干涉RNA抑制人骨肉瘤细胞PCNA表达的实验研究

目的：构建增殖细胞核抗原(proliferation cell nuclear antigen，PC-NA)短发夹状RNA表达载体，检测其对骨肉瘤细胞PCNA mRNA及蛋白表达的影响。方法：体外构建PCNA shRNA表达载体pSilence2．1-neo-PCNA，转染骨肉瘤细胞系MG-63，RT-PCR和免疫组化方法检测转染后PCNA mRNA及蛋白的表达，MTT比色法和集落形成实验检测细胞增殖活性。结果：pSilence2．1-neo-PCNA载体转染能显著抑制PCNA mRNA和蛋白的表达，转染后24.48和72h mRNA表达抑制率分别为68．62％、80．62％和73．11％，PI值分别为空白组的47．72％、23．37％和35．90％。转染后48h细胞增殖的抑制率为68．89％。结论：pSilence2．1-neo-PCNA可显著抑制MG-63细胞PCNA mRNA和蛋白的表达及细胞的增殖活性。     

利用siRNA抑制人骨肉瘤细胞survivin的表达

目的构建生存素(survivin)短发夹状RNA表达载体,检测其对骨肉瘤细胞survivin mRNA及蛋白表达的影响。方法体外构建survivin shRNA表达载体pSilence2.1-neo-survivin,转染骨肉瘤细胞系MG-63,RT-PCR、免疫组化方法检测转染前后survivin mRNA及蛋白的表达,MTT比色法检测细胞增殖活性。结果pSilence2.1-neo-survivin载体转染能显著抑制survivin mRNA、蛋白表达,转染后48h细胞增殖的抑制率为61.83%。结论pSilence2.1-neo-survivin可显著抑制MG-63细胞survivinmRNA、蛋白的表达及细胞的增殖活性。     

干涉FNA抑制人骨肉瘤细胞PCNA表达的实验研究

目的构建增殖细胞核抗原(proliferation cellnuclear antigen,PCNA)短发夹状RNA表达载体,检测其对骨肉瘤细胞PCNA mRNA及蛋白表达的影响.方法体外构建PCNA shRNA表达载体pSilence2.1-neo-PCNA,转染骨肉瘤细胞系MG-63,RT-PCR和免疫组化方法检测转染后PCNA mRNA及蛋白的表达,MTT比色法和集落形成实验检测细胞增殖活性.结果pSilence2.1-neo-PCNA载体转染能显著抑制PCNA mRNA和蛋白的表达,转染后24、48和72 h mRNA表达抑制率分别为68.62%、80.62%和73.12%,PI值分别为空白组的47.72%、23.37%和35.90%.转染后48 h细胞增殖的抑制率为68.89%.结论pSilence2.1-neo-PCNA可显著抑制MG-63细胞PCNA mRNA和蛋白的表达及细胞的增殖活性.     

shRNA沉默RAGE基因表达对前列腺癌细胞增殖的抑制作用

目的:构建针对人晚期糖基化终产物受体(receptor for advanced glycation end products , RAGE)基因的特异性短发夹RNA(small hairpin RNA, shRNA)表达载体,探讨其对前列腺癌细胞DU145增殖的抑制作用.方法:设计并合成4种针对RAGE基因的特异性短链寡核苷酸,构建含shRNA RAGE的表达载体,转染高表达RAGE的亚克隆细胞株sub DU145-2C1.荧光显微镜下观察细胞转染后的情况,实时荧光定量PCR(real-time fluorescence quantitative -PCR, RFQ-PCR)检测转染shRNA后对RAGE mRNA表达的影响,Western印迹法检测对RAGE蛋白表达的影响,CCK-8法检测对细胞增殖的影响,划痕实验观察对细胞迁移能力的影响.结果:构建获得的shRNA RAGE表达载体能够有效抑制RAGE基因的表达(P<0.05),其中以shRNA RAGE -1(R1)的抑制作用最强,其对RAGE mRNA表达的抑制率为84%,对蛋白表达的抑制率为27%.细胞增殖结果显示,转染shRNA RAGE后细胞增殖能力明显降低;而细胞迁移能力则无明显变化.结论:shRNA RAGE能有效下调RAGE基因的表达水平,抑制细胞增殖.     

cIAP1基因的RNA干扰载体的构建及其对卵巢癌细胞的生物学影响

目的 构建针对cIAP1基因的慢病毒shRNA表达载体并稳定转染人卵巢癌Skov3细胞,观察该基因对卵巢癌细胞的影响。方法 设计合成针对cIAP1的shRNA重组质粒表达载体,并筛选出最有效的干扰序列,获取pGPU6-cIAP1-shRNA稳定表达细胞株。RT-PCR及Western blot检测转染组Skov3细胞cIAP1基因mRNA及蛋白表达的水平,MTT法检测细胞生长,绘制生长曲线。结果 测序验证针对cIAP1的shRNA重组质粒构建成功,并筛选cIAP1-2534为最佳干扰序列;流式细胞术分析cIAP1 shRNA载体的转染效率可达74.7%,RT-PCR及Western blot检测干扰组Skov3细胞的cIAP1基因mRNA及蛋白表达水平明显降低(P＜0.05)。MTT实验结果显示干扰组细胞的OD值显著低于正常组细胞(P＜0.05),干扰组细胞的生长速度明显慢于正常组(P＜0.05)。结论 针对cIAP1基因的慢病毒shRNA表达载体可以有效抑制Skov3细胞中该基因的表达,cIAP1基因表达下调能在一定程度上抑制卵巢癌Skov3细胞的体外增殖能力及细胞侵袭能力。     

DNA-PKcs短发夹RNA载体的构建及其表达

目的构建DNA-PKcsshRNA表达载体,观察该基因的抑制对A2780细胞增殖活性的影响。方法将针对人DNA-PKcs基因的不同部位设计的shRNA插入到真核表达质粒并转染人卵巢A2780细胞,RT-PCR和WesterBlot检测其对该基因mRNA和蛋白水平的抑制效率,MTT法测定DNA-PKcs基因的抑制对肿瘤细胞增殖活性的影响。结果 DNA测序分析证实DNA-PKcs shRNA表达载体pSIRENDNA-PKcs shRNA构建成功并在细胞中表达,转染重组载体的A2780细胞DNA-PKcs的表达在mRNA和蛋白水平均明显下降;重组载体转染细胞增殖活性明显降低。结论成功构建DNA-PKcs shRNA表达载体为进一步研究DNA损伤修复基因DNA-PKcs奠定了基础;DNA-PKcs表达的抑制可能会导致肿瘤细胞增殖活性降低。     

RNA干扰HER2基因对人大肠癌HT29细胞株增殖影响的研究

目的研究载体介导的靶向HER2基因的RNA干扰 (RNA interference,RNAi)对体外生长的人大肠癌HT29细胞增殖的影响。方法 将针对HER2基因的短发夹RNA(short hairpin RNA,shRNA)表达载体转染体外生长的HT29细胞,分别用半定量RT-PCR和Western blot检测HER2 mRNA和蛋白的表达,MTT测定各组细胞的增殖差异。结果 靶向HER2的shRNA可以有效地抑制体外生长的人大肠癌HT29细胞中HER2基因mRNA和蛋白表达,与对照组比较,实验组细胞增殖明显受到抑制。结论 靶向HER2的shRNA表达载体可以通过降低HER2基因的表达,进而抑制体外生长的大肠癌HT29细胞的增殖。     

RNA干扰技术抑制血管内皮生长因子表达

目的：应用RNA干扰技术抑制血管内皮生长因子（VEGF）表达。方法：将VEGF基因作为RNA干扰的靶区，通过E—RNAi网上提供的服务，设计两个特异的RNA干扰序列，将其装入含U6启动子的载体上，构建成抗VEGF基因的小发夹样RNA（shRNA）表达载体，再转染人胚肾细胞HEK293、结肠癌细胞HT29、宫颈癌细胞Hela和肝癌细胞HepG2，通过RT—PCR、Northern杂交和免疫荧光观察VEGF表达受抑的程度。结果：成功构建了两种抗VEGF基因的shRNA表达载体，RT—PCR发现其在HEK293和HT29细胞系中，能明显抑制VEGF基因的表达，抑制率分别为72％和42％。但在Hela和HepG2细胞中的抑制率仅为28％和13％；Northern杂交显示，在HEK293细胞和HT29细胞中，VEGF mRNA明显受抑，抑制率达88％和89％；免疫荧光显示，在HT29细胞中，VEGF蛋白表达的受抑制率为73％。结论：针对VEGF基因的shRNA表达载体能够明显抑制VEGF基因的表达，但在不同细胞系中的作用强度存在差别。     

靶向尿激酶受体uPAR基因的shRNA表达载体的构建及鉴定

背景与目的：尿激酶受体（uPAR）与肿瘤的侵袭和转移密切相关,抑制uPAR的表达,可以抑制肿瘤的转移。本研究构建uPAR基因短发夹RNA（shRNA）的表达质粒,为舌鳞状细胞癌RNA干涉（RNAi）介导的基因治疗打下基础。方法：根据GenBank数据库提供的uPAR基因序列,选择设计合成能转录shRNA的DNA序列,将它们插入真核表达载体pWH1构建重组质粒,用酶切的方法进行鉴定;最后将构建成功的特异性表达载体（pWH1-uPAR）转染至舌鳞状细胞癌,通过RT-PCR、免疫细胞化学和Western blot观察其对舌鳞状细胞癌uPAR mRNA和蛋白水平表达的影响。利用MTT实验检测细胞增殖能力的变化。结果：成功构建了uPAR shRNA表达载体;与Ts细胞和转染空载体pWH1的Ts细胞相比,转染pWH1-uPAR表达载体的Ts细胞uPAR mRNA和蛋白的表达明显降低。MTT结果显示uPAR shRNA对Ts细胞增殖的抑制率为32.9%。结论：设计构建的真核表达载体可以特异性干扰uPAR基因的表达,为进一步研究uPAR基因的功能和舌鳞状细胞癌治疗提供有效的方法和手段。     

靶向EGFR基因的shRNA抑制胰腺癌PANC-1细胞增殖的研究

目的探讨EGFR基因对胰腺癌PANC-1细胞的增殖抑制作用。方法构建针对EGFR序列特异性shRNA的表达载体,用脂质体转染胰腺癌PANC-1细胞。采用RT-PCR、Western blot检测EGFR mRNA和蛋白的表达;流式细胞仪检测细胞周期及凋亡;克隆形成实验检测细胞增殖。结果靶向EGFR的序列特异性shRNA明显抑制EGFR mRNA和蛋白的表达,EGFR mRNA和蛋白的抑制率分别为72.1％和67.6％;G1期细胞增多、S期细胞减少(P<0.05);细胞凋亡增加(P<0.05);克隆形成减少(P<0.05)。结论靶向EGFR的序列特异性shRNA能明显抑制胰腺癌细胞增殖、促进凋亡。     

阻断己糖激酶-Ⅱ基因表达对结肠癌化疗的影响及其机制

目的：观察阻断己糖激酶-Ⅱ（ＨＫ-Ⅱ）基因表达对结肠癌ＬｏＶｏ细胞化疗敏感性的影响及其机制。方法：应用质粒介导的短发夹ＲＮＡ（ｓｈＲＮＡ）真核表达法特异性阻断ＨＫ-Ⅱ基因表达。通过半定量逆转录 聚合酶链反应（ＲＴ-ＰＣＲ）和Ｗｅｓｔｅｒｎ印迹法分析ＲＮＡ干扰效应。ＭＴＴ法检测氟尿嘧啶（５-ＦＵ）和奥沙利铂（Ｌ-ＯＨＰ）对ＬｏＶｏ细胞的半数抑制浓度（ＩＣ５０）;底物比色法测定半胱氨酸蛋白水解酶（ｃａｓｐａｓｅ）-３活性;Ｗｅｓｔｅｒｎ印迹法检测胸苷酸合成酶（ＴＳ）表达变化。结果：ＲＮＡ干扰技术特异性下调结肠癌ＬｏＶｏ细胞ＨＫ-Ⅱ基因表达,ｍＲＮＡ和蛋白质水平的表达抑制率分别为７２.１％和７１.２％。阻断ＨＫ-Ⅱ基因表达后,结肠癌ＬｏＶｏ细胞５-ＦＵ和Ｌ-ＯＨＰ的ＩＣ５０值分别为（４.７０±０.４０）μｇ／ｍｌ和（６.２７±０.５９）μｇ／ｍｌ,均明显低于正常培养细胞的（１１.９３±０.１５）μｇ／ｍｌ和（９.７７±０.６０）μｇ／ｍｌ（Ｐ＜０.０１）;与正常培养细胞相比,ＲＮＡ干扰的ＬｏＶｏ细胞ｃａｓｐａｓｅ-３活性明显增高,ＴＳ蛋白表达下降。结论：阻断ＨＫ-Ⅱ基因表达可能通过活化ｃａｓｐａｓｅ-３和降低ＴＳ表达的途径来增加结肠癌ＬｏＶｏ细胞化疗敏感性。     

Stable RNA interference of hexokinase II gene inhibits human colon cancer LoVo cell growth in vitro and in vivo

The purpose of this study is to investigate the effect of silencing hexokinase II (HK II) gene with RNA interference (RNAi) technique on colon cancer LoVo cell proliferation in vitro and in vivo. A short hairpin RNA (shRNA) eukaryotic expression vector against HK II gene was constructed, named as plasmid pGenesil-1-HK II, and transfected into LoVo cells. The expression of HK II gene was detected by RT-PCR and Western blot analysis respectively. Then, tumor colony formation was observed, and cell cycle was also assessed by flow cytometry and the contents of intracellular adenosine triphosphate (ATP) by high performance liquid chromatography (HPLC). Furthermore, LoVo cells were injected subcutaneously into nude mice. After a 4-week follow-up period, the sizes and weights of tumors were measured. Moreover, the expression of Ki67 protein was observed by immunohistochemical technique, and cell apoptosis by terminal deoxynucleotidyl transferase mediated nick end labeling (TUNEL). Consequently, the expression of HK II gene was efficiently blocked by RNAi. Downregulation of HK II gene expression significantly suppressed cloning efficiency and cell cycle of LoVo cell in vitro and tumor growth in vivo. Compared with untransfected LoVo cells, LoVo cells transfected with pGenesil-1-HK II plasmids showed significant decrease in the cellular ATP contents and Ki67 expression, and obvious increase in the apoptosis indexes. Our results suggest that HK II gene can act as a crucial therapeutic target for slowing colon cancer growth.     

The bmi-1 oncoprotein is differentially expressed in non-small cell lung cancer and correlates with INK4A-ARF locus expression

Genes of the polycomb group function by silencing homeotic selector genes that regulate embryogenesis. In mice, downregulation of one of the polycomb genes, bmi-1, leads to neurological alterations and severe proliferative defects in lymphoid cells, whilst bmi-1 overexpression, together with upregulation of myc-1, induces lymphoma. An oncogenic function has been further supported in primary fibroblast studies where bmi-1 overexpression induces immortalization due to repression of p16/p19ARF, and where together with H-ras, it readily transforms MEFs. It was the aim of this study to assess the expression of bmi-1 in resectable non-small cell lung cancer (NSCLC) in association with p16 and p14ARF (=human p19ARF). Tumours (48 resectable NSCLC (32 squamous, 9 adeno-, 2 large cell, 4 undifferentiated carcinomas and 1 carcinoid); stage I, 29, II, 7, III, 12; T1, 18, T2, 30; differentiation: G1 12, G2 19, G3 17) were studied by immunohistochemistry for protein expression and by comparative multiplex PCR for gene amplification analysis. In tumour-free, normal lung tissue from patients, weak - moderate bmi-1 staining was seen in some epithelial cells, lymphocytes, glandular cells and in fibroblasts, whereas blood, endothelial, chondrocytes, muscle cells and adipocytes did not exhibit any bmi-1 expression. In tumours, malignant cells were negative/weakly, moderately and strongly positive in 20, 22 and 6 cases, respectively. As assessed by multiplex PCR, bmi-1 gene amplification was not the reason for high-level bmi-1 expression. Tumours with moderate or strong bmi-1 expression were more likely to have low levels of p16 and p14ARF (P = 0.02). Similarly, tumours negative for both, p16 and p14ARF, exhibit moderate-strong bmi-1 staining. 58% of resectable NSCLC exhibit moderate-high levels of bmi-1 protein. The inverse correlation of bmi-1 and the INK4 locus proteins expression (p16/p14ARF) supports a possible role for bmi-1 misregulation in lung carcinogenesis.     

CtBP1基因shRNA真核表达载体的构建及其干扰效果的初步鉴定

目的：构建C-末端结合蛋白-1（CtBP1）基因RNA干扰（RNAi）的真核表达载体,转染人子宫内膜癌耐药细胞株B-MD-C1（ADR＋/＋）,初步鉴定其干扰效果。方法：以人CtBP1基因为靶基因,以pGenesil-1质粒为载体,根据GenBank数据库提供的CtBP1基因核苷酸序列,选择设计两条siRNA干扰序列,将带9个碱基茎环结构的干扰序列插入带有绿色荧光蛋白（EGFP）基因、卡那霉素（Kanr）抗性基因及U6启动子的真核表达载体pGenesil-1中,构建针对CtBP1基因的shRNA真核表达载体,转化大肠杆菌DH5α菌株,提取质粒,进行限制性内切酶酶切鉴定和测序分析。确认载体构建成功后,用脂质体LipofectamineTM2000将重组质粒瞬时转染人子宫内膜癌耐药细胞株B-MD-C1（ADR＋/＋）,在荧光显微镜下观察绿色荧光蛋白表达,计数转染细胞数,计算转染效率,RT-PCR法检测载体对CtBP1基因的表达抑制效果。结果：构建针对CtBP1基因的pGenesil-1-CtBP1小发夹RNA（pGenesil-1-CtBP1-shRNA）,经限制性内切酶酶切、PCR和DNA测序证实与设计完全一致;在荧光显微镜下观察到B-MD-C1（ADR＋/＋）细胞表达绿色荧光蛋白（EGFP）,证实重组质粒己转染入细胞,转染效率达到60%-70%;RT-PCR结果显示B-MD-C1（ADR＋/＋）细胞中CtBP1基因被特异抑制,基因表达抑制率达40%以上,与转染试剂对照组、空白对照组和阴性序列对照组间的差异均具有统计学意义（P均〈0.05）。结论：成功构建CtBP1基因的shRNA表达载体,可以有效抑制B-MD-C1（ADR＋/＋）细胞上CtBP1基因表达。为进一步研究CtBP1基因功能进而逆转肿瘤的多药耐药奠定基础。     

慢病毒介导的稳定沉默nm23-H1基因的肺癌细胞株的建立及生物学行为改变

背景与目的 nm23-H1基因是重要的肿瘤转移抑制基因。前期研究发现利用化学合成的小干扰RNA(small interfering RNA,siRNA)抑制nm23-H1基因的表达可明显增强肺癌细胞的侵袭力。为了进一步研究nm23-H1基因沉默后的分子生物学机制,本研究利用慢病毒介导的短发夹RNA(short hairpin RNA,shRNA)建立nm23-H1基因稳定沉默的肺癌细胞株。方法将表达特异性抑制nm23-H1基因shRNA的慢病毒转染人大细胞肺癌细胞株NL9980和肺腺癌细胞株A549,通过嘌呤霉素筛选出稳定转染细胞株。逆转录PCR、定量PCR及Western blot法检测nm23-H1基因表达,并通过shRNA抵抗的nm23-H1基因重组质粒转染拯救实验验证,侵袭小室实验检测侵袭力改变。结果逆转录PCR、定量PCR和Western blot法检测稳定转染细胞株NL9980-99和A549-99中nm23-H1基因在mRNA和蛋白水平表达均明显降低;shRNA抵抗的nm23-H1基因重组质粒转染拯救实验重现nm23-H1的正常表达;侵袭小室实验显示NL9980-99和A549-99细胞侵袭力明显增强。结论成功建立nm23-H1基因稳定沉默的人大细胞肺癌细胞株NL9980-99和人肺腺癌细胞株A549-99,nm23-H1基因沉默后使NL9980-99和A549-99细胞的侵袭力明显增强。     

RYBP基因稳定沉默的HL-60细胞系的构建

 【摘要】　目的　利用慢病毒介导的RNA干扰（RNAi）技术,建立RYBP基因稳定沉默的HL-60细胞系。方法　设计针对RYBP基因的5条短发夹状RNA（shRNA）序列,构建RYBP shRNA慢病毒重组载体,分别包装成慢病毒颗粒,直接感染HL-60细胞,同时设空载体和阴性对照shRNA慢病毒对照组。通过观察绿色荧光蛋白表达以监测感染效率,经嘌呤霉素（终质量浓度8 μg／ml）筛选出稳定感染细胞。Western blot实验初步鉴定出蛋白水平最低的RYBP shRNA组,用实时定量聚合酶链反应（PCR）进一步检测该组细胞mRNA表达水平。结果　慢病毒感染的HL-60细胞经嘌呤霉素筛选成功,与对照组比较,5条RYBP shRNA组细胞RYBP表达均有不同程度减低（P＜0.01）,其中以shRNA2沉默效果最佳,且shRNA2组的RYBP基因mRNA水平降低了95 %以上（P＜0.05）。结论　慢病毒介导的shRNA2能高效、稳定地沉默RYBP基因的表达,成功构建了RYBP基因稳定沉默的HL-60细胞系。     

RNA干扰技术抑制smad4基因表达对宫颈癌细胞增殖的影响

目的：探讨用RNA干扰技术下调smad4基因表达对宫颈癌细胞增殖的影响。方法：用DNA重组技术将针对人smad4基因不同部位所设计的三对短发夹状RNA（shorthairpinRNA，shRNA）序列克隆到真核表达质粒pGenesil-1中，构建smad4shRNA表达载体pGenesil—smad4一shRNA1、2、3。脂质体介导转染人宫颈癌细胞株HeLa，经G418筛选抑制smad4表达的稳定细胞克隆。MTT法、克隆形成实验、流式细胞术检测抑制smad4基因对宫颈癌细胞增殖的影响。结果：成功构建分别携带三段shRNA及空载体对照的重组质粒pGenesil—smad4-shRNA1、2、3和pGenesil-con，三种shRNA重组质粒中pGenesil—smad4-shRNA2可明显降低细胞内smad4mRNA及smad4蛋白表达，筛选出的HeLa／shRNA2细胞增殖能力明显增强。结论：应用RNA干扰技术能筛选出特异而高效阻断smad4基因表达及功能的shRNA，smad4基因表达下调能明显促进宫颈癌细胞生长。     

RNA干扰抑制MTA 1的表达对乳腺癌细胞MDA-MB-231增殖的影响

目的:探讨通过RNA干扰技术抑制MTA1的表达及对乳腺癌细胞MDA-MB-231增殖和细胞周期的影响。方法:建立3种稳定表达靶向MTA1的shRNA的MDA-MB-231细胞系。通过反转录-聚合酶链反应(reverse transeription-polymerase chain reaction,RT-PCR)和免疫组化法验证基因表达的抑制效果;采用细胞计数法及噻唑蓝(thiazolylblue,MTT)法检测细胞的增殖能力;流式细胞仪分析细胞周期。结果:MTA1基因被抑制后,其mRNA表达明显下降,RT-PCR结果显示,稳定转染3种重组质粒后,MTA1mRNA水平较对照组分别下调了70.07%、82.40%和63.44%;同时,MDA-MB-231细胞的生长明显受抑制,与对照组细胞相比,细胞计数示细胞数目明显减低;MTT分析示细胞增殖下降,流式细胞分析示细胞周期阻滞在G0/G1期。结论:在MDA-MB-231细胞中,抑制MTA1的表达可有效抑制细胞生长并导致细胞周期的阻滞;利用RNA干扰技术抑制MTA1的表达可能会成为一种有效的乳腺癌基因治疗手段。     

阻断mTOR表达对结肠癌LoVo细胞增殖的影响及机制

目的观察RNA干扰(RNAi)特异性阻断哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)基因表达对结肠癌LoVo细胞体内外增殖的影响及机制。方法实验分3组：正常培养组：未转染的正常培养LoVo细胞;阳性实验组：转染mTOR-RNA干扰质粒的LoVo细胞;阴性对照组：转染空载体质粒的LoVo细胞。MTT法检测LoVo细胞体外生长曲线;平板克隆形成试验分析细胞克隆形成能力;流式细胞仪检测细胞周期和凋亡;高效液相色谱法(HPLC)测定细胞内三磷酸腺苷(ATP)含量。结果阳性实验组细胞生长速度较正常对照组减慢。正常培养组、阳性实验组和阴性对照组细胞克隆形成率分别为(26.8±4.9)%、(11.8±2.1)%和(21.3±4.7)%;与正常培养组比较,阳性实验组细胞克隆形成率显著减少(P<0.01)。与正常培养组相比,阳性实验组G₁期细胞数增加8.6%,S期的细胞数减少8.0%,细胞凋亡率增加7.0%(均P<0.01)。正常培养组、阳性实验组和阴性对照组细胞内ATP含量分别为（2.47±0.20）nmol/106 、（1.62±0.18）nmol/106和（2.37±0.21）nmol/106;阳性实验组ATP含量明显低于正常培养组(P<0.01)。结论特异性阻断mTOR基因表达可通过遏制能量代谢和诱导细胞凋亡来抑制结肠癌LoVo细胞增殖。     

SILENCING OF Bc1-2 GENE BY SMALL HAIRPIN RNA INHIBITS GROWTH OF NB4 CELLS

Double-stranded RNA-dependent posttrans- criptional silencing, also known as RNA interference (RNAi), is a phenomenon in which double-stranded small interfering RNA (shRNA) complexes can target specific genes of homology for silencing. RNAi allows genes in human cells to be silenced by introducing shorter synthetic duplex RNAs (i.e., 20 bp) through transfection. A 20-nt shRNA is long enough to induce gene-specific silencing but short enough to evade host response[1-3]. Stable gene rep…