LSAB法在检测恶性肿瘤抑癌基因p53蛋白表达中的应用与体会

ＬＳＡＢ法在检测恶性肿瘤抑癌基因ｐ５３蛋白表达中的应用与体会牛兆山ｐ５３基因是一种重要的抑癌基因，ｐ５３蛋白的异常表达与恶性肿瘤的发生、发展有关。随着对检测ｐ５３蛋白技术手段的不断研究，方法将日趋完善。目前常见的检测法有ＲＦＬＰ、ＰＣＲ及免疫组化技术...     

调控p53蛋白功能的分子机理

ｐ５３是一种抑癌基因，其编码产物野生型ｐ５３蛋白在维持细胞正常生长及抑制恶性增殖过程中起重要作用。ｐ５３蛋白功能的丧失和多种肿瘤有关。参与调控ｐ５３蛋白功能的因素很多，本文着重从基因组水平、转录后水平、翻译后调节及ｐ５３蛋白和其它基因产物的相互作用等几个方面加以综述，以期进一步揭示调控ｐ５３蛋白功能的分子机制     

p53抑癌基因与肿瘤病人的预后

正常野生型ｐ５３基因表达的蛋白具有调节细胞周期、诱导受损伤细胞凋亡的功能，ｐ５３抑癌基因与肿瘤病人预后的关系是肿瘤生物学行为研究的热点之一。通过总结近年来关于ｐ５３抑癌基因与肿瘤病人预后方面的文献，分析结论不一致或相互矛盾的原因，指出研究方法的差异，阐述了ｐ５３抑癌基因作为肿瘤病人预后因子时与经典的ＴＮＭ分期系统之间的关系，对临床实践中合理应用这一指标具有重要的参考意义     

p53蛋白结构和生物功能

ｐ５３具有抑癌和致癌的两种作用，关键在于生物功能得失。野生型ｐ５３限制细胞增殖，与细胞凋亡相关，能与病毒癌蛋白结合，抑制转化细胞和癌细胞的恶性表型。肿瘤细胞的ｐ５３基因点突变、缺失、重排或插入。突变型ｐ５３基因与其它癌基因合作转化细胞，而野生型ｐ５３基因能够抑制细胞转化。     

p53、c-erbB1、c-myc和p16基因蛋白产物在人脑胶质瘤中的表达

目的为了探明癌基因ｃ－ｅｒｂＢ１、ｃ－ｍｙｃ，抑癌基因ｐ５３和ｐ１６在胶质瘤发生发展中的作用，以及上述基因蛋白检测对胶质瘤诊断、分级的临床意义。方法用免疫组化ＡＢＣ法检测４种癌基因蛋白产物在６５例人脑胶质瘤中的表达，并分析与胶质瘤病理分级间的关系。结果ｐ５３、ｃ－ｅｒｂＢ１、ｃ－ｍｙｃ过度表达率随胶质瘤级别升高而逐渐升高，前两者在胶质瘤良性组和高度恶性组间差异有显著性（Ｐ＜０．０５）；ｐ１６在高度恶性组表达缺失率高于其它组，但差异不显著；４种癌基因、抑癌基因在胶质瘤中有协同表达。结论上述４种基因在胶质瘤的形成和发展中发挥着不同程度的作用，对ｐ５３、ｃ－ｅｒｂＢ１基因蛋白的检测或多种癌基因蛋白联合检测，对胶质瘤的病理分级和预后判断有积极的意义。     

p53蛋白结构和生物功能

ｐ５３具有抑癌和致癌的两种作用，关键在于生物功能得失。野生型ｐ５３限制细胞增殖，与细胞凋亡相关能与病毒癌蛋白结合，抑制转化细胞和癌细胞的恶性表型。肿瘤细胞的ｐ５３基因点突变、缺失、重排或插入。突变型Ｐ５３基因与其它癌基因合作转化细胞，而野生型ｐ５３基因能够抑制细胞转化。     

p53基因蛋白在大肠腺癌中表达的病理学意义

ｐ５３基因蛋白在大肠腺癌中表达的病理学意义＊１季晨阳２季丹３ＤｕｎｃａｎＲＳｍｉｔｈ３Ｈａｋ－ＳｕＧｏｈ野生型ｐ５３基因蛋白是抑癌基因蛋白，可以调控细胞生长、分化和ＤＮＡ修复并促进凋亡〔１，２〕。在发生肿瘤时，ｐ５３基因失活（突变、杂合性丢失），不但...     

大肠腺癌p53基因cDNA突变与突变型p53基因蛋白表达的相互关系和意义

目的：探讨大肠腺癌突变型ｐ５３基因蛋白表达与ｐ５３基因ｃＤＮＡ突变间的相互关系和意义。方法：对１００例新鲜大肠腺癌组织采用ＰＡｂ２４０单克隆抗体免疫组织化学染色（ＬＳＡＢ法）检测突变型ｐ５３基因蛋白表达、ＲＴ－ＰＣＲ－ＳＳＣＰ检测ｐ５３基因ｃＤＮＡ突变，并比较它们间相互关系。结果：１００例大肠腺癌中，７６例ＰＡｂ２４０单抗阳性（７６％），５１例ｐ５３基因ｃＤＮＡ突变阳性（５１％）；ＰＡｂ２４０单抗反应与ｐ５３基因ｃＤＮＡ突变比较，两者皆阳性４９％，两者中一者阳性２９％，两者皆阴性２２％（Ｐ＜０．０００１）。结论：ｐ５３基因ｃＤＮＡ突变与其基因蛋白产物结构改变高度吻合，大肠腺癌ｐ５３基因ｍＲＮＡ（ｃＤＮＡ）突变是参与和影响突变型ｐ５３基因蛋白结构改变和生物学行为的主要因素     

p73—一个p53家族新基因

ｐ７３基因是一新发现的与经典抑癌基因ｐ５３具有相似结构,功能和活性的基因,并由于其在染色体上特殊的定位,被认为是一种新的候选抑癌基因。本介绍了ｐ７３发现以来国外有关ｐ７３基因的研究进展,特别对ｐ７３基因的定位、ｐ７３与ｐ５３的关系、是否抑癌基因以及该基因在肿瘤发生发展中的作用和地位进行了综述。     

抑癌基因p53及蛋白产物在星形细胞瘤中的表达

抑癌基因ｐ５３及蛋白产物在星形细胞瘤中的表达郭琳琅曹长安肖莎区士欢采用核酸分子原位杂交技术和免疫组化方法观察了ｐ５３基因在３７例星形细胞瘤中的表达情况，探讨ｐ５３基因与星形细胞瘤发生的关系。１材料和方法１．１材料选自我院神经外科手术切除星形细胞瘤标本...     

p53蛋白在宫颈鳞状上皮内病变与宫颈癌中的过度表达及其与H…

目的 探讨宫颈鳞状上皮内病变（ＳＩＬ）和宫颈癌中抑癌基因ｐ５３基因表达水平以及与ＨＰＶ的关系。方法 用免疫组化和ＰＣＲ－ＲＦＬＰ方法，对２６８例宫颈石蜡包埋组织（２９例慢性宫颈炎、６８例ＳＩＬ、１７１例宫颈癌）进行了ｐ５３蛋白水平及多型ＨＰＶ检测。结果 宫颈癌ｐ５３蛋白的过度表达率及强阳性过度表达率高于ＬＳＩＬ，ＨＰＶ１８阳性的ＳＩＬ及宫颈癌ｐ５３蛋白的过度表达率高于ＨＰＶ１６阳性和ＨＰＶ阴性者。     

p53,c—erbB1,c—myc中p16基因蛋白产物在人脑胶质瘤中的表达

目的 为了探明癌基因ｃ－ｅｒｂＢ１、ｃ－ｍｙｃ，抑癌基因ｐ５３和ｐ１６在胶质瘤发生发展中的作用，以及上述基因蛋白检测对胶质瘤诊断、分级的临床意义。方法 用免疫组化ＡＢＣ法检测４种癌基因蛋白产物在６５例人脑胶质瘤中的表达，并分析与胶质瘤病理分级间的关系。结果 ｐ５３、ｃ－ｅｒｂＢ１、ｃ－ｍｙｃ过度表达率随胶质瘤级别升高而逐渐升高，前两者在胶质瘤良性组和高度恶性组间差异有显著性（Ｐ〈０．０５）；ｐ１６     

p53肿瘤抑制基因与白血病

野生型ｐ５３基因（ｗｔｐ５３）是一种肿瘤抑制基因，已定位于１７ｐ１３．１，编码的核磷酸蛋白，在大多数恶性肿瘤中已发现有ｐ５３基因的突变或缺失，说明ｐ５３基因的功能失活与肿瘤的起因及恶化有关，在血液系统的恶性肿瘤中，也发现有ｐ５３基因的改变。     

免疫组化和PCR—SSCP检测p53基因异常的一致性探讨

目的：探讨免疫组化检测ｐ５３蛋白表达和ＰＣＲ－ＳＳＣＰ检测ｐ５３基因突变的一致性。方法：单克隆抗体ＤＯ－７检测８５例非小细胞肺癌（ＮＳＣＬＣ）的ｐ５３蛋白表达，ＰＣＲ－ＳＳＣＰ检测其中３１例腺癌的ｐ５３基因突变。结果：８５例ＮＳＣＬＣ中ｐ５３蛋白表达阳性率为６８％（５８／８５），３１例腺癌中ｐ５３蛋白表达阳性率为６１％（１９／３１），１４例（４６％）出现ｐ５３基因５～８外显子突变，ｐ５３蛋白免疫组化和ＰＣＲ－ＳＳＣＰ检测ｐ５３基因突变无显著相关（χ２＝０．１，Ｐ＝０．７６），其一致率为５２％。结论：ｐ５３蛋白表达并不能很好地反映ｐ５３基因突变。     

p53肿瘤抑制基因与卵巢癌

目前抑癌基因成为癌变机制研究的热点，其中ｐ５３尤其令人瞩目。世界上每天被确诊为癌症的６．５万人中约５０％是由于ｐ５３基因突变引发的，并且发现有５１种以上肿瘤与ｐ５３突变有关，其中包括卵巢癌。在女性生殖器肿瘤中，卵巢癌最具致死性，确诊后五年生存率不足２５％。本文综述卵巢癌手术标本及细胞系中，ｐ５３基因丢失、突变及ｐ５３蛋白过度表达情况，探讨其相关的病因学因素。     

肺癌中MTS1/p16和p53基因产物的表达与细胞增殖的关系

目的：研究肺癌中ＭＴＳ１／ｐ１６和ｐ５３基因产物的表达与细胞增殖的关系。方法：应用Ｓ－Ｐ免疫组织化学方法研究６２例肺癌组织中ｐ１６蛋白和ｐ５３蛋白的表达情况，并进行增殖细胞核抗原（ＰＣＮＡ）检测，计算细胞增殖指数（ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎｉｎｄｅｘ，ＰＩ）。结果：６２例肺癌组织中ｐ１６蛋白和ｐ５３蛋白阳性率分别为５８．１％和５９．７％。腺癌ｐ１６蛋白的阳性率明显高于小细胞癌（Ｐ＜０．０５）；淋巴结转移阳性组ｐ１６蛋白的表达显著低于阴性组（Ｐ＜０．０５）；ＰＩ分级为Ⅱ级的ｐ１６蛋白表达显著高于Ⅳ级（Ｐ＜０．０５）。不同组织类型肺癌中ｐ５３蛋白的表达未见明显差异，淋巴结转移阳性组ｐ５３蛋白的表达高于阴性组（Ｐ＜０．０１）；不同ＰＩ分级中ｐ５３蛋白的表达，Ⅳ级明显高于Ⅰ级（Ｐ＜０．０５）和Ⅱ级（Ｐ＜０．０５），Ⅲ级明显高于Ⅰ级（Ｐ＜０．０５）和Ⅱ级（Ｐ＜０．０１）。ｐ１６蛋白低表达和ｐ５３蛋白过表达之间未见明显相关。结论：ｐ１６蛋白低表达和ｐ５３蛋白过表达均有促进肺癌细胞增殖的作用，ｐ１６蛋白的表达与肺癌的细胞分化有关，ｐ５３蛋白过表达对肺癌细胞的转移起重要作用。抑癌基因ｐ５３对ＭＴＳ１／ｐ１６基因无明显调控作     

用非同位素PCR－SSCP方法检测石蜡包埋乳腺癌p53基因点突变

应用一非同位素ＰＣＲ－ＳＳＣＰ方法检测常规石蜡包埋乳腺癌组织中ｐ５３基因点突变。结果显示６０例乳腺癌中，１４例有异常电泳带，表明这些病例相应ＤＮＡ片段中发生了点突变，其中４例位于第５～６外显子，３例位于第７外显子，７例位于第８外显子。免疫组化法检测突变型ｐ５３蛋白的表达，１３例为阳性，其中１１例ＳＳＣＰ检测到异常电泳带，另２例突变可能发生在所检测的基因片段以外。而５例ＳＳＣＰ分析发现基因突变者，免疫染色却为阴性，主要可能由于石蜡包埋组织中ｐ５３抗原性减弱或消失所致，因此，ＳＳＣＰ法检测ｐ５３基因点突变更为准确、可靠，而且可初步将突变定位在基因某一片段。本研究结果表明非同位素ＰＣＲ－ＳＳＣＰ是一简便、快速、有效的检测基因点突变的方法，特别适用于对大量标本基因点突变的筛选；ｐ５３基因点突变与突变型ｐ５３蛋白免疫染色阳性呈相关关系，但并不完全吻合。     

p53蛋白在宫颈鳞状上皮内病变与宫颈癌中的过度表达及其与HPV的关系

目的探讨宫颈鳞状上皮内病变（ＳＩＬ）和宫颈癌中抑癌基因ｐ５３蛋白表达水平以及与ＨＰＶ的关系。方法用免疫组化和ＰＣＲ－ＲＦＬＰ方法，对２６８例宫颈石蜡包埋组织（２９例慢性宫颈炎、６８例ＳＩＬ、１７１例宫颈癌）进行了ｐ５３蛋白水平及多型ＨＰＶ检测。结果宫颈癌ｐ５３蛋白的过度表达率及强阳性过度表达率高于ＬＳＩＬ和ＨＳＩＬ，ＨＰＶ１８阳性的ＳＩＬ及宫颈癌ｐ５３蛋白的过度表达率高于ＨＰＶ１６阳性和ＨＰＶ阴性者。结论抑癌基因ｐ５３蛋白过度表达率与宫颈癌的发生发展有关，与ＨＰＶ１８的内在联系尚有待于进一步研究。     

p53基因突变与肺癌发生的早期遗传学损害

在进行肺癌与ｐ５３基因关系的系列研究过程中，发现１例支气管粘膜上皮不典型增生和１例原位癌，运用免疫组织化学方法进行ｐ５３蛋白表达检测，结果发现支气管上皮不典型增生和原位癌组织中有明显的ｐ５３蛋白阳性染色细胞，从而进一步证实了ｐ５３基因突变可能是肺癌发生的早期遗传学损害。     

p53、p16、nm23基因蛋白在肺癌中的表达及意义

目的：研究肺癌组织中ｐ５３,ｐ１６,ｎｍ２３基因蛋白的表达：方法：应用免疫组化ＬＳＡＢ方法检测１２９例肺癌标本中;ｐ５３,ｐ１６,ｎｍ２３基因蛋白的表达。结果：ｐ５３,ｐ１６,ｎｍ２３蛋白在肺癌中的阳性表达率分别为５２．７％,４５．７％,５５．８％;３种蛋白阳性表达率与组织学分型无明显相关;肺腺癌淋巴结转移阳性组ｐ５３蛋白阳性表达率显著高于淋巴结无转移组;