钙调素拮抗剂小檗胺逆转K562／ADR细胞株多药耐药的研究

目的:研究钙调素拮抗剂小檗胺(BBM)抑制白血病细胞增殖并逆转细胞多药耐药的作用。方法:以四唑氮蓝(MTT)法测定小檗胺对K562细胞、耐阿霉素K562细胞(K562/ADR)的增殖抑制作用并求得其IC_(50);测定联合应用阿霉素和BBM后K562/ADR细胞对阿霉素的IC_(50)值及其增敏倍数。采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)法检测小檗胺作用前后K562/ADR细胞多药耐药基因(MDR)在mRNA水平的表达,应用免疫组织化学方法测定P170表达量。结果:小檗胺能显著抑制K562及K562/ADR细胞增殖,其IC_(50)值分别为5.32 μg·mL~(-1)和 10.97μg·mL~(-1)。联合应用阿霉素和1 μg·mL~(-1)小檗胺使K562/ADR细胞对阿霉素的IC_(50)由5.94 μg·mL~(-1)降低至2.93μg·mL~(-1),其增敏倍数为2.03倍。8 μg·mL~(-1)小檗胺作用K562/ADR细胞24 h后P170的表达量由85.45％降低至63.86％,72 h后MDR1mRNA的表达以β-actin为内参照的半定量比值也由处理前的1.625降至0.877。结论:小檗胺对K562、K562/ADR有显著的增殖抑制作用,小檗胺能部分逆转K562/ADR细胞对阿霉素的耐药,其作用是通过抑制MDR1在mRNA和P170水平的表达而实现的。     

五味子甲素对K562/ADR、HL60/ADR、MCF-7/ADR多药耐药逆转机制的研究

目的探讨五味子甲素(schizandrin A or deoxyschizan-drin,schA)对白血病细胞K562/ADR、HL60/ADR、乳腺癌细胞MCF-7/ADR多药耐药的逆转作用,并初步探讨其逆转机制。方法 MTT法检测schA对耐药细胞的逆转作用;流式细胞仪检测schA对细胞内柔红霉素、罗丹明-123含量和细胞表面P-gp表达水平的变化;用Real-time PCR方法检测schA对细胞内mdr1 mRNA和mrp1 mRNA表达;生化检测法检测schA对细胞内GSH含量的变化。结果耐药逆转实验显示:不同浓度的schA对作用机制不同的化疗药物耐药产生不同的逆转效果;蓄积实验表明schA可增加柔红霉素、罗丹明123在耐药细胞内的蓄积,并且有良好的剂量依赖关系;schA处理K562/ADR、HL60/ADR细胞24 h后,能降低P-gp蛋白和mdr1、mrp1基因的表达;schA处理K562/ADR、HL60/ADR细胞4 h后,可降低细胞内谷胱甘肽含量。结论 schA对耐药机制不同的细胞株K562/ADR、HL60/ADR均有耐药逆转作用,推测可能是与抑制细胞表面的P-gp蛋白功能和表达,降低mdr1、mrp1耐药基因的表达和降低细胞内谷胱甘肽含量有关,schA通过影响上述机制,进而增加细胞内的药物浓度,达到有效杀灭肿瘤细胞的作用。     

半夏水提取液逆转多药耐药细胞系K562/A02耐药性的研究

目的观察非细胞毒性浓度半夏水提取液对耐阿霉素的人白血病细胞系K562/A02多药耐药性的逆转作用,并探讨其逆转机制.方法采用MTT法测定半夏水提取液的细胞毒性及其对K562/A02细胞敏感性的影响,用流式细胞仪检测非细胞毒性浓度的半夏水提取液处理后K562/A02细胞膜表面糖蛋白P170表达的变化.结果半夏水提取液对K562/A02细胞有一定的细胞毒作用,非细胞毒性浓度半夏水提取液可显著降低阿霉素对K562/A02细胞的IC50,显著降低细胞膜糖蛋白P170的表达.结论半夏水提取液可部分逆转多药耐药细胞系K562/A02细胞对阿霉素的耐药性.     

盐酸千金藤碱逆转K562/ADR细胞多药耐药性及其机制

研究盐酸千金藤碱(cepharanthine hydrochloride,CH)逆转K562/ADR细胞多药耐药性及其机制。采用MTT法检测多柔比星(adriamycin,ADR)单用及分别与CH、维拉帕米(verapamil,VER)合用的细胞毒作用;采用流式细胞仪,测定CH对细胞内ADR蓄积、罗丹明123(Rho123)蓄积和泵出及P糖蛋白(P-gp)表达的影响。结果表明,CH(4μmol.L1)使K562/ADR细胞对ADR的敏感性增加7.43倍,逆转活性是VER的3.19倍,但对K562敏感株基本无影响。同时CH浓度依赖性地增加K562/ADR细胞内ADR和Rho123的蓄积,减少Rho123的泵出,抑制P糖蛋白的表达,但对K562细胞均无明显影响。CH在体外逆转肿瘤细胞多药耐药性的作用可能与其抑制P糖蛋白的功能和表达有关。     

麻黄碱逆转K562/A02细胞多药耐药性的研究

目的：观察非细胞毒性质量浓度的麻黄碱对耐药的白血病细胞株（KS62／A02）多药耐药性的逆转作用，并探讨其逆转机制。方法：用MTT法检测麻黄碱的细胞毒作用；用流式细胞仪检测非细胞毒性浓度的麻黄碱处理后K562／A02细胞膜表面糖蛋白P170表达及功能的变化。结果：麻黄碱对K562／A02有一定的细胞毒作用，其非细胞质量浓度（IC10）为75mg·L^-1，非细胞毒性质量浓度的麻黄碱对K562／A02细胞对阿霉素的耐药性有部分逆转作用（5．67倍），作用于K562／A02细胞后，细胞膜糖蛋白P170的表达从（85．3±5．5）％下调至（34．8±1．2）％，DNR外渗试验显示，细胞内化疗药物的质量浓度明显增加。结论：麻黄碱通过下调K562／A02细胞膜糖蛋白P170的表达，抑制其将化疗药物“泵”出细胞外的功能，提高化疗药物在K562／A02细胞内的有效质量浓度，能部分逆转K562／A02细胞的多药耐药性。     

透明质酸寡糖逆转白血病细胞系K562/ADR多药耐药的研究

目的研究透明质酸寡糖(o-HAs)的体外逆转白血病多药耐药细胞(K562/A02)的耐药性,并对其逆转机制进行探讨。方法以四甲基偶氮唑盐微量酶反应比色法(MTT法)检测o-HAs对K562/A02细胞的多药耐药逆转活性;以流式细胞术检测o-HAs对K562/A02细胞内抗癌药物盐酸多柔比星(ADR)累积的影响。结果在100μg.mL-1浓度时o-HA4、o-HA6、o-HA8、o-HA10使ADR对K562/A02的半数抑制浓度(IC50)由61.6μg.mL-1分别降低至30.17、30.04、32.29、33.33μg.mL-1。细胞中ADR的累积量增加至原来的3.90、3.92、3.76、3.39倍。结论 o-HAs在体外具有较强的逆转K562/A02细胞多药耐药的活性。     

槲皮素体外逆转K562/ADM耐药的研究

近年来发现槲皮素(Quercetin,QUE)对肿瘤细胞具有耐药逆转作用备受人们关注。本实验以QUE作为逆转剂,通过观察其逆转后,K562/ADM对阿霉素(Adriamycin,ADM)的耐药性变化、逆转前后细胞内的GST含量的变化,为QUE在逆转白血病的应用上提供部分理论依据。1材料与方法1.1材料野生型人红白血病具有多药耐药表型的细胞株K562/ADM购自中国医学科学院天津血液学研究所,K562/ADM在含1.0 pg/ADM的RPMI1640培养液中连续传代培养,实     

复方当归注射液逆转K562/A02细胞多药耐药的研究

目的:研究复方当归注射液对人红白血病多药耐药(MDR)细胞株K562/A02MDR1、多药耐药相关蛋白(MRP)、拓扑异构酶Ⅱ(TopoⅡ)、谷光甘肽-S-转移酶-π(GST-π)基因及其相应蛋白表达的影响。方法:采用台盼蓝染色法检测复方当归注射液的细胞毒作用;采用半定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)和免疫印迹法分别检测复方当归注射液在非细胞毒浓度(IC10)作用下对K562/A02细胞上述基因及其表达的影响。结果:复方当归注射液作用后,K562/A02细胞中MDR1基因及P-gp表达降低(P<0.01);TopoⅡ蛋白表达增高(P<0.01),TopoⅡ基因表达无显著变化(P>0.05);MRP、GST-π基因及其蛋白的表达无明显变化(P>0.05)。结论:复方当归注射液能部分逆转K562/A02细胞的耐药性,其作用机制可能与下调K562/A02细胞MDR1mRNA的表达,导致细胞膜上P-gp的表达量减少及在蛋白水平上调K562/A02细胞TopoⅡ的表达有关。     

姜黄素衍生物C15对白血病K562/A02细胞多药耐药的逆转作用

目的: 探讨姜黄素衍生物C15对人白血病K562/A02细胞多药耐药(multidrug resistance,MOR)的逆转作用及其作用机制。方法: 四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测细胞增殖;流式细胞术检测P-糖蛋白(P-gp)外排泵功能和细胞周期;免疫印迹法检测蛋白表达;P-gp-Glo^TM Assay System试剂盒检测P-gp ATP水解酶(ATPase)活性。结果: C15对K562/A02细胞半数抑制浓度(IC₅₀)大于50 μmol·L^-1。对K562/A02细胞无明显细胞毒的浓度为2.5,5.0,10.0 μmol·L^-1的C15逆转对K562/A02细胞对阿霉素(ADR)耐药的倍数分别为2.60,5.39,11.39,对长春新碱(vincristine, VCR)耐药的倍数分别为4.50,18.07,124.35,但是对非P-gp底物的化疗药物顺铂(cisplatin, CIS)和敏感细胞K562基本无逆转效果。2.5,5.0,10.0 μmol·L^-1 C15可以增加耐药细胞K562/A02胞内罗丹明123(Rh-123)的蓄积量分别为1.93,2.30,2.47倍。C15增加阿霉素(adriamycin, ADR)在K562/A02细胞中的蓄积水平,降低P-gp介导的Rh-123外排速率。2.5,10.0 μmol·L^-1 C15与300 nmol·L^-1VCR联合作用后,可使K562/A02细胞的G2/M期比例从9.36%增加到67.57%和69.38%。C15对P-gp蛋白和ATPase的活性没有抑制作用。结论: C15可能是P-gp的非衣物型抑制剂,且具有逆转K562/A02细胞MDR的作用,该作用与其抑制细胞P-gp的外排泵功能有关。     

阿霉素纳米粒对白血病多药耐药细胞株K562/ADR耐药性的逆转作用

目的:研究阿霉素纳米粒对人白血病多药耐药细胞株K562/ADR耐药性的逆转作用.方法:采用MTT法测定药物的体外杀伤作用,应用流式细胞术测定细胞内药物浓度.结果:阿霉素纳米粒和阿霉素对K562细胞细胞毒作用相似,K562/ADR对阿霉素纳米粒较阿霉素敏感2.63倍,细胞内阿霉素浓度显著增加可能是关键因素.结论:阿霉素纳米粒通过增加耐药细胞内阿霉素浓度有效逆转多药耐药.     

Reversal effect of a macrocyclic bisbibenzyl plagiochin E on multidrug resistance in adriamycin-resistant K562/A02 cells

Plagiochin E is a new macrocyclic bisbibenzyl compound isolated from Marchantia polymorpha. In the previous studies, we reported that when combined with fluconazole, plagiochin E had synergetic effects against the resistant strain of Candida albicans. Herein, we examined the reversal effect of plagiochin E on multidrug resistance in adriamycin-induced resistant K562/A02 cells and the parental K562 cells. Its cytotoxicity and reversal effects on multidrug resistance were assessed by MTT (3-[4, 5-dimethylthiazol-2-yl]-2, 5-diphenyl-tetrazolium bromide) assay. Apoptosis percentage of cells was obtained from Annexin V/fluorescein isothiocyanate (FITC) and propridium iodide (PI) double-staining. The effects of plagiochin E on P-glycoprotein activity were evaluated by measuring rhodamine 123 (Rh123)-associated mean fluorescence intensity and P-glycoprotein expression on the basis of the flow cytometric technology, respectively. The results showed that plagiochin E ranging from 2 to 12 mug/ml had little cytotoxicity against K562/A02 cells. When combined with adriamycin, it significantly promoted the sensitivity of K562/A02 cells toward adriamycin through increasing intracellular accumulation of adriamycin in a dose-dependent manner. Further study demonstrated that the inhibitory effect of plagiochin E on P-glycoprotein activity was the major cause of increased stagnation of adriamycin inside K562/A02 cells, indicating that plagiochin E, as a new class of mutidrug resistance inhibitor, may effectively reverse the multidrug resistance in K562/A02 cells via inhibiting expression and drug-transport function of P-glycoprotein.     

自噬水平与白血病K562/ADM细胞耐药的关系研究

目的采用阿霉素(adriamycin,ADM)“逐步提高药物浓度+间歇性诱导”的方式体外诱导建立稳定耐受15μmol·L^-1 ADM的白血病K562/ADM细胞,观察该细胞对其它化疗药物的敏感性以及细胞自噬水平与耐药的关系。方法MTT法检测细胞对几种化疗药物的敏感性;用透射电镜、荧光显微镜观察细胞自噬形态学改变;Annexin-V/PI双染流式细胞仪检测细胞凋亡;Western blot检测自噬和耐药相关蛋白的表达水平。结果K562/ADM细胞除了对ADM产生明显耐药外,还对多种化疗药物如:吡柔比星、柔红霉素、5-FU和长春新碱等有交叉耐药,但对三氧化二砷较敏感。K562/ADM细胞内自噬体数量、MDC荧光强度以及LC3Ⅰ/Ⅱ、Beclin-1蛋白表达水平均高于亲本细胞。用3-MA抑制自噬可明显增加K562/ADM细胞对ADM的敏感性,同时也能有效抑制K562/ADM细胞内耐药相关蛋白的表达。结论K562/ADM细胞出现多药耐药现象,且耐药性与细胞自噬水平有密切关系。     

Acquired multidrug resistance in human K562/ADM cells is associated with enhanced autophagy

Abstract

Autophagy, as a necessary process for survival in mammalian cells deprived of nutrients or growth factors, will be activated in many tumor cells while treated with chemotherapeutic drugs, but the role of autophagy in acquired multidrug resistance of human acute myelogenous leukemia to adriamycin-based chemotherapy remains to be clarified. Our aim was to address that question by surveying the autophagic activity in parental acute myelogenous leukemia cell line K562 and resistant sub cell line, K562/ADM, which were obtained by treating adriamycin with increasing concentrations. K562/ADM and K562 cells were exposed to PBS culture medium for 3 hours, then the stress-induced autophagy was measured. Real-time quantitative RT-PCR revealed the expression of LC3 mRNA was higher in K562/ADM than in K562 cells. LC3-II, as an autophagosomal marker, was more abundant in K562/ADM than in K562 cells measured by Western blotting. To determine the effect of 3-MA, a known specific inhibitor of autophagy, on overcoming acquired multidrug resistance induced by adriamycin, the MTT assay and flow cytometry were performed. We also found that 3-MA can enhance the growth inhibition and apoptotic effect of adriamycin in acquired resistant cells (K562/ADM). Collectively, our results provide evidence that the upregulation of autophagy plays a major role in multidrug resistance of K562/ADM cells induced by adriamycin.     

屈洛昔芬对K562耐阿霉素细胞株耐药性的逆转作用(英文)

目的:研究屈洛昔芬(DRO)对耐阿霉素(ADR)K562细胞株(K562/A02)多药耐药性(MDR)的逆转作用及逆转机制。方法:用DRO分别处理K562/A02和K562敏感株。MTT法观察DRO影响K562/A02对ADR化学敏感性的变化。DRO 10μmol/L处理K562/A02前后,通过RT-PCR和免疫细胞化学染色,分析MDR1、GSTπ基因表达的变化,采用流式细胞技术测定细胞内ADR浓度的变化。结果:DRO显著逆转K562/A02的MDR,在20、10和5μmol/L浓度时,对ADR的化学敏感性分别增加到14、13和4倍,逆转活性与维拉帕米相当。MDR1和GSTπ的mRNA和蛋白表达在DRO 10μmol/L处理后第2天开始下降,第5天明显降低。用20、10和5μmol/L浓度的DRO处理两株细胞,K562/A02细胞内ADR积累分别增加到2.9、2.3和1.5倍。但DRO不能明显增加K562细胞内的ADR的浓度。结论:DRO对K562/A02的MDR有较强的逆转活性,逆转强度与维拉帕米相当,其逆转机制有多种不同的途径。     

热休克蛋白90抑制剂17-AAG对K562/ADR耐药细胞株生长和凋亡的影响

目的研究热休克蛋白90抑制剂17-AAG对耐药白血病细胞生长的影响及其诱导的细胞凋亡作用,为白血病的治疗提供新的研究思路。方法采用MTT法检测17-AAG对细胞增殖抑制的剂量-时间-效应关系;激光共聚焦DA-PI染色法观察细胞形态学变化;流式细胞术检测细胞凋亡、周期及P-糖蛋白(P-gp)的变化,Western blot检测细胞凋亡相关蛋白的变化。结果 17-AAG能够明显抑制K562/ADR细胞的生长,大量细胞的核内DNA发生断裂,细胞核边缘化,加药组细胞凋亡率与对照组相比明显增高;加药后细胞被阻滞在G1期,procaspase-3和cleaved Caspase-3表达升高。结论 17-AAG可以通过诱导耐药细胞株K562/ADR的凋亡而抑制细胞生长。P-gp和Caspase-3的表达与凋亡事件的发生具有一定的相关性。     

洛美利嗪逆转K562/ADM细胞多药耐药性

目的研究洛美利嗪(lomerizine,Lom)逆转K562/ADM细胞多药耐药性的作用及机制。方法MTT法检测细胞毒作用,流式细胞仪研究Lom对ADM和长春新碱(vincristine,VCR)的K562/ADM细胞凋亡诱导作用的影响及对罗丹明123(rhodamine 123,Rh123)外排和P-糖蛋白(P-glycoprotein,P-gp)表达的作用。结果Lom明显提高ADM对K562/ADM多药耐药细胞的细胞毒作用及ADM和VCR的凋亡诱导作用,3,10和30 μmol·L^-1 Lom使K562/ADM对ADM的IC₅₀值由79.03 μmol·L^-1分别降至28.14,8.16和3.16 μmol·L^-1。Lom增加胞内ADM的蓄积浓度并抑制Rh123外排;但作用72 h后对K562/ADM细胞P-gp表达无影响。结论Lom通过抑制P-gp的活性逆转K562/ADM细胞的多药耐药性。     

冬凌草甲素逆转SGC7901/ADR细胞的多药耐药性及其机制

目的 观察冬凌草甲素(Ori)对胃癌细胞株SGC7901/ADR多药耐药性的逆转及其作用机制.方法 用MTT法检测Ori的非细胞毒浓度及对SGC7901/ADR细胞株阿霉素敏感性的影响;免疫荧光法检测Ori对SGC7901/ADR细胞p-糖蛋白(P-gp)活性及表达的影响;RT-PCR法检测Ori对细胞MDR1基因转录的影响.结果 用Ori无毒剂量处理细胞后,细胞对阿霉素的逆转倍数为4.53,MDR1基因的转录降低了0.78,P-gp的表达率降低了18.83％.结论 Ori能逆转SGC7901/ADR细胞的多药耐药性,其机制为降低MDR1基因的转录和下调P-gp的表达.     

木香烃内酯对K562/A02细胞阿霉素耐药的逆转作用研究

目的探索木香烃内酯对白血病耐药细胞系K562/A02阿霉素耐药的逆转作用。方法将木香烃内酯与K562/A02细胞共培养72 h后,采用MTT法检测木香烃内酯对细胞生长的抑制作用。不同浓度木香烃内酯处理K562/A02细胞24 h后,采用Annexin V和PI双染法检测木香烃内酯对细胞的凋亡。不同浓度木香烃内酯与阿霉素共培养72 h后采用MTT法检测木香烃内酯对K562/A02细胞的耐药逆转情况。采用流式细胞仪检测木香烃内酯处理24 h之后K562/A02细胞阿霉素蓄积以及细胞膜表面P-糖蛋白(P-gp)的表达。结果木香烃内酯对K562/A02细胞的生长具有明显抑制作用,呈显著的剂量相关性。与对照组比较,2.5~50μmol/L木香烃内酯组K562/A02细胞存活率显著降低(P0.05、0.01、0.001)。随着木香烃内酯浓度的增加,凋亡细胞的比例明显增加。与对照组比较,不同浓度木香烃内酯组细胞凋亡比例显著升高(P0.05、0.01、0.001)。加入5μmol/L木香烃内酯后,使K562/A02细胞对阿霉素的敏感性提高12倍。木香烃内酯处理后K562/A02细胞内部阿霉素的蓄积明显增加,呈浓度相关性。与对照组比较,5、10μmol/L木香烃内酯组K562/A02细胞内部阿霉素的蓄积增加显著升高(P0.05)。细胞表面的P-gp的表达并无显著影响。结论木香烃内酯能够抑制K562/A02细胞增殖,诱导K562/A02细胞凋亡,增强阿霉素的化疗敏感性,逆转阿霉素耐药。