妊高征胎盘滋养细胞浸润能力的检测及胰岛素样生长因子-II、转化生长因子-β1对其的影响

目的　检测妊娠高血压综合征 (妊高征 )胎盘滋养细胞浸润能力 ,胰岛素样生长因子 II(IGF II)、转化生长因子 β1(TGF β1)对细胞滋养细胞侵袭力的影响。　 方法　从正常及妊高征胎盘分离、纯化细胞滋养细胞行体外培养 ;用体外侵袭试验检测正常及妊高征胎盘滋养细胞的侵袭力 ;IGF II、TGF β1对两组滋养细胞侵袭力的影响。　 结果　妊高征滋养细胞较正常滋养细胞的侵袭力显著降低 (P <0 .0 5 ) ;IGF II明显促进、TGF β1明显抑制正常妊娠滋养细胞的侵袭能力(P <0 .0 5 ) ;二者对妊高征滋养细胞侵袭力的影响不显著 (P >0 .0 5 )。　结论　妊高征胎盘滋养细胞的侵袭力显著降低 ;IGF II、TGF β1可能在妊高征胎盘滋养细胞浅浸润过程中起一定作用。     

妊高征胎盘滋养细胞浸润能力的检测及胰岛素样生长因子-Ⅱ、转化生长因子-β1对其的影响

目的　检测妊娠高血压综合征 (妊高征 )胎盘滋养细胞浸润能力 ,胰岛素样生长因子 II(IGF II)、转化生长因子 β1(TGF β1)对细胞滋养细胞侵袭力的影响。　 方法　从正常及妊高征胎盘分离、纯化细胞滋养细胞行体外培养 ;用体外侵袭试验检测正常及妊高征胎盘滋养细胞的侵袭力 ;IGF II、TGF β1对两组滋养细胞侵袭力的影响。　 结果　妊高征滋养细胞较正常滋养细胞的侵袭力显著降低 (P <0 .0 5 ) ;IGF II明显促进、TGF β1明显抑制正常妊娠滋养细胞的侵袭能力(P <0 .0 5 ) ;二者对妊高征滋养细胞侵袭力的影响不显著 (P >0 .0 5 )。　结论　妊高征胎盘滋养细胞的侵袭力显著降低 ;IGF II、TGF β1可能在妊高征胎盘滋养细胞浅浸润过程中起一定作用。     

转化生长因子β1及其信号转导分子Smad4,Smad7在人脑胶质瘤中的表达及其意义

目的　探讨转化生长因子 β1及其超家族肽类的细胞内转导分子Smad4和Smad7在人脑胶质瘤中的表达及其意义。方法　采用免疫组织化学方法 ,对经过石蜡包埋的 3 0例胶质瘤和8例正常脑组织标本进行定位和定性检测。结果　TGF β1,Smad4和Smad7蛋白在胶质瘤中均有不同程度的表达 ,Smad4的表达水平随着胶质瘤恶性程度的增高而降低 ,且在正常脑组织、低、高级别胶质瘤组中的表达差异有统计学意义 (P <0 .0 5 ) ;TGF β1,Smad7在正常脑组织中几乎不表达 ,在低级别胶质瘤 (Ⅰ Ⅱ级 )中表达较少 ,在高级别胶质瘤 (Ⅲ Ⅳ级 )中表达较多 ,两者在正常脑组织及高、低级别胶质瘤中的表达两两比较差异有统计学意义 (P <0 .0 5 )。且TGF β1与Smad7的表达水平呈正相关 (r =0 .78,P <0 .0 1) ;TGF β1与Smad4的表达水平呈负相关(r =-0 .67,P <0 .0 1)。结论　TGF β1,Smad7蛋白的阳性表达与组织学分级密切相关 ,它们参与了在人脑胶质瘤细胞的恶性转化 ,而Smad4对胶质瘤的进展有抑制作用。     

术后狭窄胆管转化生长因子-β1的表达及意义

目的　观察转化生长因子 β1(TGF β1)在术后狭窄胆道中的表达和分布 ,探讨其在良性胆管狭窄形成过程中的作用及意义。方法　采用免疫组织化学streptavidin biotincomplex(SABC)法检测了 12例术后 3～ 6个月狭窄胆道组织中TGF β1的的表达和分布情况 ,并与 5例正常胆道组织进行对照研究。结果　狭窄胆道组织中TGF β1主要表达于肉芽组织、成纤维细胞、巨噬细胞及血管内皮细胞。正常胆管壁纤维组织表达较弱 ,阳性细胞均数为 12 .45± 6.2 4;TGF β1在术后狭窄胆道组织中的表达较强 ,本组 12例标本中 10例表达 ,2例表达 ,阳性细胞均数为5 9 .5 2± 8.3 3 ,与正常胆管比较差异有非常显著性 (P <0 .0 1)。结论　TGF β1高表达是造成胆道狭窄过程中成纤维细胞增殖旺盛、细胞外基质过度沉积、瘢痕增生的重要因素。     

转化生长因子-β1和结缔组织生长因子在慢性胰腺炎组织中的表达及其意义

我们通过建立大鼠慢性胰腺炎 (CP)模型 ,用免疫组织化学技术 ,对转化生长因子 β1(TGF β1)和结缔组织生长因子(CTGF)在CP形成过程中的表达进行动态观察 ,探讨其作用。一、材料和方法1.试剂与仪器 :三硝基苯磺酸Sigma公司产品 ,恒流静脉泵TE 3 11型 ,Teru mo公司产品 ,兔抗大鼠TGF β1单克隆抗体 ,兔抗大鼠Ⅰ型胶原多克隆抗体SantaCruz公司产品 ,兔抗大鼠CTGF单克隆抗体和EnVisionTM试剂盒购自Dako公司。2 .模型制备[1] :48只SD大鼠 (必凯公司 ) ,体重 2 5 0～ 3 0 0 g ,随机分为两组 :(1)CP组 (n =2 4)。氯胺酮 (10 0mg/kg)…     

反义转化生长因子-β1基因逆转骨肉瘤细胞恶性表型的研究

目的　观察反义转化生长因子 (TGF) β1基因对骨肉瘤细胞恶性表型的逆转作用。方法　将反义TGF β1基因转染骨肉瘤细胞MG 63后 ,以G418(4 0 0mg/L)筛选 14d ,获得转染细胞系。分别检测细胞周期、细胞凋亡和明胶酶A(MMP 2 )表达 ,并观察转染细胞软琼脂克隆形成数和裸鼠体内致瘤能力。结果　与MG 63和空载体转染细胞MG pcDNA3相比 ,反义基因转染细胞MG TGF β1(-)的G0 /G1期细胞从 5 6.2 %和 60 .1%增至 71.6% ,S期细胞从 19.1%和 17.8%降至 12 .9% ,MMP 2mRNA表达明显减少。MG TGF β1( )的软琼脂克隆形成数从 48.6± 8.1和45 .2± 4.7减至 2 8.2± 5 .6,裸鼠体内形成肿瘤的体积 (83 .4± 2 7.4)mm3 也明显小于MG 63组(191.3± 2 1.5 )mm3 和MG pcDNA3组 (2 0 4.2± 3 0 .7)mm3 。结论　反义TGF β1基因转染骨肉瘤细胞可以逆转肿瘤细胞的恶性表型 ,抑制肿瘤的侵袭和转移。     

胎儿和少儿皮肤内转化生长因子-β1和β3基因表达的变化

目的　探讨转化生长因子 β1(TGF β1) ,TGF β3及其Ⅰ 型和Ⅱ 型受体 (TBRⅠ ,TBRⅡ )在胎儿和少儿皮肤中表达的特征。方法　提取 18例不同胎龄的胎儿皮肤和 6例少儿皮肤的总RNA后 ,分离mRNA ,用逆转录 多聚酶链反应 (RT PCR)方法检测这 4种基因的表达。结果　在早期妊娠胎儿的皮肤中 ,TGF β1,TBRⅠ和TBRⅡ基因表达较弱 ,随着胎龄的增加 ,这 3种基因表达逐渐增强。在少儿皮肤内 ,这 3种基因的表达量分别为妊娠早期皮肤的 1.3 ,1.3和 1.2倍 ,基因表达显著升高 (P <0 .0 5 )。在早期胚胎的皮肤中 ,TGF β3基因表达较强 ,而在少儿皮肤内 ,该基因表达低下。结论　在早期胚胎皮肤中 ,TGF β1,TBRⅠ和TBRⅡ基因低表达 ,TGF β3基因的高表达可能与胎儿皮肤创面无瘢痕修复密切相关。     

良性增生前列腺组织中TGF_(β1)mRNA和蛋白的表达

目的 :在转录和翻译水平探讨转化生长因子 β1(TGFβ1 )在良性前列腺增生症 (BPH)前列腺组织中的表达及意义。方法 :应用原位杂交和免疫组织化学法对 2 2例 BPH和 10例正常前列腺 (NP)组织标本中 TGFβ1的表达进行定性、定位检测。结果 :BPH前列腺和 NP组织的上皮和间质都有明显的 TGFβ1 m RNA表达 ,其表达在 BPH和 NP间差异无显著性意义 (P >0 .0 5 ) ;在两组内 ,基质细胞 TGFβ1 m RNA表达明显高于上皮细胞 (P<0 .0 1)。 BPH前列腺和 NP的上皮组织中 TGFβ1 蛋白表达较弱 ,且两者之间差异无显著性意义 (P >0 .0 5 ) ;间质中 TGFβ1 表达均为阳性 ,BPH前列腺间质中阳性表达显著强于 NP的间质 (P <0 .0 1) ,以基质为主要成分的增生结节中表达更高。结论 :TGFβ1 是导致 BPH前列腺间质增生的重要物质 ,启动 BPH发生发展的因素在转录后水平调控 TGFβ1 的表达。     

Smad与创伤愈合

转化生长因子 β(transforminggrowthfactor β ,TGF β)属于TGF β细胞因子超家族 ,在细胞的生长和分化、细胞外基质的合成、创伤修复、机体免疫调节、胚胎发育等多种生理和病理过程中发挥重要作用 ,是目前公认的与创伤愈合关系密切的细胞因子之一。TGF β通过特定的信号转导途径 ,调节相应靶基因的表达 ,进而调控多样化的生物学效应 ,因此关于其信号转导方面的研究一直备受瞩目。近年来 ,TGF β信号转导分子Smad家族的发现使研究日趋深入和完善 ,TGF β信号经跨膜的丝氨酸 苏氨酸激酶受体转导至细胞内 ,再由Smad蛋白转导…     

盐酸特拉唑嗪诱导人前列腺间质细胞凋亡的机制研究

目的　探讨盐酸特拉唑嗪诱导人前列腺间质细胞凋亡的机制。方法　在原代体外培养的人增生前列腺间质细胞中加入不同浓度的盐酸特拉唑嗪、转化生长因子 (TGF) β1及TGF β1抗体 ,用原位凋亡法 (TUNEL)检测细胞的凋亡状况 ,TGF β1酶联免疫粘附试验 (ELISA)试剂盒检测细胞悬液A值。结果　盐酸特拉唑嗪和TGF β1均可诱导体外培养的人前列腺间质细胞凋亡 ,且具有浓度依赖性 ;加入特异性TGF β1抗体后细胞凋亡率减少 72 .7% (P <0 .0 1) ;盐酸特拉唑嗪组细胞悬液TGF β1浓度的A值较对照组高 87.5 % (P <0 .0 1)。 结论　盐酸特拉唑嗪诱导人前列腺间质细胞凋亡通过或至少部分通过细胞自分泌TGF β1引起。     

从膀胱癌尿脱落细胞中提取RNA进行RT-PCR的研究

目的:建立从膀胱癌尿液脱落细胞中提取RNA进行RT-PCR研究的实验方法.方法:从20例膀胱癌患者尿液脱落细胞中提取RNA,采用RT-PCR技术扩增癌细胞中CD_(44)基因V_6～V_(11)外显子序列.结果:18例尿液标本均可被扩增出所设计的相应片段,并经Southern印迹杂交证实.结论:临床上采用此技术可从分子水平上对大批膀胱癌患者的癌基因表达产物进行无创伤性检测;为深入研究膀胱癌的发病机制、生物学行为和探讨简便、有效的无创伤性检测方法奠定了实验基础.     

TGFβ_1及PCNA在肾细胞癌中的表达及其临床意义

目的 :探讨肾细胞癌中转化生长因子 β1 (TGFβ1 )及增殖细胞核抗原 (PCNA)的表达及其价值。方法 :采用免疫组织化学技术 (SP法 )对 46例肾细胞癌和 11例正常肾组织标本中 TGFβ1 、PCNA进行检测 ,并结合临床资料进行分析。结果 :肾癌组 TGFβ1 表达量较正常组高 (P <0 .0 5 ) ;PCNA在肾癌组高表达 (P <0 .0 1) ,且在高分期、高分级肾细胞癌中表达量较低分期、低分级肾细胞癌高 (P <0 .0 5 ) ;TGFβ1 表达量与 PCNA表达量呈负相关关系 (P <0 .0 1) ;TGFβ1 表达量低及 PCNA表达量高的肾癌患者预后差 (P <0 .0 5 )。结论 :TGFβ1 对处于增殖状态的肾细胞癌是一种重要负性调节因子 ,可抑制肾癌发展 ;TGFβ1 及 PCNA表达可作为判断肾细胞癌预后的指标     

阻断转化生长因子-β1自分泌环对骨肉瘤细胞生物学活性和化疗药物敏感性的影响

目的　观察阻断转化生长因子 β1(TGF β1)自分泌环对肿瘤细胞增殖活性和化疗药物敏感性的影响。方法　将反义TGFβ1基因转染骨肉瘤细胞MG 63 ,采用四甲基偶氮唑蓝微量酶反应比色法 (MTT)检测细胞增殖活性。以含 0、0 .2 5、0 .5 0、0 .75、1.0 0mg/L阿霉素 (ADR)的培养基培养转染细胞 48h后 ,采用3 H TdR掺入法检测细胞化疗药敏感性。结果　MG 63和空载体转染细胞增殖活性为 0 .197± 0 .0 15和 0 .195± 0 .0 2 1,差异无显著性 (P >0 .0 5 )。反义TGF β1转染细胞增殖活性为 0 .162± 0 .0 17,生长明显缓慢 ,对ADR敏感性明显增强 ,与对照组比较差异有显著性 (P <0 .0 5 )。讨论　通过阻断TGF β1自分泌环以降低骨肉瘤表达TGF β1,可以抑制细胞增殖活性 ,增加细胞对化疗药敏感性     

肝细胞癌抗原519基因在肝癌组织中的表达

我们采用逆转录 聚合酶链反应(RT PCR )对肝细胞癌抗原 5 19(HCA5 19)在肝细胞肝癌 (HCC)、肝硬化和正常肝组织中的表达情况进行了研究。一、材料与方法1.对象 :HCC患者标本 5 6例 ,均于术中切下标本后立刻取癌和癌旁组织 ,经过液氮速冻后保存于 -80℃冰箱待用 ,均经过常规病理检查证实。其中男41例 ,女 15例。取 15例肝硬化和 15例正常肝组织及 5例正常睾丸组织作为对照。2 .总RNA的提取、cDNA的合成和PCR反应参照文献中的方法[1] 进行 :HCA5 19引物序列为 5’ GCAAGC TATTGTCACACCTTTG 3’和 5’ AT GATTACAGGA…     

人脾脏巨噬细胞总RNA的提取和产率研究

目的　探讨提取人脾脏巨噬细胞总RNA的方法并测算其产率。方法　收集 5例门静脉高压症脾亢患者的手术切除脾脏 ,经贴壁培养法分离纯化出巨噬细胞 (Mφ)后 ,采用TRIzol试剂一步法提取 5例脾脏Mφ样本的总RNA。分光光度法和琼脂糖凝胶电泳检测总RNA的产量和质量。最后计算出每 10 8个Mφ总RNA的产率。 结果　 5例样本Mφ总RNA的A2 60nm与A2 80nm比值平均为 1.83± 0 .13 ,提示总RNA纯度较高 ,电泳结果提示总RNA无降解。每 10 8个Mφ平均可抽提 (4 1.5 8± 2 3 .13 ) μg总RNA。 结论　采用TRIzol试剂一步法提取脾脏Mφ总RNA是可行的 ,收获的人脾脏Mφ总RNA纯度高、完整性好、量较多 ,可满足后续实验要求。     

阻断转化生长因子β1自分泌环对骨肉瘤细胞恶性表型的影响

[目的]观察阻断转化生长因子β1(TGFβ1)自分泌环对骨肉瘤细胞恶性表型的影响。[方法]将反义TGFβ1基因转染骨肉瘤细胞MG-63,G418筛选14d后获得转染细胞系MG-TGFβ1(-)。取MTT法检测转染细胞增殖活性,并观察细胞软琼脂克隆形成数和裸鼠体内致瘤能力。[结果]与MG-63和空载体转染细胞MG-pcDNA3相比,MG-TGFβ1(-)细胞增殖活性明显受到抑制。MG-TGFβ1(-)的软琼脂克隆形成数(28·2±5·6)比MG-63组(48·6±8·1)和MG-pcDNA3组(45·2±4·7)明显减少,裸鼠体内形成肿瘤的体积(83·4±27·4)mm3也明显小于MG-63组(191·3±21·5)mm3和MG-pcDNA3组(204·2±30·7)mm3。[结论]反义TGFβ1基因转染骨肉瘤细胞可以逆转肿瘤细胞的恶性表型,进一步的研究将有助于提高骨肉瘤的治疗效果。     

生长抑素类似物对肝癌细胞转化生长因子β/Smads信号系统的调节

生长抑素 (SST)是一种环状的多肽类激素 ,在人体内具有广泛的生物效应 ,主要表现为调节生长激素释放、神经冲动传递、免疫细胞活性、抑制内分泌及平滑肌收缩 ,减少肠系膜血流、抑制肠道对氨基酸的吸收等[1] 。转化生长因子 (TGF) β/Smads信号是上皮细胞重要的负性调节系统 ,是机体抑癌的中心环节。本研究旨在探讨OCT对肝癌的抑制作用 ,及该抑瘤作用同TGFβ/Smads系统的关系。一、材料与方法1.细胞株 :Bel740 2人肝癌细胞株。2 .裸鼠肝癌原位种植瘤的制作 :取Bel740 2细胞株 ,制成 2× 10 6个细胞悬液 ,接种于裸鼠腹股沟。待皮下肿…     

老年大鼠骨痂中转化生长因子-β_1的表达

目的　探讨增龄对骨折愈合过程中转化生长因子 β1(TGF β1)表达的影响。方法　建立老年大鼠股骨骨折模型 ,于第 1、2、4、8、12周取骨痂 ,进行组织学观察 ,并用免疫组织化学方法进行TGF β1表达测定。结果　在 2、4周TGF β1主要在软骨细胞、间充质细胞而在 8周新生类骨质中有TGF β1表达。结论　增龄可引起成骨细胞功能降低 ,导致TGF β1分泌减少 ,使骨折的愈合延缓     

体外诱导骨髓间质干细胞向软骨方向分化的研究

目的　探讨体外诱导骨髓间充质干细胞 (BMSCs)向软骨方向分化的条件和方法。方法　抽取兔股骨骨髓 ,用密度梯度离心和贴壁分离法分离BMSCs ,分别在高密度 (1× 10 6/ml)和低密度 (1× 10 4/ml)培养条件下用转化生长因子 β1(TGF β1)诱导BMSCs向软骨方向分化。倒置显微镜、透射及扫描电子显微镜观察细胞 ,用免疫组织化学、原位杂交、特殊染色方法检测Ⅱ型胶原及软骨基质成分的表达。结果　高密度诱导的BMSCsⅡ型胶原免疫组织化学阳性率为 89.2 %,Ⅱ型胶原原位杂交阳性率为 82 .6%,黏多糖特殊染色阳性 ,低密度诱导的BMSCsⅡ型胶原免疫组织化学阴性 ,Ⅱ型胶原原位杂交阳性率为 3 .8%,黏多糖特殊染色阴性。结论　TGF β1可以诱导BMSCs向软骨方向分化 ,细胞密度是BMSCs分化的重要影响因素。