茶多酚对舌鳞状细胞癌细胞增殖和端粒酶催化亚基的抑制作用

目的观察茶多酚对人舌鳞状细胞癌Tca8113细胞增殖和端粒酶催化亚基(hTERT)的影响。方法实验分0.025、0.050、0.100、0.200g/L茶多酚组和空白培养基组。采用噻唑蓝比色法检测茶多酚对Tca8113细胞增殖的影响,逆转录PCR法检测hTERT基因表达,Western-blot法测定细胞中hTERT蛋白表达量。所有数据采用ANOVA单因素方差分析和Student-Newman-Keuls检验进行统计学检验。结果茶多酚能明显抑制Tca8113细胞增殖,并存在时间和浓度依赖性。72h时,0.200、0.100、0.050和0.025g/L茶多酚组细胞增殖抑制率分别为69.75%±3.24%、63.17%±3.19%、50.35%±4.21%和34.75%±3.71%。72h时,0.100、0.050g/L组hTERT mRNA和蛋白表达均低于空白对照组(P<0.05)。结论茶多酚能够抑制人舌鳞状细胞癌Tca8113细胞株的增殖及端粒酶催化亚基的转录和表达,抑制端粒酶催化亚基可能是茶多酚抗舌癌的机制之一。     

岩黄连总碱对Tca8113细胞增殖和凋亡作用的影响

目的:观察岩黄连总碱对体外培养人舌鳞癌Tca8113细胞增殖抑制及诱导凋亡作用。方法:MTT法检测不同浓度的岩黄连总碱分别处理体外培养的Tca8113细胞24、48和72 h后的细胞增殖抑制情况,Hochest33258染色及DNA ladder检测细胞凋亡,并用脱氧核苷酸转移酶介导的dUTP缺口末端标记法(TUNEL法)原位检测细胞凋亡及细胞凋亡率。结果:岩黄连总碱对Tca8113细胞增殖具有明显抑制作用(P<0.01),且呈现出一定的时间和浓度依赖性;Hochest33258检测发现岩黄连总碱作用48 h后可见凋亡细胞;DNA ladder检测可见凋亡特有的180～200 bp整数倍DNA条带;TUNEL结果显示岩黄连总碱处理组细胞凋亡率呈时间和浓度依赖性。结论:岩黄连总碱能抑制Tca8113细胞增殖,呈时间和浓度依赖性;同时能诱导Tca8113细胞凋亡,且诱导凋亡的作用也呈时间和浓度依赖性。     

吉西他滨对舌鳞癌细胞增殖和端粒酶活性的影响

目的:了解吉西他滨对舌鳞癌Tca8113细胞增殖及端粒酶活性的影响。方法:采用噻唑蓝(MTT)和碘化丙锭(PI)染色法,检测细胞增殖抑制率和细胞周期变化;采用TRAPPCRELISA法检测细胞端粒酶活性,PAGE-银染法显示端粒酶电泳图像。数据采用SPSS10.0中独立样本t检验法或单因素方差分析法进行统计学检验。结果:吉西他滨能够显著抑制Tca8113细胞增殖,并具有时间和浓度依赖性,5.0μg/ml组72h增殖抑制率均值为72.2%,高于0μg/ml组(F=161.854,P<0.05)。细胞周期检测显示:吉西他滨作用72h后,S期细胞比例下降,5.0μg/ml组均值为18.1%,低于0μg/ml组38.5%(t=5.801,P<0.05)。TRAPPCRELISA法检测细胞端粒酶活性(A值)随吉西他滨作用浓度增加和时间延长而下降:72h,0和5.0μg/ml组A值分别为1.32±0.12、0.28±0.02(F=811.208,P<0.05)。结论:吉西他滨能够有效抑制Tca8113细胞增殖,可以降低细胞端粒酶活性。     

岩黄连总碱和脱氢阿卟卡维丁对Tca8113中NF-kappa B表达活性的影响

目的:研究中草药岩黄连总碱(YHL-TA)和脱氢阿卟卡维丁(YHL-2)对人舌鳞癌细胞Tca8113细胞中NF-kappaB表达活性的影响,并进一步探讨其抗癌机制。方法:采用PCR法和Western-blotting法检测经YHL-TA和YHL-2作用后的Tca8113细胞中NF-kappa B核酸水平以及蛋白水平的表达活性变化。结果:YHL-TA和YHL-2均能抑制Tca8113细胞增殖,并在核酸水平和蛋白水平抑制NF-kappa B P50、P65亚基的表达活性。其中YHL-2抑制作用最强;并且随作用时间延长和药物浓度的增高,抑制作用增强。结论:YHL-TA和YHL-2可以明显抑制Tca8113细胞的增殖,并显著降低其NF-kappa B的表达,其中YHL-2作用最明显。这可能是岩黄连抗癌作用机制之一。     

岩黄连总碱对Tca8113中Bcl-2表达活性的影响

目的:研究中草药岩黄连总碱(YHL-TA)对人舌鳞癌细胞Tca8113细胞中Bcl-2表达活性的影响,并进一步探讨其抗癌机制。方法:采用PCR法和Western印迹法检测经YHL-TA作用后的Tca8113细胞中Bcl-2核酸水平以及蛋白水平的表达活性。结果:YHL-TA能促进Tca8113细胞凋亡,并在核酸水平和蛋白水平抑制Bcl-2的表达活性,且随作用时间的延长和药物浓度的增高,抑制作用增强。结论:YHL-TA可以明显促进Tca8113细胞的凋亡,并显著降低其Bcl-2的表达,这可能是岩黄连抗癌作用机制之一。     

岩黄连脱氢卡维丁体外抑制Tca8113增殖及对端粒酶活性影响的研究

目的：研究中草药岩黄连脱氢卡维丁（Tetradehydroscoulerine，YHL－1）对人舌鳞状细胞癌Tca8113细胞增殖的抑制作用，及其对端粒酶活性和端粒酶催化亚基（hTERT）表达的影响，探讨其抗癌机制。方法：采用噻唑蓝比色法（MTT法）检测不同浓度的YHL-1对Tca8113细胞增殖的影响，同时以TRAP—ELISA法检测Tca8113细胞端粒酶活性改变情况，并用Western blotting法半定量检测端粒酶hTERT的表达。结果：YHL-1能明显抑制Tca8113细胞增殖，且随时间延长和药物浓度的增高，抑制作用增强。72h时，0．200、0．100、0．050、0．025 g／LYHL-1组细胞增殖抑制率分别为（64．1±1．5）％、（47．3±3．3）％、（35．6±5．0）％、（31．8±5．87）％。72 h时，0．100、0．050 g／L组端粒酶活性和hTERT蛋白含量均低于空白对照组（P〈0．05）。结论：岩黄连脱氢卡维丁可以明显抑制Tca8113细胞的增殖，并显著降低其端粒酶活性及hTERT的表达，这可能是其抗舌癌的机制之一。     

端粒酶RNA反义寡核苷酸对舌癌细胞系Tca8113细胞增殖和端粒酶活性的影响

目的探讨端粒酶RNA反义寡核苷酸对舌癌细胞系Tca8113细胞增殖和端粒酶活性的影响。方法反义寡核苷酸(AS-ONS)作用于Tca8113细胞;采用MTT法测定AS-ONS对Tca8113细胞的毒性;倒置相差显微镜观察细胞生长状况及形态学改变;透射电镜观察细胞超微结构;测定Tca8113细胞端粒酶活性。结果AS-ONS可明显地抑制Tca8113细胞的生长,其生长抑制随剂量的增加而增强,具有浓度依赖性;AS-ONS对于Tca8113细胞端粒酶活性抑制作用具有时间依赖性。不同浓度AS-ONS作用于Tca8113细胞,其细胞毒性作用较弱;在倒置显微镜下可见AS-ONS组随药物浓度增高,细胞生长出现抑制。透射电镜观察到AS-ONS组作用的细胞细胞膜破损,细胞核内染色质凝聚,边集,并穿过核膜溢入胞质中,胞质部分溶解,线粒体空胞变性;AS-ONS对端粒酶活性抑制效果非常明显。结论反义寡核苷酸AS-ONS可明显地抑制Tca8113细胞的生长,并具有剂量依赖性和时间依赖性;靶向于端粒酶RNA的反义寡核苷酸可明显地抑制Tca8113细胞端粒酶活性,细胞增殖受到明显抑制。     

β-胡萝卜素对人舌鳞癌Tca8113细胞增殖和端粒酶活性的影响

目的 观察β-胡萝卜素对体外培养的人舌鳞癌Tca8113细胞的细胞毒性、细胞周期、细胞凋亡以及端粒酶活性的影响.方法 四唑蓝法检测30、 50、 60和70 μmol/L 4种浓度β-胡萝卜素对Tca8113细胞增殖的抑制作用,流式细胞仪观察β-胡萝卜素处理后Tca8113细胞周期改变及细胞凋亡,端粒重复片段扩增银染法检测细胞端粒酶活性的变化.结果 从50 μmol/L开始,随β-胡萝卜素浓度的提高,对Tca8113细胞增殖抑制作用越来越强.70 μmol/L β-胡萝卜素作用Tca8113细胞4 d后,抑制率超过50%,细胞生长曲线的"S"形趋于平缓.70 μmol/L β-胡萝卜素作用Tca8113细胞3 d后,流式细胞仪检测未出现亚二倍体的"凋亡峰".与空白对照组相比,实验组S期细胞减少约50%(P<0.05),G0/G1期细胞同时显著增加(P<0.05),G2/M期细胞变化无统计学意义(P>0.05).β-胡萝卜素处理Tca8113细胞后,端粒酶活性显著下调.结论 β-胡萝卜素可以通过减少DNA合成,阻滞细胞于G0/G1期,抑制舌癌Tca8113细胞的增殖,抑制效果随浓度的增加而明显.作用机制可能与下调肿瘤细胞端粒酶活性、导致细胞死亡有关.     

乳铁蛋白对口腔癌细胞血管内皮生长因子和碱性成纤维细胞生长因子表达的影响

目的 观察乳铁蛋白对口腔癌细胞株Tca8113细胞中血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)和碱性成纤维细胞生长因子(basic fibroblast growth factor,bFGF)表达的影响.方法 实验分0.006、0.013、0.025、0.050 g/L乳铁蛋白实验组和空白对照组.反转录聚合酶链反应(RT-PCR)和蛋白质印迹法分别检测VEGF、bFGFmRNA和蛋白表达的改变.结果 0.050 g/L乳铁蛋白实验组VEGFmRNA的表达(0.31±0.08)和蛋白的表达(0.68±0.11)均显著低于空白对照组[分别为(1.07±0.13)、(0.97±0.07)],P<0.05;0.050 g/L乳铁蛋白实验组bFGFmRNA的表达(0.27±0.10)和蛋白的表达(0.68±0.07)均显著低于空白对照组[分别为(0.91±0.12)、(1.01±0.09)],P<0.05.结论 乳铁蛋白能抑制口腔癌细胞株Tca8113细胞中VEGF、bFGF的转录和表达,抑制肿瘤的血管发生可能是乳铁蛋白抗口腔癌的机制之一.     

5-氟尿嘧啶对人舌癌细胞的抑制作用和对端粒酶活性的影响

目的 :研究 5 -氟尿嘧啶对人舌癌Tca8113细胞的抑制作用和对端粒酶活性的影响 ,进一步探讨它的抗癌机理。方法 :应用MTT法、双层琼脂培养法、倒置显微镜观察、HE染色观察、透射电镜观察研究细胞用药前后的生长增殖活性和大体及超微结构变化 ,用免疫组化法、TRAP -PCR -ELISA法研究细胞用药前后部分癌基因表达及端粒酶活性的变化。结果 :5 -氟尿嘧啶对人舌癌Tca8113细胞有明显的抑制作用且呈浓度依赖性 ,对细胞大体形态和超微结构有明显的改变 ,下调c -myc、bac - 2的表达 ,抑制端粒酶活性且有一定的时间依赖性 (用 876ng/ml5 -氟尿嘧啶处理舌癌细胞后 12h、2 4h、4 8h、72h、96h端粒酶活性分别为 0 .76± 0 .0 3、0 .4 5± 0 .0 6、0 .32± 0 .0 5、0 .14± 0 .0 2 ,阴性 )。结论 :5 -氟尿嘧啶可以明显抑制Tca8113细胞的增殖活性及其转移复发倾向 ,还可以作用于线粒体 ,在下调c -myc、bac - 2表达的同时抑制端粒酶活性     

三氧化二砷对舌鳞癌细胞凋亡及端粒酶逆转录酶基因的作用

目的　研究三氧化二砷(As2O3)对舌鳞癌细胞株(Tca8113)增殖的影响及对端粒酶逆转录酶基因(hTERT mRNA)的作用,并初步探讨三氧化二砷的作用机制。方法　以舌鳞癌细胞株(Tca8113)为研究对象,采用噻唑蓝 (MTT)、Annexin V/碘化丙锭(PI)染色法检测细胞生长抑制率和细胞凋亡率;采用Western blot检测细胞hTERT蛋白 的表达;采用RT-PCR法检测细胞hTERTmRNA的表达情况。结果　As2O3能够明显抑制Tca8113细胞增殖,诱导 细胞凋亡,并有浓度、时间依赖性。5μmol/L As2O3组72 h细胞生长抑制率为83·40%±7·31%,细胞凋亡率为 26·40%±3·42%。As2O3能抑制hTERTmRNA的表达和翻译,随As2O3作用时间、浓度增加,细胞hTERTmRNA和蛋 白表达减弱,各实验组与对照组比较差异有统计学意义(P<0·05)。结论　As2O3可以明显抑制Tca8113细胞增殖, 诱导舌癌细胞凋亡,并抑制端粒酶催化亚基基因的表达,诱导细胞凋亡和抑制hTERT转录和翻译可能是其作用机 制之一。     

EGCG对舌鳞癌Tca8113细胞增殖与凋亡的实验研究

目的:研究表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)对体外培养的人舌鳞癌Tca8113细胞增殖抑制及诱导凋亡的作用。方法:采用CCK-8法检测不同浓度的EGCG(0、10、20、40、80mg/L)对Tca8113细胞的体外增殖抑制作用;采用流式细胞术及DAPI荧光染色法检测EGCG对Tca8113细胞凋亡的影响。结果:CCK-8法检测显示EGCG对Tca8113细胞有明显增殖抑制作用并呈现时间及浓度依赖性(P<0.01);流式细胞仪结果显示,经10mg/L EGCG处理的Tca8113细胞凋亡率还不能认为与对照组有区别,其余EGCG处理组细胞凋亡率均高于对照组并呈现时间及浓度依赖性(P<0.01);DAPI染色在免疫荧光显微镜下可见典型的细胞核皱缩及凋亡小体等。结论:EGCG对Tca8113细胞具有明显的增殖抑制及诱导凋亡作用,且呈现时间及浓度依赖性。     

粘着斑激酶对Tca8113舌鳞癌细胞生物学特性的影响

目的研究粘着斑激酶（FAK）在Tca8113舌鳞癌细胞中的表达及对其生长、粘附、侵袭转移能力的影响。方法采用FAK寡核苷酸转染的方法处理Tca8113舌鳞癌细胞,采用逆转录- 聚合酶链反应（RT- PCR）测定FAKmRNA水平的变化,间接免疫荧光方法检测胞浆FAK蛋白的表达,以Transwell小室和冲刷实验的方法计数细胞,测定细胞的粘附和侵袭能力的变化,MTT法检测细胞的生长抑制情况。结果反义FAK寡核苷酸转染后,Tca8113细胞侵袭、粘附、趋化运动能力均显著降低。转染48 h后,FAKmRNA和蛋白水平明显下降（P<0.05）。结论FAK对Tca8113细胞的增殖、存活、粘附及侵袭具有重要作用。     

替尼泊苷诱导Tca8113细胞凋亡及细胞周期阻滞的实验观察

目的：检测替尼泊苷(teniposide,VM-26)的体外抗肿瘤增殖效果并探索其作用机制。方法：以不同浓度的VM-26体外作用Tca8113细胞,应用MTT方法、流式细胞仪、透射电镜和荧光染色等分别检测细胞的生长抑制率、凋亡率及细胞周期分布。使用SAS6．12软件进行单因素方差分析。结果：VM-26和CDDP对Tca8113细胞的半数抑制浓度分别为0．35μg／ml和1．1μg／ml。透射电镜观察细胞形态发生典型的凋亡表现,5.0μg/ml和0．15μg／ml的VM-26作用72h,细胞凋亡率分别为81．01％和17．38％,而细胞周期则分别被阻滞在S期和G2／M期。结论：VM-26可以显著诱导口腔鳞癌细胞凋亡并抑制细胞生长,不同剂量的VM-26对口腔鳞癌细胞周期阻滞的阶段不同。