99m Tc-MAG3-ASON的制备及其在荷乳腺癌裸鼠中的分布

目的:探讨99mTc标记的反义寡核苷酸(ASON)的制备及其在荷乳腺癌裸鼠中的分布.方法:一步法合成巯基乙酰三甘氨酰-N-羟基琥珀酰亚胺酯(NHS-MAG3),并与c-erbB2 mRNA互补的5'末端氨基修饰的15个碱基的ASON偶联;随后进行99mTc的标记,并用SephadexG25分离纯化99mTc-MAG3-ASON,并评价其稳定性;最后检测其在荷乳腺癌BALB/c裸鼠体内的分布.结果:99mTc-MAC3-ASON平均标记率为70.6%;纯化后,在室温下放置4h,其放化纯度为94.3%;与人血清孵育后,其放化纯度为93.8%;与血浆蛋白结合率为11.8%.乳腺癌组织的摄取率2h达峰值(6.09% ID/g).结论:以NHS-MAG3为螯合剂制备的99mTc-MAG3-ASON具有良好的稳定性,在乳腺癌部位高浓聚,可望用于肿瘤的显像诊断和治疗.     

99mTc-PDGFR-β AODN的制备及其生物分布

目的:寻求一种理想的99mTc标记大鼠血小板衍化生长因子受体-β(PDGFR-β)反义脱氧寡核苷酸(AODN)的方法,并观察标记产物的生物学分布以探讨其用于防治冠状动脉再狭窄的可能性. 方法: 先使长度为18个碱基的单链PDGFR-β AODN与双功能螯合剂NHS-MAG3耦联,然后进行99mTc标记,测定不同条件下标记率,分析确定最佳标记条件.常规测定放化纯度和比活度,并对标记物进行稳定性和正常小鼠体内分布实验. 结果: ①最佳标记条件下平均标记率达70%(最高为73.2%),经P4层析柱纯化后放化纯度>95%,比活度7.4～11.1MBq(200～300μCi)/ μg;② 99mTc-MAG3-AODN在室温下生理盐水中及37℃下新鲜人血清中稳定性良好,与血清蛋白结合率为6%～8%;③ 99mTc-MAG3-AODN在正常小鼠体内稳定性良好,在肾、肝中摄取较高. 结论: 以NHS-MAG3为鳌合剂标记得到的99mTc-MAG3-AODN具有良好的稳定性,为下一步进行细胞和动物实验提供了基础.     

NHS-MAG3为螯合剂的99mTc-寡核苷酸标记特性

目的 探讨以NHS-MAG,作为螯合剂的^99mTc-寡核苷酸(^99mTc-ON)的标记特性。方法将NHS-MAG,与长度为15个碱基的c-myc mRNA的反义(ASON)、正义(SON)和无义寡核苷酸(MON)偶联,进行^99mTc标记,Sephadex G25 柱层析分离纯化,评价^99mTc-ON的标记率、放化纯和稳定性;将ON-MAG,偶联物置-20℃贮存15 d、1月、2月后进行^99mTc标记,观察标记率的变化,评价ON-MAG3的稳定性;用三氯乙酸沉淀法测定^99mTc-ON的血浆蛋白结合率。结果 ^99mTc-ASON、^99mTc-SON和^99mTc-MON的标记率分别为68．41％、66．24％和69．38％,纯化后放化纯分别为96．98％、95．34％和94．62％。三者在室温和血清中均较稳定。ON-MAG3在-20℃保存2月后,标记率未见明显下降。三种^99mTc-ON的血浆蛋白结合率均小于13％。结论以NHS-MAG3作为螯合剂的^99mTc-ON具备优良的标记特性,标记率、放化纯较高,稳定性好,血浆蛋白结合率低,是一种有临床应用潜力的放射性标记药物。     

99mTc标记的新型肺癌多肽分子探针及其生物学分布

目的探讨99mTc标记特异性靶向肺癌小分子多肽的标记方法,观察99mTc-多肽在正常动物体内的动力学特性及体内生物学
分布特点。方法采用NHS-MAG3双功能螯合法进行99mTc标记小分子多肽（cNGQGEQc）,纸层析法测定标记率,通过体外稳定
性实验、半胱氨酸置换实验及血清蛋白结合实验评价99mTc-多肽的放化特性,测定标记物静脉注射后在新西兰大白兔不同时相
血液放射性清除曲线;分别测定经尾静脉注射7.4 MBq标记物后的小鼠体内各脏器质量数和放射性计数,计算各脏器每克组织
百分注射剂量率（%ID/g）;经耳缘静脉注射37 MBq标记物,应用SPECT显像法观察标记物在大白兔体内的放射性动态分布
变化。结果99mTc 标记多肽的标记率>90%,室温下和血清中37 ℃下放置12 h 放化纯度分别为91%和85%;半胱氨酸置换率
<7%;血清蛋白结合率<5%。99mTc标记多肽在兔体内血放射性清除迅速;在小鼠体内清除较快,主要通过肾脏排泄,其余脏器内
放射性均较低（P<0.05）。结论99mTc标记基于肺癌特异性靶向多肽的标记方法简单,标记率高,具有良好的体内外稳定性,具有
比较理想的体内分布动力学特性。
     

99Tcm标记多肽VEGF125-136及其生物学分布

目的 探讨一种理想的99Tcm标记小分子多肽VEGF125-136的方法,并研究标记物的生物学分布.方法 在合成多肽的过程中直接完成多肽VEGF125-136与双功能螯合剂MAG3的偶联,然后采用正交设计探讨99Tcm的最佳标记条件,并研究标记物稳定性和小鼠体内分布.结果 ①简化了偶联步骤,提高了偶联产率;②最佳标记条件下标记率约78%,经HPLC纯化后放化纯度＞95%,且在室温条件下稳定性好;③ 99mTc-VEGF125-136-MAG3在正常小鼠的血液中清除较快,在肾、肝中摄取较高.结论 以MAG3为螯合剂用99Tcm标记VEGF125-136有良好的标记率.     

基于VEGFR靶点的小分子肿瘤靶向抑制肽的99Tcm标记及鉴定

目的 探讨基于血管内皮生长因子受体( vascular endothelial growth factor receptor,VEGFR)靶点的小分子肿瘤靶向抑制肽理想的放射性核素99 Tcm标记方法.方法 多肽QKRKRKKSRKKH、RKRKRKKSRYIVLS分别经双功能螯合剂S-acetyl-MAG3、GA(D)GG、HYNIC修饰后进行放射性核素99 Tcm标记,HPLC及纸层析法鉴定其标记率及放化纯度,3 H-TdR参入实验鉴定其抑制细胞增殖的能力,体外受体竞争结合实验鉴定其受体结合活性.结果 以HYNIC为双功能螯合剂,这2条多肽的99 Tcm标记率分别为(94.13±1.77)％、(93.79±3.53)％,明显高于S-acetyl-MAG3、GA(D) GG修饰多肽的标记率.经HYNIC修饰后的多肽对肿瘤细胞A549增殖的抑制率约为(32.86±3.36)％、(61.50±4.50)％,与修饰前无明显变化(P＞0.05);多肽标记后仍保持了良好的VEGFR结合活性,室温下放置24 h后,放化纯度仍高达90％左右.结论 以HYNIC为双功能螯合剂,以TPPTS为协同配体及还原剂,多肽QKRKRKKSRKKH、RKRKRKKSRYIVLS的99Tcm标记率高,且仍具有良好的抑制肿瘤细胞增殖的能力和VEGFR结合活性.     

肺癌特异性靶向小分子多肽的131I标记及其在兔体内的动态显像

目的建立肺癌特异性靶向小分子多肽cNGQGEQc的131I标记方法,并通过SPECT动态显像以研究131I-cNGQGEQc在兔
体内的放射分布特性。方法采用氯胺-T法对N-端连接有酪氨酸的小分子多肽cNGQGEQc进行131I标记,利用纸层析法测定
131I-cNGQGEQc的标记率与放化纯度,并观察131I-cNGQGEQc在生理盐水（NS）和正常人血清中于37 ℃孵育24 h后的体外稳定
性及其脂水分配系数。应用SPECT对经耳缘静脉注入131I-cNGQGEQc的新西兰白兔进行显像,结合感兴趣区时间-放射性曲线
分析,观察家兔体内放射性动态分布变化。结果131I-cNGQGEQc 的标记率为90%,经HPLC 纯化后放化纯度为95%;
131I-cNGQGEQc在NS和正常人血清中其放化纯度分别为（93.12±1.18）%和（88.34±5.43）%。131I-cNGQGEQc的脂水分配系数
lg P（正辛醇∕生理盐水）为-1.75,提示所制备的标记多肽是水溶性的。兔SPECT动态显像示：l min双肾即显影,5 min心、肝影开
始减弱,膀胱显影,随后膀胱影持续增强,30 min后软组织影逐渐减弱;胆囊未显影,腹部呈持续低放射分布;甲状腺区及胃未见
明显核素浓聚;各组织器官T-A曲线均随时间逐渐下降。结论131I-cNGQGEQc的制备方法简便,标记率高（>90%）,在体外具有
良好的稳定性;131I-cNGQGEQc为水溶性,主要经泌尿系统排泄,具有比较理想的体内分布特性。本实验结果为进一步的肺癌
荷瘤裸鼠放射性标记多肽的靶向定位诊断与治疗提供实验基础。
     

99Tcm-annexinV在肺癌化疗评估中的应用

目的制备放射性药物99Tcm-annexinV,评估其在早期预测肺癌化疗效果中的作用。方法通过毕赤酵母重组表达、硫酸铵沉淀和分子筛层析纯化得到annexinV,采用氯化亚锡还原法在annexinV的氨基端标记放射性核素99Tcm,经脱盐柱纯化获得标记产物。采用薄层层析测定99Tcm-annexinV的标记率和放射性化学纯度,外露磷脂酰丝氨酸的红细胞测定99Tcm-annexinV的生物活性。通过在615小鼠腋部皮下接种LA795细胞和组织插块法获得荷肺癌小鼠模型,经腹腔注射环磷酰胺治疗肺癌后6、12、24和48h测定99Tcm-annexinV在小鼠体内的分布情况。结果毕赤酵母工程菌株分泌表达annexinV,经硫酸铵分级沉淀和分子筛层析纯化后annexinV得以有效回收。室温下30min完成anne-xinV的99Tcm标记,标记率为50.2%。99Tcm-annexinV放射性化学纯度为93.9%,其生物活性保存良好。生物分布实验表明,99Tcm-annexinV通过肾脏排泄。615荷肺癌小鼠模型经过环磷酰胺化疗后48h,99Tcm-annexinV在肿瘤组织的摄取达到最高,肿瘤/肌肉放射性摄取率之比为6.34,肿瘤/血液放射性摄取率之比为4.09。结论制备了毕赤酵母来源的99Tcm-annexinV,有可能应用于早期预测肺癌化疗效果。     

基于双功能螯合剂的99mTc间接标记depreotide的探索

目的探索使用采用双功能螯合剂作为偶联剂进行间接标记,以避免直接标记所带来的损伤。方法使用近年来常用的三种螯合剂HYNIC、NHS-MAG3及SHNH进行间接标记。结论三种标记体系的标记率、放化纯及比活度较高,为核素分子显像提供了必要的基础条件和临床应用前景。稳定性测定发现^99mTc-MAG3-depreotide在室温、血清以及血浆中更稳定。^99mTc HYNIC-depreotide和^99mTc-SHNH-depreotide在血液、心脏、胃、肠的分布显著较高。而^99mTc-MAG3-depreotide标记物主要经过肾脏排出体外,在血液、肝脏和肾脏中清除较快,而心脏、肺、肌肉、骨骼和脑组织放射性分布均较低,且在整个过程中变化不显著。     

抗人活化血小板嵌合单克隆抗体SZ-51/Hu的纯化、鉴定和核素标记

目的评价抗人活化血小板嵌合单克隆抗体SZ-51/Hu核素标记及其用于临床血栓放射免疫显像的可行性.方法用免疫亲和层析法纯化SZ-51/Hu,并对其特性进行鉴定,以过量的2-亚氨硫醇预处理SZ-51/Hu,采用99Tcm-葡庚糖酸钠(GH)配体交换法标记.薄层层析法测定标记物的放化纯度.制备实验性狗股动脉血栓模型后,经静脉注入99Tcm-SZ-51/Hu进行SPECT显像.结果纯化的SZ-51/Hu分子量为160kD,亲和常数5.5104×108L/mol,每个活化血小板的结合位点数平均为10262±2372个.99Tcm抗体的标记率达96%以上.实验性狗股动脉血栓模型注射99Tcm-SZ-51/Hu后4h血栓显示清晰.结论SZ-51/Hu保留了原鼠源单抗SZ-51/Hu相同的活化血小板(GMP-140)结合特异性和亲和力.99Tcm标记后仍保持良好的体内特异性血栓定位能力,可望用于临床血栓放射免疫显像.     

感染性心内膜炎112例临床分析

目的分析南方医科大学南方医院近10年收治的112例感染性心内膜炎（IE）的流行病学、临床表现、致病菌及治疗、预后
等临床特点,总结IE的变化。方法对近10年本院收治的112例IE患者的诊治过程进行回顾性分析。结果112例患者平均年
龄46±17.1岁,其中70例（62.5%）存在各种基础心脏病,按发病高低依次为风湿性心脏病32例（28.6%）,先天性心血管畸形22例
（19.6%）,老年性瓣膜退行性变16 例（14.3%）。临床表现包括发热（93.8%）、贫血（77.7%）、充血性心衰（33.0%）、栓塞现象
（32.1%）等。超声心动图提示瓣膜或心内膜赘生物105例（93.8%）。血培养阳性者61例（58.1%）,按检出率高低依次为链球菌
（23例）、葡萄球菌（22例）等。91例经治疗后痊愈或好转出院,10例放弃治疗出院,11例死亡,死亡原因为充血性心衰（8例）、肺
栓塞（2例）及脑出血（1例）。结论IE的流行病学、易感因素、致病菌等发生了变化,临床表现多样,病死率仍较高,需临床医生提
高警惕。
     

以不明原因发热为主要表现的横纹肌淋巴瘤1例报告并文献回顾

淋巴瘤是免疫系统恶性肿瘤之一,其中结外淋巴瘤患者常缺乏典型症状及阳性的辅助检查结果,部分病例仅以发热为主
要表现。对于表现为长期发热（病程>3周）的淋巴瘤患者,其发热症状的特点可以为疾病的诊断提供线索,如起热时间、热型、药
物反应等特异性表现对于明确诊断具有重要作用,尤其早期、罕见病例。应用不明原因发热的诊断思维,可以提高此类淋巴瘤
患者的诊断效率,值得深入探讨。
     

急性阑尾炎患者白细胞分类计数诊断价值及验证

目的通过对721例确诊为急性阑尾炎患者术前白细胞分类计数的回顾性研究,分析白细胞分类计数能否提示该疾病严
重程度,寻找阑尾炎穿孔的最佳血常规指标。方法回顾性分析长沙市某大型三甲医院2010年1月~2013年6月普外科行阑尾
切除患者共721例,分析白细胞分类计数与急性阑尾炎严重程度的相关性,利用ROC曲线评估白细胞分类计数指标对阑尾炎穿
孔的诊断价值,找到最适指标截断值。另设置验证组467例,用以评价截断值的诊断能力。结果随急性阑尾炎严重程度变化
幅度最大的是淋巴细胞百分比,提示阑尾炎穿孔的白细胞分类最佳指标是淋巴细胞绝对值,其小于1.83提示可能存在穿孔,灵
敏度较高,具有一定的临床参考价值。结论淋巴细胞降低对辅助判断急性阑尾炎严重程度具有重要意义。
     

低出生体质量儿先天性心脏病非体外循环手术的麻醉处理

目的总结53例低出生体质量新生儿及早产儿先天性心脏病外科手术的麻醉管理,并探讨其围术期的危险因素。方法
2003年6月~2013年7月共在非体外循环下完成53例低出生体质量儿先天性心脏病手术,其中49例为早产儿。本组病例孕周
26~40 周（30.96±3.09）周,出生体质量640~2460（1429.90±455.08）g。手术时日龄4~87（32.81±20.76）d;手术时体质量650~
2460（1750.20±481.59）g。所有患儿均在全身麻醉下完成先心病非体外循环矫治手术。根据血气分析结果对呼吸参数、患儿体
内酸碱平衡及电解质进行调整,应用血管活性药物控制血压并维持术后血流动力学稳定,术后持续机械通气,置暖箱保温。结
果本组病例中有47例为PDA结扎术,其中有1例未行手术即发生心跳骤停,未能心肺复苏;1例由于术前诊断有误,术中经食
管超声诊断后修正诊断为主动脉瓣及升主动脉重度发育不良,不能行PDA结扎术,放弃治疗;2例COA矫治术,其中1例于手术
中发生心跳骤停,术中死亡;2例为PDA结扎同期COA矫治术;其余2例为紫绀型先天性心脏病,分别行A-P分流术+Broch术和
B-T分流术。本组病例术中死亡2例,死亡率3.77%,术后早期死亡（72 h内）1例,总死亡率5.66%。结论低出生体质量儿可实施
早期非体外循环下先心病手术;良好的麻醉管理有助于降低围术期的死亡率和并发症发生率,并提高术后生存率。
     

姜黄素诱导Jurkat细胞凋亡时MAPKs及MMPs家族的表达

目的探讨姜黄素体外诱导人T细胞淋巴瘤Jurkat 细胞凋亡时MAPKs及MMPs家族成员的表达,揭示其可能的分子机
制。方法以不同浓度姜黄素作用Jurkat 细胞不同时间,MTT检测细胞增殖抑制率,流式细胞术检测细胞周期变化,Westernblot
检测MAPKs家族成员的表达,明胶酶谱法检测细胞培养上清中MMPs的活性。结果姜黄素呈时间-剂量依赖性抑制
Jurkat细胞增殖,使细胞阻滞于G0/G1期。以6.25、12.50及25.00 μmol/L姜黄素分别处理Jurkat细胞,胞内JNK和P-JNK的表达
均呈浓度依赖性上升（P<0.01）,而ERK1/2及P38 MAPK的表达与阴性对照组相比无明显改变。另细胞培养上清中MMP-2及
MMP-9的活性在各药物处理组中也基本不变。结论姜黄素在（6.25~25.00）μmol/L浓度范围时,可体外诱导Jurkat细胞的凋
亡,阻滞细胞于G0/G1期。其分子机制可能与激活MAPKs家族中的JNk信号通路有关,而与MMPs家族成员的活性无关。
     

非小细胞肺癌中CD133和Notch1的表达及其临床病理意义

目的通过检测非小细胞肺癌（NSCLC）中CD133蛋白和Notch1蛋白的表达及相互之间的关系,研究它们与NSCLC患者
临床病理因素之间的关系。方法采用免疫组织化学ElivisionTM plus法检测305例NSCLC组织和80例正常肺组织中CD133、
Notch1以及血管内皮生长因子（VEGF）蛋白表达情况。结果在NSCLC组和正常肺组织中CD133、Notch1和VEGF蛋白的阳
性表达率分别为48.9%、43.9%、45.6%和10.0%、15.0%、0%,两组之间相比差异有统计学意义;CD133、Notch1和VEGF蛋白的阳
性表达率在NSCLC患者肿瘤组织的不同分化程度、淋巴结转移与否及临床分期间差异有统计学意义（P<0.05）;且CD133、
Notch1和VEGF三种蛋白之间相互呈正相关关系（P<0.001）。Kaplan-Meier生存分析显示,CD133、Notch1和VEGF蛋白阳性
表达组患者的生存时间明显短于其阴性表达组患者,差异有统计学意义;Cox多因素回归分析显示,CD133和Notch1蛋白的表
达是影响NSCLC患者预后的独立因素（P<0.05）。结论CD133、Notch1和VEGF参与NSCLC的发生、发展、浸润和转移,联合
检测CD133和Notch1蛋白的表达对NSCLC的进展和预后判断有重要意义。
     

小鼠脂肪间充质干细胞的分离培养及其在肝内归巢

目的建立小鼠脂肪间充质干细胞（ADSCs）分离培养的方法,并将ADSCs移植于体内,观察其致瘤性及肝脏归巢情况。
方法取皮下脂肪用0.075%Ⅰ型胶原酶消化,贴壁培养获取小鼠ADSCs,通过流式细胞技术检测其表面分子、细胞周期;并将
ADSCs注射到小鼠皮下观察其致瘤性,及尾静脉注射观察其肝脏的归巢。结果分离培养的细胞高表达CD29、CD44,不表达
CD34、CD45、CD11b、CD14;细胞周期显示G0/G1、S、G2/M 的细胞所占的比例分别为80.1%、7.9%、12%;ADSCs具有低免疫原
性,不表达CD40、CD80、CD86、MHCI 、MHCII以及PDL-1。在IFN-γ作用下,可轻度上调CD40、CD80以及PDL-1。ADSCs移
植后未见成瘤,且可在肝脏实质内多处定居。结论胶原酶消化、贴壁培养可以从小鼠脂肪中分离出高纯度的间充质干细胞,且
ADSCs移植后能在肝内定居。