缺血后处理对肝缺血再灌注损伤后磷脂酰肌醇-3激酶和细胞外信号调节激酶的影响和意义

摘要：目的观察缺血后处理对肝缺血再灌注后磷脂酰肌醇-3激酶（PI3K）和细胞外信号调节激酶1/2（ERK1/2）表达的影响,探讨
肝缺血后处理的作用机制。方法采用大鼠70%肝缺血再灌注损伤模型,进行3次循环的再灌注1 min-阻断1 min的缺血后处
理,观察假手术（S）组、LY294002+假手术（LY+S）组、PD98059+假手术（PD+S）组、缺血再灌注（IR）组、缺血后处理（IPO）组、
LY294002+缺血后处理（LY+IPO）组和PD98059+IPO（PD+IPO）组的肝功能、细胞凋亡、Akt和ERK1/2磷酸化程度的变化。结
果缺血后处理能明显减轻缺血再灌注造成的肝功能损害,增加Akt和ERK1/2的磷酸化程度,应用LY294002或PD98059后都
可以取消IPO的作用。结论缺血后处理可能通过激活PI3K和ERK1/2减轻肝缺血再灌注损伤。
     

环磷酸鸟苷/蛋白激酶G信号通路的激活与再灌注损伤挽救激酶信号通路的关系

目的：观察脑钠肽（brain natriuretic peptide,BNP）激活环磷酸鸟苷/蛋白激酶G（cyclic guanosine monophosphate/protein kinase G,cGMP/PKG）信号通路的心肌保护作用是否与细胞外调节蛋白激酶１/２（extracellular regulated protein kinase1/2,ERK1/2）、磷酸酰肌醇-３-激酶（phosphatidylinositol 3 kinase,PI3K）蛋白激酶的激活有关。方法：将84只新西兰兔随机分为7组（n=12）：假手术组;对照组;BNP组;BNP+LY294002组（LY294002为PI3K抑制剂）;LY294002组;BNP+PD98059组（PD98059为ERK1/2抑制剂）;PD98059组。除了假手术组只开胸不结扎冠状动脉外,其余6组均于结扎左回旋支45 min后恢复左回旋支血流,进行再灌注180 min。全程观察血流动力学及心电变化;实验终末,各组随机抽取6只兔子心脏做左室梗死面积测定,采用伊文思蓝和氯化三苯基四氮唑双染色法测定心肌梗死面积;每组另外6只兔子心脏取梗死边缘区组织,Western blot方法测定P-Akt/Akt、P-ERK1/2/ ERK1/2的表达。结果：心率（heart rate,HR）和平均动脉压（mean arterial blood pressure,MABP）在基线水平上无明显差异（P >0.05）。与基线水平相比,HR和MABP在缺血以及再灌注时期有明显下降（P<0.05）,而在再灌注时期维持较稳定的水平。各组之间HR、MABP差异无统计学意义（P >0.05）;与对照组相比,BNP组心律失常发生率明显减少（P<0.003 125）。与BNP组比较,BNP+LY294002组、LY294002组、BNP+PD98059组及PD98059组心律失常明显增加（P<0.003 125）,BNP+LY294002组和LY294002组,BNP+PD98059组和PD98059组差异无统计学意义（P >0.003 125）;假手术组无心肌梗死。与对照组比较,BNP组心肌梗死范围明显减少（P <0.05）。与BNP组比较,BNP+LY294002组、LY294002组、BNP+PD98059组及PD98059组梗死面积明显增加（P<0.05）。BNP+LY294002组和LY294002组,BNP+PD98059组和PD98059组差异无统计学意义（P >0.05）;与对照组比较,BNP组Akt、ERK1/2的磷酸化水平明显增加（P <0.05）。与BNP组相比,BNP+LY294002组Akt的磷酸化水平及BNP+PD98059组ERK1/2的磷酸化水平分别明显降低（P <0.05）。BNP+LY294002组和LY294002组Akt的磷酸化水平,BNP+PD98059组和PD98059组ERK1/2的磷酸化水平差异无统计学意义（P >0.05）。结论：BNP激活cGMP/PKG信号通路,对心肌缺血再灌注损伤产生保护作用,且该通路的激活与再灌注损伤挽救激酶通路的激活有关。     

PI3K／AKT及MEK／ERK信号通路在肿瘤血管内皮细胞迁移中的作用

目的：研究磷脂酰肌醇3激酶（PI3K）／丝氨酸苏氨酸蛋白激酶（AKT）及丝裂原细胞外信号调节激酶（MEK）／细胞外信号调节激酶（ERK）信号通路在肿瘤血管内皮细胞迁移中的作用及机制。方法用不同浓度的PI3K／AKT信号通路抑制剂LY294002（2．50、7．50、15．00μmol／L）;MEK／ERK信号通路抑制剂PD98059（2．50、7．50、15．00μmol／L）分别处理肿瘤血管内皮细胞,以DMEM‐F12培养基,加入0．10％二甲基亚砜（DMSO）的培养基分别作为对照,通过细胞划痕试验,定向迁移试验和Transwell试验来检测不同的信号通路抑制剂对肿瘤血管内皮细胞的水平、垂直和定向迁移能力的影响。结果0．1％DMSO对内皮细胞的迁移无明显影响,其作用后内皮细胞的迁移能力与DMEM‐F12单独作用无明显区别,说明小剂量DMSO作为LY294002、PD98059的溶剂不影响肿瘤血管内皮细胞的迁移功能;应用信号通路抑制剂LY294002、PD98059处理后,内皮细胞迁移能力受抑制,且随着抑制剂浓度增高而增大;LY294002与PD98059组比较,前者迁移距离更小,细胞迁移数较后者少,二者比较差异有统计学意义（P＜0．05）。结论抑制PI3K／AKT和MEK／ERK信号通路均能抑制肿瘤血管内皮细胞的水平、垂直和定向迁移,且与抑制剂浓度呈正相关;PI3K／AKT信号通路对内皮细胞迁移的影响比MEK／ERK信号通路明显。     

瑞舒伐他汀对高糖导致的血管形成障碍的影响

目的 探讨瑞舒伐他汀对高糖导致的血管形成障碍的影响。方法 培养原代心肌微血管内皮细胞,取1代细胞分为四组：低糖组（5.6 mmol/L葡萄糖）、高糖组（33.3 mmol/L葡萄糖）、瑞舒伐他汀组（33.3 mmol/L葡萄糖+1 μmol/L瑞舒伐他汀）和LY294002组（33.3 mmol/L葡萄糖+1 μmol/L瑞舒伐他汀+10 μmol/L LY294002）,其中LY294002为磷脂酰肌醇3-激酶（PI3K）的抑制剂。采用Matrigel、Transwell和MTT法分别观察四组微血管内皮细胞的管腔形成、迁移及增殖能力。采用Western blotting技术检测蛋白激酶B（Akt）、磷酸化Akt（Ser473）（p-Akt）、内皮一氧化氮合酶（eNOS）和磷酸化eNOS（Ser1117）（p-eNOS）蛋白的表达。结果 与低糖组相比,高糖组的内皮细胞管腔形成、迁移及增殖能力均明显降低（P<0.05）;瑞舒伐他汀组的内皮细胞管腔形成、迁移及增殖能力均明显高于高糖组及LY294002组,但仍低于低糖组,差异均有统计学意义（P<0.05）。瑞舒伐他汀组p-Akt和p-eNOS蛋白的相对表达量均明显高于高糖组和LY294002组（P<0.05）,并基本恢复至低糖组水平（P>0.05）。结论 瑞舒伐他汀可明显改善高糖导致的内皮细胞的血管形成障碍,其机制可能与激活PI3K/Akt/eNOS通路相关。     

缺血后处理对肝缺血再灌注损伤后磷脂酰肌醇-3激酶和细胞外信号调节激酶的影响和意义

目的观察缺血后处理对肝缺血再灌注后磷脂酰肌醇-3激酶(PI3K)和细胞外信号调节激酶1/2(ERK1/2)表达的影响,探讨肝缺血后处理的作用机制。方法采用大鼠70%肝缺血再灌注损伤模型,进行3次循环的再灌注1 min-阻断1 min的缺血后处理,观察假手术(S)组、LY294002+假手术(LY+S)组、PD98059+假手术(PD+S)组、缺血再灌注(IR)组、缺血后处理(IPO)组、LY294002+缺血后处理(LY+IPO)组和PD98059+IPO(PD+IPO)组的肝功能、细胞凋亡、Akt和ERK1/2磷酸化程度的变化。结果缺血后处理能明显减轻缺血再灌注造成的肝功能损害,增加Akt和ERK1/2的磷酸化程度,应用LY294002或PD98059后都可以取消IPO的作用。结论缺血后处理可能通过激活PI3K和ERK1/2减轻肝缺血再灌注损伤。     

丹红注射液通过改善线粒体功能障碍减轻缺氧/复氧诱导的心肌细胞损伤

[目的]研究丹红注射液(DHI)对缺氧/复氧(H/R)损伤心肌细胞线粒体功能的调节作用机制。[方法]建立原代心肌细胞H/R损伤模型。四甲基噻唑蓝(MTT)法检测磷脂酰肌醇-3-羟激酶(PI3K)和丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)/细胞外信号调节激酶(ERK)/MAPK激酶(MEK)抑制剂LY294002与PD98059干预后,DHI对H/R损伤心肌细胞存活的影响。采用荧光探针Rh123检测DHI对H/R损伤心肌细胞线粒体膜电位(Δφm)的影响。蛋白免疫印迹(Western blot)法检测LY294002和PD98059干预后DHI对H/R损伤的心肌细胞PI3K及MEK下游丝氨酸/苏氨酸激酶(Akt)和ERK1/2蛋白表达及活性水平的影响。应用海马生物能量检测仪测定正常与H/R损伤条件下DHI对线粒体能量代谢的影响。[结果] DHI能够明显逆转H/R引起的细胞活力和线粒体膜电位下降。阻断剂LY294002和PD98059干预后,DHI对心肌细胞活力和线粒体膜电位的改善作用明显减弱。DHI能够显著增加H/R损伤的心肌细胞Akt和ERK蛋白磷酸化水平,且这种促进作用能够被抑制剂LY294002和PD98059抑制。常氧条件下,DHI不影响心肌细胞线粒体能量代谢。H/R条件下,DHI能够显著抑制心肌细胞线粒体基础耗氧率与最大耗氧率下降,增加线粒体能量储备能力。[结论] DHI能够激活Akt和ERK1/2,抑制H/R造成的线粒体能量代谢障碍,维持线粒体储备能力,缓解H/R诱导的心肌细胞损伤。     

PI3K/Akt信号转导通路对脑微血管内皮细胞生物学行为的影响

目的 观察PI3K特异性抑制剂LY294002对脑微血管内皮细胞迁移、增殖和血管发生改变及PI3K/Akt信号途径的影响.方法 不同浓度(5、10及20μmol/L)LY294002处理后,用体外"伤口愈合"实验、细胞增殖试剂盒和缺乏生长因子的Matrigel胶观察内皮细胞迁移、增殖和血管发生情况,并用Western印迹法检测磷酸化P13K和磷酸化Akt(苏氨酸308)的表达变化.结果 与正常对照组相比,实验组脑微血管内皮细胞迁移明显减少(均P<0.01)、细胞存活率降低(均P<0.01)、血管发生改变(包括血管床面积、平均血管长度、毛细血管数和血管分支点数)及磷酸化P13K、磷酸化Akt(苏氨酸308)的表达均降低(均P<0.05或P<0.01),且随LY294002浓度增高抑制作用增强(均P<0.05或P<0.01).结论 PI3K/Akt信号途径下调可抑制内皮细胞的迁移、增殖和血管发生.     

PI3K/AKT 及 MEK/ERK 信号通路抑制剂对结直肠癌血管内皮细胞管道形成的作用

目的：探讨PI3K/AKT信号通路抑制剂（LY294002）及MEK/ERK信号通路抑制剂（PD98059）对结直肠癌血管内皮细胞管道形成的影响。方法实验分为对照组和实验组,其中对照组分正常组和二甲基亚砜（DMSO）组（0.1%DMSO）,实验组分PI3K/AKT信号通路抑制剂组LY294002及MEK/ERK信号通路抑制剂组PD98059（实验组设4个浓度梯度）,比较结直肠癌血管内皮细胞在不同抑制剂浓度（2.5、5、10、20μmol/L）作用下在Matrigel胶上管道形成的情况,6h后观察并取每个孔上、下、左、右、中5个区域中的图片,测其管道形成的总长度,每组均设3个复孔,数据以均数依标准差表示,采用SPSS 16.0软件进行统计分析,以P〈0.05为差异有统计学意义。结果对照组中正常组与DMSO组两者管道形成总长度之间差异无统计学意义[（4.16±0.26）mm比（4.17±0.18）mm],而实验组管道形成总长度较对照组都有明显减少（P〈0.05）。其中LY294002浓度在2.5、5、10、20μmol/L管道形成的长度分别为（3.08±0.51）、（2.65±0.24）、（2.02±0.18）、（1.08±0.13）mm,而PD98059管道形成的长度分别为（3.39±0.18）、（2.98±0.12）、（2.53±0.18）、（1.88±0.12）mm,随着浓度的增加,管道形成长度逐渐减少,差异有统计学意义（P〈0.05）。 LY294002与PD98059相比,在相同浓度下,LY294002管道形成长度较PD98059减少（P〈0.05）。结论PI3K/AKT信号通路抑制剂及ERK/MEK信号通路抑制剂能够明显抑制结直肠癌血管内皮细胞的管道形成,且随着抑制剂浓度的升高,管道形成能力进一步降低,PI3K/AKT信号通路抑制剂抑制肿瘤血管内皮细胞管道形成的能力比ERK/MEK信号通路抑制剂明显。     

CA916798基因通过PI3K/AKT/mTOR通路参与顺铂耐药的机制分析

摘要：目的观察阻断PI3K/AKT/mTOR通路对人肺腺癌细胞A549 及多药耐药人肺腺癌细胞A549/CDDP内CA916798 基因
mRNA表达的影响。方法以雷帕霉素、LY294002分别作用于人肺腺癌细胞A549和多药耐药人肺腺癌细胞A549/CDDP,检测
顺铂作用后细胞生长及增殖情况,RT-PCR 检测CA916798 基因mRNA表达水平。结果以雷帕霉素和LY294002 分别阻断
A549、A549/CDDP细胞的PI3K/AKT/mTOR通路后,细胞对于顺铂的耐药性均显著下降（P<0.05）,CA916798基因的表达均显
著下调（P<0.05）。结论CA916798基因位于PI3K/AKT/mTOR通路下游,可能是CA916798诱导肺癌顺铂耐药的机制之一。
     

尼克酰胺抑制PKC-βⅡ活性改善高糖导致的心肌微血管内皮细胞血管形成障碍

目的探讨尼克酰胺对高糖导致的微血管生成障碍的影响及可能机制。方法将原代心肌微血管内皮细胞分为正常糖组（NG,5.6 mmol/L）、高糖组（HG,33.3 mmol/L）、高糖＋尼克酰胺组（HG＋N,33.3 mmol/L＋20 mmol）和高糖＋蛋白激酶C-βⅡ（PKC-βⅡ）抑制剂LY333531组（HG＋LY,33.3 mmol/L＋20 nmol）,培养24 h后分别观察细胞的管腔形成、迁移及增殖情况。Western blotting检测不同组细胞PKC-βⅡ、Akt和内皮型一氧化氮合酶（eNOS）的表达情况。结果与NG组相比,HG组细胞的管腔形成、迁移和增殖能力明显降低（P〈0.05）;而HG＋N组和HG＋LY组细胞的管腔形成、迁移和增殖能力得到明显改善。Western blotting结果显示：与NG组相比,HG组PKC-βⅡ磷酸化程度上调,且伴随Aktser473及eNOSser1117表达水平的降低（P〈0.05）。尼克酰胺不仅抑制了高糖导致的PKC-βⅡ磷酸化程度上调,并且恢复Akt、eNOS磷酸化至NG组水平（P〈0.05）。结论高糖导致了PKC-βⅡ的激活,进而抑制Akt/eNOS通路的活性,从而阻碍了微血管细胞的血管形成。尼克酰胺抑制了高糖条件下PKC-βⅡ的磷酸化,上调Akt/eNOS通路活性,从而改善微血管形成障碍。     

miR-92b 对人胃癌细胞SGC7901迁移、粘附和侵袭的影响

目的探讨miR-92b对胃癌细胞迁移、粘附和侵袭能力的影响及其相关的分子机制。方法在人胃癌SGC-7901细胞中瞬
时转染miR-92b inhibitor和miR-92b mimics后,经划痕实验、细胞迁移实验、基质胶粘附实验和Transwell侵袭实验观察对细胞
转移的影响;Western blot 检测E-Cadherin、Vimentin、Akt 和p-Akt 蛋白的表达水平。结果SGC-7901 细胞转染miR-92b
inhibitors后,迁移、粘附和侵袭的细胞数量减少（P<0.05）;Western blot结果显示E-Cadherin表达升高,Vimentin表达降低,Akt
和p-Akt的表达升高。转染miR-92b mimics后,迁移、粘附和侵袭的细胞数量增多（P<0.05）;E-Cadherin表达降低,Vimentin表
达升高,Akt和p-Akt表达降低。结论miR-92b介导SGC7901细胞发生上皮-间质转化,促进肿瘤细胞的粘附、迁移和侵袭,可能
通过非PI3K/Akt途径促进肿瘤细胞的转移。
     

醛糖还原酶抑制剂影响PDGF-BB促系膜细胞增殖作用的机制研究

目的探讨醛糖还原酶抑制剂（ARI）影响血小板源性生长因子-BB（PDGF-BB）促体外培养大鼠系膜细胞（MsC）增殖作用的机制。方法用四甲基偶氮唑盐（MTT）比色法检测细胞增殖,流式细胞术分析细胞周期,对比PDGF-BB刺激MsC生长速度与MAPK3条信号通路（ERK、JNK及p38）抑制剂及PI3K信号通路抑制剂对PDGF促MsC增殖作用的影响。用半定量RT-PCR检测醛糖还原酶抑制剂（ARI）对MsC合成内源性PDGF-B链的影响。蛋白印迹法观察ARI对PDGF引起的信号通路磷酸化的影响。结果（1）ERK抑制剂U0126、JNK抑制剂SP600125及PI3K抑制剂LY294002能明显抑制PDGF对MsC的促增殖作用（P〈0.05）,而p38抑制剂SB203580不能抑制PDGF的促MsC增殖作用;（2）ARI在转录水平对MsC合成内源性PDGF-B链没有明显影响。（3）PDGF刺激MsC后引起ERK、JNK及PI3K/Akt信号通路的磷酸化,而ARI仅能抑制JNK及PI3K/Akt两条信号通路的磷酸化（P〈0.05）,对ERK信号通路的磷酸化没有明显影响。结论ARI部分抑制PDGF促MsC增殖作用可能与其影响JNK和PI3K/Akt信号通路活化有关。     

低相对分子质量肝素联合紫杉醇对鼻咽癌细胞侵袭和迁移能力的影响

目的探讨低相对分子质量肝素（LMWH）联合紫杉醇对鼻咽癌细胞侵袭和迁移能力的影响及其相关的分子机制。方法
采用MTT法检测药物对鼻咽癌细胞CNE1、CNE2的增殖抑制效应;细胞划痕实验、Transwell小室法检测细胞的迁移和侵袭能
力;Western blot检测基质金属蛋白酶-9 （MMP-9）和基质金属蛋白酶组织抑制剂-1 （TIMP-1）的表达;ELISA法检测细胞培养液
中乙酰肝素酶（HPA）的表达。结果MTT结果显示,不同浓度LMWH和紫杉醇对鼻咽癌细胞CNE1、CNE2均具有显著的增殖
抑制作用。200 U·ml^-1LMWH与0.1μmol·L^-1紫杉醇联合作用于CNE1、CNE2细胞24 h的迁移抑制率分别为66.70%、70.53%,
较单用紫杉醇的迁移抑制率明显提高。同时LMWH与紫杉醇联合作用于CNE1、CNE2细胞的侵袭抑制作用也明显高于单用
紫杉醇的作用。LMWH与紫杉醇均可下调MMP-9和HPA的表达,且合用时作用更加明显。结论LMWH具有增强紫杉醇抑
制鼻咽癌细胞侵袭和迁移的作用,其机制可能与下调MMP-9和HPA的表达有关。     

P38信号通路调控帕金森病小鼠黑质NF-κB和iNOS的表达

目的探讨P38丝裂原活化蛋白激酶（P38 MAPK）信号通路与核因子NF-κB、一氧化氮合酶（inducible nitricoxide, iNOS）
之间的关系,通过给予P38 MAPK特异性抑制剂SB203580,研究P38 MAPK信号通路在1-甲基-4-苯基-1,2,3,6-四氢吡啶
（MPTP）制备的帕金森病（PD）小鼠模型的作用机制。方法将小鼠随机分为模型组、干预组和对照组。观察小鼠行为学变化,
采用免疫组织化学和免疫蛋白印迹法观察小鼠黑质酪氨酸羟化酶（TH）、磷酸化P38（p-P38）、NF-κB和iNOS的表达变化;以及
给予SB203580后对上述变化的影响。结果与对照组相比,模型组小鼠出现典型PD症状,TH阳性神经元明显丢失、蛋白水平
下降,P38 MAPK信号通路被激活,其磷酸化产物p-P38表达明显增多,NF-κB和iNOS表达也明显增加;经SB203580干预处理
后,上述变化均减轻。结论P38 MAPK信号通路可能参与激活NF-κB、iNOS而诱导PD模型小鼠黑质多巴胺能神经元的损伤,
采用SB203580抑制P38 MAPK信号通路可对PD模型小鼠多巴胺神经元起到保护作用。
     

苯扎贝特促进内皮细胞的增殖和迁移

目的:苯扎贝特对牛主动脉内皮细胞(BAECs)增殖和迁移的影响及信号转导机制。方法:BAECs给予不同浓度的苯扎贝特和(或)信号转导抑制剂,分别行细胞计数、MTT检测、刮痕修复、Boyden趋化小室检测。结果:苯扎贝特显著促进BAECs的增殖、趋化和迁移并呈剂量依赖效应,而一氧化氮合酶抑制剂、ERK抑制剂和PI3K抑制剂均可显著抑制上述效应。结论:苯扎贝特可显著促进BAECs增殖、趋化和迁移,该作用由MAPK、PI3K和由其上调的一氧化氮介导。     

高糖激活WNT信号通路促进血管平滑肌细胞钙化

目的探讨高糖导致血管钙化机制是否与WNT信号通路有关。方法采用体外血管钙化模型,高糖诱导血管平滑肌细胞
钙化,检测WNT信号分子和骨相关蛋白Cbfa1,Osx,OCN,BMP2的表达以及细胞钙化程度。观察WNT信号抑制剂Dkk1对高
糖诱导的血管平滑肌细胞钙化和Cbfa1,Osx,OCN,BMP2表达的影响。结果高糖能上调血管平滑肌细胞WNT信号通路分子
包括Wnt3a,Wnt7a,Fzd4,Wisp1 mRNA的表达（1.86±0.15, 1.68±0.13, 2.10±0.17, 2.30±0.20, P<0.05）,促进WNT信号通路关键
分子β-catenin的磷酸化（2.70±0.22, P<0.05）,激活WNT信号通路。使用WNT信号抑制剂Dkk1能减轻血管平滑肌细胞钙化,
下调骨相关蛋白Cbfa1,Osx,OCN,BMP2 mRNA的表达［（51±9）%,（58±11）%,（56±10）%,（62±10）%,P<0.01）］。结论WNT
信号通路参与了高糖诱导的血管平滑肌细胞钙化。
     

腺病毒介导靶向NF-κB基因的shRNA对体外食蟹猴子宫内膜细胞增殖活性的影响

目的合成高特异性靶向NF-κB基因的shRNA腺病毒载体,观察其对体外培养的食蟹猴子宫内膜细胞的增殖活动是否具
有直接的抑制效应。方法设计携带有NF-κB-p65基因及空载基因的shRNA腺病毒载体,体外培养食蟹猴子宫内膜细胞,分成
实验组及对照组,实验组转染携带NF-κB-p65 shRNA的腺病毒,对照组转染携带空载基因的腺病毒,共培养后观察有关细胞增
殖活性如凋亡蛋白及细胞周期的改变情况。结果腺病毒载体PCR和测序结果与预期结果一致,经包装产生的病毒滴度为
1.58×1011 U/ml。NF-κB-p65-shRNA腺病毒感染食蟹猴子宫内膜细胞后,实验组子宫内膜细胞凋亡蛋白的表达水平明显高于阴
性对照组（P<0.05）;实验组凋亡细胞较对照组明显增多,进入细胞分裂期细胞数明显少于对照组（P<0.05）。结论携带NF-κB
基因的腺病毒体外感染食蟹猴子宫内膜细胞后可加速子宫内膜细胞的凋亡,并抑制子宫内膜细胞的增殖,为后期该基因在食蟹
猴子宫内膜异位症模型上的研究提供理论基础。
     

喉鳞癌组织中SMG-1、ATM和P53的表达及临床意义

目的检测SMG-1、ATM和P53在喉鳞癌组织中的表达,探讨它们在肿瘤发生发展过程中的相互作用。方法收集2006年
1月1日~2009年8月31日在耳鼻咽喉科住院手术的喉鳞癌患者标本,采用免疫组化法检测63例喉鳞癌、30例癌旁正常组织中
SMG-1、ATM和P53 蛋白的表达情况,并对它们的表达与喉癌临床病理特征之间的关系以及三者的相关性进行分析。结果
SMG-1、ATM和P53在喉鳞癌组中的表达率分别为36.5%（23/63）、41.3%（26/63）、和57.1%（36/63）,与癌旁正常组织比较（分别
为73.3%、83.3%、和20.0%）,差异有统计学意义（P<0.05）;SMG-1表达与T分期和原发部位呈显著相关（P<0.05）,与患者年龄、
N分期、病理分级无关（P>0.05）。ATM和P53表达均与患者年龄、T分期、N分期、原发部位、病理分级无关（P>0.05）。SMG-1阴
性表达患者的五年生存率明显高于阳性患者,差异有统计学意义（P<0.05）。SMG-1 和P53 的表达之间存在负相关关系
（r=-0.476, P<0.01）。结论SMG-1 、ATM和P53与喉癌的发生关系密切,SMG-1表达是反映喉癌临床病理特征和预后的重要生
物学指标,其可能通过调控P53表达,共同在喉癌的发生发展中起重要作用。
     

Exendin-4 通过PI3K/Akt 信号通路促进脂肪干细胞旁分泌细胞因子

目的探讨Exendin-4 促进脂肪来源干细胞（ADSCs）旁分泌细胞因子的机制。方法混合酶消化法提取和培养SD大鼠
腹股沟处的脂肪干细胞,使用流式细胞学检测有或无Exendin-4 处理后的第4 代ADSCs表面标记物,MTT法绘制0、1、5、10、
20 nm/L不同浓度Exendin-4下的ADSCs生长曲线;qPCR法检测不同浓度Exendin-4处理12 h后bFGF、VEGF、HGF、IGF-1的
表达变化。Western blotting和qPCR检测Exendin-4对于Akt通路的作用。同时添加通路阻断剂LY-294002,使用ELISA检测
Akt 通路阻断后Exendin-4 对于旁分泌蛋白的影响。结果分离培养的ADSCs 高表达CD29、CD90、CD105,低表达CD34、
CD45,并且能够多向分化为脂肪细胞、骨细胞,符合间充质干细胞的表型特点。Exendin-4处理后,不仅不会改变ADSCs的表
型,还能以浓度依赖方式促进ADSCs 在体外增殖（P<0.05）。不同浓度Exendin-4 处理ADSCs 12 h 后,旁分泌蛋白bFGF、
VEGF、HGF、IGF-1的表达量逐渐提高,其中10 nm/L Ex-4处理12 h可能为最佳处理浓度（P<0.05）。Western blotting和qPCR
提示Exendin-4 能够显著提高胞内Akt 的磷酸化水平,而给予LY-294002 后,磷酸化Akt 表达减弱,同时ADSCs培养液上清中
bFGF、VEGF、HGF、IGF-1的含量也明显降低（P<0.05）。结论短暂Exendin-4处理不会改变ADSCs表型,但能加强细胞的增殖
能力,且以剂量依赖方式促进干细胞旁分泌细胞因子bFGF、VEGF、HGF、IGF-1。10 nm/L可能为Exendin-4 最适促旁分泌浓
度,其扩大干细胞旁分泌的机制部分是通过激活PI3K/Akt信号通路来介导。
     

舒芬太尼预处理对大鼠心肌缺血再灌注时PI3K/Akt的影响

目的研究舒芬太尼预处理对大鼠心肌缺血再灌注损伤的影响及PI3K/Akt（P-Akt）信号通路在其中的作用。方法选择健
康雄性大鼠60只,体质量250~350 g,随机分为5组：假手术组（Sham组）,缺血再灌注组（I/R组）,舒芬太尼预处理组（Spc组）,舒
芬太尼预处理联合PI3K抑制剂组（Spc+W组）,PI3K抑制剂组（W组）。通过结扎大鼠左冠状动脉前降支30 min,松开结扎
线复灌120 min制作心肌缺血再灌注模型。Sham组：只挂线,不结扎,持续150 min;I/R组：缺血30 min,再灌注120 min;Spc组：
缺血前采用微量注射泵股静脉泵注舒芬太尼1 μg/kg,泵注5 min,停止5 min,重复处理3次,总量共3 μg/kg的预处理方式,缺血
30 min,再灌注120 min;Spc+Wortmannin 组：舒芬太尼预处理前5 min给予PI3K抑制剂（15 μg/kg）,缺血前30 min舒芬太尼预
处理,缺血30 min,再灌注120 min;Wortmannin 组：缺血前35 min给予PI3K抑制剂（15 μg/kg）,缺血30 min,再灌注120 min。
于基础状态（T0）、缺血前即刻（T1）、缺血30 min（T2）、再灌注30 min（T3）、再灌注120 min（T4）记录各组大鼠心率和平均动脉压。
再灌注末抽取动脉血,离心取血清测定肌酸激酶同工酶（CK-MB）和乳酸脱氢酶（LDH）。实验结束时,各组取6只大鼠心脏测算
心肌梗死面积,其余6只大鼠采用Western blot测定心肌组织P-Akt的表达。结果与Sham组比较,I/R 组和Spc组P-Akt表达增
高（P<0.01）,Spc+W组和W组P-Akt表达水平差异无统计学意义（P>0.05）。与I/R 组相比,Spc组心肌梗死面积减少（P<0.01）,
CK-MB（P<0.01）、LDH（P<0.01）降低,心肌组织P-Akt 表达上调（P<0.01）,平均动脉压略有上升,但无统计学差异（P>0.05）,
Spc+W组和W组梗死面积、CK-MB、LDH差异无统计意义（P>0.05）。结论舒芬太尼预处理可减轻大鼠心肌缺血再灌注损伤,
增加P-Akt的表达,这种保护作用可能与PI3K/Akt信号通路的激活有关。