PTEN基因对卵巢癌耐药细胞系C13K顺铂耐药性的影响

目的:探讨第10号染色体上PTEN对人卵巢癌顺铂耐药细胞株C13K顺铂耐药性的逆转作用。方法:将野生型PTEN基因真核表达质粒在脂质体介导下转染人卵巢癌耐药细胞系C13K细胞,同时以转染空载体和未转染C13K细胞作为对照,分别应用逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)及蛋白印迹法(W estern blot)检测PTEN mRNA及蛋白表达水平,对转染细胞株进行四甲基偶氮噻唑蓝(MTT)实验,观察PTEN基因对肿瘤细胞生长的抑制作用和C13K细胞对顺铂药物敏感性的影响,流式细胞仪(FACS)分析细胞的凋亡。结果:转染48 h后,与对照组相比,转染野生型PTEN基因能明显增加C13K细胞PTEN mRNA和蛋白的表达,差异有统计学意义(P<0.05);MTT法显示,转染野生型PTEN基因的C13K细胞生长明显慢于转染空载体和未转染的C13K细胞,转染PTEN的C13K细胞对顺铂的敏感性显著增加;FACS分析显示,顺铂作用24h后,转染PTEN基因能够显著提高C13K细胞凋亡率。结论:转染野生型PTEN质粒能有效地提高C13K细胞内PTEN的表达,恢复细胞对顺铂的敏感性。     

顺铂联合紫花牡荆素抑制人卵巢癌细胞增殖的研究

目的:探讨顺铂(DDP)是否具有敏化紫花牡荆素(CAS)抑制体外培养人卵巢癌SKOV3细胞生长增殖的作用。方法:体外培养SKOV3细胞;用MTT和平皿克隆法检测顺铂、CAS在亚细胞毒性浓度下,以及两者联合对SKOV3细胞生长增殖的影响;用FCM检测CAS对SKOV3细胞周期的影响;Western blot分析p21和cyclin B1蛋白表达的变化。结果:顺铂具有敏化CAS抑制人卵巢癌SKOV3细胞增殖活性的作用;与亚细胞毒性浓度的顺铂和CAS相比,顺铂和CAS联合作用SKOV3细胞集落形成率明显下降(P<0.01);经亚细胞毒性浓度的顺铂和CAS联合作用48h后SKOV3被阻滞于G2/M期,同时cyclin B1蛋白表达降低,p21蛋白表达增高。结论:顺铂具有敏化CAS抑制体外培养人卵巢癌SKOV3细胞生长增殖的作用,其机制可能是通过降低cyclin B1表达、活化p21实现的。     

ERK1/2在曲普瑞林逆转卵巢癌OVCAR-3细胞顺铂耐药中的作用

目的：研究曲普瑞林在抑制卵巢癌OVCAR3细胞增殖的同时可否逆转顺铂耐药，并探讨MAP-ERKl／2在其中的变化及调节机制。方法：筛选建立耐顺铂的亚细胞系OVCAR3-DDP；采用M1Tr、流式细胞术及Westernblot比较不同浓度下顺铂、曲普瑞林及两药联合对耐药卵巢癌OVCAR3-DDP细胞生长的影响，测定ERKl／2蛋白的表达。结果：卵巢癌OVCAR3-DDP细胞耐药指数为3．87；顺铂与曲普瑞林联合化疗增敏倍数为2．23；ERKl／2蛋白活性在顺铂处理组升高，在曲普瑞林处理组、顺铂与曲普瑞林联合处理组降低。结论：曲普瑞林增加了卵巢癌OVCAR3-DDP细胞对顺铂的敏感性，此作用可能与细胞内ERKl／2信号转导通路有关。     

ERK1/2在曲普瑞林逆转卵巢癌OVCAR-3细胞顺铂耐药中的作用

目的:研究曲普瑞林在抑制卵巢癌OVCAR3细胞增殖的同时可否逆转顺铂耐药,并探讨MAP-ERK1/2在其中的变化及调节机制。方法:筛选建立耐顺铂的亚细胞系OVCAR3-DDP;采用MTT、流式细胞术及Western blot比较不同浓度下顺铂、曲普瑞林及两药联合对耐药卵巢癌OVCAR3-DDP细胞生长的影响,测定ERK1/2蛋白的表达。结果:卵巢癌OVCAR3-DDP细胞耐药指数为3.87;顺铂与曲普瑞林联合化疗增敏倍数为2.23;ERK1/2蛋白活性在顺铂处理组升高,在曲普瑞林处理组、顺铂与曲普瑞林联合处理组降低。结论:曲普瑞林增加了卵巢癌OVCAR3-DDP细胞对顺铂的敏感性,此作用可能与细胞内ERK1/2信号转导通路有关。     

卵巢癌对顺铂和紫杉醇耐药的分子机制

卵巢癌致死率居女性生殖道恶性肿瘤之首,严重威胁女性的生命健康。肿瘤细胞减灭术及铂类联合紫杉醇的系统化疗是治疗卵巢癌的金标准。因卵巢癌起病隐匿,多数卵巢癌患者确诊时已属晚期,而晚期肿瘤易对目前的化疗药物产生抗药性,因此化疗耐药已成为提高卵巢癌治愈率的关键制约因素。明确化疗耐药的分子机制对探索有效的靶向治疗、研发逆转耐药的新药物具有极其重要的价值,从而提高化疗敏感性和逆转化疗耐药。卵巢癌化疗耐药的形成是多基因、多因素、多水平共同参与的结果,主要的分子机制有抗凋亡、促生存、细胞内药物排出增多、细胞解毒及DNA修复功能增强等。卵巢癌对顺铂和紫杉醇耐药的分子机制尚无定论,现就其可能的耐药机制进行综述。     

腹腔注射顺铂治疗卵巢癌

增加肿瘤与抗癌药物的接触,能提高治疗有效率和存活时间。人类许多肿瘤局限于腹腔、(如卵巢癌和间皮瘤)。腹腔注射(IP)药物增加了这些部位的肿瘤与药物直接接触的机会。药动学研究认为,许多药物通过腹腔给药可显示出不少药理学方面的优点。进一步了解腹腔化疗的原理并应用于临床,能改善病人存活。本文对腹腔化疗药理学原理及应用顺铂腹腔给药治疗卵巢癌进行综述。腹腔药动学将IP治疗视为三室模型。药物直接进入肿瘤所在的腔内为第一室;然后被吸收入血液中(血浆)为第二室;再分布到与血液接触的所有其它组织为第三室。总的药物作用以测定血药浓度时间曲线下面积(AUC)计算。可用腹腔/血浆AUC比说明药物直接注入腹腔内的优点。药物注入     

顺铂诱导卵巢癌SKOV3细胞自噬和凋亡的研究

目的:研究顺铂诱导卵巢癌SKOV3细胞自噬和凋亡的发生情况,并探讨可能的发生机制。方法:顺铂干预卵巢癌SKOV3细胞后,用MDC染色荧光显微镜观察自噬囊泡及流式细胞仪检测自噬率;AnnexinV-FITC/PI双染色流式细胞仪检测凋亡率及TUNEL法检测凋亡指数;Western blot检测自噬蛋白Beclin1,LC3-Ⅱ和凋亡蛋白caspase9,caspase3的表达。结果:顺铂干预SKOV3细胞后,MDC阳性细胞数明显增多;自噬率提高(P<0.05);凋亡率提高(P<0.05);凋亡指数提高(P<0.05);自噬蛋白Beclin1,LC3-Ⅱ和凋亡蛋白caspase9,caspase3表达均增强(P<0.05)。结论:顺铂不仅可诱导卵巢癌SK-OV3细胞凋亡,而且可诱导卵巢癌SKOV3细胞自噬性死亡。     

β连环素在卵巢肿瘤中的研究进展

β连环素（ff-catenin）主要参与Wnt信号通路和上皮钙黏蛋白（E—cadherin）介导的细胞间的黏附,其在多数肿瘤中存在异常表达。研究表明,wnt／β-eatenin信号通路的异常激活与卵巢肿瘤的发生密切相关。同时,E-cadherin／β-catenin复合体的改变直接参与卵巢肿瘤的侵袭转移。卵巢肿瘤动物模型的出现进一步证明β-catenin在卵巢肿瘤发生发展中的作用。对卵巢肿瘤中β-catenin的研究进展做文献综述。     

β-连环素与妇科肿瘤关系的研究进展

β-连环素是粘附分子E-钙粘素的相关蛋白,当基因突变导致β-连环素蛋白在胞浆中积聚并分配至胞核中,对卵巢及子宫的部分类型的肿瘤发生有重要作用.     

顺铂和紫杉醇对人卵巢浆液性囊腺癌细胞系SKOV3ip 1多细胞团簇的耐药性实验研究

目的探讨人卵巢浆液性囊腺癌细胞系SKOV3ip1细胞形成的多细胞团簇(MCA)对顺铂和紫杉醇的敏感性及其可能机理.方法用液体重叠系统获得SKOV3ip1的MCA,以单层细胞为对照.分别加入浓度为0.8、8.0、40.0、80.0μmol/L的顺铂或浓度为0.2、2.0、10.0、20.0μmol/L的紫杉醇作用后,采用台盼蓝排除实验检测MCA细胞抑制率、体外耐药的克隆形成率实验检测MCA的克隆形成率、流式细胞仪分析检测MCA的细胞周期分布和细胞凋亡率.结果不同浓度的顺铂(0.8、8.0、40.0、80.0μmol/L)或紫杉醇(0.2、2.0、10.0、20.0μmol/L)作用后,MCA细胞抑制率明显低于单层细胞,差异有显著性(P顺铂=0.045,P紫杉醇＝0.003).顺铂(40μmol/L)作用12h后的MCA和单层细胞均无细胞克隆(≥50个活细胞组成的细胞团为1个细胞克隆)形成,紫杉醇(10μmol/L)作用12h后的MCA(n=100)的克隆形成率为7%,明显高于单层细胞的0%(P＜0.05).空白对照中,MCA的G0+G1期细胞较单层细胞明显增多(P=0.003);顺铂作用后MCA和单层细胞的细胞凋亡率分别为(1.898±0.562)%和(7.930±5.541)%,两者比较,差异无显著性(P＝0.100),细胞周期分布也无明显变化;紫杉醇作用后MCA的细胞凋亡率(5.510±2.517)%,与单层细胞的(10.098±2.416)%比较,差异有显著性(P＝0.012),紫杉醇在单层细胞中诱导的G2+M期细胞阻滞在MCA中出现缺失.结论SKOV3ipl的MCA对顺铂和紫杉醇化学治疗(化疗)呈现出不同程度的耐药性,尤其对紫杉醇耐药性更为明显.细胞周期分布的变化、G2+M期细胞阻滞的缺失及MCA的细胞凋亡率的降低,可能是引起MCA对紫杉醇化疗耐药的原因.     

β连环素在卵巢肿瘤中的研究进展

β连环素（β-catenin）主要参与Wnt信号通路和上皮钙黏蛋白（E-cadherin）介导的细胞间的黏附,其在多数肿瘤中存在异常表达。研究表明,Wnt/β-catenin信号通路的异常激活与卵巢肿瘤的发生密切相关。同时,E-cadherin/β-catenin复合体的改变直接参与卵巢肿瘤的侵袭转移。卵巢肿瘤动物模型的出现进一步证明β-catenin在卵巢肿瘤发生发展中的作用。对卵巢肿瘤中β-catenin的研究进展做文献综述。     

ERCC1 Ⅷ外显子剪接变异对卵巢癌细胞顺铂耐药的影响

目的:探讨ERCC1 Ⅷ外显子剪接变异对卵巢癌细胞顺铂耐药的影响。方法:分别构建缺失Ⅷ外显子和野生型的ERCC1表达载体pD-DE(含突变型ERCC1基因)和pD-WE(野生型ERCC1),脂质体转染法转染A2780细胞,Western blot检测ERCC1表达水平研究该剪接变异对ERCC1基因表达水平的影响。MTT法检测肿瘤细胞的顺铂耐药性,彗星实验检测转染后细胞DNA的损伤修复情况。结果:成功构建重组质粒pD-DE和pD-WE;Western blot结果显示,该剪接变异未显著影响ERCC1表达;转染pD-DE的细胞与转染pD-WE的细胞相比,明显降低了顺铂的耐受性与细胞DNA损伤修复的能力。结论:ERCC1 Ⅷ外显子剪接变异降低卵巢癌细胞DNA损伤修复能力和对顺铂的耐药性。     

β—连环素与妇科肿瘤关系的研究进展

β－连环素是粘附分子E－钙粘素的相关蛋白,当基因突变导致β－连环素蛋白在胞浆中积聚并分配至胞核中,对卵巢及子宫的部分类型的肿瘤发生有重要作用。     

顺铂与姜黄素联用抑制人卵巢癌细胞株3AO增殖作用的研究

目的:研究顺铂（cDDP）对姜黄素抑制人卵巢癌细胞株3AO增殖的影响。方法:采用MTT法计算细胞存活率,Giemsa染色观察细胞形态变化及细胞凋亡情况,用流式细胞术检测细胞周期变化及细胞凋亡率。结果:姜黄素可明显抑制3AO细胞的生长,其半数生长抑制率（IC_50）约为27.8μmol/L;姜黄素将肿瘤细胞聚集在S期和G2/M期并可诱导细胞凋亡。cDDP与各种浓度姜黄素联合可显著抑制3AO细胞增殖（P<0.01）。姜黄素和cDDP均可在一定程度上诱导细胞凋亡,两种药物联用后,诱导细胞凋亡作用显著增强。结论:姜黄素可与cDDP协同抑制人卵巢癌细胞株3AO的增殖。其协同作用的机制可能与诱导细胞凋亡有关。     

αvβ6整合素对顺铂诱导的卵巢癌细胞凋亡的影响

目的　探讨αvβ6整合素介导的细胞与细胞外基质的黏附 ,及其对顺铂诱导的卵巢癌细胞凋亡的影响。方法　采用流式细胞仪测定卵巢癌细胞株SKOV3、AO、3AO细胞表面αvβ6整合素的表达 ,并利用酶联免疫吸附实验、吖啶橙 溴化乙锭双荧光染色法分析顺铂诱导的细胞凋亡及αvβ6整合素对细胞凋亡的影响。结果　SKOV3、AO、3AO细胞均表达αvβ6整合素 ,其相对荧光指数 (FI)均为 1 0 3± 0 0 1。顺铂可以诱导SKOV3、AO、3AO细胞凋亡 ,经顺铂 (10 μg/ml)作用 4 8h后 ,酶联免疫吸附实验结果显示 ,生长于αvβ6整合素配体———纤维粘连蛋白 (FN)上的细胞的富集系数 (EF)分别为 2 11± 0 0 4、2 15± 0 0 6、2 11± 0 0 4 ,明显低于生长于非整合素配体———多聚赖氨酸 (polylisin)上的细胞 (分别为 3 5 1± 0 0 3、3 5 5± 0 0 4、3 6 6± 0 0 4 ,P <0 0 1) ;吖啶橙 溴化乙锭双荧光染色法结果显示 ,生长于FN上的细胞凋亡率分别为 (5 0± 0 7) %、(5 0± 0 7) %、(6 0± 0 7) % ,明显低于生长于polylisin上的细胞凋亡率[分别为 (2 8 0± 0 7) %、(2 8 0± 0 7) %、(2 9 0± 0 7) % ,P <0 0 0 1],用αvβ6整合素的特异性阻断抗体封闭过的细胞再次生长于FN上时 ,细胞凋亡率 [分别为 (15 0± 0     

米非司酮对卵巢上皮性癌耐药细胞DNA修复基因表达和顺铂敏感性的影响

目的 研究米非司酮对卵巢上皮性癌(卵巢癌)耐药细胞DNA修复基因表达的调控,及对顺铂的增敏作用.方法 应用四甲基偶氮唑蓝比色法检测2.5、5.0、10.0 μmol/L米非司酮作用后卵巢癌顺铂耐药细胞株COC1/DDP的顺铂半数抑制浓度(IC50);用RT-PCR技术、流式细胞仪检测米非司酮联合顺铂作用后COC1/DDP细胞ERCC1、BRCA1、hMLH1 mRNA的表达水平及细胞周期和凋亡率的变化;建立COC1/DDP细胞裸鼠皮下移植瘤模型,分为顺铂组、米非司酮组、联合组和对照组,观察米非司酮在裸鼠体内对顺铂的增敏作用.结果 2.5、5.0、10.0 μmol/L米非司酮分别使COC1/DDP细胞对顺铂的IC50下降为(3.18±0.46)、(1.95±0.14)和(0.64±0.18)μg/ml,2.5 μmol/L米非司酮联合顺铂作用后的IC50与单用顺铂者[(3.71±0.38)μg/ml]比较,差异无统计学意义(P=0.076),其他浓度之间两两比较,差异均有统计学意义(P＜0.01).米非司酮下调ERCC1、BRCA1、hMLH1 mRNA表达水平,3种基因mRNA的相对表达量随米非司酮浓度的升高均呈下降趋势.2.5、5.0、10.0 μmol/L米非司酮联合顺铂对COC1/DDP细胞作用后,G0/G1,期细胞比例升高(分别为51.68%、53.74%、55.08%).2.5、5.0、10.0 μmol/L米非司酮与10 μg/ml顺铂联合作用使细胞凋亡率分别增加为5.11%、9.13%和12.24%.米非司酮联合顺铂治疗裸鼠皮下移植瘤的生长抑制率为70.1%,与顺铂组、米非司酮组(分别为22.5%、6.5%)比较,差异均有统计学意义(P＜0.05).结论 米非司酮通过下调ERCC1、BRCA1、hMLH1基因的表达及阻滞G0/G1期细胞、增加细胞凋亡率来增强顺铂对卵巢癌细胞的抗肿瘤敏感性.     

蛋白酶体抑制剂MG132逆转子宫颈癌细胞HCE1多细胞球体对顺铂耐药的研究

目的 构建宫颈鳞癌细胞系HCE1的多细胞球体模型,研究蛋白酶体抑制剂MG132对其顺铂天然耐药的影响,探讨MG132是否可以逆转HCE1多细胞球体的天然耐药及其可能的机制.方法 (1)采用液体重叠法和旋转法建立HCE1多细胞球体模型;(2)用MG132、顺铂分别干预HCE1单层细胞及多细胞球体,分为MG132组、顺铂组、MG132+顺铂组、对照组,锥虫蓝拒染法检测细胞抑制率,流式细胞仪检测细胞周期及凋亡率;(3)用蛋白印迹法和免疫组化方法分别检测HCE1单层细胞及药物干预前后多细胞球体中核因子kB(NF-kB)和B细胞淋巴瘤/白血病2蛋白(bcl-2)的表达.结果 (1)成功建立了HCE1多细胞球体模型.(2)HCE1单层细胞和多细胞球体的细胞抑制率:MG132组分别为(11.67±2.34)%和(10.78±1.17)%,两者比较,差异无统计学意义(P>0.05);MG132+顺铂组分别为(92.67±2.52)%和(91.33±2.18)%,两者比较,差异也无统计学意义(P>0.05);顺铂组分别为(45.01±7.44)%和(9.45±5.98)%,两者比较,差异有统计学意义(P<0.05).(3)HCE1单层细胞和多细胞球体的凋亡率:MG132组两者凋亡率分别为8.14%和5.97%,MG132+顺铂组两者凋亡率分别为99.01%和95.22%;顺铂组两者凋亡率分别为33.61%和0.88%.(4)NF-kB的相对表达量和bcl-2的高表达率:HCE1多细胞球体对照组分别为0.67、60%,顺铂组分别为0.85、83%,MG132组分别为0.39、20%,MG132+顺铂组分别为0.47、33%.结论 (1)HCE1多细胞球体模型对顺铂可产生天然耐药,是体外研究宫颈癌对顺铂耐药的良好模型.(2)MG132对HCE1多细胞球体有抑制增殖、诱导凋亡的作用,可部分逆转HCE1多细胞球体对顺铂的天然耐药性,其机制可能与NF-kB、bcl-2表达下调有关.     

顺铂、维拉帕米和环孢菌素诱导卵巢癌细胞凋亡的研究

目的 探讨顺铂（ＤＤＰ）,维拉帕米（ＶＰ）及３′－酮基－去甲基苏氨酸１－缬氨酸２－环孢菌素（ＰＳＣ８３３）诱导卵巢癌细胞凋亡的作用机理。方法 以人卵巢癌亲代细胞株ＣＯＣ１及其耐ＤＤＰ亚细胞株ＣＯＣ１／ＤＤＰ为材料,根据所加药物的不同分为ＤＤＰ组,ＶＰ组,ＰＳＣ８３３组,ＤＤＰ联合ＶＰ组,ＤＤＰ联合ＰＳＣ８３３组和对照组,计算各组细胞生长抑制率,细胞凋亡率同时进行细胞周期分析。结果 ＤＤＰ联合ＶＰ组     

醋酸甲羟孕酮增强顺铂对人卵巢癌耐药细胞抗癌作用的研究

目的:观察醋酸甲羟孕酮(MPA)对人卵巢癌CoC1/cDDP细胞移植瘤的生长抑制作用及对DDP的耐药逆转作用,并分析其作用机制。方法:建立人卵巢癌裸鼠皮下移植瘤模型,随机分为4组,每组5只。(1)对照组:腹腔注射等体积生理盐水;(2)DDP治疗组:每只每次腹腔注射DDP 3mg/kg。(3)MPA治疗组:每只每次灌胃30mg/kg;(4)联合治疗组:每只每次灌胃MPA 30mg/kg,1h后每只每次腹腔注射DDP 3mg/kg,每隔2天给药1次,共4次,于治疗第1、5、10、15、20天分别测瘤体积,20天后处死裸鼠,完整剥出瘤组织,称瘤重,计算抑瘤率;通过流式细胞仪检测亚G1期细胞及AnnexinV+/PI-细胞鉴定细胞凋亡,分析移植瘤细胞周期;用半定量RT-PCR法检测移植细胞组织Survivin-ΔEx3、caspase-3、P21WAF1/CIP1及GST-π4基因mRNA表达。结果:(1)MPA组、MPA+DDP组治疗第10天起皮下移植瘤体积明显小于DDP组和对照组,且进行性缩小(P<0.01);抑瘤率分别为51.63%、62.21%,均明显大于DDP组的6.84%(P<0.01),并且两组间有显著差异(P<0.01);(2)流式细胞仪分析显示,移植瘤出现亚G1期峰及AnnexinV+/PI-细胞均证实MPA能诱导CoC1/cDDP细胞凋亡,并显著高于对照组及DDP组,并出现G1期阻滞;与DDP合用除出现G1期阻滞外又出现G2/M期阻滞,S期明显减少,亚G1期细胞及AnnexinV+/PI-细胞进一步上升;(3)半定量RT-PCR检测显示,MPA组Survivin-ΔEx3、GST-πmRNA下调,而P21WAF1/CIP1、caspase-3 mRNA上调,与DDP合用后,对Survivin-ΔEx3、P21WAF1/CIP1及GST-πmRNA的表达无协调作用,而对caspase-3 mRNA有协同上调作用。结论:MPA通过阻滞G0/G1期明显抑制了CoC1/cDDP移植瘤生长,并有很强的致凋亡作用,同时下调GST-πmRNA,从而逆转对顺铂耐药。     

mda-7/IL-24基因对卵巢癌细胞耐药性的影响

目的:探讨抑癌基因mda-7/IL-24对卵巢癌细胞株A2780和耐药株A2780/ DDP耐药性的影响。方法:构建人mda-7/IL-24基因重组腺病毒,感染A2780和A2780/ DDP的两种卵巢癌细胞株,MTT法检测细胞感染对顺铂(DDP),阿霉素(ADM),5-氟尿嘧啶(5-FU),泰素(Taxol)4种化疗药物敏感性的变化。结果:重组腺病毒载体Ad．mda-7/ IL-24经测序、酶切电泳检测正确;感染后A2780细胞对DDP、5-FU、Taxol的耐药性降低, DDP的药物敏感性提高了15．45倍,5-FU和Taxol的药物敏感性分别提高了2．15倍和3．63倍;A2780/DDP细胞对5-FU药物敏感性提高了2．62倍。结论:成功构建了Ad．mda-7/IL-24重组腺病毒载体,感染卵巢癌细胞A2780可提高对DDP、5-FU和Taxol的敏感性。