干扰素-γ对肾小管上皮细胞转分化的作用

目的 应用转化生长因子-β1(TGF-β1)诱导肾小管上皮细胞肌纤维母细胞转分化(TEMT),研究干扰素-γ(IFN-γ)对肾小管上皮细胞的表型重塑的作用和机制.方法 将正常大鼠肾小管上皮细胞(NRK52E)分为空白组、诱导组(TGF-β13 ng/mL)、药物组(IFN-γ1000 IU/mL)及阻断组(TGF-β13 ng/mL IFN-γ200、400、600、1000、2000、3000 U/mL),培养72 h后,观察α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)以及结缔组织生长因子(CTGF)的表达;测量α-SMA阳性细胞百分数和平均荧光强度(MCF),α-SMA mRNA,CTGF mRNA的表达;并测定上清液中胶原Ⅲ的含量.结果 ①诱导组细胞转分化为肌成纤维细胞样细胞,α-SMA阳性细胞百分数及MCF均明显增加(P<0.05);α-SMA mRNA和CTGF mRNA表达也明显增加(P<0.05);胶原Ⅲ含量升高(P<0.05).②药物组的细胞形态、α-SMA mRNA、CTGF mRNA表达及胶原Ⅲ含量等与空白组的差异无统计学意义(P>0.05);⑨阻断组IFN-Υ明显抑制了TGF-β1诱导的转分化,且呈剂量依赖;并抑制胶原Ⅲ合成P<0.05.结论 IFN-Υ能够负性调控TGF-β1诱导的TEMT,减少胶原Ⅲ分泌;IFN-Υ对TEMT的负性词节作用可能是通过减少CTGF表达来实现的.     

内源性结缔组织生长因子介导转化生长因子β1对肾小管上皮细胞的转分化效应

目的：探讨内源性结缔组织生长因子（CTGF）在人肾小管上皮细胞（HK2）转分化过程中的作用。方法：将HK2细胞分为4组：对照组；转化生长因子β1（TGF-β1）5ng／ml刺激组；TGF-β1 5ng／ml刺激4-CTGF反义0DN 3 mmol／L干预组；TGF-β1 5ng／ml刺激＋CTGF正义ODN3mmol/L对照组。用倒置显微镜观察各组细胞的形态学变化，用RT-PCR检测各组细胞中CTGF、上皮细胞钙粘蛋白（E-cadherin）、α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）、纤连蛋白（FN）mRNA表达变化。结果：TGF-β1刺激使HK2细胞形态由椭圆形转为梭形；下调E-cadherinmRNA表达。上调CTGF、α-SMA和FNmRNA表达．且CTGFmRNA表达变化在时间上早于E-cadherin、α-SMA和FNmRNA表达变化；CTGF反义ODN可对抗TGF-β1引起的细胞形态学改变和E-cadherin、CTGF、α-SMA、FiNmRNA表达变化效应。结论：内源性CTGF介导了TGF-β1对HK2细胞的转分化效应。     

肝细胞生长因子对IL-1α刺激肾小管上皮细胞肌纤维母细胞转分化的作用

目的研究肝细胞生长因子(HGF)对IL-1α诱导的肾小管上皮细胞肌纤维母细胞转分化(TEMT)及细胞分泌功能的影响。方法在体外培养的正常大鼠肾小管上皮细胞(NRK52E)中加入IL-1α 20ng／ml诱导．并加入大(1600ng／ml)、中(1200ng／ml)、小(800ng／ml)剂量HGF阻断，流式细胞仪和免疫组化法检测α-平滑肌肌动蛋白的表达；倒置相差显微镜、扫描电镜观察细胞形态变化；ELISA法测定培养细胞上清液分泌的粘连蛋白(FN)含量。结果IL-1α刺激后细胞转变为类似成纤维细胞形态；α-SMA阳性细胞百分数及α-SMA表达的平均荧光强度明显增加(P＜0．05)；培养上清液中FN含量增加(P＜0．05)。HGF可剂量依赖性地抑制IL-1α诱导NRK52E细胞形态学改变及α-SMA的表达(P＜0．05)，不同程度地抑制IL-1α的促FN分泌作用(P＜0．05)。单独加入不同剂量HGF对肾小管细胞无影响。结论HGF可抑制IL-1α诱导的TEMT作用，减少FN的分泌，对肾间质纤维化具有负性调节作用。     

肝细胞生长因子对转化生长因子诱导肺泡Ⅱ型上皮细胞转分化的影响

目的:研究肝细胞生长因子(HGF)对转化生长因子β1(TGFβ-1)诱导肺泡上皮细胞转分化的影响。方法:应用TGF-β1诱导肺泡Ⅱ型上皮细胞转分化。将人肺腺癌A549细胞株培养液分为4组:①对照组;②HGF组;③TGFβ-1组;④HGF+TGFβ-1组,应用倒置相差显微镜观察细胞形态变化;免疫细胞化学方法检测肌成纤维细胞特异性标志物α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、肺泡上皮细胞特异性标志物肺泡表面活性蛋白A(SP-A)的表达。结果:①TGF-β1组肺泡上皮细胞从原来典型的上皮细胞形态转变为长梭形肌成纤维细胞样形态。②TGF-β1组的细胞α-SMA的表达明显增加,SP-A的表达明显减低。③HGF组的细胞形态学、α-SMA、SP-A的表达与对照组无明显差异。④HGF+TGFβ-1组,多数细胞保持原来肺泡上皮细胞的形态,α-SMA表达明显低于TGFβ-1组、SP-A表达明显高于TGFβ-1组。结论:HGF能够在一定程度上负性调控TGFβ-1诱导的肺泡上皮细胞的转分化。     

吡格列酮对肾小管上皮细胞转分化及CTGF表达的影响

目的 探讨吡格列酮能否负性调节转化生长因子β(TGF-β)诱导的肾小管上皮细胞转分化为肌成纤维细胞(TEMT),以及抑制TGF-β下游介质结缔组织生长因子(CTGF)表达,以阐明吡格列酮抗肾纤维化的作用及机制.方法 将体外培养的正常大鼠肾小管上皮细胞(NRK52E)分为空白对照组、TGF-β3 ng/mL诱导组、TGF-β3 ng/mL+DMSO组、不同剂量吡格列酮阻断组.应用倒置相差显微镜观察细胞形态,免疫组织化学、RT-PCR方法 定性及定量检测肌成纤维细胞特异性标志物α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA);RT-PCR方法 定量检测CTGFmRNA的表达;ELISA法测定培养细胞上清液中Ⅲ型胶原的含量.结果 ①TGF-β诱导组细胞从原来典型的上皮细胞形态转变为长梭形肌成纤维细胞形态;免疫组织化学染色见大量α-SMA阳性细胞,与对照组相比,α-SMAmRNA表达量增加(P＜0.05);CTGF mRNA表达量增加(P＜0.05);细胞培养上清液中Ⅲ型胶原的含量增加(P＜0.05).②吡格列酮阻断组明显抑制TGF-β诱导的NRK52E细胞形态学改变;各剂量组均能抑制TGF-β诱导的α-SMA mRNA、CTGF mRNA表达及Ⅲ型胶原分泌(P＜0.05),且呈剂量依赖(P＜0.05);③相关分析显示,CTGF mRNA与α-SMA mRNA、Ⅲ型胶原的分泌呈正相关(r=0.975,0.988,P均＜0.01).α-SMA mRNA与Ⅲ型胶原的分泌呈正相关(r=0.952,P＜0.01).结论 吡格列酮能够抑制TGF-β诱导的TEMT及Ⅲ型胶原的分泌,对肾间质纤维化具有负性调节作用;吡格列酮抑制TGF-β诱导的CTGF表达可能是其负性调节TEMT的机制之一.     

马兜铃酸Ⅰ诱导人肾小管上皮细胞转分化机制的初步探讨

目的:探讨马兜铃酸Ⅰ(aristolochic acid Ⅰ,AAI)诱导体外培养的人肾小管上皮细胞株(HK-2)转分化的可能机制.方法:将HK-2细胞分为对照组和AAI组,两组细胞分别培养24h、48h、72h.应用倒置相差显微镜观察HK-2细胞形态学变化;免疫组织化学方法检测α-平滑肌肌动蛋白(α-smooth muscle acfin,α-SMA)的表达;ELISA法定量检测上清液中转化生长因子-β1(transforming growth factor-β1,TGF-β1)的表达;逆转录-聚合酶反应(RT-PCR)检测结缔组织生长因子(connection tissue growth factor,CTGF)mRNA的水平变化.结果:20μg/ml的AAI可诱导HK-2细胞肥大、拉长呈梭形,TGF-β1分泌增加,CTGFmRNA合成增加,α-SMA表达增强.这些作用呈一定的时间依赖性.结论:AAⅠ可诱导肾小管上皮细胞转分化,可能与TGF-β1分泌增多有关,而TGF-β1可能通过下游CTGF发挥生物学效应.     

结缔组织生长因子通过活化ERK1/2通路促肌纤维母细胞增殖

目的:探讨结缔组织生长因子(CTGF)促进转化生长因子-β1(TGF-β1)诱导活化的肌纤维母细胞增殖作用及其分子机制。方法:用TGF-β1预处理人胚肺成纤维细胞(HELF)48h,使细胞转化为肌纤维母细胞,然后将预处理后的细胞分为对照组,CTGF刺激组,和PD98059干预组。以Western免疫印迹法检测α-SMA水平,并通过MTT法检测CTGF对转化生长因子-β1(TGF-β1)诱导活化的肌纤维母细胞增殖作用。结果:CTGF刺激组α-SMA蛋白表达明显高于对照组(P<0.01);用PD98059阻断ERK-1/2磷酸化可以明显抑制CTGF引起的α-SMA蛋白表达(P<0.05);CTGF刺激组细胞增殖明显与对照组相比(P<0.01);用PD98059阻断ERK-1/2磷酸化可以明显抑制CTGF引起的细胞增殖(P<0.05)。进一步实验显示CTGF刺激细胞15min时能明显诱导TGF-β1预处理细胞内Erk-1/2磷酸化(P<0.01),30min是达到高峰,60min时下降到基础水平。结论:CTGF通过ERK1/2信号通路促进TGF-β1诱导的肌纤维母细胞增殖。     

肝细胞生长因子对高糖及结缔组织生长因子培养的肾小管上皮细胞纤维化的影响

目的：探讨肝细胞生长因子（HGF）对高糖及结缔组织生长因子（CTGF）诱导肾小管上皮细胞（HKC）纤维化的影响.方法：体外培养HKC,分别在高糖及CTGF环境下加入不同浓度人重组肝细胞生长因子（rhHGF）,以RT-PCR检测转化生长因子β1（TGF-β1）、CTGF、以及纤维化指标Ⅳ型胶原（COL4A1）、纤连蛋白（FN）、α平滑肌肌动蛋白（α-SMA）等的基因表达.结果：高糖及CTGF刺激下,细胞因子和纤维化指标表达均不同程度增加,其中,CTGF作用下,COL4A1表达明显低于高糖组（P＜0.01）.高糖及CTGF环境下加入rhHGF后,纤维化指标显著降低（P＜0.01）,其中高糖＋rhHGF组,CTGF表达减少,TGF-β1表达无明显改变（P＞0.05）.结论：HGF可通过抑制TGF-β下游因子CTGF的表达,发挥抗肾小管上皮细胞纤维化作用,但CTGF并不是其惟一的阻断途径.     

他克莫司对肾小管上皮细胞转分化早期CTGF、VEGF表达的影响

目的探讨不同剂量的他克莫司(FK506)对肾小管上皮细胞(HKC)转分化的作用及其对早期结缔组织生长因子(CTGF)、血管内皮生长因子(VEGF)表达的影响。方法以体外培养的HKC为研究对象,分4组:(1)对照组;(2)转化生长因子-β1(TGF-β1)(8ng/mL)组;(3)FK506(10、30、60ng/mL)组;(4)TGF-β1(8ng/mL)加FK506(10、30、60ng/mL)组。应用形态学、免疫组化技术、和半定量反转录PCR(RT-PCR)观察FK506对TGF-β1诱导的HKC转分化的作用及对α-SMA、CTGF、VEGF表达的影响。结果与对照组比较,48h后TGF-β1组HKC细胞呈现出长梭形外观,α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、CTGF、VEGF的表达明显增多(P<0.01),FK506组α-SMA、VEGF及CTGF的表达差异无统计学意义(P>0.05)。TGF-β1加FK506组比TGF-β1组α-SMA、VEGF及CTGF随FK506的浓度增加表达明显降低(P<0.05)。结论 FK506对TGFβ1诱导的肾小管上皮细胞转分化早期可能通过下调VEGF、CTGF的表达起抑制作用。     

槲皮素抗肾小管上皮细胞转分化的机制研究

目的探讨槲皮素对转化生长因子β（TGF-β）诱导大鼠肾小管上皮细胞-肌成纤维细胞转分化（TEMT）的影响。方法TGF-β刺激体外培养的正常大鼠肾小管上皮细胞株（NRK5ZE）,同时以不同浓度槲皮素进行干预,细胞免疫化学染色法和PCR方法检测α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）及E-钙黏蛋白（E-cadherin）的表达。结果TGF-β刺激导致α-SMA表达增加,不同浓度槲皮素作用后,可减轻TGF-β诱导的α-SMA表达,上调E-cadherin的表达（P〈0．05）。结论槲皮素对TGF-β刺激的NRK52E细胞转分化有明显抑制作用。     

红景天甙对低氧诱导肾小管上皮细胞转分化的作用研究

目的 观察红景天甙(salidroside,Sal)对氯化钴(cobaltous chloride,CoCl_2·6H_2O,Co)诱导的低氧状态下正常大鼠近端肾小管上皮细胞(normal rat kidney tubular epithelia cell,NRK52E)转分化的影响并分析其可能的机制.方法 体外培养NRK52E细胞,分为正常对照组,氯化钴低氧组,10、50、100 μmol/L不同浓度红景天甙组.观察低氧标志蛋白低氧诱导因子-1α(hypoxia inducible foctor-1α,HIF-1α)的表达.倒置相差显微镜观察细胞形态变化;荧光免疫及细胞免疫法检测NRK52E细胞α-平滑肌肌动蛋白(α-smooth muscle actin,α-SMA)表达情况;RT-PCR检测NRK52E细胞α-SMA、转化生长因子-β_1(transforming growth factor-β_1,TGF-β_1)mRNA的表达;Western blot蛋白印迹检测HIF-1α和α-SMA蛋白的表达;酶联免疫吸附法检测细胞上清液胶原Ⅰ(collagen Ⅰ,Col-Ⅰ)和纤维粘连蛋白(fibronectin,FN)的含量.结果 100 μmol/L Co诱导NRK52E细胞表达HIF-1α.Co组细胞明显肥大、拉长,呈肌成纤维细胞外观.不同浓度Sal组细胞形态介于正常与Co组之间.CO组α-SMA基因、蛋白和TGF-β_1 mRNA表达量较对照组升高(P＜0.05),不同浓度Sal组α-SMA基因、蛋白和TGF-β1 mRNA表达量较Co组减少(P＜0.05).Co组细胞上清液Col-Ⅰ和FN的含量较对照组增加(P＜0.05),不同浓度Sal组Col-Ⅰ和FN的含量明显下降(P＜0.05),以高剂量组最为明显.结论 Sal可在一定程度上改善Co诱导的低氧状态和细胞转分化,减少细胞外基质的增加.其机制可能是通过抑制TGF-β_1和HIF-1α的表达实现的.     

CTGF反义寡核苷酸对人肾小管上皮细胞转分化的影响

目的研究结缔组织生长因子（CTGF）反义寡核苷酸（ASODN）对人肾小管上皮细胞（HKC）转分化的影响。方法用巨噬细胞趋化因子-1（MCP-1）和马兜铃酸Ⅰ（AAⅠ）联合诱导HKC转分化模型。实验设空白对照组、模型对照组、PEI组、CTGFASODN10ng/mL组和CTGF ASODN100ng/mL组,分别采用WST-8法、流式细胞术、RT-PCR法、细胞免疫组织化学法检测不同浓度的CTGF ASODN对HKC转分化模型细胞增殖和细胞周期的影响,以及α-SMA mRNA表达和α-SMA、TGF-β1、Fibronectin（FN）蛋白表达的变化。结果 100ng/mL的CTGF ASODN对MCP-1和AAⅠ联合诱导HKC转分化细胞具有促进细胞增殖的作用,并可减少实验模型导致的细胞S期阻滞,降低α-SMA mRNA表达,减少α-SMA、TGF-β1和FN蛋白的表达。结论 CTGFASODN能够抑制MCP-1和AAⅠ导致的人HKC转分化。     

CTGF反义寡核苷酸对人肾小管上皮细胞转分化的影响

目的 研究结缔组织生长因子(CTGF)反义寡核苷酸(ASODN)对人肾小管上皮细胞(HKC)转分化的影响.方法 用巨噬细胞趋化因子-1(MCP-1)和马兜铃酸Ⅰ(AAⅠ)联合诱导HKC转分化模型.实验设空白对照组、模型对照组、PEI组、CTGF ASODN 10 ng/mL组和CTGF ASODN 100 ng/mL组,分别采用WST-8法、流式细胞术、RT-PCR法、细胞免疫组织化学法检测不同浓度的CTGF ASODN对HKC转分化模型细胞增殖和细胞周期的影响,以及α-SMA mRNA表达和α-SMA、TGF-β1、Fibronectin(FN)蛋白表达的变化.结果 100 ng/mL的CTGF ASODN对MCP-1和AAⅠ联合诱导HKC转分化细胞具有促进细胞增殖的作用,并可减少实验模型导致的细胞S期阻滞,降低α-SMA mRNA表达,减少α-SMA、TGF-β1和FN蛋白的表达.结论 CTGF ASODN能够抑制MCP-1和AAⅠ导致的人HKC转分化.     

转化生长因子-β1体外诱导气道上皮细胞向肌纤维母细胞转分化

目的探讨TGF-β1体外诱导气道上皮细胞表型向肌纤维母细胞转分化的可能性。方法TGF-β1（10μg/L）处理气道上皮细胞株16HBE-14o，显微镜下实时观察形态学变化，免疫染色方法检测E-cadherin，α-SMA和F-actin的表达，RT-PCR方法检测E-cadherin，α-SMA mRNA的表达。结果TGF-β1 10μg／L作用3d，气道上皮细胞株16HBE-14o失去正常的立方形，变得肥大，胞体拉长；上皮细胞特征性标志E-cadherin表达减弱，胞浆中出现肌纤维母细胞表型标志物α-SMA，F-actin聚合形成张力纤维沿着细胞长轴分布。结论本研究提示，气道上皮细胞在TGF-β1的作用下经历了表型改变向肌纤维母细胞转分化，可能作为肺肌纤维母细胞的一个新的来源，从而参与哮喘气道重塑、气道高反应性的发生发展。     

外源性结缔组织生长因子对人肾小管上皮细胞转分化及细胞外基质合成的作用

目的:探讨外源性结缔组织生长因子(CTGF)在人肾小管上皮细胞转分化及细胞外基质合成中的作用.方法:将体外培养的人肾小管上皮细胞HK2分为三组:对照组;CT-GF小剂量组(终浓度为2.5 μg/L);CTGF大剂量组(终浓度为20 μg/L).用倒置显微镜观察细胞形态学变化;噻唑蓝(MTr)法检测细胞增殖活性;RT-PCR检测HK2细胞E-钙黏蛋白(E-cadherin),α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA),纤连蛋白(FN)和胶原ⅠαmRNA水平的变化;免疫组织化学方法观察HK2细胞FN和胶原Ⅰ的表达.结果:CTGF刺激使HK2细胞由椭圆形变为梭形,同时促进HK2细胞增殖.不同浓度的CTGF作用于HK2细胞48 h后,α-SMA和FN mRNA水平显著升高(P＜0.05),E-钙黏蛋白mRNA的表达显著下降(P＜0.05);大剂量CTGF刺激HK2细胞48 h后胶原ⅠαmRNA水平显著升高(P＜0.05).小剂量CTGF组HK2细胞胞质FN表达水平显著增加(P＜0.05),大剂量CTGF组HK2细胞胞质表达FN和胶原Ⅰ均显著增加(P＜0.05).结论:CTGF在体外能够诱导人肾小管上皮细胞转分化,并促进FN的合成,大剂量的CTGF可以增加其胶原Ⅰ的合成.     

结缔组织生长因子对肾小管上皮细胞转分化的调节机制

目的 观察结缔组织生长因子（CTGF）对体外培养的人肾小管上皮细胞转分化的直接影响,并探讨阻断内源性CTGF表达对转化生长因子- β1（TGF-β）诱导人肾小管上皮细胞转分化的干预效果,以阐明CTGF在肾小管上皮细胞转分化中的作用。方法 体外培养人近曲小管上皮细胞（HKC）。在观察CTGF对HKC的直接作用时,将HKC细胞分为三组：（1）对照组;（2）小剂量CTGF组：培养液中加入重组人CTGF（rhCTGF）,终浓度为2．5μg／L;（3）大剂量CTGF组：rhCTGF终浓度为5．0μg／L。在探讨CTGF在TGF-β诱导HKC转分化中的作用时,将细胞分为4组：（1）正常对照组;（2）TGF-β刺激组（培养液加入重组人TGF-β1蛋白,浓度为10．0μg／L）;（3）TGF-β1＋CTGF正义寡核苷酸（ODN）组（先以CTGF正义ODN转染HKC,再加TGF-β1刺激）;（4）TGF-β1＋CTGF反义ODN组（先以CTGF反义ODN转染HKC,再加TGF-β1刺激）。用逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）方法测定HKC α-平滑肌肌动蛋白（α—SMA）和Ⅳ型胶原（col Ⅳ）mRNA水平的变化;间接免疫荧光方法检测HKC胞浆内α—SMA的表达;流式细胞仪检测α—SMA阳性细胞百分率;ELISA方法测定培养液上清中col Ⅳ的浓度。结果 不同浓度rhCTGF作用于HKC24h后,α-SMAmRNA水平显著升高（P〈0．01）,而colⅣmRNA表达水平明显下降（均P〈0．01）;刺激48h后,胞浆α—SMA表达明显增强,流式细胞仪测得三组细胞α-SMA阳性百分率依次为：2．4％、38．9％、65．5％（P〈0．01）;ELISA结果表明,rhCTGF抑制了colⅣ的分泌（P〈0．01）。TGF-β1可诱导HKC高表达CTGF和α-SMA。转染后6h,CTGF反义ODN可显著抑制HKC表达CTGF和α-SMA mRNA（P〈0．01）。转染后48h,CTGF反义ODN可明显抑制胞内α-SMA蛋白合成。结论 CTGF在体外能刺激肾小管上皮细胞向肌成纤维细胞（MyoF）转分化,而CTGF反义ODN的导人可有效抑制TGF-β1诱导的转分化过程。因此,CTGF可能是调节肾小管上皮细胞转分化的重要因子。     

曲尼司特对转化生长因子-β1诱导大鼠肾小管上皮细胞转分化作用的影响及机制

目的:探讨曲尼司特对转化生长因子β1(TGF-β1)诱导大鼠肾小管上皮细胞(NRK-52E)转分化作用的影响及机制。方法:应用TGF-β1刺激NRK-52E,分为阴性对照组,TGF-β1诱导组和不同剂量曲尼司特干预组,用流式细胞仪观察曲尼司特干预后NRK-52E的转分化标志物α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)和E-钙粘蛋白(E-cadherin)的表达情况。结果:在TGF-β1诱导NRK-52E细胞转分化过程中,曲尼司特能剂量依赖性下调α-SMA表达,上调E-cadherin表达,两者表达呈负相关(r=-0.653)。结论:提示曲尼司特在TGF-β1诱导肾小管上皮细胞转分化中发挥保护作用。     

转化生长因子β1／整合素连接激酶信号通路在大鼠肾小管上皮细胞转分化中的作用及大黄素对其的干预效应

目的：研究转化生长因子β1整合素连接激酶（transforming growth factor-betal／integrin-linked kinase,TGF-β1／ILK）信号通路在白细胞介素β1（interleukin-1β,IL-1β）诱导的大鼠肾小管上皮细胞-肌成纤维细胞转分化（tubular epithelial-myofibroblast transdifferentiation,TEMT）中的作用,并探讨大黄素是否是通过抑制TGF-β1/ILK信号通路而影响TEMT。 方法：以雄外培养的正常大鼠肾小管上皮细胞株（NRK52E）为研究对象,分为空白对照组、大黄素对照组、IL-1β诱导组、大黄素阻断组、TGF-β1Ⅰ型受体阻断剂（SB431542）阻断组、大黄素和SB431542共同阻断组、大黄素预处理组和大黄素逆转组。NRK52E细胞在上述处理因素下培养48h后,在倒置相差显微镜下观察细胞形态变化;免疫组化双标法检测细胞表型标志物α平滑肌肌动蛋白（alpha-smooth muscle actin,α-SMA）和E-钙黏连素（E-cadherin）的表达;免疫组化单染法检测NRK52E细胞TGF-β1和ILK的表达,采用图像分析软件定量分析免疫组化染色结果;酶联免疫吸附测定法测定NRK52E细胞分泌的纤维连接蛋白（fibronectin,FN）含量。结果：与空白对照组比较,IL-1β诱导TEMT的同时TGF-β1和ILK表达增加（P〈0．05）,大黄素可明显抑制IL-1β诱导的上述变化（P〈0．05）。阻断TGF-β1信号通路后,IL-1β诱导的TEMT明显受抑,且ILK表达减少。与大黄素阻断剂组比较,大黄素预处理不能预防IL-1β诱导的TEMT,大黄素不能逆转IL-1β诱导的TEMT。相关分析显示,TGF-β1表达与α-SMA、FN、ILK表达呈正相关,与E-钙黏连素表达呈负相关。ILK表达与α-SMA、FN表达呈正相关,与E-钙黏连素表达呈负相关。结论：1L-1β通过激活TGF-β1／ILK信号通路蛋白而诱导TEMT,大黄素通过抑制TGF-β1／ILK信号通路蛋白而抑制IL-1β诱导TEMT。     

阿魏酸哌嗪对TGF-β1诱导肾成纤维细胞表型活化的影响

目的 观察阿魏酸哌嗪对转化生长因子-β1(TGF-β1)诱导肾成纤维细胞表型活化的影响,探讨其抗肾间质纤维化的可能机制.方法 体外培养正常大鼠肾脏成纤维细胞(NRK-49F),利用MTT观察阿魏酸哌嗪对TGF-β1诱导细胞活力的影响;免疫细胞化学法观察阿魏酸哌嗪对TGF-β1诱导细胞α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、结缔组织生长因子(CTGF)蛋白表达的影响;实时荧光定量逆转录-聚合酶链反应(real time RT-PCR)检测阿魏酸哌嗪对TGF-β1诱导细胞α-SMA及CTGF mRNA表达的作用,双抗体夹心ABC-ELISA法检测阿魏酸哌嗪对TGF-β1诱导细胞上清Ⅰ型胶原(Col Ⅰ)、纤维连接蛋白(FN)表达的影响.结果 TGF-β1可以显著增加大鼠肾脏成纤维细胞活力,上调细胞α-SMA、CTGF蛋白和mRNA的表达以及Col Ⅰ、FN的表达.与TGF-β1刺激组相比,阿魏酸哌嗪能部分抑制TGF-β1诱导的细胞活力增加、α-SMA、CTGF的表达和细胞外基质(ECM)的合成.结论 阿魏酸哌嗪可以在一定程度上拮抗TGF-β1诱导的肾纤维化效应.     

shRNA干扰β-catenin对TGF-β1诱导的肾小管上皮细胞转分化的作用

目的构建特异性针对β-catenin基因的shRNA干扰载体,转染TGF-β1诱导的人近端肾小管上皮细胞株HKCs,研究其对肾小管上皮细胞转分化的影响。方法将构建的shRNA-β-catenin干扰载体转染TGF-β1诱导的HKC细胞,RT-PCR、Western blot检测β-catenin的mRNA及蛋白表达水平,筛选抑制效果最佳载体;RT-PCR、细胞免疫荧光、Western blot检测肾小管上皮细胞转分化相关蛋白E-cadherin、α-SMA的mRNA及蛋白表达水平。结果经酶切和测序鉴定,成功构建的shRNA-β-catenin表达载体转染HKC细胞,β-catenin在mRNA及蛋白表达水平均低于转染空白载体组(P<0.05),并筛选shRNA-β-catenin-1进入实验组;转染shRNA-β-catenin-1组细胞β-catenin在mRNA及蛋白表达水平均低于TGF-β1诱导组和空载体组(P<0.05),且β-catenin转核显著减弱(P<0.05);E-cadherin的mRNA及蛋白表达水平较TGF-β1诱导组和空载体组显著上调(P<0.05)、α-SMA的mRNA及蛋白表达水平较TGF-β1诱导组和空载体组显著下调(P<0.05)。结论运用shRNA-β-catenin干扰载体转染TGF-β1诱导的HKC细胞,能够抑制肾小管上皮细胞-间充质转分化。