脱氧氟尿苷逆转人卵巢癌细胞系顺铂耐药的研究

脱氧氟尿苷(FUDR)是高效低毒的新一代氟尿嘧啶类抗肿瘤药物,尚未见有关FUDR用于逆转肿瘤耐药的报道。本研究采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法、原子吸收分光光度法、免疫组化SP法等方法,分析了FUDR对卵巢癌细胞系SKOV3/DDP顺铂敏感性的影响,并初步探讨其逆转机制,为临床耐药逆转提供理论依据。     

端粒酶抑制剂对顺铂不同敏感性卵巢癌细胞株的影响

目的:通过检测顺铂(CDDP)敏感株和耐药株在经CDDP处理前后的端粒酶活性变化,了解端粒酶活性与CDDP耐药性的关系,及端粒酶抑制剂叠氮胸苷(AZT)和全反式维甲酸(AT-RA)对CDDP不同敏感性的卵巢癌细胞株的影响,试图寻找一个解决常规化疗耐药问题的新方法。方法:将卵巢癌CDDP敏感株A2780和耐药株CAOV3、OVCAR3在不同浓度的CDDP、AZT和ATRA中培养,TRAP-ELISA法检测端粒酶活性,MTT法检测药物对细胞增殖的影响。结果:未加CDDP时,敏感株和耐药株的端粒酶活性没有明显差别,经CDDP处理后敏感株的端粒酶活性明显降低,而耐药株没有明显变化。端粒酶抑制剂对CDDP敏感株和耐药株的细胞增殖都有明显的抑制作用。结论:通过不同方式抑制端粒酶活性,均可抑制CDDP敏感株和耐药株的细胞增殖。端粒酶的活性与卵巢癌细胞株对CDDP的耐药性有关。     

利用外泌体评估卵巢癌患者对顺铂敏感性

目的:利用外泌体评估卵巢癌患者对顺铂敏感性。方法:超速离心法从卵巢癌细胞A2780、SKOV3、CAOV3培养上清及卵巢癌患者血清中提取外泌体。MTT法检测顺铂对卵巢癌细胞株的24h时半数抑制浓度(IC_(50)),检测出顺铂敏感细胞及耐药细胞。MTT法检测敏感细胞A2780在细胞外泌体与顺铂共培养条件下的增殖。Caspase 3/7活性凋亡检测A2780细胞在细胞外泌体与顺铂共培养条件下的凋亡。MTT法检测A2780细胞在卵巢癌患者血清外泌体与顺铂共培养条件下的增殖,并随访卵巢癌患者病情进展情况。结果:通过超速离心法能从卵巢癌细胞系培养上清及卵巢癌患者外周血清中分离出外泌体。MTT分析证实A2780为顺铂敏感细胞,SKOV3、CAOV3为顺铂不敏感细胞。细胞系来源的外泌体能显著降低A2780对顺铂的敏感性(P<0.05),同时削弱顺铂对A2780中Caspase 3/7的活性(P<0.05),其中SKOV3和CAOV3外泌体的抑制作用显著高于A2780。基于A2780细胞+顺铂模型,将30例卵巢癌患者分为顺铂敏感组和不敏感组,其中不敏感组的13例患者的血清外泌体降低A2780对顺铂敏感性(P<0.05),术后1年已有5例患者有复发情况,而敏感组无复发。结论:利用A2780细胞模型分析外泌体对顺铂杀伤作用的影响,能在一定程度上评估卵巢癌患者对顺铂的敏感性。     

ATM对卵巢癌细胞株CaOV3顺铂敏感性的影响

目的:探讨ATM激酶表达水平和活性对卵巢癌细胞Ca OV3顺铂敏感性的影响,以及可能的机制。方法:以ATM-siRNA转染Ca OV3细胞48h下调ATM蛋白水平,以KU-55933预处理Ca OV3细胞12h下调ATM激酶活性。CCK8试验检测细胞活性,Western blot法检测ATM及r-H2AX蛋白表达,荧光共聚焦confocal检测细胞DNA双链损伤标志蛋白r-H2AX表达及同源重组修复关键蛋白RAD51表达及两者细胞核中共定位,应用碱性慧星试验检测细胞内DNA双链损伤情况,流式细胞术检测细胞周期分布。结果:卵巢癌细胞系Ca OV3具备相对完整的同源重组修复能力,下调ATM或抑制ATM激酶活性均可降低DNA双链损伤情况下的同源重组修复能力,增加其对c DDP敏感性,同时减少c DDP引起的G0/G1期周期阻滞。结论:抑制ATM可影响卵巢癌细胞同源重组修复过程,增加DNA双链损伤,缓解G0/G1期周期阻滞,增加其对顺铂敏感性。     

阿司匹林联合顺铂与单纯顺铂抗卵巢癌效应的体外对比研究

化疗是卵巢癌综合治疗的重要手段之一，对于延长中位数生存时间、提高患者生存质量都具有重要意义。多药耐药是化疗失败的重要原因，本实验旨在寻找化疗增敏药物，为提高抗肿瘤药物的临床疗效奠定基础。顺铂是卵巢癌-线化疗药物，顺铂耐药问题严重困扰着临床医生，本实验观察了阿司匹林对顺铂抗卵巢癌效应的影响并对其作用机制进行了初步探讨。     

卵巢癌顺铂耐药的分子机制研究进展

顺铂耐药是卵巢癌术后复发和预后不良的重要原因之一,卵巢癌的顺铂耐药机制复杂,除抑癌基因、癌基因、耐药相关基因的改变处,还涉及染色体改变、细胞解毒过程及DNA损伤修复能力的增强以及细胞骨架、热休克蛋白表达异常等,对其分子机制的了解有助于指导卵巢癌临床治疗方案的选择。     

利用生物信息学技术探索人卵巢癌细胞株A2780对顺铂耐药基因的研究

目的:利用生物信息学技术探索人卵巢癌细胞株A2780对顺铂耐药基因的可能机制,为临床化疗提供有效的依据。方法:(1)通过GEO在线GEO2R工具从两组数据库(GSE15372和GSE33482)中,分别比较对顺铂耐药的A2780与对顺铂敏感的A2780中的基因表达差异,并筛选出高表达基因和低表达基因;使用维恩图确定两组数据库中耐药的高表达共同差异基因和低表达的共同差异基因。(2)利用GO分析和KEGG通路富集分析耐药基因的生物学功能。(3)利用蛋白质-蛋白质互作(PPI)网络及Cytoscape软件筛选出A2780对顺铂耐药核心靶基因。(4)利用Kaplan-Meier Plotter工具对Hub基因进行总生存期分析。结果:(1)两组数据集的高表达共同耐药基因共37个,低表达共同耐药基因共2个。(2)GO分析结果显示：生物学过程(BP)分析结果表明,耐药基因主要参与着细胞间信号传导、趋化作用等;细胞组成(CC)分析表明,耐药基因主要位于细胞外区域、细胞间隙、细胞表面;分子功能(MF)分析表明,耐药基因参与着趋化因子相结合等作用。KEGG通路富集分析显示,耐药基因主要在细胞因子与细胞因子...     

CO_2对人卵巢癌细胞株生长转移相关因子表达及顺铂敏感性的影响

目的:探讨体外模拟腹腔镜二氧化碳(CO2)气腹环境对人卵巢癌细胞株SKOV3生长转移相关因子表达的影响及CO2气腹环境作用后SKOV3对顺铂(DDP)敏感性的变化。方法:将体外培养的处于对数生长期的SKOV3细胞分为4组,即CO2组、DDP组、CO2+DDP组及对照组。用实时荧光定量PCR(Real-timePCR)法及免疫细胞化学法检测各组细胞的PCNA、VEGF和CD44v6mRNA和蛋白的表达。结果:(1)CO2气体与顺铂间无交互作用(P0.05);(2)CO2处理组肿瘤细胞的PCNA、VEGF和CD44v6mRNA和蛋白表达均明显升高(P0.01);(3)DDP组与对照组、CO2+DDP组与CO2组比较,DDP处理组肿瘤细胞的PCNA、VEGF和CD44v6mRNA和蛋白表达均明显降低(P0.01,P0.01)。结论:CO2环境能促进人卵巢癌细胞株SKOV3生长转移相关因子表达;DDP对肿瘤细胞生长转移因子的表达有抑制作用;CO2环境作用后,肿瘤细胞对DDP敏感性的变化不明显。     

神经酰胺增强卵巢癌顺铂敏感性的体外研究

目的:探讨神经酰胺增强卵巢癌顺铂敏感性的作用及机制,为筛选有效的卵巢癌顺铂耐药逆转剂提供实验依据。方法:本研究采用MTT法测定不同剂量的C6-神经酰胺(Ceramide C6)(5、10、20、40μmol/L)对卵巢癌顺铂化疗的增敏作用,以RT-PCR、Westernblot法检测Ceramide C6对肿瘤细胞Bcl-2 mRNA及其蛋白表达的影响,应用流式细胞技术观察Ceramide C6对肿瘤细胞凋亡的影响。结果:Ceramide C6对SKOV3、SKOV3/DDP细胞生长有抑制作用,与DDP联合应用时可增强DDP敏感性。SKOV3细胞中,与对照组相比,不同浓度Ceramide C6使顺铂敏感性分别增加了7.23%、20.14%、45.02%、57.75%。SKOV3/DDP细胞中,顺铂敏感性分别增加了23.08%、24.57%、45.86%、65.78%。随Ceramide C6浓度增加,SKOV3和SKOV3/DDP细胞中Bcl-2 mRNA及蛋白表达逐渐减低,差异有统计学意义(F=41.780,P=0.000;F=223.258,P=0.000;F=98.306,P=0.000;F=224.687,P=0.000)。Ceramide C6可增加SKOV3、SKOV3/DDP细胞凋亡率,差异有统计学意义(F=135.625,P=0.000;F=224.906,P=0.000)。结论:神经酰胺可能通过抑制肿瘤细胞Bcl-2 mRNA及其蛋白表达,诱导肿瘤细胞凋亡途径,增强顺铂对卵巢癌SKOV3和SKOV3/DDP细胞体外生长的抑制作用,在一定程度上逆转了卵巢癌顺铂耐药。     

单己糖神经酰胺与卵巢癌顺铂耐药性关系的研究

目的　研究单己糖神经酰胺 (ceramidemonohexoside ,CMH)与卵巢癌顺铂耐药细胞株COC1 DDP细胞的顺铂耐药性的关系 ,及其在COC1 DDP细胞凋亡中的作用。方法　分别提取、纯化COC1 DDP细胞 (用浓度为 1 2 5、5μmol L的米非司酮处理前、后 )和卵巢癌顺铂敏感细胞株COC1细胞的中性鞘糖脂 ,用高效薄层层析、凝胶光密度成像系统分析细胞中CMH的相对含量。将COC1 DDP细胞分为 :顺铂 ( 0 1、0 2 5、0 5、1 2 5、2 5μg ml)组、米非司酮 ( 1 2 5、2 5、5、10、2 0 μmol L)组、顺铂 ( 0 1～2 5μg ml) +米非司酮 ( 1 2 5、5μmol L)组 ,用四甲基偶氮唑蓝 (MTT)法检测各组细胞的生存率、琼脂糖凝胶电泳检测各组细胞DNA的变化、透射电子显微镜观察各组细胞的形态变化。结果　COC1 DDP细胞中CMH的相对含量为 ( 3 7 1± 3 3 ) % ,明显高于COC1细胞的 ( 14 1± 1 4) % (P <0 0 0 1) ;COC1 DDP细胞分别经 1 2 5、5μmol L米非司酮处理后 ,CMH的相对含量下降到 ( 2 6 6± 2 6) %和 ( 17 5±0 7) % ,分别与米非司酮处理前比较 ,差异均有显著性 (P <0 0 5,0 0 0 1)。MTT法检测显示 ,米非司酮浓度在 5μmol L以下时 ,对COC1 DDP细胞不产生明显的抑制作用 (P >0 0 5) ;顺铂 +米非司酮组COC1 DDP细胞抑制率较     

TWEAK激活自噬增强上皮性卵巢癌顺铂耐药细胞株A2780/DDP顺铂敏感性的研究

目的:观察TWEAK对上皮性卵巢癌顺铂耐药细胞株A2780/DDP的顺铂(DDP)耐药性的影响,并初步探讨其机制。方法:CCK8法测定不同浓度TWEAK刺激后A2780/DDP的顺铂半数细胞致死量(IC50)。Western blot法检测TWEAK刺激A2780/DDP后Beclin-1、微管结合蛋白轻链3(LC3)及成纤维细胞生长因子诱导早期反应蛋白14(Fn14)的表达水平。激光共聚焦显微镜检测绿色荧光-LC3蛋白(GFP-LC3)在A2780/DDP细胞内的分布情况。用TWEAK刺激敲除Fn14表达的A2780/DDP细胞,Western blot法检测Beclin-1、LC3的表达。结果:CCK8检测结果显示,10、100ng/mlTWEAK组的顺铂IC50分别为(31.940±0.118)μg/ml、(28.769±0.090)μg/ml,均显著低于0ng/ml组(36.358±0.106)μg/ml(P均<0.05)。Western blot法结果显示,TWEAK可呈剂量和时间依赖性诱导Beclin-1、LC3及Fn14表达上调,而特异性敲除Fn14表达后,Beclin-1、LC3表达明显下调。激光共聚焦显微镜检测结果显示,TWEAK可诱导GFP-LC3致密斑形成。结论:TWEAK可增强人卵巢癌细胞耐药株A2780/DDP的顺铂敏感性;呈剂量和时间依赖性激活A2780/DDP的自噬活性,且主要通过与其受体Fn14结合介导。     

每周静脉注射顺铂及每日口服足叶乙甙对以前顺铂治疗过的卵巢癌疗效显著

本实验研究每周静脉注射顺铂同时每日口服足叶乙甙     

卵巢癌顺铂耐药的分子机制研究进展

顺铂耐药是卵巢癌术后复发和预后不良的重要原因之一.卵巢癌的顺铂耐药机制复杂,除抑癌基因、癌基因、耐药相关基因的改变外,还涉及染色体改变、细胞解毒过程及DNA损伤修复能力的增强以及细胞骨架、热休克蛋白表达异常等,对其分子机制的了解有助于指导卵巢癌临床治疗方案的选择.     

卵巢癌顺铂耐药细胞系的建立及耐药机制的研究

顺铂 (ｃｉｓｐｌａｔｉｎ ,ＤＤＰ)是一种有效的抗肿瘤药物 ,耐药的产生极大地影响卵巢癌患者对化疗的敏感程度 ,限制了其临床疗效[1] 。本研究采用中等浓度、间歇作用[2 ] 的方法 ,于 1998年 12月到 1999年 5月建立了人卵巢癌细胞株ＳＫＯＶ3对顺铂耐药细胞系ＳＫＯＶ3/ＤＤＰ ,对耐药指数、细胞周期分布、细胞内谷胱甘肽 (ＧＳＨ )含量、拓扑异构酶Ⅱ(ＴＯＰⅡ )含量及活性进行检测 ,从细胞水平、分子生物学水平对其基本特征及耐药机制进行研究。1　材料与方法1 1　研究资料　人卵巢癌细胞株ＳＫＯＶ3购自北京医科大学妇科教研室 ,细胞株…     

氟标记氟代脱氧葡萄糖正电子发射断层扫描用于卵巢癌术后监测的探讨

目的 评价^18F-FDG(18氟标记氟代脱氧葡萄糖)PET(正电子发射断层扫描)在卵巢癌术后病情监测中的临床应用价值。方法 1999年6月至2002年3月对21例卵巢癌术后随访的患者行^18F-FDG PET检查，结果 判定采用目测法和半定量分析法(标准化摄取值，SUV)。结果 9例临床完全缓解的卵巢癌Ⅰ期患者于术后12～15个月进行了全身PET检查，未发现病灶，继续随访观察12～21个月，临床无复发征象。12例临床检查疑为复发者，11例PET检查为阳性，1例为阴性，6例PET结果阳性者及1例阴性者进行了手术探查，手术病理证实7例均为复发，PET、B超与病理结果符合率分别为85．7％、71．4％。21例患者中，2例CA125升高而B超结果为阴性者，PEr显像除见局部复发灶外，还同时探测到横结肠和(或)乙状结肠转移灶，均经病理证实为复发灶，病灶最小直径约0．8cm；1例PET检查结果为阴性者，B超及CT检查均为阳性，病理证实为透明细胞癌复发。结论 ^18F-FDG PET检查对卵巢癌术后随访、确认肿瘤复发以及探测全身各部位尤其肠道转移灶有良好的临床应用价值，对肠道转移病灶的定性和定位诊断优于B超，对透明细胞癌的诊断缺乏准确性。     

调节细胞自噬增强卵巢癌顺铂敏感性的体外研究

目的:探讨细胞自噬与上皮性卵巢癌顺铂耐药的关系及调节细胞自噬对卵巢癌顺铂耐药的影响。方法:应用MTT法、MDC荧光染色法及激光共聚焦显微镜技术,观察SKOV3、SKOV3/DDP细胞株自噬现象;通过自噬特异性抑制剂3-MA作用,了解3-MA对卵巢癌细胞胞浆内自噬体的抑制作用及抑制细胞自噬对卵巢癌顺铂敏感性的影响。结果:SKOV3细胞株顺铂IC50值为3.330μg/ml,SKOV3/DDP细胞株顺铂IC50值为14.152μg/ml。3-MA联合顺铂作用后SKOV3细胞株的顺铂IC50值为3.312μg/ml,其对顺铂的敏感性无明显影响(P=0.221),SKOV3/DDP细胞株顺铂IC50值为6.386μg/ml,提示3-MA可提高上皮性卵巢癌顺铂耐药细胞对顺铂的敏感性(P=0.000)。MDC荧光染色及激光共聚焦显微镜观察SKOV3、SKOV3/DDP细胞株胞浆自噬体的形成情况,顺铂能够诱导自噬体的生成,在3-MA作用下,SKOV3/DDP细胞株顺铂诱导的自噬体荧光强度变小,而SKOV3细胞株自噬体的荧光强度变化不大。结论:细胞自噬活性增强与上皮性卵巢癌顺铂耐药有关,抑制细胞自噬活性可以部分逆转上皮性卵巢癌SKOV3/DDP顺铂耐药,但不改变顺铂敏感型细胞SKOV3对顺铂的敏感性。     

Smac基因转染对卵巢癌SKOV3/DDP裸鼠移植瘤顺铂敏感性及微血管生成的影响

目的:探讨转染Smac基因对卵巢癌SKOV3/DDP裸鼠移植瘤顺铂敏感性及微血管生成的影响。方法:建立卵巢癌SKOV3/DDP裸鼠移植瘤模型,随机分为5组,分别给予不同药物干预:(1)对照组:移植瘤内注射生理盐水;(2)DDP组:腹腔内注射顺铂;(3)空质粒+DDP组:移植瘤内注射空质粒,24h后腹腔内注射顺铂;(4)Smac组:移植瘤内注射Smac重组质粒;(5)Smac+DDP组:移植瘤内注射Smac重组质粒,24h后腹腔内注射顺铂。顺铂浓度为0.5mg/m1,给药剂量按3mg/kg计算。观察各组裸鼠移植瘤体积变化,计算抑瘤率。TUNEL法检测移植瘤组织标本的凋亡指数,免疫组化法检测CD34并计算微血管密度(MVD)。结果:Smac+DDP组的移植瘤体积最小,平均抑瘤率72.94%,与其他组比较差异有统计学意义(P0.05)。对照组、DDP组、空质粒+DDP组、Smac组、Smac+DDP组的凋亡指数分别为(19.90±3.18)%,(21.82±4.40)%,(22.64±3.81)%,(30.23±4.06)%,(48.59±4.47)%,MVD计数分别为(24.8±5.36),(21.2±3.11),(19.8±3.70),(14.4±3.85),(11.6±2.70)。其中,Smac+DDP组的凋亡指数最高,MVD最低,与其他组比较差异有统计学意义(P0.05)。结论:Smac基因转染可增强卵巢癌耐药移植瘤对顺铂的敏感性,同时减少微血管生成。     

顺铂作为卵巢癌肉瘤的初始化疗：一项妇科肿瘤学组研究

卵巢癌肉瘤很罕见。手术切除是治疗的首选。美国妇科肿瘤学组（GOG）进行了细胞毒性药物治疗卵巢癌肉瘤的最大系列研究。     

顺铂与姜黄素联用抑制人卵巢癌细胞株3AO增殖作用的研究

目的:研究顺铂（cDDP）对姜黄素抑制人卵巢癌细胞株3AO增殖的影响。方法:采用MTT法计算细胞存活率,Giemsa染色观察细胞形态变化及细胞凋亡情况,用流式细胞术检测细胞周期变化及细胞凋亡率。结果:姜黄素可明显抑制3AO细胞的生长,其半数生长抑制率（IC_50）约为27.8μmol/L;姜黄素将肿瘤细胞聚集在S期和G2/M期并可诱导细胞凋亡。cDDP与各种浓度姜黄素联合可显著抑制3AO细胞增殖（P<0.01）。姜黄素和cDDP均可在一定程度上诱导细胞凋亡,两种药物联用后,诱导细胞凋亡作用显著增强。结论:姜黄素可与cDDP协同抑制人卵巢癌细胞株3AO的增殖。其协同作用的机制可能与诱导细胞凋亡有关。     

microRNA let-7e逆转人卵巢癌细胞顺铂耐药及其作用机制

目的:研究人类microRNA let-7e(hsa-let-7e)在人卵巢癌顺铂耐药细胞中的表达及其作用机制。方法:采用实时荧光定量PCR法检测let-7e在卵巢癌亲本细胞株A2780及耐顺铂卵巢癌细胞A2780/CP中的表达;采用实时荧光定量PCR法和Western blot法分别检测A2780细胞和A2780/CP细胞中果蝇zeste基因增强子同源物2(EZH2)mRNA和蛋白的表达。将let-7e模拟物(mimics)及阴性对照(negative control,NC)转染A2780/CP细胞,采用实时荧光定量PCR和Western blot法分别检测EZH2 mRNA和蛋白的表达,MTT法检测细胞的半数抑制浓度(IC50),台盼蓝染色实验检测经顺铂作用不同时间后的细胞存活率。结果:与A2780细胞比较A2780/CP细胞中let-7e呈低表达、EZH2mRNA和蛋白相对表达水平显著增高,差异均有统计学意义(P0.05)。A2780/CP细胞转染let-7e mimics后,EZH2 mRNA和蛋白的相对表达水平较阴性对照组明显下降(P0.05),细胞对顺铂的敏感性显著增强,其半数抑制浓度(IC50值)与阴性对照组比较差异有统计学意义(P0.05)。顺铂作用于转染let-7e mimics的A2780/CP细胞后,细胞的存活率较阴性对照组明显降低(P0.05)。结论:let-7e在卵巢癌耐药细胞A2780/CP中异常低表达,上调其表达可部分逆转细胞耐药性。let-7e可能通过作用于靶蛋白EZH2参与卵巢癌细胞顺铂耐药的发生和发展。