丙型肝炎病毒核心蛋白下调沉默信息调节因子2相关酶1-AMP激活蛋白激酶信号通路活性致肝细胞能量代谢紊乱

目的 探讨沉默信息调节因子2相关酶1 (SIRT1)-AMP激活的蛋白激酶(AMPK)信号通路在HCV核心蛋白所致肝细胞能量代谢紊乱中的作用.方法 pcDNA3.1-core重组质粒转染HepG2细胞,流式细胞仪测定表达HCV核心蛋白的HepG2细胞的活性氧(ROS),液体闪烁计数仪测定ATP/ADP比例和AMPK α2酶活性,比色法测定烟酰胺腺嘌呤二核苷酸氧化态与还原态之比(NAD+/NADH),荧光定量检测SIRT1酶活性,RT-PCR和Western印迹检测SIRT1、AMPK α2的表达.计量资料比较采用t检验.结果 Western印迹检测证实,HepG2细胞表达相对分子质量为22 000的HCV核心蛋白.与HepG2细胞相比,表达HCV核心蛋白的HepG2细胞ROS水平升高(1.0±0.1比4.0±0.5,t=14.411,P＜0.01);ATP/ADP比例无明显变化(8.2±2.2比9.3±2.8,t=0.757,P＞0.05);AMPK α2酶活性(0.8±0.2比0.2±0,t=7.345,P＜0.01)明显降低;NAD+/NADH比例明显降低(0.08±0.02比0.02±0,t=7.348,P＜0.01);SIRT1酶活性[(0.30±0.05) pmol·μg 1·min-1比(0.15±0.04) pmol·μtg-1·min-1,t=5.738,P＜0.01)]明显降低;SIRT1 mRNA(0.8±0.2比0.4±0.1,t=4.382,P＜0.01)和AMPK α2 mRNA(0.9±0.3比0.2±0,t=5.715,P＜0.01)表达明显降低;SIRT1蛋白(0.8±0.2比0.3±0,t=5.941,P＜0.01)和磷酸化AMPK蛋白(0.5±0.1比0.1±0,t=9.608,P＜0.01)水平明显降低.结论 HCV核心蛋白能下调SIRT1-AMPK信号通路活性,导致肝细胞能量代谢紊乱.     

人参皂甙Rbl通过PKC途径抑制ET-1诱发的乳鼠心肌肥大

目的:探讨人参皂甙Rb1(Gs-Rb1)是否可通过蛋白激酶C(PKC)系统减轻内皮素-1(ET-1)诱导的乳鼠心肌细胞肥大。方法:将乳鼠心肌细胞随机分为空白对照组、Gs-Rb1组、ET-1组、Gs-Rb1+ET-1组、ET-1+CHE组(PKC阻断剂白屈菜季氨碱)组和Gs-Rb1+ET-1+CHE组;干预96h后,测定心肌细胞表面积、总蛋白含量、PKC活性、c-fos和p-c-jun表达。结果:(1)Gs-Rb1+ET-1组心肌细胞表面积、心肌细胞总蛋白含量显著少于ET-1组(P0.05~0.001);而与Gs-Rb1+ET-1+CHE组没有统计学意义(P=0.569);(2)Gs-Rb1+ET-1组PKC活性较ET-1组显著下降[(9.3±0.6)pmol·min-1·mg-1比(14.1±0.9)pmol·min-1·mg-1],但显著强于Gs-Rb1+ET-1+CHE组[(2.7±0.2)pmol·min-1·mg-1],P均0.001;(3)ET-1组c-fos、p-c-jun基因和蛋白的表达显著高于空白对照组(P均0.001);与ET-1组比较,Gs-Rb1+ET-1组c-fos[mRNA/蛋白:(0.53±0.05/0.39±0.02)比(0.43±0.03/0.31±0.03)]、p-c-jun[mRNA/蛋白:(0.64±0.04/0.44±0.02)比(0.33±0.05/0.37±0.03)]表达和ET-1+CHE组c-fos[mRNA/蛋白:0.41±0.05/0.31±0.02]、p-c-jun[mRNA/蛋白:0.31±0.05/0.36±0.03]表达均显著下降(P0.05或0.001),Gs-Rb1+ET-1+CHE组c-fos、p-cjun基因和蛋白的表达显著低于Gs-Rb1+ET-1组和ET-1+CHE组(P0.05或0.001)。结论:Gs-Rb1显著抑制ET-1所致的心肌细胞肥大,PKC系统是介导此生物学效应的途径之一。     

胰岛素抵抗的慢性丙型肝炎患者外周血及肝组织内源性大麻素系统的变化

目的研究胰岛素抵抗(IR)的慢性丙型肝炎(CHC)患者外周血及肝组织内源性大麻素系统的变化。方法采用高效液相色谱-质谱联用技术检测CHC患者和CHC合并IR患者外周血内源性大麻素花生四烯酸乙醇胺(AEA)和花生四烯酰甘油(2-AG)水平,应用RT-PCR及Western印迹检测肝组织大麻素受体1(CB1R)及脂肪酸酰胺水解酶(FAAH)的表达,数据行t检验。结果与CHC患者相比,CHC合并IR患者外周血AEA水平升高[(6.80±1.70)pmol/mL比(3.88±0.63)pmol/mL,t=8.053,P0.01];肝组织CB1R mRNA水平(1.7±0.4比1.0±0.2,t=4.696,P0.01)和CB1R蛋白水平(0.8±0.2比0.4±0.1,t=5.367,P0.01)增加;FAAH mRNA水平(0.5±0.1比1.0±0.3,t=4.743,P0.01)和FAAH蛋白水平(0.5±0.1比0.8±0.3,t=2.846,P0.01)下降。与胰岛素抵抗指数(HOMA-IR)4的患者相比,HOMA-IR指数≥4的患者AEA水平升高[(7.53±1.85)pmol/mL比(5.56±1.40)pmol/mL(t=2.986,P0.05)];肝组织CB1 mRNA水平(2.3±0.65比1.4±0.35,t=2.986,P0.05)和CB1R蛋白水平(1.2±0.3比0.9±0.2,t=2.038,P0.05)升高,FAAH mRNA水平(0.3±0.08比0.6±0.15,t=4.076,P0.01)和FAAH蛋白水平(0.2±0.05比0.4±0.1,t=3.464,P0.05)下降。结论随着IR程度加重,CHC患者外周血AEA水平升高;肝组织CB1R表达增加而FAAH表达减少。     

日本血吸虫感染小鼠肝髓样细胞触发受体-1的表达及其功能

目的观察日本血吸虫感染小鼠肝组织髓样细胞触发受体-1 (TREM-1)的动态表达,分析TREM-1与巨噬细胞M1极化的相关性。方法 34只C57BL/6小鼠随机分为对照组(10只)和感染组(24只),对照组小鼠不作任何处理,取肝组织;感染组每鼠经腹部皮肤接种日本血吸虫尾蚴(15±2)条,感染后第3、6、 9和12周,各取6只小鼠的肝组织。实时荧光定量PCR检测对照组、各时间点感染组小鼠肝组织中TREM-1和白细胞介素-1β(IL-1β) mRNA的相对转录水平;蛋白质免疫印迹(Western blotting)检测各鼠肝组织中TREM-1和诱导型一氧化氮合酶(i NOS)的蛋白相对表达水平;制备各鼠肝组织冰冻切片,免疫荧光染色技术检测肝组织巨噬细胞中TREM-1的表达情况。合成TREM-1 siRNA和阴性siRNA (NC siRNA),分别转染RAW264.7巨噬细胞,培养6 h后分为TREM-1 siRNA、 NC siRNA、 TREM-1 siRNA+日本血吸虫成虫抗原(SWA)和NC siRNA+SWA组,后两组加入终浓度为20μg/ml的SWA作用48 h,收集细胞,Western blotting检测细胞中TREM-1和i NOS蛋白的相对表达水平。多组之间TREM-1、 IL-1βmRNA相对转录水平,TREM-1和i NOS蛋白相对表达水平的比较使用单因素方差分析,两组之间的比较采用独立样本t检验。结果实时荧光定量PCR检测结果显示,感染后第3、 6、 9和12周,感染组小鼠肝组织中TREM-1 mRNA相对转录水平分别为14.28±6.26、183.41±37.37、 68.17±16.19和106.91±45.70 (F=6.668, P 0.01),其中感染后第6周感染组与对照组(1.00)比较差异有统计学意义(t=-4.881, P 0.01); IL-1βmRNA的相对转录水平分别为8.16±1.91、 56.12±10.68、 24.41±3.54和24.28±2.98 (F=16.943, P 0.01),各时间点感染组与对照组(1.00)比较差异均有统计学意义(t=-3.740, P 0.05; t=-5.159、-6.606和-7.799, P 0.01)。Western blotting检测结果显示,感染后第3、 6、 9和12周,感染组小鼠肝组织中TREM-1蛋白相对表达水平分别为1.24±0.38、 1.50±0.13、 1.13±0.28和1.17±0.60 (F=1.547, P 0.05),其中感染后第6周感染组与对照组(1.00)比较差异有统计学意义(t=-6.011, P 0.01); i NOS蛋白相对表达水平分别为5.27±3.66、 23.27±14.72、 10.16±4.97和2.69±1.65 (F=9.384, P 0.01),各时间点感染组与对照组(1.00)比较差异均有统计学意义(t=-2.893、-3.716、-4.537和-2.571, P 0.05)。免疫荧光染色结果显示,对照组小鼠肝组织中TREM-1 (绿色)和F4/80 (红色)的表达较少,感染组小鼠肝组织肉芽肿周围TREM-1和F4/80的表达增加,TREM-1和F4/80共定位的细胞(黄色)增多。Western blotting检测结果显示,NC siRNA+SWA、 TREM-1 siRNA、 TREM-1 siRNA+SWA组TREM-1蛋白相对表达水平分别为1.35±0.13、 0.58±0.09和1.09±0.03 (F=46.689, P 0.01),其中NC siRNA+SWA、 TREM-1siRNA组与NC siRNA组(1.00)比较差异有统计学意义(t=-4.716、 7.858, P 0.05), TREM-1 siRNA+SWA组与TREM-1 siRNA组比较差异有统计学意义(t=9.000, P 0.01)。NC siRNA+SWA、 TREM-1 siRNA、TREM-1 siRNA+SWA组i NOS蛋白相对表达水平分别为3.69±1.04、 0.77±0.12和2.74±0.86 (F=12.714, P 0.01),其中NC siRNA+SWA、 TREM-1 siRNA组与NC siRNA组(1.00)比较差异有统计学意义(t=-4.451、3.254, P 0.05), TREM-1 siRNA+SWA组与TREM-1 siRNA组差异无统计学意义(t=3.913, P 0.05)。结论日本血吸虫感染小鼠肝组织中TREM-1表达显著上调,抑制TREM-1的表达能够抑制SWA作用的巨噬细胞i NOS的表达。     

“健脾和胃祛湿方”对大鼠肝组织CYP450酶作用和初步机制

目的从分子水平探讨"健脾和胃祛湿方"对药物代谢酶CYP450的作用.方法采用液质联用分析、Western blot及RTPCR方法测定大鼠肝微粒体及肝脏组织中CYP450酶系6种亚型(CYP1A2、CYP2C9、CYP2C19、CYP2D6、CYP2E1、CYP3A4)的活性、蛋白及mRNA表达水平的影响.结果"健脾和胃祛湿方"对CYP450亚型CYP2C19、CYP2C9、CYP2D6、CYP2E1和CYP3A4的酶活性,蛋白及mRNA表达水平没有显著性影响;而呈剂量依赖性地降低CYP1A2酶活性,蛋白及mRNA表达水平.结论"健脾和胃祛湿方"作用于药物代谢酶CYP450亚型CYP1A2酶活性、蛋白及mRNA表达水平,对CYP450酶其他亚型没有影响.     

乙型肝炎病毒对肝脂肪变患者肝细胞固醇调节元件结合蛋白表达的影响

目的 探讨HBV对肝脂肪变患者肝细胞固醇调节元件结合蛋白(SREBPs)表达的影响.方法 收集我院感染科诊断为CHB合并肝脂肪变的患者55例,根据患者外周血清HBV DNA载量的不同分为3组:A组:HBV DNA≤103拷贝/ml的患者(15例);B组:103拷贝/ml＜HBV DNA＜105拷贝/ml的患者(18例); C组:HBV DNA≥105拷贝/ml的患者(22例).将C组抗病毒治疗后HBV DNA≤103拷贝/ml的10例患者分为C1组(治疗前)和C2组(治疗后);将C组抗病毒治疗后HBV DNA≥105拷贝/ml的12例患者分为C3组(治疗前)和C4组(治疗后).用油红O染色观察肝组织脂滴的变化;实时荧光定量PCR检测SREBP-1c及SREBP-2 mRNA的表达;免疫组织化学法检测SREBP-1c及SREBP-2蛋白的表达.多组间比较用单因素方差分析及q检验,配对样本t检验进行抗病毒前后两组间数据的比较.结果 (1)A、B、C组脂滴表 达的红色积分吸光度值分别为1004.27±218.63、1937.01±401.47、4133.79±389.28,各组间油红O红染程度不同(F=385.69,P＜0.01);C1、C2、C3、C4组脂滴表达的红色积分吸光度值分别为4020.84±326.64、1012.02±244.89、4189.18±329.21、4121.76±304.09,与C1组比较,C2组油红O红染程度下调,t=22.55,P＜0.01,差异有统计学意义;C4组与C3组比较,差异无统计学意义.(2)与A组比较,B组与C组SREBP-1c mRNA分别上调(1.218±0.130)倍、(1.798±0.118)倍,A、B、C组SREBP-1c mRNA表达水平比较,F=297.47,P＜0.01,差异有统计学意义.与A组比较,B组与C组SREBP-2 mRNA分别下调95.6%±11.8%、97.2%±15.3%,A、B、C组间SREBP-2 mRNA表达水平比较,差异无统计学意义.与C1组比较,C2组SREBP-1c mRNA表达水平下调71.4%±8.1%,t=11.224,P＜0.01,差异有统计学意义;与C1组比较,C2组SREBP-2 mRNA表达水平上调(1.034±0.155)倍,差异无统计学意义.与C3组比较,C4组SREBP-1c mRNA表达水平上调(1.012±0.206)倍,差异无统计学意义;与C3组比较,C4组SREBP-2 mRNA表达水平下调99.8%±18.3%,差异无统计学意义.(3)A、B、C组SREBP-1c蛋白表达量分别为36257.21±5709.79、50413.47±4989.28、71025.83±6047.13,3组SREBP-1c蛋白比较,F=178.26,P＜0.01,差异有统计学意义;A、B、C组SREBP-2蛋白表达量分别为32913.52±3951.21、32625.91±4025.06、34173.44±5316.25,3组比较,差异无统计学意义.C1、C2、C3、C4组SREBP-1c蛋白表达量分别为69832.16±4941.36、48735.47±5471.41、70871.69±5083.14、68913.32±5343.22,C1组与C2组比较,t=10.260,P＜0.01,差异有统计学意义;C3与C4组比较,差异无统计学意义.C1、C2、C3、C4组SREBP-2蛋白表达量分别为33980.21±4081.80、34011.50±3859.27、33610.12±4761.10、32915.66±5023.61,C1组与C2组比较,差异无统计学意义,C3组与C4组比较,差异无统计学意义.结论 HBV DNA可能通过干扰SREBP-1c的表达而参与了肝细胞脂肪变性的形成.     

阿尔茨海默病大鼠海马PKC和GDNF的变化

目的　选用切断大鼠穹窿海马伞作为阿尔茨海默病 (Alzheimer’sdisease ,AD)的动物模型 ,观察AD大鼠海马PKC和GDNF的变化 ,探讨其在AD发病中的作用。方法　应用放射性同位素方法检测穹窿海马伞切断AD大鼠海马PKC的活性 ,应用Westernblot方法检测穹窿海马伞切断AD大鼠海马GDNF。结果　穹窿海马伞切断AD大鼠手术侧海马PKC活性 (565 85± 1 80 70pmol·mg- 1 ·min- 1 )与正常对照组 (744 45±1 33 2 0pmol·mg- 1 ·min- 1 )比较明显降低 (P <0 0 5) ,而手术对侧 (681 50± 1 2 0 2 0pmol·mg- 1 ·min- 1 )和假手术组 (675 52± 1 35 51pmol·mg- 1 ·min- 1 )与正常对照组比较无明显差别。用Westernblot方法检测GDNF ,手术组条带浅于正常对照组和假手术组。结论　穹窿海马伞切断AD大鼠海马PKC和GDNF均降低 ,这表明在AD海马有PKC和GDNF变化 ,PKC和GDNF在AD发病中起到一定的作用     

重症急性胰腺炎多层螺旋CT灌注研究

目的 探讨SAP的CT灌注特点,评价其临床价值.方法 使用16排螺旋CT对9例SAP患者、17例MAP患者以及41例胰腺正常者进行CT灌注扫描.应用perfusion 3软件包进行数据处理,计算各组的血流量(BF)、血容量(BV)、平均通过时间(MTT)、毛细血管通透性(IS)等灌注参数,并行独立样本t检验.结果 MAP组的BF、BV平均值为(121.5±55.27)ml·100 mg-1·min-1、(11.7±5.26)ml/100 mg,SAP组平均值为(63.58±36.91)ml·100 mg-1·min-1、(7.13±2.11)ml/100 mg,差异显著(P＜0.01);较正常组的(219.17 4.98.02)ml·100 mg-1·min-1和(18.60±14.75)ml/100 mg,均显著降低(P＜0.01).MAP组和SAP组的PS分别为(25.14±10.7)ml·100 mg-1·min-1和(34.61±11.25)ml·100 mg-1·min-1,均高于正常组的(16.61 ±9.36)ml·100 mg-1·min-1(P＜0.05).结论 CT灌注成像技术判断SAP的严重程度有临床应用价值.     

肝细胞色素P450 1A1、2E1在非酒精性脂肪肝发病中的作用

目的　研究肝细胞色素P4 5 0 1A1、2E1在非酒精性脂肪肝大鼠中的表达及其意义。方法　荧光分光光度计法检测高脂饲料诱导 4 0只大鼠脂肪肝模型中P4 5 0 1A1活性 (7 乙氧异唑O 脱乙基酶 ,EROD)和 2E1活性 (苯胺羟化酶 ,ANH) ,免疫组化和Westernblot方法测定肝细胞色素P4 5 0 1A1、2E1表达 ,逆转录聚合酶链反应测定其mRNA表达。结果　脂肪肝 2、4、8和 1 2周EROD活性分别为(32 5 .0 7± 5 9.6 8)、(345 .2 5± 4 9.2 8)、(4 6 8.95± 5 5 .2 8)和 (5 4 8.6 8± 4 3.2 5 )nmol·mg-1 ·min-1 ,与正常对照组的 (2 6 0 .4 2± 35 .32 )nmol·mg-1 ·min-1 比较明显增高 (P <0 .0 1 ) ,脂肪肝 2、4、8和 1 2周ANH活性分别为 (6 35 .6 8± 6 5 .4 8)、(735 .4 5± 76 .89)、(887.4 5± 85 .6 5 )和 (95 6 .5 8± 84 .4 7)nmol·mg-1 ·min-1 ,与正常对照组的 (5 0 0 .2 5± 78.34)nmol·mg-1 ·min-1 比较明显增高 (P <0 .0 1 ) ,肝细胞色素P4 5 0 1A1、2E1基因表达随脂肪肝程度的加重而增高。结论　脂肪肝引起的肝脏损害可能与肝细胞色素P4 5 0 1A1、2E1表达有关 ,两者共同参与脂肪肝的发生     

Wnt诱导分泌型蛋白1:研究乙型肝炎诱发肝癌的新途径

目的 观察由乙型肝炎病毒X蛋白(HBX)引起的HepG2细胞内Wnt诱导分泌型蛋白1 (WISP-1)的变化,探索HBV诱发肝癌的机制. 方法 收集肝癌、癌旁及正常肝组织标本,用免疫组织化学法检测标本中HBX和WISP-1的表达差异.设立2个实验组:稳定转染HBx基因的HepG2细胞(Gx)组和稳定转染空载体pc-DNA3.1(+)HepG2细胞(G0)组.同时用PCR和Western blot检测两组细胞中WISP-1的表达.计数资料样本率比较用x2检验;计量资料均数的比较用t检验和单因素方差分析;相关分析采用Spearman秩相关系数检验. 结果 肝癌组织中WISP-1的表达阳性率为76.6％,较癌旁组织的23.4％及正常肝组织的0明显增高,x2=35.967,P＜0.01,差异有统计学意义.Gx细胞中WISP-1 mRNA和蛋白的相对表达水平分别为1170.33±41.26、240.33±11.37,与G0细胞中WISP-1的mRNA和蛋白相对表达水平265.34±27.47,40.33±7.09比较;t=31.625,F=600.565,P值均＜0.01,差异均有统计学意义.结论 WISP-1基因在肝癌中呈高表达,HBV感染肝细胞后,其HBX可通过上调WISP-1的表达水平引起肝癌的发生.     

Clinical significance of combined CYP2C9 and VKORC1 genotypes in Japanese patients requiring warfarin

The individual management of anticoagulation therapy is important for safe medical outcomes, including those of oral surgery. Here, Japanese patients who received warfarin (n = 35) and normal controls (n = 125) were analyzed by real-time PCR to determine the frequencies of single nucleotide polymorphisms in VKORC1 (vitamin K epoxide reductase complex, subunit 1) and CYP2C9 and how these frequencies related to warfarin dose and PT-INR. The genetic polymorphisms CYP2C9(*2) (416 C > T), CYP2C9(*3) (1061 A > C), and intron 1-136 C > T in VKORC1 (1173 C > T) were measured. All patients had the wild-type CYP2C9 gene (*1/*1). All 160 cases had the wild-type (CC) type CYP2C9(*2), 93.8% had AA type CYP2C9(*3), 6.2% had AC type CYP2C9(*3), 1.2% had CC type VKORC1, 13.8% had CT type VKORC1, and 85% had TT type VKORC1. The CC type VKORC1 genetic polymorphism was associated with a significantly higher mean warfarin maintenance dose (4.5 ± 0.5 mg) than other VKORC1 genotypes (TT type 2.9 ± 0.1 mg: CT type 3.4 ± 0.3 mg). Categorization of the patients in terms of the combined CYP2C9 and VKORC1 haplotype (the warfarin-responsive index; WRI) revealed the mean daily warfarin maintenance dose was 3.0 ± 0.1 mg for WRI 1 and 3.7 ± 0.3 mg for WRI 2 (P < 0.012). The event survey revealed 2 patients with nonfatal cerebral hemorrhage had a WRI score of 2 (VKORC1 C/T heterozygosity genotype). Thus, CYP2C9 and VKORC1 haplotype analysis allows prediction of warfarin maintenance dosage. The findings may provide a personalized use of warfarin in the field of oral surgery.     

乙型肝炎病毒感染者单核细胞来源的树突状细胞中维甲酸诱导基因-Ⅰ的表达及功能

目的 探讨HBV感染后维甲酸诱导基因-Ⅰ(RIG-Ⅰ)在单核细胞来源的树突状细胞(MoDC)中的表达和功能,并了解RIG-Ⅰ和MoDC在HBV感染疾病进程中的作用.方法 采集28例HBV感染者外周血,21例为慢性乙型肝炎(CHB)患者,7例为急性乙型肝炎(AHB)患者;18例健康志愿者作为对照.采用CD14免疫微珠分离纯化外周血CD14~+单核细胞,用粒-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)和IL-4联合诱导培养7 d成为树突状细胞(DC),用水泡性口炎病毒(VSV)感染刺激RIG-Ⅰ活化.在不同时间点收集细胞抽提RNA,实时定量PCR检测RIG-Ⅰ、干扰素启动子刺激基因1(IPS-1)和IFN-β的表达.正态分布数据采用方差分析,连续性变量两组间比较采用Mann-Whitney U检验,多组间比较采用Kruskal-Wallis检验.结果 VsV感染活化RIG-Ⅰ后,CHB、AHB组和健康对照组的RIG-Ⅰ mRNA表达水平在16 h(2.44±2.03,19.54±3.15.21.48±8.39;F=7.451.P=0.002)和24 h(2.68±2.93,10.31±3.88,14.01±5.04;F=7.908,P=0.001)时差异均有统计学意义;IPS-1在CHB和AHB组中的表达在16 h(2.05±1.08,1.99±1.56)和24 h(2.27±2.16,3.24±1.21)均高于健康对照组(16 h:0.60士0.31,F=7.246,P=0.003;24 h;1.08±0.73,F=13.598,P=0.01).CHB组中IFN-β水平在16 h和24 h均低于AHB组和健康对照组,差异有统计学意义.结论 RIG-Ⅰ和IPS-1在HBV感染者MoDC中的表达明显异常,提示RIG-Ⅰ信号通路可能被HBV干扰,RIG-Ⅰ和MoDC的功能缺陷在HBV感染和慢性化中发挥重要作用.     

辅助性T淋巴细胞1、2、17在慢性乙型肝炎病毒感染状态中的变化

目的 了解慢性HBV感染中辅助性T淋巴细胞(Th)1、Th2、Thl7产生的主要细胞因子的表达,以反映这3种细胞的功能状态.方法 ELISA测定34例慢性乙型肝炎、31例肝硬化、26例原发性肝癌、22例慢性重型乙型肝炎患者及15例健康对照者m清中的1FN-γ、IL-4和IL-17水平,对数据进行t检验和Pearson相关分析.结果 IFN-γ/IL-4在慢性乙型肝炎患者(1.08±0.66)比健康对照者(2.60±0.60)降低(P＜0.01),在慢性重型乙型肝炎患者(4.81±0.87)比健康对照者升高(P＜0.01);IFN-γ/IL-17在慢性乙型肝炎(1.13±0.85,P＜0.01)、肝硬化(1.69±0.92,P=0.010)、肝癌(1.76±0.84,P=0.011)患者比健康对照者(2.66±0.70)降低,在慢性重型乙型肝炎患者(3.68±0.42)比健康对照者升高(P=0.004);IL-4/IL-17在肝硬化(0.72±0.38,P=0.026)、肝癌(0.63±0.19,P＜0.01)患者比健康对照者(1.04±0.23)降低.结论 慢性乙型肝炎患者IL-4的表达占优势;肝硬化、肝癌患者IL-17的表达占优势;慢性重型乙型肝炎患者IFN-γ的表达占优势.     

CD4+CD25+Foxp3+调节性T细胞在慢性乙型肝炎患者中的作用

目的 探讨CD4+CD25+Foxp3+调节性T细胞与乙型肝炎慢性化和病毒清除之间的关系.方法 收集慢性活动性乙型肝炎(CAH)患者19例、HBV携带者(AsC)21例、HBV感染恢复者12例和健康对照者15例.通过流式细胞术分析外周血CD4+CD25+Foxp3+T细胞的表型和频率,磁珠分选(MACS)CD4+CD25+T细胞,实时荧光定量PCR方法 分析Foxp3 mRNA基因在CD4+CD25+T细胞的表达水平.统计学处理采用单因素方差分析或非参数检验.结果CAH或AsC组外周血CD4+CD25+Foxp3+T细胞频率以及CD4+CD25+T细胞中Foxp3 mRNA的表达水平显著高于健康对照组或HBV感染恢复者(F=6.8,F=3.72,均P<0.05).免疫组织化学染色发现,CAH患者肝组织Foxp3'T细胞浸润累积较对照组明显增高,但AsC较CAH减少.HBeAg阳性患者(包括CAH和AsC)CD4'CD25'T细胞频率显著高于HBeAg阴性患者(t=2.3,P<0.05),抗-HBe阴性患者显著高于抗-HBe阳性患者(t=2.4,P<0.05).CD4+CD25+Foxp3+T细胞频率与慢性乙型肝炎患者血清中HBV病毒载量存在正相关(r=0.56,P<0.01).结论 慢性乙型肝炎患者CD4+CD25+Foxp3+调节性T细胞异常与乙型肝炎慢性化和病毒清除有关.     

HBV特异性抗原对HBV携带者T淋巴细胞免疫功能的影响

目的 通过分析不同类型HBV携带者外周血单个核细胞(PBMCs)的细胞免疫功能,分析HBV抗原对其的影响,探索HBV慢性感染的机制并寻求可能的免疫治疗方法.方法 用不同的抗原和(或)细胞因子刺激培养的无症状HBV携带者PBMCs,酶联免疫吸附法检测细胞培养上清液中不同细胞因子的水平;流式细胞术检测PBMCs的细胞表型.对数据进行t检验分析和相关性分析.结果 HBsAg刺激无症状HBV携带者PBMCs后产生的干扰素(IFN)γ为(48.3±19.8)Pg/ml,较健康对照人群低[(196.2±104.3)Pg/ml(t=3.023,P＜0.05)].HBsAg和HBcAg刺激HBeAg阳性患者PBMCs分泌的IFN y水平分别为(50.4±51.6)Pg/ml和(63.2±36.9)pg/ml,明显低于HBeAg阴性组[(86.2±42.3)Pg/ml和(101.4±32.5)pg/ml],t值分别为2.468和3.184,P值均＜0.05;HBeAg阳性患者组分泌白细胞介素(IL)-12 P70明显低于HBeAg阴性组(P＜0.05);补偿外源性IL-12可明显促进HBV携带者PBMCs分泌IFN γ(P＜0.01),IL-12协同HBV抗原可激活CD8+CD45RA+CCR7及CD8+CD45RA CD62L+细胞.结论 HBeAg阳性患者PBMCs分泌IL-12减少,这可能是HBV携带者持续感染的重要原因;外源性IL-12可促进HBV携带者PBMCs中的中枢记忆性T淋巴细胞的免疫功能.

Abstract：

Objective To investigate the effect of HBV antigens and pathological mechanism of chronic HBV infection by analyzing the cellular immune function of peripheral blood mononuclear cells (PBMCs) from HBsAg carriers. Methods PBMCs were prepared from individuals with chronic asymptomatic HBV infection and cultured in the presence of different antigens and/or cytokines. The levels of cytokines in culture supernatants were detected by ELISA method. The phenotype of the cells was detected by FACS.Results The levels of IFN γ secreted by PBMCs from HBsAg carriers were (48.3 ± 19.8) pg/ml, significantly lower than that from healthy controls (t = 3.023, P ＜ 0.05＝; The IFN γ produced by PBMCs from HBeAg positive patients due to HBsAg and HBcAg stimulation were (50.4±51.6) pg/ml and (63.2 ± 36.9)pg/ml, significantly lower than that of HBeAg negative patients (t = 2.468 and 3.184, P ＜ 0.05, respectively＝.The IL-12p70 secreted by PBMCs from HBeAg positive patients was also significantly lower than that of HBeAg negative patients (P ＜ 0.05＝; Exogenous IL-12 promoted significantly PBMCs to secrete IFN γ (P ＜0.01＝ and IL-12 combined with HBV antigens activated CD8+CD45RA+CCR7+ and CD8+CD45RA-CD62L+cells. Conclusion IL-12 secreted by PBMCs decreased in HBeAg positive patients, which may be the crucial reason of viral persistence in chronic HBV carriers. Exogenous IL-12 combined with specific HBV antigen could promote the central memory CD8+ T cells to produce IFN γ.     

慢性乙型肝炎患者胸腺近期输出功能与初始T细胞比例的相关性

目的了解慢性乙型肝炎（CHB）患者外周血单个核细胞（PBMCs）中T细胞受体重排删除环（TRECs）含量和PBMCs中初始T细胞比例,分析两者的相关关系。方法采集CHB患者和健康人外周静脉血标本,（1）应用实时荧光定量聚合酶链反应（RT-PCR）技术检测TRECs含量;（2）利用荧光标记抗体FITC-CD3、PE-CD45RA、PE-cy5-CD62L标记细胞表面分子,流式细胞仪检测PBMCs中CD3＋CD45RA＋CD62L＋细胞比例;（3）TRECs含量与初始T细胞相关性分析。结果 （1）CHB组TRECs含量为（6.78±1.06）拷贝/103 PBMCs,低于对照组（8.16±2.07）拷贝/103 PBMCs,P〈0.01。（2）CHB组初始T细胞比例为（20.73±6.75）%,低于对照组（27.82±9.66）%,P〈0.05。（3）CHB组初始T细胞比例与TRECs含量呈正直线相关,相关系数r=0.688,P〈0.01。对照组初始T细胞比例与TRECs含量正相关,r=0.646,P〈0.01。两组r值比较差异无统计学意义,P〉0.05。结论 （1）CHB患者PBMCs中TRECs含量与初始T细胞比例均低于正常人;（2）CHB患者与正常人PBMCs中TRECs含量与初始T细胞比例均正相关。     

慢性丙型肝炎患者外周血单个核细胞中APOBEC3G mRNA与血丙型肝炎病毒RNA的相关性

目的 探讨慢性丙型肝炎患者外周血单个核细胞(PBMC)APOBEC3G mRNA表达水平与HCV慢性感染的关系.方法 用TaqMan实时(RT)-PCR法检测49例慢性丙型肝炎患者以及31名健康人PBMC中APOBEC3G mRNA的水平,同时检测丙型肝炎患者外周血HCV RNA载量.所得数据采用SPSS 11.0分析软件进行t检验和回归分析.结果 慢性丙型肝炎患者PBMC中APOBEC3G mRNA的表达水平为(1.5±1.9)×10-5拷贝/mL,低于健康对照组(5.2±5.5)×10-5拷贝/mL,两组比较差异具有统计学意义(t=-3.005,P＜0.01),而与外周血HCVRNA载量无明显相关性(r=-0.082,P＞0.05).结论 HCV感染抑制APOBEC3G的表达,但APOBEC3G不影响HCV复制.

Abstract：

Objective To study the relationship between APOBEC3G mRNA level in peripheral blood mononuclear cells (PBMC) and serum hepatitis C viral RNA level in patients with chronic hepatitis C infection. Methods TaqMan real-time fluorescence relative quantitative polymerase chain reaction (RT-PCR) was used to quantify APOBEC3G mRNA levels in PBMC from 49 patients with chronic hepatitis C (CHC) and 31 healthy subjects. The relationship between APOBEC3G mRNA level and hepatitis C virus (HCV) viral load was analyzed. SPSS11. 0 statistics software was used for t test and regression analysis. Results APOBEC3G mRNA level in CHC patients [(1.5×10-5±1.9×10-5 ) copy/mL] was significantly lower than that [( 5. 2 × 10-5 ± 5. 5 × 10-5 ) copy/mL] in the healthy control subjects (t=-3.005, P＜0.01). While APOBEC3G mRNA level was not related with HCV viral loads (r=-0.082, P＞0.05). Conclusion HCV has an inhibitive effect on APOBEC3G expression, whereas APOBEC3G doesn't affect HCV replication directly in vivo.     

拉米夫定治疗无良好应答患者乙型肝炎病毒P区突变与基因型的关系

目的 观察拉米夫定治疗后无良好应答的慢性乙型肝炎患者HBV P区变异情况与基因型的关系.方法 对631例拉米夫定治疗后无良好应答的慢性乙型肝炎患者进行研究.通过荧光定量PCR或核酸测序确定HBV基因型,直接测序观察P区突变,实时荧光定量PCR方法检测患者病毒载量,比较不同基因型患者的HBV DNA水平及HBV P区变异情况.计量资料采用成组设计资料t检验,计数资料采用x~2检验或Fisher精确检验.结果 631例慢性乙型肝炎患者中,B基因型HBV感染者272例,C基因型感染者359例,C基因型感染者患者年龄为(39.1±11.4)岁,明显大于B基因型感染患者的(33.7±9.7)岁(t=-6.55,P<0.01).C基因患者病毒载量为(5.96±1.22)log_(10)拷贝/ml,高于B基因型患者的(5.58±1.21)log_(10)拷贝/ml,t=-2.01,P<0.05.A181V/T变异在C基因型的发生率高于B基因型(0.4%比5.3%,χ~2=12.23,P<0.01),M204I/V,L180M、T184A/G/I/S、S202G/I和V173L变异发生率在B、C基因型之间差异无统计学意义(P值均>0.05).M204I在B基因型的发生率为20.6%,高于C基因型的13.9%(χ~2=4.91,P<0.05);M204V和M201Ⅳ变异在B、C基因型中的发生率差异无统计学意义(χ~2值分别为1.70和2.21,P值均>0.05).拉米夫定耐药发生率在B、C基因型间差异无统计学意义(χ~2=0.00,P>0.05).结论 拉米夫定常见耐药位点在B、C基因型之间无明显差异,但是C基因HBV感染患者病毒载量高于B基因型HBV感染患者;M204I变异在B基因型中出现频率高于C基因型,拉米夫定加用或改用阿德福韦酯后可能会使A181V/T变异在C基因型出现的概率高于B基因型;年龄、免疫因素和非常见位点的变异或许是影响拉米夫定疗效的重要因素.     

血清TIMP-2水平对肝纤维化诊断价值的研究

目的评价HBV感染者血清TIMP-2水平对肝纤维化诊断的临床应用价值。方法采用ELISA法测定498例HBV感染者和100例正常对照者血清TIMP-2,采用放射免疫分析法检测HA、PCⅢ、CⅣ和LN,和采用全自动酶法测定丙氨酸氨基转移酶（ALT）。结果与健康正常人比,HBV感染者五项指标均有不同程度的升高,除慢性HBV携带者PCⅢ、CⅣ、LN、ALT和慢性肝炎轻度患者CⅣ水平与对照组比无统计学差异外,其余各组均与对照组比有显著性差异（P〈0.05）;从急性肝炎至肝硬化患者血清TIMP-2水平依次进行性升高,其中慢性HBV携带者与急性肝炎患者血清TIMP-2水平分别为78.56±26.23ng/ml和92.65±21.93ng/ml,两者相比差异显著（P〈0.01）。血清TIMP-2与HA、PCⅢ、CⅣ和LN呈显著正相关（P〈0.05）,与ALT也呈正相关（P〈0.05）。结论本文检测的肝纤维化指标均可不同程度地反映肝脏的纤维化程度,其中以血清TIMP-2较为可靠和有效。