间充质干细胞在HLA半相合移植中的应用

造血干细胞移植是治愈恶性血液系统疾病的唯一方法,但寻找HLA完全相合的供者越来越难,HLA半相合移植显示出它独特的优势。骨髓间充质干细胞是骨髓微环境中具有自我更新和多向分化的非造血干细胞,在造血干细胞移植中发挥重要的作用,它能够促进造血重建,与造血干细胞共输注能增强造血干细胞的植入。     

间充质干细胞与造血干细胞移植相关研究的进展

骨髓中主要存在2种主要类型的干细胞:造血干细胞(hematopoietic stem cells,HSC)及非HSC或间充质干细胞(mesenchymal stem cells,MSC)。HSC移植可重建患者造血系统和免疫系统,因此,临床上HSC移植用于治疗各种恶性血液病、遗传性血液病、再生障碍性贫血及免疫缺陷病等。     

骨髓间充质干细胞的黏附分子表达及其对脐血造血干细胞扩增的支持作用

目的:探讨骨髓间充质干细胞(MSC)的黏附分子表达及其对脐血造血干/祖细胞体外增殖的支持作用。方法:取正常骨髓单个核细胞贴壁培养,梭形细胞完全融合后传代,用流式细胞仪检测免疫表型;将脐血CD34+细胞接种到MSC或其他培养液上,比较不同培养条件对造血细胞扩增能力及黏附分子表达的影响。结果:MSC在体外培养中分为成纤维样成熟MSC(mMSC)和体积很小的圆形RS(rapidlyselfrenewingcells)细胞;两群细胞的CD34、CD45、CD3、CD19、CD33、HLADR、CD38均为阴性,而CD90、CD105、CD166、CD29、CD44、CD49e、CD54、CD13呈阳性,但RS细胞表面抗原表达的阳性率和平均荧光强度都明显低于mMSC,而CD117的表达高于mMSC;脐血CD34+细胞在MSC和细胞因子作用下,扩增8d后有核细胞、CD34+、CD34+CD38-细胞和CFUCs分别扩增(145.57±17.89)、(37.47±13.78)、(69.78±50.07)、(10.74±5.89)和(20.73±5.54)倍,均显著高于对照组,扩增后CD34+细胞的ALCAM、VLAα4、VLAα5、VLAβ1、HCAM、PECAM和LFA1表达较扩增前无显著变化。结论:MSC是一个异质性的细胞群体,可为造血干细胞(HSC)体外扩增提供适宜的微环境,有助于抑制HSC分化并保持其归巢能力。     

骨髓间充质干细胞与肺间质纤维化

间质性肺疾病（ILD）是由各种不同原因引起的一组疾病,其以肺间质纤维化为共同病理改变,是导致肺功能进行性丧失和呼吸衰竭的主要原因。特发性肺纤维化（IPF）是最常见的一种ILD,其对目前采用的药物治疗几乎无反应,预后差。目前对这类疾病发病机制的研究认为,无论是否有炎症反应,肺纤维化形成都是肺损伤与修复反复失衡的结果。间充质干细胞（MSC）是广泛存在于人体各组织中的一种成体干细胞,具有多向分化潜能。在受损肺,骨髓来源的MSC（BMd-MSC）可以分化为上皮细胞、血管内皮细胞和成纤维细胞。采用MSC疗法有可能是治疗肺纤维化最理想的方法之一。     

骨髓间充质干细胞治疗脑梗死的研究进展

研究发现，骨髓间充质干细胞在适宜条件下可分化为神经元样细胞，并对脑梗死后神经功能缺损有明显的改善作用。文章就骨髓间充质干细胞的生物学特性、作用机制、存在的问题及其在脑梗死应用方面的研究进展做了综述。     

间充质干细胞在心肌梗死治疗中的作用

心肌梗死有很高的发病率和死亡率 ,一般认为成熟心肌细胞属于终末分化细胞 ,丧失再生能力。心肌梗死时心肌细胞受到不可逆损伤 ,细胞大量坏死 ,梗死区不能通过残余心肌细胞的增生进行修复 ,成纤维细胞逐渐代替坏死的心肌细胞并在梗死区形成瘢痕组织 ,导致心脏局部收缩功能下降 ,梗死心肌重构 ,最终引起心功能不全 ,极大影响患者的生活质量。近来虽有学者认为心肌细胞的某个亚组能再生[1] ,但这种很弱的再生能力局限于活的心肌内 ,在梗死区内并未发现。传统的治疗方法旨在减少坏死心肌的数量 ,缩小梗死范围 ,对已形成的疤痕组织无能为力。随…     

造血干细胞移植后骨髓造血重建及血细胞形态的观察

造血干细胞移植是目前公认的治疗血液系统恶性肿瘤的有效方法。我院于 1 993年～ 2 0 0 1年 3月对血液系统恶性肿瘤及个别重型 β 地中海贫血和其他恶性肿瘤的 1 0 8例患者施行了多种方式的造血干细胞移植。我们选择其中 86例资料较完整的造血干细胞移植后患者 ,对其骨髓造血重建及血细胞形态进行回顾性分析 ,现报告如下。1　资料与方法1 .1　一般资料本组 86例 ,男 5 5例 ,女 3 1例 ,年龄 1～ 5 2岁 ,中位年龄 2 7岁。其中急性非淋巴细胞白血病 3 5例(Ｍ1 2例 ,Ｍ2 1 0例 ,Ｍ31 5例 ,Ｍ44例 ,Ｍ53例 ,Ｍ61例 ;3 4例ＣＲ ,1例ＮＲ) ,急性淋…     

骨髓间充质干细胞治疗缺血性脑血管病研究进展

骨髓间充质干细胞是存在于骨髓中的一种具有跨胚层分化潜能的干细胞。近年来研究发现其可在中枢神经系统内存活并能分化为神经样细胞，在体外也可通过诱导向神经细胞转化，并对脑缺血、脑外伤等疾病的神经功能的缺损有改善作用。其取材方便、体外扩增迅速且能以多种途径移植包括静脉移植、脑内移植。故骨髓间充质干细胞在中枢神经系统损伤修复中的临床应用前景广阔。     

骨髓间充质干细胞归巢研究进展

骨髓问充质干细胞（BMMSCs）,是一种多能干细胞,具有多向分化潜能,可分化为骨细胞、软骨细胞、内皮细胞、心肌细胞等,并能分泌大量细胞因子,参与组织修复。因此,BMMSCs成为科研工作者研究的热点和焦点,并取得了不少令人欣喜的成果,但是其到底是怎么归巢到靶器官,仍不是很清楚。本文就BMMSCs归巢的机制和影响因素进行简要综述。     

骨髓间充质干细胞治疗缺血性脑血管病

近年来,随着对骨髓间充质干细胞（bone marrow mesenchymal stem cell,BMSC）研究的深入,利用BMSC移植治疗缺血性脑血管病成为研究热点。然而,在BMSC的作用机制、移植时间、移植途径、特异性标记物等方面仍存在着较大争议。     

骨髓间充质干细胞的培养及低氧条件对其影响

目的 骨髓间充质干细胞(BMMSC)的体外培养和低氧对于BMMSC增殖作用的影响.方法 成年雄性SD大鼠断颈处死后于75％酒精中浸泡5 min.用全骨髓贴壁法培养细胞,选取生长状态良好的第3代细胞进行鉴定.以单克隆抗体CD45、CD90行流式细胞术鉴定大鼠BMMSC.用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法测定第3代BMMSC以及低氧处理的第3代BMMSC的增殖情况.结果 用全骨髓贴壁法分离并培养SD大鼠BMMSC;流式细胞仪检测显示:第3代BMMSC表面特异性标志CD90表达率为96.0％,而非BMMSC表面标志CD45仅为2.5％.MTT结果显示低氧条件下的BMMSC比常氧条件下增殖速率高,并且光镜下观察到细胞状态均一,折光性更好.结论 用全骨髓贴壁法可以在体外分离、培养出纯度较高的SD大鼠来源BMMSC,低氧环境可以刺激BMMSC的增殖.     

Study on bilibrubin induced apoptosis of human bone marrow mesenchymal stem cells

正Objective To investigate the effects of bilirubin on human bone marrow mesenchymal stem cell(BMMSC)and to provide the evidence for selecting patients with liver function failure suitable for BMMSC transplantation therapy.Methods Bilirubin of different concentration(0,10,20,30,40 and 50μmol/L)was separately added into     

成人骨髓间充质干细胞分化为成骨细胞的研究

目的：通过成人骨髓间充质干细胞(mesenchymal stem cells，MSC)体外定向诱导为成骨细胞，探讨理想而有临床实用价值的成人骨髓MSC体外诱导培养体系。方法：体外分离、扩增成人骨髓MSC，流式细胞仪检测细胞表面抗原的表达。采用基础诱导培养液[地塞米松、β-甘油磷酸钠、L-抗坏血酸加不同浓度的重组人转化生长因子-β1(recombinant human transforming growth factor—betal，rhTGF-β1)]诱导成人骨髓MSC体外分化为成骨细胞。利用倒置光学显微镜、透射电镜、四甲基偶氮唑盐(MTT)比色、碱性磷酸酶(ALP)染色、ALP活性测定等方法研究成人骨髓MSC增殖和分化情况。结果：成人骨髓MSC的增殖和分化作用和rhTGF-β1有剂量依赖关系，低浓度时促进增殖，高浓度抑制增殖，5μg／L浓度达到高峰，其浓度升高促进MSC分化。结论：含有rhTGF-β1 5μg／L的基础诱导培养液是理想且有临床实用价值的成人骨髓间充质干细胞体外诱导为成骨细胞的培养体系。     

Human bone marrow mesenchymal stem cells in vivo

Great confusion still exists amongst cell biologists, musculoskeletal and other specialists interested in regenerative medicine regarding the in vivo identity of human bone marrow (BM) mesenchymal stem cells (MSCs). Contrary to views held in some quarters, methods for the robust identification and purification of BM MSCs are now well established. Human BM MSCs represent a phenotypically homogeneous cell population that share an identical phenotype with marrow adventitial reticular cells (ARCs), which are stromal cells similar in nature to pericytes. When an extensive panel of markers is used to characterize BM MSCs, it appears that the diverse MSC markers described in different laboratories are expressed on the same cell population. Rare cell phenotypical analysis and in vitro colony forming unit-fibroblast (CFU-F) assays produce no compelling evidence that BM MSCs circulate in healthy man. Furthermore, although investigators speak of a number of specific MSC markers, a true marker of MSC 'stemness' and multipotentiality has not yet been defined since culture-expanded MSCs may lose some of these markers, but remain multipotential. This knowledge provides a platform for understanding MSCs in vivo leading to novel approaches for therapy development, including in situ tissue engineering.     

体外诱导骨髓间充质干细胞向神经元样细胞分化的研究

目的观察人骨髓间充质干细胞（BM-MSCs）体外扩增和定向诱导分化为神经元样细胞的变化,为其临床应用奠定基础。方法采用密度梯度离心法分离BM-MSCs细胞,用MesencultTM培养基和贴壁培养法培养、纯化和扩增细胞,流式细胞术检测细胞表面CD29和CD90分子表达率。采用20 ng/ml重组碱性成纤维细胞生长因子（bFGF）、20 ng/ml新型人表皮生长因子（hEGF）和20 g/L二甲基亚砜（DMSO）、5 mmol/Lβ-巯基乙醇（BME）分别诱导BM-MSCs;采用免疫组化法检测细胞的神经元特异性烯醇化酶（NSE）、胶原纤维酸性蛋白（GFAP）、波形蛋白（VIM）表达情况。结果BM-MSCs细胞增殖迅速,3周可传代培养;BM-MSCs传十代扩增1－2×10^3倍。分离和扩增BM-MSCs CD29、CD90强表达率分别为95.02%、93.81%。药物诱导后的BM-MSCs发生轴突等神经元样细胞变化,阳性表达NSE、GFAP、VIM分子。结论人BM-MSCs能体外培养和扩增,并能定向诱导分化为神经元样细胞。     

永生化骨髓间充质干细胞的生物学特性

目的:探讨永生化骨髓问充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells.BMSCs)的生物学特性.方法:通过质粒pCMVSV40T/PUR导入大鼠BMSCs,建立永生化BMSCs.在倒置显微镜下观察细胞形态;采用检测碱性磷酸酶的活性,了解永生化BMSCs是否可分化为成骨细胞;采用裸鼠皮下接种实验检测细胞的致瘤性;应用不同血清浓度进行细胞培养及冻存,描绘其生长曲线及复苏后的活性.结果:未导入质粒的BMSCs培养至15代后细胞不能继续传代,呈明显衰老迹象,而永生化BMSCs培养至5代后仍可保持较好的活性,但具有明显接触抑制;永生化BMSCs具有分化为成骨细胞的能力:裸鼠接种后无致瘤性;与其他血清浓度相比,20%血清培养组的细胞生长速度较快;50%及90%血清组其复苏后较20%血清组活性高(P<0.05).结论:在体外,pCMVSV40T/PUR构建的永生化BMSCs具有活性较好等特性,且无成瘤性.可为BMSCs的研究及应用提供大量的细胞来源.     

Immunomodulatory effect of human adipose tissue-derived adult stem cells: comparison with bone marrow mesenchymal stem cells

Like mesenchymal stem cells from bone marrow (BM-MSCs), adipose tissue-derived adult stem cells (ADAS cells) can differentiate into several lineages and present therapeutical potential for repairing damaged tissues. The use of allogenic stem cells can enlarge their therapeutical interest, provided that the grafted cells could be tolerated. We investigate here, for the first time, the immunosuppressive properties of ADAS cells compared with the well-characterized immunosuppressive properties of BM-MSCs. ADAS cells did not provoke in vitro alloreactivity of incompatible lymphocytes and, moreover, suppressed mixed lymphocyte reaction (MLR) and lymphocyte proliferative response to mitogens. The impairment of inhibition when ADAS cells and BM-MSCs were separated from lymphocytes by a permeable membrane suggests that cell contact is required for a full inhibitory effect. Hepatocyte growth factor is secreted by both stem cells but, similar to interleukin-10 and transforming growth factor-beta (TGF-beta), the levels of which were undetectable in supernatants of MLR inhibited by ADAS cells or BM-MSCs, it did not seem implicated in the stem cell suppressive effect. These findings support that ADAS cells share immunosuppressive properties with BM-MSCs. Therefore, ADAS cell-based reconstructive therapy could employ allogenic cells and because of their immunosuppressive properties, ADAS cells could be an alternative source to BM-MSCs to treat allogenic conflicts.     

SSEA-4 identifies mesenchymal stem cells from bone marrow

Adult bone marrow (BM) contains hematopoietic stem cells (HSCs) as well as a nonhematopoietic, stromal cell population. Within this stromal population are mesenchymal stem cells (MSCs), which not only support hematopoiesis but also differentiate into multiple lineages, including fat, bone, and cartilage. Because of this multipotentiality, the MSC is an attractive candidate for clinical applications to repair or regenerate damaged tissues of mesenchymal origin. However, research progress has been hampered by the limited existing knowledge of the biology of these cells, particularly by the lack of a suitable marker for their prospective isolation. Here, we report that SSEA-4, an early embryonic glycolipid antigen commonly used as a marker for undifferentiated pluripotent human embryonic stem cells and cleavage to blastocyst stage embryos, also identifies the adult mesenchymal stem cell population.     

骨髓间充质干细胞移植对大鼠重症急性胰腺炎的治疗作用观察

目的探讨骨髓间充质干细胞（MSCs）移植对重症胰腺炎（SAP）的治疗作用及相关机制。方法将雄性SD大鼠120只随机分为假手术组、模型组及移植组各40只。模型组和移植组采用5%牛磺胆酸钠逆行胰胆管注射方法制作SAP模型,假手术组开腹后翻动肠壁即关腹。造模成功后移植组经门静脉植入MSCs;模型组及假手术组采用同样方法给予等量生理盐水。于24、48、72 h每组分别处死10只大鼠,对胰腺和肾脏损伤进行大体形态和光镜下观察,测定血清淀粉酶（AMY）、BUN、Cr、TNF-α和IL-6水平。结果模型组胰腺和肾脏组织损伤明显,各时间点血清AMY、BUN、Cr、TNF-α和IL-6水平均高于假手术组,P均〈0.05。移植组胰腺和肾脏组织损伤有所减轻;各时间点血清中AMY、BUN、Cr、TNF-α和IL-6水平均低于模型组及假手术组,P均〈0.05。结论经门静脉移植MSCs治疗SAP效果确切,可降低多器官功能障碍的发生率。     

自体成肌细胞和骨髓间充质干细胞移植对缺血坏死心肌的修复作用

目的 观察自体骨骼肌成肌细胞(SMs)和骨髓间充质干细胞(BMSCs)经冠脉移植至缺血坏死心肌后的分化情况及对缺血坏死心肌的修复作用.方法 取日本大耳白兔45只,随机分为SMs、BMSCs移植组和对照组,每组15只.移植组分别取臀肌和骨髓体外培养SMs和BMSCs.各组均结扎左前降支建立缺血坏死心肌模型.分别于再灌注后1 h经左前降支注射5-溴脱氧尿核苷(BrdU)标记的SMs、BMSCs悬液1 ml(5×1012个/L)或等量DMEM培养液.移植后24 h和4周用超声心动仪检查心脏功能变化.移植后4周以病理组织学检查HE染色及BrdU抗体、结蛋白(Desmin)抗体和骨骼肌特异性慢肌球蛋白重链(Slow-MHC)单克隆抗体,免疫组化染色评价移植细胞的分化情况.结果 移植后4周,SMs和BMSCs组在左室射血分数[(61.9±3.6)%、(62.4±2.6)%]和左室短轴收缩率[(31.6±2.3)%、(30.8±1.9)%]较对照组[(53.2 ±2.3)%、(23.8±0.9)%]均有明显改善(P＜0.05);SMs与BMSCs组比较差异无统计学意义(P＞0.05);HE染色显示移植组心肌纤维排列有序,其中SMs组可见新生的多核肌样细胞.移植SMs和BMSCs BrdU抗体免疫组化染色阳性.SMs组SMsDesmin抗体和Slow-MHC单克隆抗体免疫组化染色阳性.结论 经冠脉自体移植的SMs和BMSCs可在缺血坏死心肌内存活.对心肌损伤具有修复作用,并同等程度地提高了心脏功能.