抗丁型肝炎病毒mAb的制备及其初步应用

目的 :以基因工程表达丁型肝炎病毒抗原蛋白 (HDAg)为抗原 ,建立分泌单克隆抗体 (mAb)的杂交瘤细胞系 ,并对其分泌的mAb进行鉴定。方法 :用Ni NTA技术纯化HDAg免疫BALB/c小鼠 ,取脾细胞及骨髓瘤细胞按常规方法融合、筛选、克隆化及腹水注射制备mAb。采用ELISA及免疫组化技术进行鉴定。结果 :筛选出 2株能稳定分泌特异性抗 HD的mAb杂交瘤细胞株 (HD1,HD2 ) ,经多次复苏传代仍能稳定分泌抗体 ,特异性强 ,效价高。应用于ELISA测定患者血清HDAg均呈特异性阳性反应。免疫组化检测肝组织显示 ,针对该mAb的抗原主要分布于细胞核或浆内。结论 :此两株丁肝杂交瘤细胞株分泌的抗体对丁肝抗原具有特异亲和性 ,为丁型肝炎病毒的临床诊断及病理检测提供技术基础     

氨甲酰磷酸合成酶单克隆抗体的制备、鉴定及应用

目的:制备抗人氨甲酰磷酸合成酶(CPSI)的单克隆抗体(mAb)并进行初步鉴定与应用.方法:将正常成人肝组织匀浆离心并分离线粒体,用线粒体总蛋白免疫BALB/c小鼠,采用杂交瘤技术制备 mAb,并通过间接ELISA法、Western blot、免疫组化及免疫荧光染色的方法对mAb进行特性鉴定,通过免疫沉淀联合质谱、Uni-ZAP XR表达文库筛选鉴定抗原,借助免疫捕获的方法用抗体来分离复合物.结果:获得3株可稳定分泌抗人CPSI mAb的杂交瘤细胞系.mAb的Ig亚类(型)为IgGl(K),该mAb可用于ELISA检测、Western blot、免疫组化、免疫荧光染色、免疫沉淀实验和复合物的分离.结论:成功制备了抗人CPSI的mAb,为CPSI的研究提供了有力的工具.     

抗人成骨肉瘤杂交瘤细胞系的建立及其特性鉴定

目的 建立分泌抗人成骨肉瘤单克隆抗体（mAb)的杂交瘤细胞系，并对其分泌的mAb进行鉴定。方法 用成骨肉瘤细胞系（OSPS-9607）免疫Balb/c小鼠，取脾细胞按常规方法融合，筛选，克隆化及腹水mAb制备，取骨肉瘤手术标本（60例）及正常组织（6种），用mAb进行免疫组化ABC染色。结果 筛选出2株能持续，稳定分泌特异性抗骨肉瘤mAb的杂交瘤细胞株（6E5和3F7），2株杂交瘤细胞经过100d连续培养，分泌mAb的特性稳定，mAb特异性强，效价高。免疫组化染色检测表明，mAb6E5和3F7针对的抗原，在成骨肉瘤组织及成骨肉瘤细胞系均呈高表达（70%）。针对mAb6E5的抗原主要分布于细胞核上，针对mAb3F7的抗原主要分布于细胞浆内，6种正常组织中除胃粘膜可见弱阳性反应外，其余未见明确的阳性反应。结论 此两株杂交瘤细胞分泌的mAb对成骨肉瘤细胞具有特异亲和性，为成骨肉瘤的早期诊断。免疫治疗及发现成骨肉瘤新的标志物奠定了基础。     

抗血型M、N及抗血型糖蛋白A/B单克隆抗体的制备及其特性鉴定

目的:制备抗血型M、N及抗血型糖蛋白A/B(GPA/GPB)的单克隆抗体(mAb),并进行特性鉴定。方法:用人“O”型血红细胞作为免疫源,免疫BALB/c小鼠。采用淋巴细胞杂交瘤技术制备mAb,用谱红细胞筛选阳性克隆;采用直接、间接血凝试验检测杂交瘤细胞培养上清及腹水中mAb的效价。分别用快速定性试纸和酶处理红细胞检测mAb的Ig亚类及抗原表位。用Western blot鉴定抗GPA/GPB mAb的特异性。结果:获得4株分泌抗M、1株抗N及3株抗GPA/GPB mAb的杂交瘤细胞株。杂交瘤细胞培养上清mAb的效价介于1×2-4~1×2-8之间,腹水mAb的效价在1×2-7~1×2-12之间。除1株mAb 1C1C9C4为IgM外,其他7株mAb均为IgG。通过杂交瘤细胞培养上清与谱红细胞的反应格局,结合mAb抗原表位的检测,确定4株和1株mAb可分别特异性结合于GPA的M、N抗原表位;另3株mAb 6D7C9、7C9H4和7C9G11与“O”型血红细胞膜的Western blot结果显示,均可结合GPA、GPB蛋白。结论:成功地建立了4株分泌抗M、1株分泌抗N及3株分泌抗GPA/GPB mAb的杂交瘤细胞株,可用于MNSs血型系统的研究及鉴定,并为制备双功能抗体用于病毒、肿瘤疾病的诊断和治疗打下了坚实的基础。     

抗人肺鳞癌单克隆抗体的制备及其特性鉴定

目的:制备和鉴定抗人肺鳞癌单克隆抗体(mAb),为肺癌的早期诊断和靶向治疗提供候选抗体药物及为肺癌抗原的筛选提供工具。方法:用肺癌细胞株YTMLC-90做抗原免疫BALB/c小鼠,取其脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞Sp2/0融合,间接ELISA和有限稀释法筛选抗体阳性的杂交瘤细胞获得mAb。染色体计数法鉴定杂交瘤细胞,并进行mAb同种型鉴定;对细胞培养上清液和腹水中的mAb采用间接ELISA法进行初步特异性检测及效价测定;采用Western blot法鉴定其与不同组织抗原结合活性;采用免疫组化染色法鉴定其在肺癌组织中的分布。结果:筛选出5株可稳定分泌抗肺鳞癌mAb的杂交瘤细胞株E2、F9、E11、D5和C6,分泌的抗体均为IgG1亚类,κ亚型。C6染色体数目为89～112条,细胞培养上清和腹水效价分别为1∶1 004和1∶104,ELSA和Western blot结果显示其能特异性与肺癌细胞结合,未见与其他高发癌组织和正常组织结合。结论:成功地制备了能够特异识别肺癌组织的mAb。     

抗人S100A4单克隆抗体的制备、鉴定及初步应用

目的:制备抗人S100A4单克隆抗体(mAb),建立检测肿瘤样品中S100A4蛋白的可靠方法.方法:采用标准杂交瘤技术得到抗重组人S100A4的mAb.以ELISA、Western blot和免疫组织化学法对抗体进行鉴定.并将抗体应用于临床人乳癌和结肠癌样品的免疫组织化学检测.结果:获得了1株稳定分泌抗人S100A4蛋白mAb的杂交瘤细胞株D101.在免疫印迹实验中,该mAb较多抗特异性更好.该mAb适用于来源于人组织的样品S100A4表达的检测,在少量乳癌和结肠癌样品的检测中给出的结果与商品化多抗的结果一致.结论:该mAb是S100A4特异的,在临床应用中有更好的重复性.     

抗ARL-1单克隆抗体的制备及初步应用

目的: 制备抗醛糖还原酶相似蛋白(aldosereductaselikeprotein, ARL- 1)的单克隆抗体 (mAb)并进行初步应用。方法: 用纯化的ARL- GST蛋白免疫BALB/c小鼠, 采用杂交瘤技术制备mAb。间接ELISA法、Westernblot及免疫组织化学染色法, 对mAb进行鉴定及初步应用。结果: 获得 1株可稳定分泌抗ARL -1蛋白mAb的杂交瘤细胞系。mAb的Ig亚类为IgG2b, 轻链属于κ型。腹水mAb的效价为: 1∶4. 096×105。Westernblot的结果表明, ARL 1蛋白在被检测的肝癌组织中呈高表达, 而在相应的癌旁组织中不表达。免疫组织化学染色的结果表明, ARL -1蛋白在肝癌组织中呈高表达且主要定位在胞质内。结论: 成功地制备 1株抗ARL -1蛋白的mAb。初步应用的结果表明, ARL- 1蛋白在肝癌组织中呈高表达, 为进一步研究ARL -1蛋白的功能, 以及其与肝癌的确切关系奠定了基础。     

抗HIV-1核心抗原p24单克隆抗体的制备及特性的初步鉴定

目的 :建立分泌抗HIV 1p2 4单克隆抗体 (mAb)的杂交瘤细胞株 ,并对其特性进行初步鉴定。方法 :以纯化的基因工程制备的p2 4抗原免疫BALB/c小鼠 ,取免疫小鼠的脾细胞与Sp2 /0骨髓瘤细胞融合 ,经HAT、HT选择培养及有限稀释法进行克隆化后 ,用间接ELISA法及Dotblot对其进行筛选和特性鉴定。结果 :筛选到 2株可分泌抗HIV 1p2 4mAb的杂交瘤细胞 ,其腹水效价为 1×10 -5,亲和力为 1.7× 10 4～ 1.8×10 4mol/L ,mAb的Ig亚类均为IgG1。两株mAb与HBcAg、HCVRNA阳性血清及HIVgp4 1等均无交叉反应 ,只与HIV 1p2 4抗原阳性血清产生特异反应。结论 :成功地建立了 2株可分泌抗HIV 1p2 4mAb的杂交瘤细胞 ,为进一步研制HIV 1p2 4抗原的ELISA检测试剂盒奠定了基础     

抗人分泌性白细胞蛋白酶抑制剂单克隆抗体的制备与鉴定

目的制备抗人分泌性白细胞蛋白酶抑制剂(hSL-PI)单克隆抗体(mAb)。方法以hSLPI为免疫BALB/c小鼠,运用杂交瘤技术制备抗hSLPI mAb。采用Ig类与亚类鉴定试剂盒鉴定mAb的Ig亚类;通过ELISA、Western blot、免疫组化染色法、流式细胞术、激光共聚焦显微镜技术鉴定mAb的特异性。结果获得4株可稳定分泌抗hSLPI mAb的杂交瘤细胞,其分泌的mAb均为IgM。Western blot分析表明,此株mAb所识别的靶分子的相对分子质量(Mr)约为12000。免疫组化染色表明,mAb与肺和结肠组织的上皮细胞、疑似肥大细胞、扁桃体和包皮组织的疑似肥大细胞的反应性均呈阳性。流式细胞术分析显示,4株mAb与人肺腺癌细胞系A549细胞中的SLPI均呈阳性反应。激光共聚焦扫描显微镜观察,荧光标记的阳性反应物主要位于A549细胞的胞质内。结论成功地制备抗hSLPI mAb,为变态反应性疾病和炎症性疾病的研究工作提供了有用的试剂。     

截短型鸭乙型肝炎病毒核心蛋白单克隆抗体的制备及初步应用

目的: 制备能与鸭乙型肝炎病毒核心抗原(DHBcAg)特异性结合的单克隆抗体(mAb),使之能特异性地对鸭乙型肝炎病毒(DHBV)进行检测.方法: 以原核表达的截短型鸭乙型肝炎病毒核心抗原(DHBcAg1-214)免疫BALB/c小鼠后常规杂交瘤技术进行细胞融合,有限稀释法克隆化,间接酶联免疫吸附试验( ELISA)和免疫组织化学( IHC)筛选、鉴定.结果: 筛选出3株(3H4、 4A11、 5A12)能有效分泌抗鸭乙肝病毒核心抗原的杂交瘤细胞株.该mAb可用于ELISA、 IHC和Western blot研究.结论: 获得了3株有效分泌抗核心抗原的mAb,可用于鸭乙肝病毒相关肝病组织与血清的检测.     

小鼠抗登革病毒2型单克隆抗体的制备及鉴定

目的 制备小鼠抗登革病毒2型(TR1751株)的单克隆抗体(Monoclonal antibody mAb)，并对其性质进行鉴定。方法免疫原为病毒感染的Blabfc乳鼠脑组织，匀浆后离心，去除细胞成分。免疫Blab／c小鼠，将小鼠脾细胞和SP2／0细胞融合后，通过ELISA、间接免疫荧光染色、噬斑减少中和实验(Plaque reduction neutralization test，PRNT)及Western blot进行筛选和鉴定。结果筛选到I1、I9和B152 3株杂交瘤细胞系，其分泌的mAb均为识别登革病毒E蛋白的中和抗体。结论获得了3株分泌小鼠抗登革病毒2型mAb的杂交瘤细胞系，利用所制备的抗体，为进一步研究登革病毒致病机理和开发疫苗提供了免疫学工具。     

抗人SSX2分子单克隆抗体的制备及初步应用

目的　制备抗滑膜肉瘤X断点 2 (Synovialsarcoma,Xbreakpoint2 ,SSX2 )分子的单克隆抗体 ,探讨SSX2的组织分布及其与肿瘤的关系。方法　应用淋巴细胞杂交瘤技术制备小鼠源性抗人SSX2mAb。应用间接ELISA测定腹水效价 ,间接免疫荧光胞内染色检测抗体与肿瘤细胞系的反应性。用酶免疫组织化学技术 ,对SSX2分子在人正常睾丸组织和直肠癌组织的分布进行了鉴定。结果　获得 1株分泌抗SSX2mAb的杂交瘤细胞株LX SSX2 ,间接ELISA测定腹水效价达 1× 10 - 5,为IgG1(κ)亚类 ,能识别K5 6 2胞内天然及变性SSX2分子。在酶免疫组织化学技术应用中获得较满意效果 ,SSX2分子表达于睾丸精原细胞的细胞核内 ,并在直肠癌标本中检出到SSX2的表达。结论　LX SSX2mAb有很好的特异性 ,为进一步研究SSX2分子的分布及其与肿瘤的关系奠定了基础     

结肠癌单克隆抗体的制备和鉴定

用1高碘酸处理结肠癌组织,然后免疫小鼠制备单克隆抗体.获得2株产生高效价、针对结肠癌抗原的抗体杂交瘤细胞株C_8和C_(102)。经免疫组织化学染色后知其抗原定位于结肠癌腺体的上皮细胞及其分秘物.由Immunoblotting知其抗原的分子量为20万道尔顿.初步研究表明,C_8和C_(102)是特异性较强的针对结肠癌的单克隆抗体(IgG2b).经高碘酸(或胰酶)处理证明,其相应抗原决定基部分是蛋白质而不是多糖.     

抗人CD100单克隆抗体的制备与初步鉴定

目的：研制可识别天然CD100分子的单克隆抗体（mAb)。方法：采用真核表达的CD100分子免疫BALB/c小鼠，以间接ELISA法筛选阳性杂交瘤，并分别用人急性T淋巴细胞性白血病细胞系MOLT-4，猿T淋巴细胞系MLA-144及猴EB病毒转化的B淋巴细胞系（BLCL），进行间接免疫荧光染色和流式细胞术鉴定mAb的特异性。结果：共获得7株可稳定分泌mAb的杂交瘤细胞株。所有mAb均可识别人和猴细胞系的膜表面天然CD100分子，其中6株可识别猿细胞系膜表面的天然CD100分子，结论：成功地制备了7株抗CD100分子的特异性mAb。为研究人和猿，猴CD100分子的结构与功能提供了新的手段。     

抗11β-羟类固醇脱氢酶1的单克隆抗体的制备与鉴定

目的:制备抗人11β-羟类固醇脱氢酶1(homo sapiens hydroxysteroid 11-beta dehydrogenase 1,HSD11B1)的单克隆抗体(mAb)并初步鉴定其特性.方法:将正常成人肝组织匀浆离心并分离线粒体,用线粒体总蛋白免疫BALB/c小鼠,采用杂交瘤技术制备mAb,并通过间接ELISA法、Western blot、免疫组化的方法对mAb进行特性鉴定,通过免疫沉淀、Uni-ZAP XR肝脏cDNA表达文库筛选鉴定抗原.结果:通过间接ELISA筛选获得1株可稳定分泌抗人HSD11B1 mAb的杂交瘤细胞系.其分泌的mAb的Ig亚类(型)为IgG1(κ),Western blot结果显示该mAb可以特异地识别相对分子质量(Mr)为35 000的蛋白;应用mAb CBF245对人肝脏cDNA表达文库(Uni-ZAP XR)进行筛选,阳性噬菌斑测序结果显示5个阳性克隆插入序列均为HSD11B1.结论:mAb BAD062特异地识别抗原HSD11B1,该mAb可用于ELISA检测、Western blot、免疫组化和免疫沉淀实验,为HSD11B1的研究提供了有力的工具.     

抗成骨肉瘤mAb的制备、鉴定及其细胞毒效应

目的 建立抗人成骨肉瘤mAb杂交瘤细胞系并对其抗体特性进行研究。方法 利用我室自建的骨肉瘤细胞系（OS——9607）免疫Balb/c小鼠,取小鼠脾细胞与骨髓瘤细胞Sp2/0进行融合,经筛选和克隆化后,建立杂交瘤细胞系,以免疫组化和Western Blot等方法研究抗体特性,以MTT法研究细胞毒作用,结果 得到1株能够稳定分泌抗体,效价高的杂交瘤细胞系3D9,免疫组化结果显示着色区主要分布在细胞核上,相应抗原在成骨肉瘤标本和成骨肉瘤细胞系高度表达（83%）,正常组织未见表达,WesternBlot显示3D9相应分子量为Mr54000。MTT法示该抗体对成骨肉瘤细胞的杀伤率明显高于对照组。结论 得到的杂交瘤细胞系分泌的mAb体具有成骨肉瘤细胞特异亲和性,并有一定的细胞毒效应,可能成为新的成骨肉瘤生化标志,在肿瘤的免疫治疗方面有广阔的应用前景。     

抗人红细胞膜抗原非凝集型单克隆抗体的研制及特性鉴定

目的:制备抗人红细胞膜抗原的非凝集型单克隆抗体(mAb)并鉴定其特性。方法:应用杂交瘤技术,以人O型红细胞膜抗原免疫BALB/c小鼠。取免疫小鼠的脾细胞与Sp2/0骨髓瘤细胞融合,用聚凝胺试管法筛选识别红细胞表面共同抗原的抗体,玻片凝集实验剔除凝集型抗体(完全抗体),再将分泌非凝集型mAb(不完全抗体)的杂交瘤细胞株用有限稀释法克隆化3次。对杂交瘤细胞的稳定性和mAb的特性进行鉴定。结果:获得1株可稳定分泌mAb的杂交瘤细胞2E8。mAb2E8为IgG1类,可特异性地识别红细胞膜上的H抗原,没有种属交叉血凝反应。杂交瘤细胞的培养上清与人的A、B、AB和O型红细胞均能产生强凝集,凝集效价为1∶1024,腹水mAb的凝集效价达到1∶64×106。mAb的亲和力用凝集试验检测,出现血凝的时间为7s,3min以内凝块>1mm。结论:成功地制备了针对红细胞膜H抗原的非凝集性mAb,此mAb的凝集效价、相对亲和力及特异性均较良好,为构建双特异性抗体奠定了基础。     

特异性HER2单克隆抗体的制备及初步应用

目的:制备特异性识别天然构象的人表皮生长因子受体-2(HER2)的单克隆抗体(mAb),用以指导Herceptin的临床应用.方法:利用纯化的原核表达的HER2融合蛋白作为抗原免疫BALB/c小鼠,取脾细胞与NS1骨髓瘤细胞按常规方法融合,ELISA法进行杂交瘤的初步筛选.构建HER2酵母展示系统,用酵母cell base ELISA进行第2次筛选.将筛选到的阳性克隆株进行亚克隆获得稳定分泌细胞株,用免疫组织化学的方法鉴定其与SK-Br-3细胞和293a细胞的反应性.结果:通过ELISA筛选得到168株阳性杂交瘤,用酵母cell base ELISA最终得到8株阳性杂交瘤,此8株免疫组化检测均与SK-Br-3细胞反应,而与293a细胞无反应.结论:成功制备了8株识别天然构象的HER2的mAb,能够用于免疫组化,为临床上使用Herceptin进行个性化治疗乳腺癌打下了基础.     

日本脑炎病毒内影像组抗独特型单克隆抗体的制备及初步鉴定

目的 制备具有内影像作用的分泌日本脑炎病毒（JEV）抗独特型单克隆抗体（AId mAb)杂交瘤细胞系。方法 以传统免疫法和硝酸纤维素膜（NC膜）皮下包埋免疫法,用具有高中和活性的抗JEV mAb 2H4和2F2分别免疫Balb/c小鼠,按常规方法融合,经多种ELISA、表面等离子共振和动物免疫实验筛选并鉴定具有内影像作用的AId mAb。结果 获得了3株可分泌AId mAb的杂交瘤细胞系。结论 所获AId mAb均能模拟JEV抗原,为JEV受体的分离、纯化提供了条件。     

抗丙酮酸脱氢酶复合体E2亚基单克隆抗体的制备与鉴定

目的 制备抗人丙酮酸脱氢酶复合体E2亚基(pyruvate dehydrogenase complex E2,PDC-E2)的单克隆抗体(mAb)并进行初步鉴定.方法 将正常成人肝组织匀浆离心并分离线粒体,用线粒体总蛋白免疫Balb/c小鼠,采用杂交瘤技术制备mAb,并通过间接ELISA法、Western blot及免疫组化的方法对mAb进行特性鉴定,通过免疫沉淀联合质谱、Uni-ZAP XR肝脏cDNA表达文库筛选鉴定抗原.结果 获得1株可稳定分泌抗人PDC-E2 mAb 的杂交瘤细胞系.mAb的Ig亚类(型)为IgG1(κ), 该mAb可用于ELISA检测、Western blot、免疫组化和免疫沉淀实验.结论 成功制备了抗人PDC-E2的mAb,为PDC-E2的研究提供了有力的工具.