再生障碍性贫血患儿骨髓间充质干细胞体外造血支持作用的研究

目的：骨髓间充质干细胞（mesenchymal stem cell, MSC）具有造血支持作用，再生障碍性贫血（aplastic anemia, AA）的发病机制涉及到造血微环境的异常，将两方面联系起来，体外研究再障患儿骨髓MSC的造血支持作用与再障的造血微环境异常的关系。方法：采集24例再障患儿和19例对照儿童的骨髓标本，分离、培养和扩增MSC；观察细胞形态及骨髓MSC成纤维细胞集落形成单位（CFU-F）计数分析；应用MTT法检测骨髓MSC粘附造血细胞的能力；应用ELISA检测骨髓MSC分泌干细胞生长因子（SCF）的浓度；对骨髓MSC进行贴壁培养，接种骨髓单个核细胞，计数扩增细胞数和红系爆式集落生成单位（BFU-E），粒细胞巨噬细胞集落生成单位（CFU-GM），混合细胞集落生成单位（CFU-GMME）。结果：①再障患儿骨髓MSC传代时间延长，CFU-F计数15.70±5.78显著低于对照组21.73±5.74，P<0.05；②再障患儿骨髓MSC培养上清中SCF的浓度30.69±16.82 pg/mL显著低于对照组50.74±14.83 pg/mL，P<0.01；③再障患儿骨髓MSC支持下的单个核细胞（MNC）细胞扩增总数和红系爆式集落生成单位（BFU-E），粒细胞巨噬细胞集落生成单位（CFU-GM），混合细胞集落生成单位（CFU-GMME）计数显著低于对照组，P<0.01。结论： 再障患儿骨髓MSC体外造血支持作用较对照儿童骨髓MSC显著降低，其发生机制可能与再障患儿骨髓MSC增殖能力减低及分泌SCF减少有关。     

骨髓间充质干细胞缺陷与获得性再生障碍性贫血

获得性再生障碍性贫血(AA)患者骨髓间充质干细胞(BM-MSCs)缺陷已成为近年来研究的热点之一.该文对BM-MSCs 缺陷在AA 发病中的作用及其对AA 治疗的临床应用进行综述.越来越多的实验室证据证明了BM-MSCs 缺陷在AA 的发病中极有可能起着重要的作用,无论是其生物学特点、基因表达谱的缺陷,抑或是增殖分化能力、造血支持作用乃至免疫调节功能的耗竭,都成为在免疫失衡基础上促使AA 不断进展至难以恢复的重要节点.随着MSCs 研究的不断深化,将恢复骨髓造血微环境为主要目的的MSCs 输注可能成为AA 治疗的新模式.     

再生障碍性贫血患儿骨髓间充质干细胞分离及培养

目的 分离再生障碍性贫血(再障)患儿骨髓间充质干细胞,进行体外培养,为进一步研究打下实验基础.方法 从再障患儿及正常志愿者骨髓中分离骨髓间充质干细胞,进行体外培养,诱导向成骨细胞、成脂细胞分化和流式细胞仪检测表面标志CD34、CD45、CD73和CD90.绘制生长曲线描述原代和传代细胞生长情况.结果 分离的贴壁细胞经向成骨细胞和脂肪细胞分化诱导培养,分别显示茜素红染色和油红染色阳性;CD73和CD90阳性.生长曲线显示,与正常志愿者相比再障患儿体外培养的骨髓间充质干细胞传代培养中生长能力减低.结论 再障患儿骨髓间充质干细胞存在异常,可能在再障发病机制中起着重要作用.     

儿童再生障碍性贫血造血干细胞移植相关并发症

再生障碍性贫血(AA)是一种骨髓造血衰竭性疾病,主要表现为骨髓造血功能低下、全血细胞减少和贫血/出血/感染征候群。异基因造血干细胞移植是治疗重型AA的重要手段。移植相关并发症的发生及管理仍是临床一巨大挑战,其预防和治疗可直接影响移植的效果、患儿长期的生存及生活质量。文章对AA患儿造血干细胞移植过程中常见移植并发症的诊断、预防及治疗进展予以阐述,以期提高患儿移植成功率及生存率。     

再生障碍性贫血患儿骨髓间充质干细胞基因表达谱及成纤维细胞生长因子表达

再生障碍性贫血(aplastic anemia,AA)是多种病因导致的以骨髓衰竭伴全血细胞减少为特征的疾病,目前认为免疫紊乱与其发病有关,具体机制还不清楚.间充质干细胞(mesenchymal stem cells,MSCs)具有免疫调节功能,在维持骨髓微环境稳定方面起着重要作用.     

Fas/FasL在再生障碍性贫血患儿中的表达及意义

目的研究凋亡基因Fas及其配体(FasL)在儿童再生障碍性贫血(AA)中的表达及意义,探讨AA的发病机制。方法30例AA患儿分为重型再生障碍性贫血(SAA)组12例,慢性型再生障碍性贫血(CAA)组18例,对照组为健康体检儿童10例。采用流式细胞术结合单克隆抗体荧光染色的方法测定AA患儿Fas/FasL表达水平及CD34 细胞数量。比较各组间表达差别。结果AA患儿Fas表达水平显著高于健康对照组(P<0.05),但SAA与CAA组Fas表达水平无差别(P>0.05);FasL表达水平在AA和健康对照组比较无差异(P>0.05)。CD34 细胞数量AA组明显低于健康对照组(P<0.05)。结论Fas/FasL系统参与诱导AACD34 细胞凋亡过程,导致造血干细胞减少,骨髓造血衰竭。     

抗胸腺细胞球蛋白治疗儿童再生障碍性贫血8例疗效分析

再生障碍性贫血(aplastic anemia),简称再障,是一种与免疫密切相关、主要由T淋巴细胞介导的骨髓衰竭性疾病,多数患儿经过造血干细胞移植或免疫抑制治疗可获得长期生存。因为异基因造血干     

抗胸腺细胞球蛋白治疗儿童再生障碍性贫血8例疗效分析

再生障碍性贫血(aplastic anemia),简称再障,是一种与免疫密切相关、主要由T淋巴细胞介导的骨髓衰竭性疾病,多数患儿经过造血干细胞移植或免疫抑制治疗可获得长期生存。因为异基因造血干     

小儿再生障碍性贫血伴骨髓细胞病态造血现象临床研究

再生障碍性贫血(AA)是血液系统中较少见的,以造血细胞干细胞损伤,外周全血细胞减少为特征的疾病,一般骨髓中不会出现病态造血现象,但在我们最近的观察中发现,有些AA病人也会出现。AA和骨髓增生异常综合征(MDS)在临床表现上尤为相似,给医生诊断及治疗带来阻碍。那么这种有病态造     

脐血造血干细胞移植患儿骨髓抑制期护理

脐血造血干细胞移植是目前根治小儿白血病、恶性肿瘤及再生障碍性贫血的最有效方法之一。自 1998年 8月— 2 0 0 0年 7月我科移植组收治了 5例脐血造血干细胞移植患儿 ,经过精心治疗及细心护理 ,全部安全顺利渡过了骨髓抑制期 ,现总结如下。1　临床资料5例脐血造血干细胞移植患儿中男1例 ,女 4例。年龄 3岁至 11岁间 ,其中急性淋巴细胞性白血病 (ＡＬＬ Ｌ2 ) 2例 ,恶性淋巴肉瘤白血病 1例 ;神经母细胞瘤骨髓转移 2例。由于超大剂量化疗预处理 ,患儿外周血三系减少 ,在骨髓抑制期出现各种临床症状如 :贫血加重、全身感染、精神萎靡、周身疲…     

Low Expression of Basic Fibroblastic Growth Factor in Mesenchymal Stem Cells and Bone Marrow of Children with Aplastic Anemia

Background: Our previous experiments with gene chip suggested that basic fibroblastic growth factor (FGF2) levels were lower in mesenchymal stem cell (MSC) from aplastic anemia patients. The purpose of this study was to determine the expression of FGF2 in MSC and in bone marrow of children with aplastic anemia to better understand the role of low FGF2 expression in the pathogenesis of aplastic anemia. Procedure: MSCs from the bone marrow of aplastic anemia children and control group were cultured in vitro. Growth curves of primary and passage MSC were plotted. FGF2 gene expression in MSCs was detected using quantitative real-time polymerase chain reaction (RT-PCR). FGF2 protein expression in mononuclear cells and FGF2 protein level in extracellular fluid of bone marrow were also investigated. Result: Decreased growth of MSCs from aplastic anemia children was observed after passage 8 in serial subcultivation, and FGF2 gene expression was downregulated. Within the patients’ bone marrow, low FGF2 expression was validated both in mononuclear cells and in the extracellular fluid. Conclusion: Low FGF2 gene expression in MSCs and low FGF2 protein level in bone marrow of aplastic anemia may involve to pathogenesis of aplastic anemia.     

当归注射液对免疫诱导再生障碍性贫血小鼠骨髓细胞CD_(34)~+及Fas抗原表达的影响

目的探讨当归注射液对免疫诱导再生障碍性贫血小鼠骨髓细胞CD34+及Fas抗原表达的影响。方法建立免疫诱导再障小鼠模型,随机分为当归组、再障组、正常组,分别测定各组小鼠的体重、外周血白细胞计数、骨髓单个核细胞计数以及流式细胞仪检测骨髓单个核细胞CD34+及Fas抗原表达的荧光强度,应用SPSS10.0统计软件进行分析。结果再障组及当归组小鼠的体重、外周血白细胞计数、骨髓单个核细胞计数较正常组均有降低,但当归组明显高于再障组(P<0.05),当归组骨髓细胞CD34+抗原表达的荧光强度(69.0±8.3)明显高于再障组(33.6±9.1,P<0.05),而与正常组(78.2±9.4)之间无显著性差异(P>0.05)。再障组骨髓单个核细胞Fas抗原表达的荧光强度(62.7±7.1)明显高于正常组(21.5±3.6,P<0.05),当归组骨髓单个核细胞Fas抗原表达的荧光强度(43.0±6.8)明显低于再障组(62.7±7.1,P<0.05)。结论当归能降低再障小鼠骨髓细胞Fas抗原的表达,减少细胞凋亡,促进骨髓造血细胞增生,有刺激造血作用。     

Low serum lipids suggest severe bone marrow failure in children with aplastic anemia

BACKGROUND: Significantly low serum lipid levels are occasionally seen at the time of diagnosis in children with aplastic anemia (AA). The aim of the present study was to clarify the pathologic and clinical significance of pretreatment serum lipid levels in AA. METHODS: A questionnaire seeking precise data about AA in pediatric patients, including the initial laboratory data at the time of onset of AA and the clinical course of these patients, was sent to 18 institutes in Japan; 13 institutes responded to the questionnaire. In this retrospective study, data concerning hematologic examination and serum lipids were available for analysis in 127 children with AA. Serum lipoprotein patterns were analyzed using conventional agarose electrophoresis in eight patients. In order to elucidate the cause of hypolipidemia in AA, we assayed serum macrophage colony stimulating factor (M-CSF), which is well known to have apparent cholesterol-lowering activity, by using an enzyme-linked immunosorbent assay in seven patients with hypocholesterolemia and compared the results with those obtained in patients with iron-deficiency anemia (IDA). RESULTS: We found that pretreatment total cholesterol (TC) and triglyceride levels in the serum correlated well with counts of both nucleated cells and hemopoietic cells in the bone marrow (BM) and were inversely correlated with the lymphocyte ratio in both the BM and peripheral blood. Patients with serum TC lower than 150 mg/dL showed a poor response to any form of therapy except BM transplantation. There was no difference in the serum lipoprotein patterns between the controls and patients examined. The serum M-CSF level was significantly higher in patients with TC levels lower than 150 mg/dL compared with controls. CONCLUSIONS: These results indicate that the pretreatment serum lipid level may reflect hematopoietic activity within the BM and can help to predict the therapeutic response of each case of AA to treatment with immunosuppressive drugs, corticosteroids and anabolic steroids. These results also indicate that M-CSF may be one of the contributing causes of the hypocholesterolemia that occurs in both AA and IDA.     

再生障碍性贫血患儿骨髓祖细胞培养的临床意义

目的探讨再生障碍性贫血(AA)患儿红细胞集落生成单位(CFU-E)、爆式红细胞集落生成单位(BFU-E)、粒细胞-单核细胞集落生成单位(CFU-GM)及巨核细胞集落生成单位(CFU-Meg)骨髓祖细胞培养情况,了解骨髓祖细胞在AA发病中的作用及意义。方法抽取28例AA患儿骨髓3～4mL,以淋巴细胞分离液提取单个核细胞,用磷酸盐缓冲液(PBS)洗涤2次,调节单个核细胞水平为106/mL,取0.3mL分别接种于红系、粒-单核系、巨核系培养基分别作4类祖细胞培养,在7、14d测定其集落数。结果28例AA中,4类集落数均值与对照组比较,差异有显著意义(P<0.01或P<0.001)。集落数随病情加重而逐步下降。4类集落数低于对照组患儿下限所占百分比分别为BFU-E35.71%、CFU-E85.71%、CFU-GM75.00%、CFU-Meg89.29%。治愈及进步者4类集落数接近对照组水平,治疗无效及进展者与治疗前比较无变化。结论动态监测AA患儿骨髓4类祖细胞集落数变化对辅助诊断、观察疗效及预后判断均有指导意义。     

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目的评价免疫调节T细胞和细胞因子在再生障碍性贫血(再障)细胞免疫功能紊乱中的作用。方法2004-02—2005-06中山大学第二附属医院采用流式细胞术检测27例特发性再障患儿骨髓及外周血淋巴细胞亚群和CD 4CD2 5T细胞水平,ELISA检测骨髓转化生长因子(TGFβ-1)和F lt-3L水平,并与正常儿童对照。结果与对照组比较,初诊再障患儿外周血和骨髓CD 8T细胞均显著增高(P<0.05),重型再障(SAA)组伴外周血CD3-CD 56NK细胞及骨髓B细胞显著下降(P<0.05)。初诊SAA组骨髓CD 4CD 25T细胞[(7.5±3.4)%]显著高于对照组[(4.3±0.9)%,P<0.05],初诊SAA组及轻型再障(MAA)组骨髓CD 4CD2 5/CD 4比值分别为(28.9±11.1)%和(28.2±9.4)%,均显著高于对照组[(17.4±0.9)%,P均<0.05],骨髓TGFβ-1分别为(2.2±1.7)μg/L和(2.0±0.6)μg/L,均较对照组[(4.4±0.9)μg/L]显著降低(分别为P<0.01、P<0.05),而F lt-3L水平分别为(1031.1±321.8)ng/L和(694.7±424.7)ng/L,均较对照组[(63.0±37.5)ng/L]显著增高(P均<0.01)。缓解期SAA儿童除外周血CD8 T细胞仍较对照组显著增高外,其余上述指标均接近正常水平。相关分析显示,骨髓CD4 CD 25T细胞与CD 3CD 4T细胞呈显著正相关(r分别为0.495、0.540,P<0.01);F lt-3L与骨髓CD 3、CD 4、CD 8T细胞及CD 4CD 25T细胞均呈显著正相关(r分别为0.732、0.542、0.688、0.405,P分别<0.01、0.01、0.01、0.05),而TGFβ-1与骨髓CD 8T细胞和F lt-3L水平呈显著负相关(r分别为-0.431、-0.482,P分别<0.05、<0.01)。结论儿童再障发病与CD 4CD 25T细胞数量缺乏无关,骨髓TGFβ-1水平显著降低和F lt-3L水平显著增高可能在再障儿童T淋巴细胞数量增多和功能紊乱中起重要作用。     

儿童再生障碍性贫血的分型研究

目的探讨儿童再生障碍性贫血(再障)的分型标准。方法对已经确诊的61例儿童急性再障和45例儿童慢性再障病例进行回顾性分析。结果急性再障患儿有如下特点外周血呈全血细胞减少,淋巴细胞比例明显增高;髂骨及胸骨骨髓呈多部位增生不良,造血细胞明显减少,非造血细胞明显增多,巨核细胞明显减少,小粒细胞面积＜50％,细胞成分以非造血细胞为主;增生活跃患儿的骨髓中,非造血细胞比例明显增多,巨核细胞明显减少。慢性再障患儿的特点是外周血呈血小板减少和(或)白细胞减少和(或)贫血的血象,淋巴细胞比例增高;髂骨骨髓以增生活跃为主,但粒细胞系比例减低,红细胞系比例可正常,非造血细胞比例增高,巨核细胞减少,小粒细胞面积＜50％,细胞成分以非造血细胞为主。结论儿童急性再障的表现与Camitta提出的重型再障的诊断标准相似,而儿童慢性再障的表现与Camitta提出的轻型再障不同,根据本文结果提出儿童再障的分型标准及胸骨骨髓在诊断急、慢性再障中的意义。     

儿童再生障碍性贫血-阵发性睡眠性血红蛋白尿综合征临床分析

为探讨儿童再生障碍性贫血 -阵发性睡眠性血红蛋白尿 (AA PNH)综合征的临床及实验室检查特点 ,特总结近年我科收治的 5例AA PNH综合征患儿的病历资料 ,从临床、血象、骨髓象、溶血方面的检查、CD5 9+细胞等方面分析其特点。结果显示儿童AA PNH综合征以学龄儿童为多见 ,本文报导 1例发病年龄 1岁半 ,为目前文献报导中年龄最小者 ;儿童AA PNH以AA伴PNH特征多见 ;临床上有严重贫血、肝脾稍大等特点 ;实验室检查可见全血细胞减少、Ret大多不低或升高、血片中可见有核红细胞 ;骨髓红系增生 ,粒红比例倒置、巨核系统大多增生低下 ;Hams试验、蔗糖水溶血试验、尿Rous试验、蛇毒因子 (Cof)溶血试验可阳性 ;血细胞膜CD5 9-细胞增多 ,粒细胞膜CD5 9-细胞比红细胞膜出现早。因此 ,可以结论　儿童AA PNH综合征多见于学龄期 ,以AA伴PNH特征多见。临床上对于全血细胞减少、骨髓红系增生、血Ret升高、血片中可见有核红细胞的患儿 ,应进一步做与PNH有关的检查 ,并综合分析 ,CD5 9-粒细胞增多具有早期诊断价值