家族性帕金森病患者parkin基因缺失突变的初步研究

目的 探讨中国家族性帕金森病（PD）患者parkin基因第3-7外显子是否存在缺失突变，及其与该病临床特点的关系。方法 采集6例无血缘相关的家族性PD患者外周血液，提取DNA，通过PCR扩增，琼脂糖凝胶电泳鉴定parkin基因第3-7外显子缺失突变，并结合临床资料分析。结果 6例患者中，发现1例有第5外显子缺失，其遗传模式呈常染色体隐性遗传，起病年龄60岁，临床表现为震颤，僵直和运动迟缓，但无异动症，第3、4、6、7外显子未发现缺失突变。结论 中国家族性PD患者中存在parkin基因和5外显子缺失突变改变。     

散发性早发帕金森病患者Parkin基因的突变研究

目的:观察我国散发性早发帕金森病(Parkinson’s disease,PD)患者中是否存在parkin基因的突变以及突变的形式和分布,探讨parkin基因突变在PD发病机理中的可能作用。方法:病例组由35例散发性早发PD患者组成,70例正常体检者为对照组。以基因组DNA为模板,扩增parkin基因的全部12个外显子,然后分别采用琼脂糖电泳法观察外显子的大片段缺失及其分布和单链构象多态性(single-strand conformation polymorphism,SSCP)-DNA序列测定法确定外显子中点突变的存在和分布。结果:(1)在35例PD患者中发现外显子2、4缺失各1例,外显子3缺失2例;(2)4例SSCP泳动异常,测序证实1例患者的外显子7存在1个未曾报道过的新的点突变位点Gly284Arg。结论:parkin基因外显子缺失和parkin基因点突变也是我国早发性PD患者的致病原因之一。     

原发性震颤parkin基因缺失突变的初步研究

目的　探讨原发性震颤(ET)患者parkin基因第3～7外显子是否存在缺失突变,及其与该病临 床特点的关系。方法　采集56例发病年龄<50岁的ET患者外周血液,提取基因组DNA,通过聚合酶链反应 (PCR)扩增、琼脂糖凝胶电泳鉴定是否有parkin基因第3～7外显子缺失突变,并结合ET患者临床资料进行 分析。结果　本组ET患者临床表现为单一症状的姿势性震颤,但均未发现parkin基因第3～7外显子缺失。 结论　ET的发生及姿势性震颤可能与parkin基因第3～7外显子缺失突变无关。     

中国南方汉族散发早发性帕金森综合征的parkin基因突变分析

目的 探讨中国南方汉族散发早发性帕金森综合征(early onset parkinsonism,EOP)的parkin基因突变特点.方法 应用实时荧光定量PCR技术结合DNA直接测序技术对156例中国南方汉族散发EOP患者进行parkin基因突变分析.结果 19例患者parkin基因突变,包括15例杂合突变、2例纯合突变、2例复杂杂合突变.17例患者外显子重排突变,其中12例外显子缺失突变,5例外显子双重重复突变.此外,3例患者存在点突变和(或)小片段缺失突变,其中ⅣS9+18C＞T、c.202-203delAG为已报道突变,c.813delT为未报道的新突变;parkin基因突变位点主要分布在其1～7号外显子.无parkin基因突变与有parkin基因突变的患者在临床表现及病情严重程度方面差异无统计学意义,但发病年龄[(40.9±6.8)岁与(35.5±10.0)岁,Z=-2.271,P=0.023)]、病程[(4.4±3.6)年与(7.6±4.0)年,Z=-3.680,P=0.000)]等方面差异有统计学意义.结论 中国南方汉族散发EOP患者parkin基因突变的频率为12.18%(19/156),外显子重排突变是其重要突变类型;外显子缺失突变是主要的突变形式;parkin基因1～7号外显子为突变热点.parkin基因突变与无parkin基因突变的EOP患者在临床表型上无明显差异,但其发病年龄较轻,病程较长,进展较缓慢.     

帕金森病患者Parkin基因的研究

目的 研究Parkin基因缺失在早发性和晚发性帕金森病（PD）患者中的分布情况，探讨其在不同亚型PD发病机制中的可能作用。方法 对63例PD患者分为早发性PD组和晚发性PD组。以提取的基因组DNA为模板，扩增Parkin基因2～5号外显子，然后行琼脂糖电泳，观察外显子的缺失分布。结果 63例PD患者中发现外显子2、4缺失各1例，外显子3缺失2例，这些缺失均出现于早发性PD组。结论 Parkin基因外显子缺失可能是我国早发性PD患者的致病基因之一。     

常染色体隐性遗传早发性帕金森病1个家系临床特征及parkin基因突变分析

目的探讨1个常染色体隐性遗传早发性帕金森病（autosomal recessive early-onset parkinson-ism，AREP）家系的临床特征及parkin基因突变情况。方法对1个AREP家系2例患者的临床资料进行回顾性分析，同时应用DNA直接测序、限制性内切酶酶切、荧光半定量PCR等技术方法进行parkin基因的突变分析。结果该家系共2例患者，发病年龄轻，分别为22岁和23岁；病情进展相对缓慢，症状有波动，呈晨轻暮重，腱反射活跃；对小剂量多巴制剂反应良好。基因突变发现该家系存在parkin基因的复合杂合突变（第7号外显子杂合的G859T和第4外显子杂合缺失突变），其中G859T为新报道的点突变。结论我国的AREP家系有帕金森病的一般临床表现，又有其独特的临床特征，存在parkin基因的突变。     

早发帕金森病临床特征、多巴转运体PET显像及基因突变分析

目的探讨早发帕金森病的临床特征、多巴胺功能改变和基因突变。方法选取作者医院收治的10例早发帕金森病患者(男、女各5例),发病年龄平均(31.4±8.0)岁,平均病程(3.0±0.8)年,无家族史,对所有患者的临床资料、多巴转运体PET显像及基因检测结果进行回顾性分析。结果 10例患者均有受累肢体运动迟缓及肌张力增高,6例出现静止性震颤,5例有足部肌张力障碍,4例腱反射活跃,2例腱反射亢进,4例存在日间症状波动。3例伴抑郁。9例患者对多巴丝肼反应良好。8例进行脑多巴胺转运体PET显像(11 C-CFT DATPET)检查,1例起病对侧壳核后部DAT降低,7例显示双侧壳核后部DAT降低,其中4例起病对侧DAT降低更为明显。1例parkin基因3、4外显子缺失,PINK1基因外显子1还发生重复突变。1例parkin基因外显子4出现了纯合突变。3例parkin基因外显子3或4发生杂合突变。结论早发帕金森病具有独特的临床特征,纹状体多巴胺功能发生改变,parkin基因和PINK1基因与其发病相关。     

应用荧光半定量聚合酶链反应方法检测常染色体隐性遗传早发性帕金森综合征parkin基因外显子重排突变分析

目的探讨常染色体隐性遗传早发性帕金森综合征（autosomal recessive early-onset parkinsonism ,AREP）基因外显子重排突变情况。方法应用荧光半定量聚合酶链反应（PCR）方法对18个AREP家系进行parkin基因外显子重排突变分析。结果9个AREP家系含有parkin基因外显子重排突变，其中2个家系为外显子4纯合缺失，2个家系为外显子4杂合缺失，2个家系为外显子2杂合缺失，1家系为外显子3杂合缺失，1家系为外显子1杂合缺失，此外，1家系为外显子3和外显子4的复合杂合缺失。未见parkin基因外显子重复突变。结论我国AREP患者存在parkin基因外显子重排突变；parkin基因外显子重排突变可能是我国AREP患者的主要致病因素。     

帕金森病患者PINK 1基因的突变研究

目的观察我国帕金森病(Parkinson's disease,PD)患者中是否存在PINK1的基因突变,并结合临床症状,分析、探讨基因突变或缺失对帕金森病患者临床症状的影响。同时,通过基因学的研究来探讨PINK1基因突变与早发型PD及晚发型PD的关系。方法应用聚合酶链反应(PCR)及DNA测序技术进行PINK1基因的突变分析。结果未发现外显子3、4缺失,外显子2缺失3例。DNA测序发现1例家族性PD患者PINK1基因外显子2中G153A杂合子突变。2例散发PD患者PINK1基因外显子3中内含子突变。PINK1基因在早发型和晚发型PD患者之间无显著的统计学意义(P0.05)。结论存在PINK1基因突变的PD患者初发症状多以震颤为主,症状波动、抑郁、便秘、睡眠障碍症状较严重,其中杂合子突变对PD有何明确意义尚需进一步的研究。且PINK1基因缺失突变在早发型与晚发型PD中可能无区别。     

应用SYBR GreenⅠ实时荧光定量聚合酶链反应检测常染色体隐性遗传早发性帕金森综合征的parkin基因外显子重排突变

目的 建立应用SYBR GreenⅠ实时荧光定量聚合酶链反应(Real-time PCR,RT-PCR)检测parkin基因外显子重排突变的技术平台,应用该技术对常染色体隐性遗传早发型帕金森综合征(autosomal recessive early-onset parkinsonism,AREP) 家系进行parkin基因外显子重排突变分析.方法 应用SYBR GreenⅠRT-PCR技术对32个中国AREP家系进行parkin基因外显子重排突变分析.结果 14个家系先证者存在parkin基因外显子重排突变,其中3个为纯合缺失突变、3个为复杂杂合缺失突变和8个杂合缺失突变,未发现外显子重复突变,突变主要累及第2～4号外显子.结论 建立了应用SYBR GreenⅠRT-PCR技术检测parkin基因外显子重排突变的基因检测平台;中国AREP 家系的parkin基因外显子重排突变频率为43.8%,与国外报道相似.     

广西地区一个早发性帕金森病家族Parkin基因的研究

目的：研究Parkin基因1～12号外显子缺失突变、点突变与一个早发性帕金森病（EOPD）家族的关系。方法：采用聚合酶链反应（PCR）扩增2例临床确诊为EOPD患者及其亲属的Parkin基因1～12号外显子;用琼脂糖凝胶电泳和单链构象多态性分析检测Parkin基因1～12号外显子缺失突变和点突变;将1例患者Parkin基因的1～12号外显子进行测序,对发现有异常的外显子,用斑点杂交、放射显影定性方法检测其亲属相应的外显子。结果：所有研究对象均未检测到Parkin基因1～12号外显子缺失突变。结论：在2例患者及2名无临床症状亲属新发现7号外显子同义杂合点突变C869T,但此突变没有引起蛋白质序列改变（Arg256Arg）。     

中国汉族早发型帕金森病人群PARK2基因突变的多态性分析

目的 观察散发性早发帕金森病(Parkinson s disease, PD)患者遗传易感基因突变的形式和分布,探讨易感基因突变在PD发病中的可能作用。 方法　病例组由30例散发性早发帕金森患者组成。抽取病人外周血提取DNA,以基因组DNA为模板, 通过PCR扩增PARK2基因的第1、4、6、7号外显子。比对PCR产物测序后的突变情况。结果 发现样本中存在突变,在正常人中存在单核苷酸多态性(single nucleotide polymorphism, SNP)。结论　PARK2基因外显子的突变是我国散发性早发PD患者的致病原因之一。     

中国汉族早发型帕金森病人群PARK2基因突变的多态性分析

目的 观察散发性早发帕金森病(Parkinson s disease, PD)患者遗传易感基因突变的形式和分布,探讨易感基因突变在PD发病中的可能作用。 方法　病例组由30例散发性早发帕金森患者组成。抽取病人外周血提取DNA,以基因组DNA为模板, 通过PCR扩增PARK2基因的第1、4、6、7号外显子。比对PCR产物测序后的突变情况。结果 发现样本中存在突变,在正常人中存在单核苷酸多态性(single nucleotide polymorphism, SNP)。结论　PARK2基因外显子的突变是我国散发性早发PD患者的致病原因之一。     

浙江沿海温岭地区帕金森病PINK1基因突变与多态性研究

目的 探讨浙江温岭地区帕金森病( Parkinson's disease,PD)患者PINK1基因突变和多态性分布特点,及其与PD的关系.方法 采用聚合酶链反应扩增200例PD组(早发性PD 112例、晚发性PD 88例)和220名相匹配的对照组(青年对照组68名、老年对照组152名)的PINK1基因1～8号外显子,并对扩增产物进行测序,斑点杂交法检测明确其基因型,计算其基因型频率和等位基因频率,并进行统计学分析.结果 未发现PD组和对照组出现PINK1基因外显子的缺失突变;在早发性PD组中有2例出现5号外显子杂合型突变(G12169A),发现该地区存在PINK1基因5号外显子G12164A,多态有G/G和G/A两种基因型,无A/A基因型,而G12101A多态有G/A和A/A两种基因型,无G/G基因型.PD组的PINK1基因5号外显子G12164A多态在A/A基因型频率84/200(42.0％)与对照组52/220(23.6％)相比有升高趋势(x2=4.034,P=0.045),在晚发性PD组中A/A基因型频率(40/88,45.5％)与老年对照组(32/152,21.1％)相比有升高趋势(x2=3.951,P=0.047),其余各组之间的等位基因频率比较差异均无统计学意义.结论 PINK1基因可能不是浙江温岭地区PD患者致病基因的突变热点;G12164A、G12101A连锁多态才是该地区晚发性PD患者的易患因素.     

Parkin基因第4号外显子多态性与帕金森病关系的研究

目的探讨parkin基因第4外显子G/A多态与帕金森病(PD)易患性之间的关系.方法采用聚合酶链式反应-限制性片断长度多态性方法(PCR-RFLP),观察155例PD患者、192名健康人对照组中parkin基因多态的分布,并与澳大利亚白种人的研究结果进行比较.结果 (1)PD患者与正常对照组间parkin基因第4外显子G/A多态基因型和等位基因分布差异均无显著意义(等位基因以G为主,频率分别为54.2%和52.9%,χ2=0.318; 基因型以GA型为主,频率分别为51.6%和43.2%,χ2=1.433,均P>0.05);发病年龄以50岁为界分成早发组与晚发组后,早发组与晚发组人群中该多态的分布差异亦无显著意义(基因型χ2=1.16,等位基因χ2=0.049,均P>0.05).(2)上海汉族人该基因的多态分布与澳大利亚白种人的差异有非常显著意义(χ2=206.448, P<0.001);上海汉族人以GA基因型为主(51.6%),澳大利亚白种人以GG基因型为主(92.7%).结论上海汉族人parkin基因第4外显子G/A多态与PD易患性关系不大;上海汉族人与澳大利亚白种人该多态分布不同.     

多重PCR/DHPLC技术检测家族性帕金森病Parkin基因外显子重组突变

目的 了解中国家族性帕金森病患者Parkin基因外显子的缺失、重复及其分布。以进一步探讨突变与临床表型之间的关系。方法 应用多重聚合酶链式反应（PCR）、变性高效液相色谱（DHPLC）、实时荧光定量PCR等方法检测46例健康对照者和来自29个家系的49例患者DNA样本中Parkin基因1～12外显子的缺失和重复。结果正常对照者中未发现重组；8个家系的17例DNA样本中发现重组，集中在外显子2～5、7。结论Parkin基因的缺失或重复很可能是家族性帕金森病的重要发病原因之一；多重PCR结合DHPLC是一种有效的基因定量方法。     

细丝蛋白C肌病基因存在新的插入缺失突变

目的 报道在1个细丝蛋白C(filamin C,FLNC)肌病家系中发现的新的插入缺失突变.方法 该家系连续5代共有19例患者,临床和病理资料在前期研究中已经作为肌原纤维肌病进行了报道.现对包括先证者在内的3例患者、5名无症状家系成员和50名健康人进行FLNC基因的测序,利用质粒将FLNC基因的第18号外显子扩增产物进行克隆分离,然后进行电泳鉴定和直接测序.结果 先证者的FLNC基因的第18号外显子存在18个正常碱基缺失,同时插入6个异常碱基,导致FLNC蛋白第7个免疫球蛋白样杆状重叠结构异常,继而致FLNC蛋白结构的失稳.家系中另2例患者存在同样的突变,而5名无症状家系成员和50名健康对照均正常.结论 FLNC肌病存在FLNC基因第18号外显子新的插入缺失突变,我们发现该病可以出现在德国之外的其他种族.     

帕金森病(Parkin)基因突变多态性与定向手术疗效的相关性研究

目的通过研究帕金森病Parkin基因4、6、7号外显子突变的多态性与微电极导向的立体定向手术疗效的相关性,探讨Parkin基因突变在PD发病机制中的作用,同时为临床定向手术探索一种新的适应证。方法通过聚合酶链式反应(PCR)、基因测序技术及TDI-FP技术,对250例行微电极导向立体定向手术的原发性PD患者进行Parkin基因4、6及7号外显子突变检测,并对所有PD患者术前及术后1周的UPDRS评分进行比较,观察具有Parkin基因突变和不具有Parkin基因突变的PD和患者的手术疗效。250名正常健康人作为基础实验部分的阴性对照。结果共发现具有Parkin基因突变(包括缺失突变和点突变)的PD患者118例,其术后UPDRS评分改善率在“开”、“关”状态下分别为57.8%、68.2%,明显高于未发现基因缺失突变患者在“开”、“关”状态下分别为51.2%、60.0%的改善率,疗效持久。结论Parkin基因是帕金森病发病的最重要的遗传易感基因之一,其在家族性与散发性PD中表现出不同的突变类型,具有不同的遗传特性;具有Parkin基因突变的帕金森病患者均具有较好的手术疗效。对Parkin基因外显子的突变的检测,成为术前选择手术适应证的一个非常重要的判定指标。     

聚合酶链反应-限制性片段长度多态性分析技术在儿童型脊髓性肌萎缩症基因诊断中的应用

目的 探讨聚合酶链反应—限制性片段长度多态性分析(PCR—RFLP)技术在儿童型脊髓性肌萎缩症(SMA)基因诊断中的价值。方法 应用PCR—RFLP技术对20例Ⅰ～Ⅲ型SMA患者及15名健康人进行SMN基因第7、第8号外显子的缺失检测。结果 7例Ⅰ型SMA患者的SMN基因第7、第8外显子全部缺失；Ⅱ型SMA患者5例，其SMN基因第7外显子全部缺失，第8外显子有4例缺失；而在8例Ⅲ型患者中只有1例检出第7、第8外显子缺失；所有健康人均无SMN基因第7、第8外显子的缺失。结论：PCR—RFLP技术可作为诊断Ⅰ、Ⅱ型SMA的有效手段，而Ⅲ型SMA患者的基因诊断尚需谨慎。     

帕金森病患者parkin基因多态性位点的研究

目的 观察汉族帕金森病(PD)患者中parkin基因多态性位点等位基因频率，探讨parkin基因多态性位点与PD发病的关系。方法 PD患者组及对照组各70例。以提取基因组DNA为模板，扩增parkin基因的外显子4、外显子10，然后行酶切与聚丙烯酰胺电泳，观察S／N167、R／W366、V/L380多态性位点等位基因频率。结果 PD患者组与对照组间三个多态性位点等位基因频率均无明显差异。结论 parkin基因S／N167、R／W366、V/L380多态性位点与汉族PD患者的发病无明显相关性。