应用PCR法检测霍乱O_(139)肠毒素

O_(139)霍乱弧菌是第一个能引起霍乱流行的非O_1群霍乱孤菌。它所引起的临床症状和流行特点与O_1群霍乱弧菌引起的霍乱病极为相似,也能产生效泻较强的霍乱肠毒素(CT),具有CTX基因。因此检测O_(139)霍乱弧菌是否携带CT基因,这对了解该菌株的致病力,控制其传播和流行具有重要意义。我们采用PCR技术对本市(1996年)收集的15株O_(139)霍乱弧菌进行CT基因检测,现将检测结果报告如下。     

1996年台州市霍乱O_(139)疫情特点与防制

为总结防治O_(139)所致霍乱的工作经验,探索霍乱弧菌O_(139)所致霍乱的流行规律,为制定O_(139)所致霍乱控制措施提供依据.现将1996年台州市首次发生的O_(139)所致霍乱疫情特点与防制工作情况报道如下.     

O139霍乱弧菌在东南亚引起旅行者感染:一起洲际性食物传播的爆发

1992年10月～1993年,O_(139)霍乱弧菌曾先后在印度和孟加拉国引起大流行。1994年3月,在去东南亚旅行的同一艘船上又有2名旅行者感染O_(139)菌株。为此,作者对发生在去流行区旅行者中的这起O_(139)霍乱弧菌感染爆发进行了临床和流行病学调查,确定传     

O139霍乱弧菌噬菌体的分离

为了探索O139霍乱弧菌分型技术 ,对江苏省临床患者的O139霍乱弧菌施行噬菌体分离 ,得到 3株噬菌体 ,命名为JSФ5、JSФ9、JSФ10。在O139菌株的裂解实验中 ,上述菌株被裂解的 (复愈株 )占82 .2 % ,不被裂解的 (溶源株 )占 6 .7% ,非溶复株占 11.1% ,这一现象相同于“kappa”噬菌体把ElTor霍乱弧菌裂解为溶源株、复愈株和非溶复株。用JSФ5裂解JSN14得到菌株JSN14 (JSФ5 /JSN14 )。它对JSФ5、JSФ9、JSФ10和它自己的过夜培养物不裂解 ,显示JSФ5是溶源性噬菌体 ;JSФ5、JSФ9、JSФ10对江苏省O139霍乱弧菌的裂解谱相同 ,表明这 3株噬菌体可能是相同的类型     

二株O139霍乱弧菌在不同诊断血清中凝集结果的观察与分析

霍乱病人的确诊到目前为止,有赖于细菌学的诊断,而细菌学的确诊至目前依赖于血清学的诊断。1999年9月21日和9月24日,我市在基层上报的2例疑似霍乱病人中相继检出二株O_(139)霍乱弧菌,2例病人的分离,培养、生化特点,全部符合霍乱生物学特点,但是在霍乱、O_(139)霍乱混合多价及单价诊断血清,     

四川省2005年霍乱分子流行病学特征

目的：分析四川省2005年霍乱弧菌分子特征,以及霍乱暴发疫情分离的菌株与菌株之间,疫情分离的菌株与海、水产品监测分离的霍乱弧菌之间的遗传相关性,查找霍乱传染来源,为预测疫情和制定防治措施提供依据.方法：利用聚合酶链反应（PCR）检测O139群霍乱弧菌特异性编码脂多糖基因（LPS）和霍乱毒力基因（ctxAB）;脉冲场凝胶电泳对菌株进行分子分型,所得结果以BioNumerics V4.0软件UPGMA方法进行聚类分析.结果：所试16株霍乱弧菌14株LPS阳性,为O139群霍乱弧菌;另2株为O1群稻叶型霍乱弧菌.2株稻叶型霍乱弧菌和1株O139群霍乱弧菌ctxAB阴性,其余13株菌均具有ctxAB,为产毒株.对16株菌以NotⅠ酶切后PFGE可分为5个型别.O139群霍乱弧菌优势流行株与从甲鱼分离的O139群霍乱弧菌PFGE型别一致,且同为产毒株.结论：甲鱼等海、水产品被O139群霍乱弧菌污染情况严重,甲鱼中分离的O139群霍乱弧菌与霍乱疫情分离菌株之间高度同源,被污染的甲鱼可能是本年度食源性霍乱暴发的主要传染来源之一,海、水产品的监测是近期霍乱防控的重点.     

温州市1999年霍乱病原学鉴定报告

1999年本实验室收到各县(市)站上送霍乱弧菌菌株共133株,其中O₁₃₉群霍乱弧菌122株,小川型霍乱弧菌11株.经血清学、噬菌体弃去生物分型及药敏试验,结果发现:今年的噬菌体分型与药敏试验有新的动向.     

江苏省1999—2005年霍乱弧菌的脉冲场凝胶电泳分析

目的了解江苏省1999-2005年间分离的霍乱弧菌核酸特征,及O139群与O1群霍乱弧菌在基因组水平上的关联。方法 NotⅠ酶切霍乱弧菌基因组,脉冲场凝胶电泳(PFGE)得到指纹图谱,并进行比较分析。结果 PFGE指纹图谱将全部136株霍乱弧菌分为6类,PFGE-A型由1株临床来源El Tor、120株临床来源和9株环境来源的O139组成,PFGE-B型由1株临床来源的El Tor组成,PFGE-C型由1株临床来源的El Tor和1株临床来源的O139组成,PFGE-D型由1株环境来源的El Tor组成,PFGE-E型由1株环境来源的O139组成,PFGE-F型由1株临床来源的O139组成。结论PFGE指纹图谱提示O139起源于不同克隆的El Tor霍乱弧菌,为了解O139的进化路线和流行规律提供了有效证据。作为高分辨率的基因分型工具,PFGE可用于追踪霍乱弧菌的暴发流行传染源,并在其分子流行病学研究中发挥重要作用。     

珠江河口水体霍乱弧菌监测及菌株毒力基因分布特征

目的 了解珠江河口水体中O1群和O139群霍乱弧菌的分布状况,分析菌株的分子特征和毒力基因特征.方法 对2009年1月至2010年12月从珠江河口水体中分离的59株O1群和10株O139群霍乱弧菌,采用聚合酶链反应(PCR)方法体外检测ctxA、tcpA、ace、zot、tcpl,hlyA、toxR和ompU等毒力相关基因,并进行毒力相关基因分型分析,对限制性内切酶Not Ⅰ消化后的基因组DNA进行脉冲场凝胶电泳(PFGE)分析,采用BioNumerics软件分析图谱,得到菌株带型相似性的聚类分析树状图.结果 2009-2010年共采集1 152份水体标本,分离得到O1/O139群霍乱弧菌69株,其中O1群埃尔托霍乱弧菌59株(小川型18株,稻叶型41株),O139群霍乱弧菌10株.PCR检测69株菌ctxA全部阴性,hlyA和toxR全部阳性,基因分型可分成9个型.稻叶型菌株中,34.15％(14/41)为hlyA+ toxR+ ompU+ ace+ zot+ tcpⅠ+型;小川型菌株中,66.67％(12/18)为hlyA+toxR+型;O139群菌株中,70％(7/10)为hlyA+ toxR+型.PFGE分型发现,O139群菌株PFGE相似度为69.9％～ 95.5％;O1群菌株相似度为72.8％～ 100.0％,可分成3个聚类.结论 在霍乱流行间歇期,该地区外环境水体中O1群和O139群霍乱弧菌非产毒株广泛存在,基因型别多样.     

广东省2009-2014年霍乱弧菌耐药监测分析

目的 了解广东省2009-2014年霍乱弧菌耐药情况,为霍乱临床合理用药和防治提供科学依据。方法 采用WHO推荐的改良K-B纸片扩散法,对在广东省2009-2014年收集的253株霍乱弧菌进行12种抗菌药物的药敏试验。结果 广东省2009-2014年共收集分离霍乱弧菌O1群189株(小川型72株,稻叶型117株),O139群26株,非O1/O139群38株;药敏结果显示,253株霍乱弧菌对头孢噻肟(CTX)和头孢曲松(CRO)均100% 敏感,对诺氟沙星(NOR)、环丙沙星(CIP)、阿米卡星(AMK)的敏感率分别为98.8% 、98.4% 、98.0%;O1群小川型、O1群稻叶型、O139群、非O1/O139群霍乱弧菌比较,不同血清型霍乱弧菌对萘啶酸(NAL)、四环素(TCY)、多西环素(DOX)、复方新诺明(SXT)、氨苄西林(AMP)、阿莫西林(AMX)、氯霉素(CHL)等抗生素的耐药率差异均有统计学意义(均P<0.05);多重耐药分析结果显示,37.5% 的菌株同时对≥3种抗生素耐受,其中有12株O1群稻叶型菌株同时对≥6种抗生素耐受,有3株O1群小川型和1株非O1/O139群菌株同时对6种抗生素耐受,有2株O139群菌株同时对4种抗生素耐受。结论 CTX、CRO、NOR、CIP、AMK对霍乱弧菌的敏感率较高;非O1/O139群霍乱弧菌感染比例增高且部分菌株表现出多重耐药现象,应加强此类菌株的耐药监测。     

疑似霍乱弧菌鉴定及分子分型检测

目的 对北京市某医院肠道门诊2株疑似霍乱弧菌进行鉴定,检测其主要毒力基因,并分析其基因型别特征.方法 利用细菌生化鉴定条(API 20 E)进行生化鉴定,玻片凝集法确定其血清型别,应用PCR及测序技术分析其16 S rRNA基因;PCR检测其8个主要毒力基因,脉冲场凝胶电泳(PFGE)分析其基因型别.结果 经鉴定,该2株疑似霍乱菌株均为非O1非139群霍乱弧菌,经16 SrRNA分析与美国国家生物技术信息中心数据库中霍乱弧菌相似性达100%,均包含毒力基因hylA、ompW和toxR,PFGE结果显示2株菌具有完全不同的带型.结论 2株疑似霍乱弧菌为非O1非139群霍乱弧菌,其致病因素与(hylA)、(ompW)、(toxR)毒力基因有关,并且2株菌遗传关系较远.     

广州市151株非0_1群霍乱弧菌生物学特性及血清分型

本文报道广州市151株非O_1群霍乱弧菌的生物学特性和血清分型试验结果。全部菌株生物学特性与国内外报道一致。在151株菌株中有98株可以分型,33株未定型,需要进一步研究。98株菌分属39个不同血清型,以VBO_1型最多,占8.6％,其次为VBO_(51),O_2、O_(10)、O_(11)型,分别占6.62％和3.97％。从急性腹泻病人粪便标本获得的26株菌对新霉素、氯霉素、红霉素等23种抗生素敏感;绝大多数菌株对青霉素、两性霉素等耐药。非O_1群霍乱弧菌是指与O_1群霍乱弧菌鞭毛抗体相同,生化性状相似,菌体抗原不同的一组弧菌。该菌对人类有致病性,被列为急性腹     

2005年-2010年武汉市霍乱弧菌监测分析

目的:对2005年-2010年霍乱弧菌监测中分离的25株疑似菌株进行系统鉴定。方法:分离培养、血清学试验、系统生化鉴定(VITEK32)、PCR检测其分型及毒素基因、药敏试验。结果:25株菌鉴定为霍乱弧菌的有21株,与霍乱弧菌发生交叉凝集4株;病例监测主要为O139霍乱弧菌、外环境监测主要为O1群霍乱弧菌;病例监测菌株携带霍乱弧菌毒素基因(ctxAB)、其他菌株均不携带霍乱弧菌毒素基因(ctxAB)。药敏实验结果对诺氟沙星和环丙沙星敏感,对其他抗生素有不同程度的耐药。结论:武汉市霍乱弧菌在病例监测中主要为O139群霍乱弧菌产毒株、外环境监测中主要为O1群霍乱弧菌非产毒株,不同型别菌株存在不同程度耐药性。     

ERIC-PCR用于珠海口岸霍乱弧菌的分子分型研究

目的针对珠海口岸分离的霍乱弧菌进行分子分型研究。方法选择46株菌株(包括45株霍乱弧菌和1株弧菌属细菌),采用肠杆菌基因间重复一致序列—聚合酶链反应技术(Enterobacteial Repetitive Intergenic Consensuspolymerase chain reaction,ERIC-PCR)扩增细菌的基因组DNA,对产生的指纹图谱进行聚类分析。结果 ERIC-PCR绘制的基因组指纹图条带清晰可辨且有一定的多态性,聚类分析结果显示ERIC-PCR将46株菌株分为22个聚类群,其中从珠海口岸供澳水产品中分离的30株O1群霍乱弧菌非流行株被细分成12个聚类群。ERIC-PCR能有效区分O1群、O139群和非O1/非O139群霍乱弧菌血清群,也能完全区分霍乱弧菌流行株与非流行株。结论 ERIC-PCR是一种有效的、具有高识别力的霍乱弧菌分型方法。本研究获得的霍乱弧菌分子分型数据为珠海口岸霍乱的防控提供了有价值的基础资料。     

随机引物PCR方法用于霍乱分子流行病学研究

研究建立了随机引物PCR方法用于霍乱分子流行病学研究,其中两组引物针对霍乱弧菌重复插入序列设计,一组引物为任意序列.对2株霍乱弧菌O1群古典型(CVC)、81株埃尔托型(EVC)和10株O139群进行了分析,上述菌株经PCR鉴定,均携带霍乱肠毒素(ctx)基因和毒力协同调节菌毛(tcp)基因.2株CVC分为2个类型,81株EVC分为14个类型,10株O139群分为3个类型.其中10株EVC分离于一次霍乱暴发,分为2个类型,提示该次暴发可能存在多个传染源.随机引物PCR方法简便、快速、分辨力高,在霍乱分子流行病学研究中有较大的应用前景.     

2010年湖南省霍乱弧菌病原学特征及溯源分析

目的分析2010年湖南省霍乱弧菌分离株的病原学特征,比较霍乱疫情分离株与常规监测分离株之间的克隆相关性,追溯传染源。方法对疫情与监测分离到的42株霍乱弧菌进行常规生物分型和PCR检测毒力基因,对23株代表株进行药敏试验,对18株代表株通过脉冲场凝胶电泳(PFGE)获得电泳图谱,利用BioNumerics软件对图谱进行聚类分析,探讨菌株间的相关性。结果 2010年从湖南省霍乱疫情中分离10株霍乱弧菌均为O139群,ctxA阳性率100%。常规监测分离霍乱弧菌32株,其中O1群15株,全部为ctxA阴性株;O139群17株,ctxA阳性率94.11%。23株霍乱弧菌耐药结果显示强力霉素、复方新诺明的耐药率分别为47.83%、56.52%,发现1株对诺氟沙星、环丙沙星耐药。PFGE方法显示有5种脉冲场凝胶电泳图谱,相似率在82%~100%之间,甲鱼中分离的O139群霍乱弧菌与霍乱疫情分离菌株之间高度同源。结论湖南省霍乱弧菌存在紧密相关的流行克隆群;被O139群霍乱弧菌污染的甲鱼很可能是湖南省霍乱疫情发生的主要传染来源,海、水产品的监测是霍乱防控的重点;要密切关注对诺氟沙星、环丙沙星的耐药变化。     

江西省2006-2008年人间霍乱弧菌致病力及药敏检测

目的掌握江西省人群中霍乱弧菌菌型变迁、毒力基因、耐药情况,为霍乱防治提供科学依据。方法采用血清学分型法对人群分离的霍乱弧菌进行分型,同时以主要毒力基因ctx为引物对分离的霍乱弧菌进行PCR扩增,并采用改良K-B纸片法对部分菌株进行10种抗生素的药物敏感试验。结果 2006-2008年期间,共从人群中分离到霍乱菌株139株(O139群136株,O1群小川型3株),其中从患者中分离到O139群41株、O1群小川型1株;从密切接触者中分离到O139群95株、O1群小川型2株。毒力实验结果显示O139群中除1株外,其余的均扩增出与阳性对照一致的毒力基因(ctx)条带,而O1群小川型均未扩增出毒力基因(ctx)条带,与阴性对照一致。药敏结果显示:O139群和O1群小川型霍乱弧菌均对利福平、丁胺卡那、氟哌酸、环丙沙星、头孢噻肟100%敏感,耐药性在90%以上的药物是四环素、强力霉素。结论江西省2006-2008年间人群中分离到的霍乱弧菌中,O139群与O1群小川型并存,O139群为优势菌;O139群菌株绝大多数为产毒株,小川型均为非产毒株。药敏结果供霍乱治疗和必要时的预防药物选择提供依据。     

拱北口岸出口水产品霍乱弧菌监测报告

[目的]2000年对拱北口岸出口水产品污染霍乱弧菌情况进行监测.[方法]共采集出口澳门水产品9255份,按《霍乱防治手册》方法进行检验.[结果]检出22株霍乱弧菌,其中小川型10株,稻叶型8株,O(139)群4株.[结论]拱北口岸出口水产品霍乱弧菌检出率为0.24％,比去年同期检出率0.04％(4／9166)明显增高.     

MPCR检测食品中霍乱弧菌和副溶血性弧菌的研究

目的建立一种快速、敏感的方法,用于检测食品中O1群(EVC)、O139群霍乱弧菌和副溶血性弧菌。方法针对霍乱弧菌O139特异基因(T139)、肠毒素A亚单位基因(ctxA)、毒力协调A亚单位基因(tcpA),副溶血性弧菌热稳定性直接溶血素基因(tdh)为靶序列,建立MPCR检测方法,相应扩增片段依次为417bp、564bp、471bp和202bp。结果用该方法对EVC、O139VC、副溶血性弧菌的标准菌株和野生株,扩增片段出现极好的特异性,而35株非O1非O139群霍乱弧菌、沙门氏菌等未见扩增带。人工污染的罗非鱼、牡蛎、鱼肠和鳃混合物的检出限EVC为22cfug、O139为50cfug、副溶血性弧菌为65cfug,整个实验过程8～10h完成。结论实验结果表明MPCR是敏感、省时、省力的检测方法。     

广州海珠地区非O1/非O139群霍乱弧菌流行状况调查及生物学特征研究

目的 了解广州海珠地区2001-2009年非O1/非O139群霍乱弧菌的流行、分布状况及生物学特征,为防控该类病原菌引起的急性腹泻病提供科学依据.方法 参照<霍乱防治手册>(第5版)中的检测方法,对本区珠江河水、饮用水、养殖水、各种海(水)产品、市售熟食等外环境标本764份、健康人群标本189份及肠道门诊腹泻患者标本3398份,共计4351份标本进行非O1/非O139群霍乱弧菌的检定.结果 4351份标本共检出非O1/非O139群霍乱弧菌101株,总检出率为2.32%;其中有66株可分型,分属于26个血清型,分型率为65.3%;VBO9、VBO38和VBO76为优势菌.外环境与腹泻患者标本中分离到9株同型别非O1/非O139群霍乱弧菌,提示两者可能存在关联.结论 非O1/非O139群霍乱弧菌在本地区的血清型分布呈现多样性,在人群中有一定的感染率;外环境中该类菌群广泛存在,对人群是一个潜在的危害因素.