过氧化物酶体增殖物活化受体γ激动剂抑制血管紧张素Ⅱ诱导的肾小球系膜细胞单核细胞趋化蛋白-1的表达

目的探讨氧化应激对血管紧张素Ⅱ（AngⅡ）诱导的肾小球系膜细胞单核细胞趋化蛋白-1（MCP—1）表达的影响，观察过氧化物酶体增殖物活化受体γ（PPARγ）激动剂对AngⅡ诱导的MCP—1表达的抑制作用。方法体外培养人肾小球系膜细胞。分为正常对照组、不同水平AngⅡ（1、10、100nmol／L）刺激组及乙酰半胱氨酸（NAC，10μmol／L）和罗格列酮（10μmol／L）预处理30min后加入AngⅡ（100nmol／L）刺激组。应用实时定量聚合酶链反应（PCR）检测各组MCP—1的表达，荧光探针2′，7′-二氯二氢荧光素乙酰乙酸（DCFDA）检测细胞内活性氧的变化。结果1．AngⅡ呈剂量依赖性的诱导肾小球系膜细胞MCP-1表达，1、10和100nmol／LAngⅡ刺激12h后MCP—1表达是对照组的1．80、2．51和3．57倍。2．AngⅡ可呈剂量依赖性诱导肾小球系膜细胞活性氧（ROS）的产生，1、10和100nmol／LAngⅡ刺激60min，ROS产生分别是对照组的1．82、2．92和4．08倍。3．Losartan完全阻断了AngⅡ诱导的ROS产生，而PD123319对AngⅡ诱导的ROS产生无抑制作用。4．抗氧化剂NAC显著抑制AngⅡ诱导的肾小球系膜细胞MCP—1表达。5．PPARγ受体激动剂罗格列酮10μmoL／L可显著抑制AngⅡ诱导的系膜细胞ROS产生和MCP-1表达。结论AngⅡ通过诱导氧化应激促进肾小球系膜细胞MCP-1表达；PPARγ／激动剂通过抑制氧化应激阻断AngⅡ诱导的MCP—1表达。     

过氧化物酶体增殖物活化受体γ激动剂减轻血管紧张素Ⅱ诱导的肾小球足细胞损伤作用

目的1.探讨氧化应激在血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)诱导的蛋白尿和肾小球足细胞损伤中的作用;2.观察过氧化物酶体增殖物活化受体γ(PPARγ)激动剂罗格列酮对AngⅡ诱导的蛋白尿和肾小球足细胞损伤的抑制作用。方法雄性C57BL/6小鼠24只随机分为:健康对照组、AngⅡ模型组、Tempol治疗组和罗格列酮治疗组。尿8-isoprostane和清蛋白采用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测;应用透射电镜观察肾小球足细胞损伤;实时定量聚合酶链式反应(RT-PCR)检测肾组织中nephrin和podocin表达。结果1.AngⅡ灌注后尿中8-isoprostane和清蛋白排泄分别是健康对照组的5.45倍和16.65倍;肾小球足细胞出现广泛足突融合;肾组织中nephrin和podocin表达显著降低,分别是健康对照组的56%和49%。2.Tempol治疗后尿8-isoporstane和清蛋白排泄分别降低68%和77%;肾小球足细胞损伤明显减轻;肾组织中nephrin和podocin表达显著增加,分别是模型组的1.43倍和1.51倍。3.罗格列酮治疗后尿中8-isoprostane和清蛋白排泄分别降低57%和74%;AngⅡ诱导的肾小球足细胞损伤在罗格列酮治疗后明显好转;肾组织中nephrin和podocin表达亦显著增加,是模型组的2.05倍和1.58倍。结论AngⅡ通过诱导氧化应激而导致蛋白尿和肾小球足细胞损伤;PPARγ激动剂通过抑制氧化应激阻断AngⅡ诱导的蛋白尿和肾小球足细胞损伤。     

过氧化物酶体增殖物活化受体γ激动剂对肾病大鼠肾组织nephrin表达的调控

目的探讨过氧化物酶体增殖物活化受体γ(PPARγ)对nephrin表达的调控作用。方法建立大鼠氨基核苷嘌呤霉素(PAN)肾病模型,应用实时定量PCR和免疫印迹法检测肾病大鼠不同时间点肾组织中PPARγ和nephrin mRNA和蛋白表达,并观察PPAR-γ激动剂罗格列酮大鼠肾组织中nephrin表达的影响。体外培养HEK293细胞,转染含荧光素酶报告基因的nephrin启动子区,观察罗格列酮对nephrin基因转录活性的影响。结果PAN肾病模型d1 PPARγ、nephrin mRNA和蛋白即出现下降,d3出现明显下降,d7下降到最低点,PPARγ与nephrin表达呈显著正相关,而PPARγ和nephrin蛋白表达与24 h尿蛋白排泄呈负相关;罗格列酮治疗后大鼠尿蛋白排泄明显下降,肾组织中nephrin表达回升;罗格列酮呈时间依赖性诱导nephrin基因的转录活性,3 h达高峰,其后荧光素酶活性有所下降,但刺激24 h仍显著高于对照组。结论nephrin表达受PPARγ调控,PPARγ激动剂通过诱导nephrin表达而减轻蛋白尿。     

小儿免疫及原发性免疫缺陷病

993427醉脉注射免疫球蛋白对新生儿脐血单个核细胞活化增殖的形响/李庆生…//中华微生物学和免疫学杂志一1999,19(1)一55一56 运用光学显徽镜及3H-TdR接入法观察IVIG对脐血单个核细胞(出MC)形态学的影响及对出MC增殖的调节。结果:IVIG使出MC的母细胞化减少,细胞代谢的速度减慢。IVIG使出MC的3H-TdR掺人率下降更加明显地反映了rVIG对出MC增殖的抑制。ILZ或ILZ联合IL.4可以拮抗IvIG对出MC增殖的抑制。表2参5(原文摘要) 993428毛细支气苍炎细胞因子与发病机理的研究/符 州…产免疫学杂志一2999,15(i)一38一40 对30例不同病毒…     

过氧化物酶体增殖物激活受体γ对哮喘小鼠气道平滑肌细胞增殖的影响

目的：探讨过氧化物酶体增殖物激活受体γ（PPARγ）激动剂罗格列酮对支气管哮喘小鼠肺组织细胞周期蛋白D1（CyclinD1）的表达及气道平滑肌细胞（ASMC）增殖的影响。方法：将30只清洁级BALA/c小鼠随机分为对照组、哮喘组和罗格列酮干预组,每组10只。卵清蛋白（OVA）致敏和激发建立哮喘小鼠模型,干预组在每次激发前1 h通过灌胃给予小鼠罗格列酮（5 mg/kg）进行干预,对照组小鼠以生理盐水代替OVA致敏和激发。显微镜下计数小鼠支气管肺泡灌洗液（BLAF）中的白细胞及嗜酸性粒细胞（EOS）;苏木精-伊红染色观察气道结构改变;免疫组化染色检测CyclinD1蛋白的表达水平;逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）法检测CyclinD1 mRNA表达变化;图像分析软件测定管腔基底膜周长（Pbm）、气管壁总面积（WAt）、气道平滑肌面积（WAm）和ASMC核数（N）,结果：以Pbm标准化。结果与对照组相比,哮喘组小鼠BALF中白细胞总数及EOS百分比显著增加,CyclinD1 mRNA和蛋白表达亦显著增高,而干预组可降低上述改变,差异有统计学意义（P<0.05）。此外,与对照组相比,哮喘组小鼠WAt/Pbm、WAm/Pbm和N/Pbm显著增加,而罗格列酮干预可减少上述比值,差异有统计学意义（P<0.05）。结论：罗格列酮可通过抑制ASMC的增殖,延缓气道重塑的进程,从而预防和治疗慢性哮喘。     

川芎嗪对血管紧张素Ⅱ诱导新生大鼠心肌细胞血小板源生长因子-β受体与细胞外信号调节激酶表达的影响

目的 观察川芎嗪对血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)诱导的新生大鼠心肌细胞血小板源生长因子-β(PDGF-β)受体、细胞外信号调节激酶 (ERK1/2) 表达的影响,探讨其治疗心肌肥大的作用机制.方法 体外培养新生大鼠心肌细胞,分为AngⅡ组(以 10-7 mol/L AngⅡ刺激)、川芎嗪组(10-7 mol/L AngⅡ加10 mg/L川芎嗪刺激)及对照组(正常培养的心肌细胞).3组分别培养24 h,收集心肌细胞,采用[3H]-亮氨酸掺入法测定心肌细胞蛋白合成速率,免疫印迹法测定其PDGF-β受体、ERK1/2表达.应用SPSS 11.0软件进行统计学分析.结果 3组间心肌细胞蛋白合成速率比较有显著性差异(F=20.71 P<0.01),其中AngⅡ组较对照组显著增加(P<0.01),川芎嗪组较AngⅡ组显著降低(P<0.01); AngⅡ组心肌细胞PDGF-β受体表达水平较对照组显著增加(P<0.01),川芎嗪组心肌细胞PDGF-β受体表达显著低于AngⅡ组 (P<0.05);AngⅡ组心肌细胞ERK1/2表达显著高于对照组(P<0.01),川芎嗪处理后AngⅡ诱导的心肌细胞ERK1/2表达较AngⅡ组显著降低 (P<0.01).结论 川芎嗪可抑制AngⅡ诱导的心肌细胞PDGF-β受体与ERK1/2的表达,这可能是川芎嗪治疗心肌肥大的重要机制之一.     

黄芪对心肌成纤维细胞增殖及分泌转化生长因子-β1的影响#br#

目的观察黄芪注射液对血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)诱导的心肌成纤维细胞分泌转化生长因子(TGF-β1)的影响。方法体外培养乳鼠心脏成纤维细胞并制成单细胞悬液,分为对照组,黄芪低、中、高剂量组,AngⅡ组,AngⅡ联合黄芪低、中、高剂量组,分别加入50、100、200 mg/ml黄芪注射液,以及10-7 mol/L AngⅡ,共同培育2 d。用四甲基偶氮哇盐法测定各组细胞增殖情况,ELISA法测定培养上清TGF-β1分泌情况。结果各组间细胞增殖率差异有统计学意义(F=71.84,P=0.000);AngⅡ组的细胞增殖率明显升高,与其余各组比较均有统计学意义(P均<0.05);AngⅡ联合黄芪后,随着黄芪剂量的逐渐增加,细胞增殖率逐渐下降,差异均有统计学意义(P<0.05)。各组间TGF-β1分泌量差异也有统计学意义(F=786.81,P=0.000);黄芪低、中、高剂量组的TGF-β1分泌量均低于对照组,差异有统计学意义(P均<0.05);AngⅡ组的TGF-β1分泌量为各组中最高,与其余各组比较均有统计学意义(P均<0.05);AngⅡ联合黄芪后,随着黄芪剂量的逐渐增加,TGF-β1分泌量逐渐下降,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论 AngⅡ可刺激心肌成纤维细胞增殖,促进心肌成纤维细胞分泌TGF-β1,而黄芪注射液可明显抑制AngⅡ诱导心肌成纤维细胞的增殖作用,并且减少心肌成纤维细胞分泌TGF-β1。     

PI3K抑制剂LY294002对鼠前脂肪细胞分化和C/EBPα及PPARγ表达的影响

目的：研究磷脂酰肌醇激酶（PI3K）抑制剂LY294002对小鼠前脂肪细胞分化和CCAAT增强子结合蛋白α（C/EBPα）及过氧化物酶体增殖物激活受体γ（PPARγ）表达的影响,探讨胰岛素受体底物（IRSs）/PI3K信号通路在前脂肪细胞分化中的作用。方法：小鼠3T3-L1细胞分为实验组和对照组,实验组加入LY294002（25 μmol/L）,对照组加入同体积DMSO。应用0.5 mmol/L 3-异丁基-1-甲基黄嘌呤(IBMX)、10-6 mol/L地塞米松和5 μg/mL胰岛素诱导两组前脂肪细胞分化,在培养的0 d、2 d、4 d、8 d分别收集细胞,实时PCR法及Western blot法检测细胞中C/EBPα和PPARγ表达水平。培养8 d油红O染色,观察细胞分化情况。结果：小鼠3T3-L1细胞基础状态下两组C/EBPα及PPARγ表达差异无统计学意义（P＞0.05）;诱导分化时实验组C/EBPα及PPARγ表达低于对照组（分别P＜0.05,P＜0.01）。油红O染色示实验组细胞无明显脂滴。结论：PI3K抑制剂LY294002能抑制小鼠前脂肪细胞分化及C/EBPα和PPARγ的表达,提示IRSs/PI3K信号通路可通过调节PPARγ和C/EBPα的表达在3T3-L1前脂肪细胞的分化中发挥重要作用。     

脂氧合酶抑制剂NDGA对人神经母细胞瘤SK-N-SH细胞生物学特性的影响

目的探讨脂氧合酶抑制剂去甲二氢愈创木酸(nordihydroguaiaretic acid,NDGA)对人神经母细胞瘤SK-N-SH细胞生长的影响。方法采用MTT比色法、群体倍增时间、HE染色、TUNEL染色法等观察和检测NDGA对人神经母细胞瘤SK-N-SH细胞增殖与凋亡的影响。结果NDGA(5～100μmol/L)可显著抑制SK-N-SH细胞增殖,并诱导其凋亡,其作用呈剂量和时间依赖性。结论脂氧合酶抑制剂NDGA可于体外抑制人神经母细胞瘤细胞的增殖,并诱导其凋亡。     

胰岛素受体底物1基因沉默对3T3-L1细胞CCAAT增强子结合蛋白α、过氧化物酶体增殖物激活受体γ表达的影响

目的研究胰岛素受体底物1(IRS-1)沉默对3T3-L1前脂肪细胞分化关键分子CCAAT增强子结合蛋白α(C/EBPα)、过氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPARγ)mRNA及蛋白表达的影响,并观察IRS-1沉默后前脂肪细胞分化为成熟脂肪细胞能力的改变,探讨胰岛素受体底物(IRSs)是否作为C/EBPα、PPARγ的上游调节信号在前脂肪细胞分化中起到重要的调节作用。方法合成4条IRS-1 shRNA,Western blotting筛选出沉默效率最高的1条。3T3-L1前脂肪细胞分为IRS-1沉默组和对照组。IRS-1沉默组细胞用沉默效率最高的IRS-1 shRNA质粒转染3T3-L1前脂肪细胞,沉默细胞中的IRS-1分子;对照组采用无意义IRS-1 shRNA质粒转染3T3-L1前脂肪细胞。转染24 h后诱导其分化成熟,分化72 h后检测促进前脂肪细胞分化的关键分子C/EBPα、PPARγ的表达。继续诱导分化至第7天,油红O染色观察IRS-1沉默后前脂肪细胞分化为成熟脂肪细胞的比例,检测其分化能力的改变。结果与对照组相比,IRS-1沉默组在诱导分化72 h后,Real-time PCR结果显示3T3-L1前脂肪细胞中C/EBPαmRNA、PPARγmRNA表达明显下降(Pa<0.05),Western blotting结果显示C/EBPα、PPARγ蛋白水平也同样显著下降(Pa<0.05);细胞继续分化至第7天,油红O染色显示,IRS-1沉默组前脂肪细胞分化成熟的比例与对照组比较显著降低。结论胰岛素可能通过IRS-1刺激C/EBPα、PPARγ的表达促进前脂肪组织的分化。     

孟鲁斯特对人支气管上皮细胞黏液蛋白分泌的影响

目的探讨孟鲁斯特对脂多糖(LPS)诱导的人支气管上皮细胞黏液蛋白分泌的影响。方法体外分离鉴定人原代支气管上皮细胞,LPS以1μg/ml剂量诱导细胞炎症反应,孟鲁斯特(50、20、10μmol/L)进行干预治疗,酶联免疫法(ELISA)检测分泌细胞上清黏蛋白5AC(MUC5AC)水平变化,并采用定量逆转录PCR(RT-PCR)、免疫印迹(Western-blot)检测MUC5AC m RNA和蛋白表达情况;2’,7’-二氯荧光黄双乙酸盐(DCFH-DA)荧光探针检测活性氧(ROS)变化;Western-blot检测孟鲁斯特干预治疗前后磷酸化细胞核转录因子κB(p-NF-κB)、磷酸化NF-κB抑制蛋白(p-IκBα)、磷酸化细胞外调节激酶1,2(ERK1/2)活化情况。结果孟鲁斯特以剂量依赖性降低LPS诱导的人支气管上皮细胞内MUC5AC mRNA水平和蛋白水平,抑制ROS产生,抑制NF-κB/p-IκBα、ERK活化。结论孟鲁斯特在体外能抑制MUC5AC的产生,其机制可能与抑制NF-κB、EKR的激活有关。     

水飞蓟宾-磷脂酰胆碱复合物对小鼠巨噬细胞一氧化氮及活性氧生成的抑制作用

目的研究水飞蓟宾-磷脂酰胆碱复合物(SPC)对过氧化氢(H2O2)诱导小鼠巨噬细胞内一氧化氮(NO)及活性氧(ROS)生成的影响。方法健康6～8周龄昆明种小鼠,腹腔提取巨噬细胞,培养成活后调细胞水平至2×108L-1,空白对照组加入等量的9g/L盐水,H2O2组加入H2O2,使其终质量浓度为1mmol/L刺激细胞30min,SPC干预组加入不同水平SPC干预细胞2h后加入终质量浓度为1mmol/LH2O2刺激30min。免疫细胞化学法观察诱导型一氧化氮合酶(iNOS)的表达,Griess法测定上清液NO的生成量,荧光探针DCFH-DA法测定巨噬细胞内ROS生成。结果H2O2组上清液NO2-水平(相当于NO累积生成量)显著高于对照组(P<0.01),不同水平SPC干预组NO2-水平降低,即NO表达减少,且呈质量浓度依赖性降低(P<0.05)。各组细胞质内iNOS表达同上清液NO的生成量呈现相应的变化趋势。H2O2组小鼠巨噬细胞内ROS显著升高,与对照组比较有显著性差异(P<0.01),不同水平SPC预先干预2h后,ROS生成量呈质量浓度依赖性降低(P<0.01)。结论SPC可能是通过抑制iNOS表达来抑制H2O2诱导的小鼠巨噬细胞内NO的生成,另外SPC也可抑制小鼠巨噬细胞内ROS生成,从而减轻组织细胞的氧化损伤。     

原发性肾病综合征患儿血淋巴细胞凋亡、增殖及地塞米松对其作用

目的　探讨原发性肾病综合征 (PNS)患儿外周血淋巴细胞 (PBLs)凋亡、增殖及地塞米松 (Dex)对其作用。方法　将PNS分为微小病变组 (MCNS)和非微小病变组 (NMCNS)。碘化丙啶染色法测定PBLs凋亡率 ,观察空白组、Dex处理组和经PHA刺激后Dex处理组细胞凋亡情况 ;3 H 胸腺嘧啶 (3 H TdR)掺入法观察不同浓度Dex对PBLs增殖影响。结果　MCNS空白组PBLs凋亡率降低 ,Dex组凋亡率高于空白组 ;MCNS患儿PBLs对体外PHA刺激的增殖率降低 ,而空白组3 H TdR掺入量却增高。NMCNS与正常儿童均无明显差异。不同浓度Dex(10 -9～ 10 -6mol/L)呈剂量依赖性抑制PNS及正常儿童PHA刺激PBLs增殖。结论　MCNS组PBLs部分活化增殖 ,凋亡下调 ,可能参与MCNS的发病机制 ,而Dex可诱导其凋亡上调并抑制增殖 ,可能是糖皮质激素(GC)对PNS作用机制之一     

苦参碱对脂多糖诱导的大鼠系膜细胞增殖和分泌细胞外基质的影响

目的了解不同浓度苦参碱（Matrine,Ma）对脂多糖（LPS）诱导的大鼠系膜细胞（MC）增殖及分泌细胞外基质（ECM）的影响,探讨Ma有无抗肾小球硬化的药理作用。方法采用体外培养MC,分为空白组、LPS组及Ma处理组（LPS10μg/ml＋Ma20、40、80、160、320、640μg/ml）,继续培养24、48、72h,以四甲基偶氮唑蓝法（MTT）检测MC的增殖情况,以台盘蓝法检测Ma对MC的细胞毒性作用,以放射免疫分析法（RIA）检测MC分泌型胶原（Col-Ⅳ）与层粘连蛋白（LN）的情况。结果经Ma处理24、48、72h后,LPS组MC增殖较空白组显著增加（P〈0.01）,Ma组与LPS组比较,MC增殖呈显著抑制（P均〈0.01）,呈时间-剂量依赖效应（r=0.826,P〈0.01）。Ma在20～640μg/ml浓度间对MC无明显细胞毒作用。Ma处理48h后,LPS组Col-Ⅳ与LN的分泌较空白组显著增加（P均〈0.01）;Ma组对Col-Ⅳ与LN分泌的抑制作用较LPS组显著（P均〈0.01）,并呈剂量依赖效应（r=-0.794,-0.851,P均〈0.01）。结论Ma可明显抑制LPS诱导的MC增殖和分泌细胞外基质,无明显细胞毒作用,并呈剂量依赖效应,初步认为Ma在细胞水平上有抗肾小球硬化的药理作用。     

血管紧张素Ⅱ上调大鼠肾小球系膜细胞整合素连接激酶的表达

目的 探讨血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)对大鼠肾小球系膜细胞整合素连接激酶(ILK)表达的影响.方法 体外分离、培养SD大鼠肾小球系膜细胞,予10-7mol/L AngⅡ刺激细胞(O、12、24、48、72 h),检测各时间点细胞ILK蛋白质的表达水平;予不同水平(0、10-11、10-9、10-7、10-5mol/L)AngⅡ刺激细胞48 h,检测ILK蛋白质的表达水平.采用SPSS 10.0软件进行统计学分析.结果 1.分离、培养的SD大鼠肾小球系膜细胞结蛋白染色阳性;2.用lO-7mol/L AngⅡ干预肾小球系膜细胞,12 h后大鼠ILK的蛋白质表达水平开始升高,48 h达到高峰值,0、12、24、48、72 h大鼠ILK蛋白质表达水平分别为0.18±0.02、0.37±0.07、0.90 ±O.10、1.73±0.12、及1.72±0.13(F=166.78 P相似文献   

siRNA阻断肌成纤维细胞内源性Smad3表达的研究

目的观察Smad3基因的RNA干扰(RNAi)对转化生长因子β1(TGF-β1)诱导的小鼠肌成纤维细胞(C2C12)的Smad3表达。方法实验分为实验组、内对照组和空白对照组。用不同浓度TGF-β1干预C2C12细胞,利用体外转录合成的siRNA-Smad3,以阻断Smad3基因表达。用Westernblot检测Smad3和磷酸化的Smad3。结果5ng/mlTGF-β1干预C2C12细胞,促进Smad3磷酸化。0.5h开始诱导Smad3磷酸化,5h达高峰。TGF-β1干预C2C12细胞,诱导Smad3磷酸化呈剂量依赖性。siRNA-Smad3转染C2C12细胞24h,Smad3表达逐渐被抑制到无表达。siRNA-Smad3转染C2C12细胞24h后,加5ng/mlTGF-β1干预,Smad3无表达。结论TGF-β1促进C2C12细胞Smad3磷酸化呈剂量与时间依赖性;siRNA阻断C2C12细胞Smad3表达与Smad3磷酸化。     

丹参酮ⅡA抑制PI3K/Akt/mTOR信号通路促进人白血病NB4细胞株自噬的实验研究

目的探讨丹参酮ⅡA(TanⅡA)体外对人急性早幼粒细胞白血病(APL) NB4细胞株自噬的影响及其信号通路研究。方法 0、4、8、16μg/m L TanⅡA作用于人白血病NB4细胞24h、48h、72h后,以噻唑蓝(MTT)比色法检测NB4细胞的增殖活性,流式细胞仪检测细胞自噬率,Western印迹检测自噬相关蛋白P62及磷酸肌醇3激酶-I(PI3K-I)、蛋白激酶B(Akt)、雷帕霉素靶蛋白(mTOR)的表达水平。结果 TanⅡA呈剂量和时间依赖性抑制NB4细胞增殖(P <0. 05)。TanⅡA可诱导NB4细胞自噬形成自噬流,并呈一定浓度和时间依赖性,各组间差异有显著性(P<0. 05)。Western印迹显示,TanⅡA作用NB4细胞48h后,细胞自噬相关蛋白P62水平明显降低,与对照组相比差异具有显著性(P <0. 05);而p-PI3K-I、p-Akt、p-mTOR蛋白表达相较对照组明显下降,差异有显著性(P值均<0. 05)。结论 TanⅡA可靶向抑制PI3K/Akt/mTOR信号通路,增强NB4细胞自噬活性、诱发自噬性死亡,从而发挥抗APL效应。     

Lipoxin A4受体样蛋白基因转染增强Lipoxin A4拮抗结缔组织生长因子诱导的人肺成纤维细胞增殖

目的克隆Lipoxin A4受体样蛋白(LRLP)基因,并转染人肺成纤维细胞(HLF).观察其增强Lipoxin A4拮抗结缔组织生长因子(CTGF)诱导的细胞增殖作用.方法构建LRLP与绿色荧光蛋白(GFP)融合基因的真核表达载体pEGFP/LRLP,并转染HLF,用G418筛选稳定表达融合基因的细胞克隆株HLF/LRLP.用10 nmol/L Lipoxin A4预处理HLF和HLF/LRLP细胞30 min后,加入1 μg/mlCTGF诱导细胞增殖.MTT法检测细胞增殖抑制率.流式细胞术检测细胞周期.Western blot检测细胞周期蛋白D1的蛋白表达量.凝胶迁移率改变试验检测信号转导子和转录激活子3(STAT3)的DNA结合力.结果 (1)成功建立稳定表达LRLP和GFP融合基因的HLF/LRLP细胞株.(2) 1 μg/ml CTGF刺激24 h,可显著诱导HLF增殖.Lipoxin A4预处理对其有抑制作用,10 nmol/L Lipoxin A4对HLF/LRLP的细胞增殖抑制率显著高于对HLF细胞的增殖抑制率(P<0.05).(3)与未转染和空载体转染的HLF相比,10 nmol/L Lipoxin A4诱导更多的HLF/LRLP细胞生长停滞在G0/G1期(P<0.05).(4) 10 nmol/L Lipoxin A4拮抗CTGF诱导的细胞周期蛋白D1表达上调,并且对HLF/LRLP细胞的拮抗作用强于对HLF细胞(P<0.05).(5) 10 nmol/L Lipoxin A4拮抗CTGF诱导的STAT3 DNA结合力上调,并且对HLF/LRLP细胞的拮抗作用强于对HLF细胞(P<0.05).结论 LRLP基因转染,增强Lipoxin A4 拮抗CTGF诱导的人肺成纤维细胞增殖.     

多不饱和脂肪酸对3T3-L1细胞分化过程中脂肪聚积的影响

目的 体外探讨n-6和n-3二类多不饱和脂肪酸(PUFAs)对脂肪细胞分化过程中脂肪聚集的影响及其机制.方法 对313-L1细胞进行体外诱导分化实验,使用n-6 PUFAs和n-3 PUFAs对细胞进行干预.在细胞被诱导分化的第5天,在培养基中分别加入油酸(OA)、花生四烯酸(AA)、二十碳五烯酸(EPA)和二十二碳六烯酸(DHA)(0.125 mmol/L)培养12 h,以牛血清清蛋白作为对照;然后应用油红O染色观察细胞形态学变化.采用甘油磷酸氧化酶-过氧化物酶-4-氨基安替比林和酚法(GPO-PAP)对细胞内和培养基中三酰甘油(TG)水平进行测定;过氧化物酶增长因子活化受体γ(PPARγ)表达的测定应用EIJSA方法.结果 显微镜下观察显示,与对照组比较,在培养基中分别加入AA、EPA和DHA后细胞内脂滴颗粒减少,细胞和培养基中TG水平均有所降低(F=3.96,4.34 Pa＜0.05),但3组间未见显著性差异;而在培养基中加入OA后,细胞内脂滴数量和TG水平无显著性变化.同时,脂肪酸干预后细胞培养基中PPARγ水平在OA、AA、EPA和DHA组均显著高于对照组(F=9.56 P＜0.01);进一步分析显示DHA组PPARγ表达量显著低于OA、AA和EPA组(F=6.87 P＜0.01).结论 n-6与n-3 PUFAs具有同样的抑制3T3-L1细胞脂肪聚积的作用,但DHA对PPARγ表达的影响作用明显小于其他脂肪酸.     

鼠尾草酸增加1,25(OH)2D3诱导HL-60细胞分化及其机制研究

目的：已证实1, 25(OH)2D3可以诱导HL-60细胞向成熟单核细胞分化,但其不足之处是高钙血症和形成耐药株。该实验应用鼠尾草酸（CA）联合1, 25(OH)2D3研究对HL-60细胞分化的影响及引起细胞内活性氧（ROS）水平和细胞内钙离子浓度的改变。方法：应用鼠尾草酸,1,25（OH）2D3单独和联合应用处理HL-60细胞,共分为5组：空白对照组;低浓度1,25（OH）2D3（1 nmol/L）组、鼠尾草酸组;联合处理组（10 μmol/L鼠尾草酸和1 nmol/L 1,25（OH）2D3）;高浓度1,25（OH）2D3（100 nmol/L）组。每24 h监测1次,通过四唑氮蓝(MTT)法观察细胞生长,共72 h;收集处理后72 h的HL-60细胞,通过光学显微镜观察细胞形态,用流式细胞仪（FCM）检测不同处理组细胞周期及单核细胞分化标记CD14的表达,ROS和细胞内钙离子浓度。结果：72 h后,联合处理组HL-60细胞与空白对照组相比,细胞增殖明显受抑制（Ab= 0.560±0.020; P<0.01）,细胞形态具有成熟单核细胞特征,CD14的表达率升高（57.62%;P<0.01）,G0/G1 期细胞显著增多, ROS水平下降［（52.67±10.76）%,P＜0.01］;联合处理组细胞内钙离子水平同空白对照组比较差异无显著性（115.64±17.74 nmol/L,P>0.05）,但与高浓度1,25（OH）2D3组相比细胞内钙离子水平明显下降(P<0.01)。结论：鼠尾草酸可增强1,25（OH）2D3对HL-60细胞的诱导分化、增强抑制HL-60细胞增殖作用,细胞阻滞于G0/G1期,细胞内活性氧水平降低,这可能与细胞的诱导分化机制有关,且这一联合作用不增高细胞内钙离子水平。