧50mg/kg)及治疗Ⅱ组(高剂量组:丹参166mg/kg、人参50mg/kg及蛤蚧50 mg/kg);于第28天处死大鼠,RT-PCR 法检测大鼠肺组织bax及bcl-2基因mRNA表达水平,用单克隆抗体免疫组化法检测bax及bcl-2蛋白含量.结果 bax基因mRNA及蛋白在模型组、醋酸泼尼松组、治疗Ⅰ组及治疗Ⅱ组的表达明显升高,与对照组相比差异有统计学意义(P＜0.05);同时模型组升高幅度明显,治疗Ⅱ组升高幅度较低,两者相比差异有统计学意义(P ＜0.01);bcl-2基因mRNA及蛋白在醋酸泼尼松组、治疗Ⅰ组及治疗Ⅱ组的表达升高,并治疗Ⅱ组升高更明显,与模型组相比差异有统计学意义(P＜0.05).结论 丹参、人参及蛤蚧组方能通过调节细胞凋亡,下调bax活性,增强Bcl-2的活性,抑制细胞凋亡,减少纤维积聚和纤维化形成.     

姜黄素对实验性肝纤维化大鼠肝脏bax和bcl-2表达的影响

[目的]探讨姜黄素(curcumin,CUR)对大鼠肝纤维化的防治作用及对肝组织bax和bcl-2蛋白及基因表达的影响.[方法]建立CCl4致大鼠实验性肝纤维化模型.用免疫组化法比较正常组、模型组以及CUR组的bcl2、bax蛋白的表达,用RT-PCR法比较各组肝组织bcb-2、bax mRNA的表达.[结果]CUR组肝组织炎症和纤维化程度较模型组显著减轻.bax蛋白主要表达在肝细胞质,而纤维间隔及汇管区呈低表达;beb-2主要表达在纤维间隔及汇管区.bax及bcl-2在模型组及CUR组表达均高于正常组(P<0.01),CUR组均较模型组降低(P<0.01).bax及bcI-2 mRNA在模型组及CUR组表达比正常组增高(P<0.01,<0.05),CUR组均较模型组降低(P<0.05).[结论]CUR可能通过降低肝细胞表达bax、减少肝细胞凋亡而减轻肝脏损伤,通过降低bcl-2表达、诱导肝星状细胞凋亡发挥减轻肝纤维化的作用,防治大鼠肝纤维化.     

当归红芪超滤膜提取物抑制过氧化氢诱导的大鼠心肌细胞凋亡及相关基因表达

目的 探讨当归红芪超滤膜提取物对心肌细胞凋亡相关基因bcl-2、bax蛋白表达的影响.方法 用高浓度的过氧化氢(400 μmol/L)在Wistar乳鼠原代培养的心肌细胞上建立细胞凋亡模型,用不同浓度的当归红芪超滤物(3.75、7.5、15 g/L)进行治疗.光镜下观察细胞形态;逆转录-多聚酶链反应和蛋白印迹法检测bcl-2、bax蛋白在心肌细胞中的表达情况.结果 与正常对照组相比,高浓度过氧化氢损伤组bcl-2 mRNA及蛋白表达显著降低(P<0.05);bax mRNA及蛋白表达显著增加(P<0.05);bcl-2/bax比值显著降低(P<0.01),差异具有统计学意义.与损伤组比较,高浓度和中浓度药物治疗组bcl-2 mRNA及其蛋白表达显著增加(P<0.05);bax mRNA及其蛋白表达显著降低(P<0.05);bcl-2/bax比值显著增加(P<0.01),差异具有统计学意义.低浓度药物治疗组则对bcl-2、bax表达无显著改变.结论 当归红芪超滤膜提取物可通过上调bcl-2/bax的比值抑制心肌细胞的凋亡,对心肌细胞具有抗凋亡的保护作用.     

低氧肺动脉高压大鼠的肺动脉组织凋亡

目的 研究bcl-2、bax凋亡相关基因在低氧处理大鼠肺动脉中的表达,探讨低氧肺动脉高压的发病机制及防治措施.方法 36只Wistar大鼠随机分为3组,分别为正常对照组、低氧肺动脉高压组、低浓度一氧化碳(CO)组,每组12只,采用原位细胞凋亡、原位杂交、免疫组化等方法检测肺动脉的凋亡状况.结果 ①原位凋亡检测示,正常对照组、低氧肺动脉高压组、低浓度CO组的凋亡率分别为8.1%,37.6%,76.5%,三者间差异显著;②原位杂交显示,正常对照组bax、bcl-2杂交呈弱阳性表达.低氧肺动脉高压组bax杂交呈弱阳性表达,低浓度CO组呈强阳性表达,但bcl-2杂交可见低氧肺动脉高压组呈强阳性表达,低浓度CO组呈弱阳性表达;③免疫组织化结果表明,低浓度CO组bcl-2、bax蛋白均有升高,以bax为著.低氧肺动脉高压组虽然也有表达,但程度较弱,且bcl-2表达处于优势.结论 低浓度CO可以调节bcl-2、bax凋亡基因的表达,从而促进肺动脉组织的凋亡.     

石斛合剂对衰老糖尿病大鼠胰腺组织凋亡相关基因Bax,Bcl-2mRNA及蛋白表达的调控

目的观察石斛合剂对衰老及衰老糖尿病（DM）大鼠胰腺组织凋亡相关基因Bax、Bcl-2mRNA及蛋白表达的影响。方法采用D-半乳糖致衰，继而加高脂高糖及注射低剂量链脲佐菌素（STZ）制备衰老DM模型，测定血清中SOD、MDA浓度，并利用RT-PCR法和Western-Blot法检测大鼠胰腺组织凋亡相关基凼Bax、Bcl-2mRNA及蛋白表达水平。结果与衰老及衰老DM组相比，石斛合剂各治疗组MDA浓度明显降低（P〈0．05），SOD浓度明显升高（P〈0．05～0．01），衰老DM石斛合剂治疗组胰腺组织BaxmRNA及蛋白水平明显降低（P〈0.05～0．01），Bcl-2mRNA及蛋白水平明显升高（P〈0．05）。结论①衰老大鼠呈现Bax／Bcl-2比值显著升高，衰老DM大鼠Bax／Bcl-2比值升高更为显著，即衰老大鼠Bax和Bcl-2mRNA及蛋白表达失衡，且这种失衡在衰老DM大鼠显得更为突出；②石斛合剂降低血糖，显著升高衰老及衰老DM大鼠SOD水平，降低MDA水平，其分子机制之一与其降低衰老DM大鼠胰腺组织Bax、增加Bcl-2 mRNA及蛋白水平，即调整Bax和Bcl-2mRNA及蛋白表达的失衡有关。     

甘草酸对氧化应激、细胞凋亡的影响及其对糖尿病肾病大鼠的疗效

目的 研究氧化应激导致的细胞凋亡与糖尿病肾病(DN)的关系,探讨中药甘草酸对氧化应激和细胞凋亡的影响及其作用机制,为DN的防治提供理论和实验依据.方法雄性Wistar大鼠40只,随机平均分为4组,正常对照组、糖尿病模型组、糖尿病α-硫辛酸(10 mg· kg-1·d-1)治疗组、糖尿病甘草酸(30 mg·kg-1·d-1)治疗组,除正常对照外,其余大鼠腹腔注射链脲佐菌素(60 mg/kg)诱发糖尿病.16w后,处死大鼠,分离肾脏,测定组织丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)水平变化,观察bcl-2、bax的表达,取部分肾皮质病理观察和电镜观察肾脏细胞凋亡形态学改变.结果与正常对照组相比,糖尿病模型组肾脏皮质MDA水平明显升高(P＜0.001),SOD活性明显降低(P＜0.001),α-硫辛酸治疗组、甘草酸治疗组MDA水平明显下降,SOD活性明显升高;糖尿病模型组肾脏bcl-2表达减少、bax蛋白表达增加,电镜观察示明显凋亡形态学改变,α-硫辛酸治疗组、甘草酸治疗组的bcl-2蛋白表达较糖尿病模型组增多,而bax蛋白表达较糖尿病模型组减少,电镜观察凋亡形态学改变减轻;糖尿病模型组肾小球基底膜增厚,系膜区域扩大,治疗组病变减轻.结论通过调节bax、bcl-2的表达抑制细胞凋亡,明显改善DN大鼠肾脏结构与功能,延缓其发展;与α-硫辛酸无差异,且价格低、副作用少,值得临床推荐应用.     

兔骨关节炎软骨细胞中bcl-2、bax mRNA及蛋白表达的意义

目的探讨bcl-2、bax基因在兔骨关节炎软骨细胞凋亡中的意义。方法新西兰白兔12只,随机分为模型组,按照石膏外固定兔后膝关节造模,以及空白对照组,6周后处死动物取得膝关节软骨。采用免疫组织化学和原位杂交检测bcl-2、bax mRNA及蛋白表达。结果模型组软骨细胞bcl-2、bax mRNA表达明显多于对照组(P＜0．05)。免疫组织化学模型组软骨细胞bcl-2、bax阳性表达灰度值明显降低,与对照组比较差异有统计学意义(P＜0．05)；阳性细胞比例明显提高,与对照组比较差异有统计学意义(P＜0．01)。模型组bcl-2/bax阳性细胞率比值比对照组低,差异有统计学意义(P＜0．05)。结论bcl-2和bax共同参与了兔骨关节炎模型软骨细胞凋亡的调节,结果导致软骨细胞凋亡加快。     

补骨脂对慢性心力衰竭大鼠心肌损伤的影响

目的探讨补骨脂对慢性心力衰竭大鼠超氧化物歧化酶(SOD)活力、丙二醛(MDA)含量以及细胞凋亡相关基因转录水平的影响。方法将SD大鼠(雄性)随机分为空白对照组、慢性心力衰竭模型组、地高辛组以及补骨脂组。采用阿霉素腹腔注射法建立慢性心力衰竭动物模型,6周后开始灌胃给药,连续给药7周。苏木精-伊红染色检测心肌组织病理损伤,紫外分光光度计法测定大鼠心脏组织中SOD活力及MDA含量。采用实时荧光定量聚合酶链式反应(PCR)法测定大鼠Bax、Bcl-2、Caspase-9及Caspase-3 mRNA表达水平。结果与模型组比较,地高辛组与补骨脂组心肌组织SOD活力升高,MDA含量下降,差异均有统计学意义(P<0.05);地高辛组与补骨脂组SOD活力、MDA水平比较,差异均无统计学意义(P>0.05)。与空白对照组比较,模型组心肌病理损伤程度加重,Bax、Caspase-9和Caspase-3 mRNA表达均上升,而Bcl-2 mRNA表达降低,差异均有统计学意义(P<0.05)。与模型组比较,补骨脂组心肌病理损伤程度减轻,Bax和Caspase-3 mRNA表达均下降,而Bcl-2和Caspase-9 mRNA表达均升高,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论补骨脂可提高大鼠心肌组织SOD活力,减少MDA含量,减轻体内氧自由基的聚集,可通过调控大鼠心肌细胞凋亡途径中关键基因的转录水平改善心肌损伤。     

PDTC对大鼠阿霉素心肌病的防治作用观察

目的研究吡咯烷二硫代氨基甲酸盐(PDTC)对阿霉素(ADR)致大鼠心肌损伤的保护作用及作用机理。方法60只雄性Wistar大鼠,随机分为3组:ADR组、ADR PDTC组和对照组。实验第30天,测定心肌组织总抗氧化能力(T-AOC)、超氧化物歧化酶(SOD)和谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性、超氧阴离子(O2·)及脂质过氧化物(LPO)水平,测定心肌组织中bcl-2、bax、p53 mRNA的表达。结果与ADR组比较,ADR PDTC组心肌组织T-AOC升高、SOD和GSH-Px活性显著增加;心肌组织O2·及LPO水平显著降低;心肌组织中bcl-2 mRNA表达显著增加,bax、p53 mRNA表达显著降低。结论PDTC对ADR致大鼠心肌损伤有保护作用,其机制可能与增加抗氧化酶的活性,减少活性氧的产生,进而调节凋亡相关基因的表达有关。     

三棱、莪术抗大鼠肝纤维化的作用机理探讨

目的 观察肝纤维化大鼠的肝细胞凋亡和肝组织中的bax、bcl-2蛋白表达情况,探讨其抗肝纤维化的作用机理.方法 以腹腔注射猪血清制备大鼠肝纤维化模型,三棱、莪术灌胃处理大鼠.以HE染色观察大鼠肝脏组织病理变化,TUNEL法检测细胞凋亡,免疫组化法检测bax、bcl-2蛋白表达.结果 三棱、莪术能改善肝脏组织病理学变化,降低肝纤维化大鼠的细胞凋亡、bax蛋白表达,提高bcl-2蛋白表达.结论 三棱、莪术通过调节细胞凋亡相关蛋白表达,抑制细胞凋亡,起到抗肝纤维化作用.     

棕榈酸对大鼠胰腺腺泡细胞AR42J细胞凋亡的影响

目的探讨棕榈酸(palmitic acid,PA)对大鼠胰腺腺泡细胞AR42J的凋亡率的改变及凋亡相关基因bcl-2、bax、caspase-3mRNA表达的影响。方法 PA浓度分别为0 mmol/L(正常对照组)、0.1 mmol/L、0.5 mmol/L、1.0 mmol/L刺激AR42J细胞后,应用流式细胞术AV/PI双染法检测细胞的凋亡率,荧光定量PCR法检测凋亡相关基因bcl-2、bax、caspase-3 mRNA的表达水平。结果与正常对照组(0 mmol/L)相比,PA在0.1mmol/L低浓度时对AR42J细胞不具损伤作用,从0.5 mmol/L开始,PA对AR42J细胞的凋亡率呈浓度、时间依赖性增强,组间比较差异有统计学意义(P0.05)。荧光定量PCR结果显示PA下调抗凋亡基因bcl-2 mRNA的表达,同时上调促凋亡基因bax、caspase-3 mRNA的表达。结论不同浓度PA对AR42J细胞的损伤作用不同,主要表现为凋亡与剂量、时间相关,其机制可能是抑制bcl-2 mRNA的表达及促进bax、caspase-3 mRNA的表达。     

水飞蓟宾对大鼠心肌缺血再灌注损伤后心肌细胞凋亡的影响

目的研究水飞蓟宾(Silibinin,SIL)对大鼠心肌缺血再灌注损伤后心肌细胞凋亡的影响及其机制。方法取100只实验用大鼠随机分为假手术组,模型组和SIL低(100mg/(kg·d))、中(200mg/[kg·d))、高(400mg/(kg·d))剂量预处理组(n=20),术前7d开始灌胃给药;采用结扎冠状动脉30min的方法建立大鼠心肌缺血再灌注损伤模型;再灌注6h后,通过高分辨率超声影像系统检测舒张末期左室内径(IVIDd)和收缩末期左室内径(LVIDs)、短轴缩短率(FS)、射血分数(EF)、每搏输出量(SV);TTC染色法计算心肌梗死面积,TUNEL法观察心肌细胞凋亡状况,RT-PCR法测定心肌组织bcl-2 mRNA、Bax mRNA表达,Western blotting法测定心肌组织caspase-3、NF-kB蛋白表达;比色法测定心肌组织中抗氧化酶活性和丙二醛(MDA)含量。结果与模型组比较,发现经SIL中、高剂量预处理能够显著降低急性心肌梗死大鼠LVIDd并显著提高FS、EF和SV,其中SIL高剂量预处理组LVIDs显著降低;显著降低心肌组织梗死面积,明显改善心肌细胞凋亡状况、显著降低心肌细胞凋亡指数(Apoptosis index,AI),显著上调bcl-2 mRNA表达并下调Bax mRNA表达、显著提高‘bcl-2/Bax比值,显著降低caspase-3、NF-kB蛋白表达量,显著提高抗氧化酶(SOD、CAT)活性并显著降低MDA含量,差异均具有统计学意义(P0.05,P0.01)。结论SIL具有抑制心肌缺血再灌注损伤大鼠心肌细胞凋亡的作用,其机制可能与SIL改善心功能、调节凋亡相关基因和蛋白表达以及抑制氧化应激损伤有关。