溶栓素的纯化研究

目的：研究溶栓素的纯化工艺。方法：采用超滤法截留分离,强阴离子交换层析去除核酸,弱阴／阳离子交换层析和疏水层析组合法精细分离溶栓素。结果：聚丙烯酰胺凝胶电泳考马斯亮蓝染色法结合显示最终纯化产物为一条染色带,纯化倍数为144．83,回收率为38．66％。结论：溶栓素的纯化工艺基本体现了工业生产工艺的特点,具有一定的实用性。     

亲和层析法纯化溶栓素

目的 :探讨亲和层析纯化溶栓素的方法。方法 :采用高碘酸钠法制备溶栓素抗体的亲和层析介质纯化溶栓素。结果 :提纯的溶栓素经聚丙烯酰胺凝胶电泳 ( PAGE)鉴定为一条带 ,活性回收率为 49.5 %。结论 :亲和层析的高碘酸钠法是纯化溶栓素的一种分离速度快、特异性强、经济、安全可靠的方法 ,并适合于大规模纯化     

重组葡激酶-水蛭素融合蛋白的分离纯化工艺建立

目的 建立大肠杆菌高密度表达的重组葡激酶-水蛭素融合蛋白(STH)分离纯化工艺.方法 高密度培养重组大肠杆菌并诱导表达STH,离心收集菌体,反复冻融后收集上清液经超滤、两步阴离子交换层析,分离纯化STH目的 蛋白.结果 纯化后的STH纯度为98%以上,纤溶比活性2.6×104IU/mg,活性回收率56%.结论 建立了STH的纯化工艺,该纯化工艺简便,时程短,重复性好,适合于大规模生产.     

发酵液中重组水蛭素的分离纯化

目的：建立毕赤酵母(pichia)高密度表达的重组水蛭素(recombinant hirudin-2,rHV2)分离纯化工艺。方法：高密度培养重组毕赤酵母并诱导表达水蛭素至胞外，发酵液经超滤、透析、离子交换层析。分离纯化rHV2目的蛋白；采用SDS-PAGE和抗凝血酶活力分别检测目的蛋白纯度和活性。结果：纯化样品经SDS-PAGE电泳检测为单一条带，重组水蛭素比活性为6000ATU／mg，纯化收率达38．6％。结论：超滤、透析和离子交换层析可用于发酵液中大规模分离纯化重组水蛭素。     

孕血清中早孕因子的分离纯化

目的:通过离子交换层析和亲和层析的分离方法从孕血清中得到纯化的早孕因子(EPF),为进一步制备单克隆抗体做准备。方法:采用依次经过DEAE52阴离子交换层析,SP Sepharose F.F阳离子交换层析,Con ASepharose4B亲和层析和Heparin Sepharose Cl6B亲和层析分离纯化方案,最终得到具有早孕因子活性的Hepa-rin-Ⅱ成分,早孕因子活性采用活性玫瑰花环抑制实验检测,采用SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳鉴定纯化物。结果:SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳显示两条带,相对分子量分别为46.30kDa和10.71kDa。结论:经过四步层析得到较纯的EPF样品,并认为EPF在血清中可以以单体和多聚体形式存在。     

人肝癌组织特异性γ-谷氨酰转移酶分离纯化

目的:分离纯化人肝癌组织中特异性γ-谷氨酰转移酶(GGT),为进一步制备其抗血清提供抗原材料,以便对肝癌早期诊断进行研究。方法:人肝癌组织经匀浆、离心、溶解、透析、凝胶层析及凝集素亲和层析等步骤进行分离纯化;纯化过程用IFCC推荐方法监测GGT催化活性,紫外法监测蛋白质出峰图谱,Lowry法测定蛋白含量。结果:经过粗提、DEAE阴离子交换层析、凝胶过滤层析及凝集素亲和层析等纯化步骤得到电泳纯的GGT,其比活为10.58U/mg蛋白,纯化倍数为84.9,得率为1.60%。结论:该方法能够较好地分离纯化人肝癌组织中特异性GGT。     

对一种源于蜗牛的壳聚糖水解酶的不同纯化方法的选择

目的研究源于蜗牛的壳聚糖水解酶的纯化方法,得到壳聚糖水解酶的纯品,从而为氨基酸序列分析、基因克隆及工业菌制备奠定前期基础。方法对比疏水作用层析、离子交换层析、羟基磷灰石柱（HA）层析、凝胶过滤层析等方法纯化蜗牛酶的实际效果,确定纯化的最佳条件,从而设计出最合理的纯化方案。结果分别用苯基琼脂糖柱层析,DEAE—Sepharose离子交换层析,羟基磷灰石柱层析,Sephacryl S-300凝胶过滤层析分离蜗牛酶,最终确定为用弱阴离子交换填料DEAD—Sepharose,疏水作用层析,凝胶过滤层析进行分离。结论本文探讨了蜗牛酶的不同纯化方法,建立了一种从蜗牛酶中分离高效高纯度壳聚糖水解酶的方法,为壳寡糖的酶解工业生产提供了新方法。     

幽门螺杆菌多靶点疫苗工程菌BIB发酵及纯化工艺研究

目的初步建立重组幽门螺杆菌多靶点疫苗工程菌（BIB）的高密度发酵及其蛋白纯化工艺。方法以摇瓶发酵结果为基础,放大工艺至50L发酵罐中,对影响目的蛋白收率的因素如发酵培养基、工作种子接种量、诱导剂浓度、诱导起始时间、诱导持续时间及诱导剂添加方式等进行优化验证;并利用rBIB蛋白高等电点特性（pI=9.05）,在pH 7.0-7.5的磷酸盐缓冲液中目的蛋白带正电荷,采用阳离子交换层析进行纯化,对阳离子交换层析填料及纯化缓冲液的pH进行优化。结果经高密度发酵后BIB菌体产量为70g/L,蛋白表达量为32%;rBIB蛋白经阳离子交换层析纯化后其纯度为91.8%。结论该工艺的初步建立为深入研究rBIB蛋白性质及其规模化生产奠定了基础。     

重组人内皮抑素层析复性的相关研究

研究了由大肠杆菌表达的重组人内皮抑素(Recombinant human endostatin,rhES)的复性、纯化过程.比较先层析复性后纯化(工艺1)和先纯化后层析复性(工艺2)两种工艺的结果表明:工艺1所得rhES的收率和活性回收率分别为64.44%和213.19%,与工艺2相比分别提高8.70%和33.04%.工艺1中,研究了3种凝胶过滤柱复性及复性pH和上样蛋白浓度对复性的影响,并优化相关工艺.结果表明:在pH9.0,rhES浓度3.91 mg/mL的条件下,采用双梯度凝胶过滤Sephacryl S-100 HR进行层析复性,Sephadex G-25脱盐后,用SP Sepharose FF阳离子交换吸附纯化,获得活性回收率为213.19%,HPLC纯度为97.07%的rhES,其IC50为1.58 ug/mL.     

用Streamline SP从大肠杆菌中初步分离纯化anti-HBsAg Fab最适吸附条件的选择及验证

目的 选择阳离子交换介质Streamline SP分离纯化anti-HBsAgFab的最适吸附条件。方法试管法分别测定平衡缓冲液在不同DH和不同离子强度下,阳离子交换介质Streamline SP对预分离纯化蛋白的吸附效果。用l mlSP预装柱及自装28 ml Streamline SP柱进行离子交换层析以验证吸附效果。结果NaAc-HAc作为平衡缓冲液在pH4．4、离子强度100-600mmlo/L可以使阳离子交换介质Streamline SP与蛋白吸附达到最佳效果。在该条件下用l ml SP预装柱及自装28ml SP柱进行离子交换层析,均验证了这一吸附效果。结论试管法选择的离子交换层析的最适吸附条件用于从大肠杆菌中初步分离纯化anti-HbsAg Fab切实可行。     

溶栓素的性质及生物活性研究

目的 :研究溶栓素的理化性质、作用机理及其体内溶栓作用。方法 :采用不连续系统 SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳法测定溶栓素的分子量 ,纤维蛋白平板法测定溶栓素的体外活性和研究溶栓素的作用机理 ,不同温度和 p H值下测定体外溶栓作用以确定溶栓素的最适温度和 p H值 ,大鼠颈动脉血栓形成法测定溶栓素的体内溶栓效果。结果 :溶栓素的相对分子量为 30 6 80 ,最适温度是 4 5℃ ,最适 p H值为7.8,溶栓素的作用机理与人血纤溶酶相似 ,有直接纤溶作用 ,溶栓素的体内溶栓作用在同等剂量的条件下优于尿激酶。结论 :溶栓素较适合作溶栓药物     

溶栓素抗凝血和抗血栓形成作用的实验研究

目的：评价溶栓素的生化药效,研究溶栓素的抗凝血和抗血栓作用。方法：应用玻片法和毛细管法研究溶栓素对小鼠凝血时间的影响;应用大鼠体内、体外血栓形成法及家兔体外血栓形成法研究溶栓素对血栓形成的影响;研究溶栓素对大鼠凝血酶原时间（PT）、活化部分凝血活酶时间（APTT）和纤维蛋白原含量（Fbg）的影响。结果：溶栓素剂量在0.25、0.5及1.0 mg•kg^-1体重时,能明显地延长小鼠凝血时间;在0.2、0.4及0.8 mg•kg^-1体重时,能有效抑制大鼠体内、体外血栓形成;在0.2 mg•kg^-1体重时,能有效地抑制家兔体外血栓形成;在0.2、0.4及0.8 mg•kg^-1体重时,能显著地降低大鼠Fbg含量,对APTT、PT未见显著影响。结论：溶栓素具有明显的抗凝血和抗血栓作用,是一种有临床应用前景的治疗血栓性疾病的药物。     

亲和层析法纯化尿激酶

目的研制尿激酶的纯化工艺,为临床尿激酶制剂提供原料。方法以琼脂糖凝胶为载体,对氨基苯甲脒为配基,采用亲和层析法纯化尿激酶。结果尿激酶活性回收率62．96％,精制品纯化4．03倍。结论该方法特异性强,纯化效果好,酶活性回收率高,可作为尿激酶纯化的一种有效方法。     

南蛇藤中雷公藤红素的提取及纯化工艺研究

目的：研究南蛇藤中雷公藤红素最佳提取及纯化工艺。方法：以雷公藤红素提取率为指标,分别进行回流提取、超声波提取和超临界提取,并通过正交实验设计,优化超声波提取工艺;以硅胶柱层析法进行纯化研究。结果：南蛇藤粉末超声波提取最佳工艺条件为：10倍量甲醇溶剂,超声功率400W,单次辐射时间5s,超声提取时间40min;经柱层析后,样品中雷公藤红素的含量不低于90％。结论：与其他提取工艺相比,超声波提取工艺提取时间短、提取率高,工艺简单可行;柱层析法简单,纯化度高。     

二陈汤配方颗粒除杂工艺研究

目的：优选二陈汤配方颗柱除杂工艺。方法：比较乙醇沉淀法、高速离心法的浸膏得率和橙皮苷的保留率,并采用薄层试验和药效试验对除杂效果进行考察。结果：乙醇沉淀法除杂效果明显,随着乙醇浓度的提高,除杂效率提高,成分保留率降低;高速离心法除杂效果差,成分保留率高;薄层试验和药效试验研究结果表明,除杂液和原液在化学成分和药效作用上无显著差异。结论：50％的乙醇沉淀法可作为二陈汤配方颗粒除杂工艺。     

肠系膜动脉血栓形成的介入溶通治疗

目的：探讨介入溶通方法在诊治肠系膜动脉血栓形成中的临床应用价值。方法：C型BX光数字减影机(DSA)或X线电视监视下做肠系膜动脉的超选择插管，经导管交替使用罂粟碱。尿激酶，肝素扩血管，溶栓，抗凝，或加用球囊成形。结果：31例临床可疑肠系膜动脉血栓形成的病人，经动脉造影除外8例，确诊23例，其中有22例病人栓塞动脉完全开通或有侧枝循环代偿，肠道血供恢复，1例死亡，溶通成功率95．7％。结论：介入溶通方法集诊断与治疗为一体，简单安全、疗效迅速、确切。     

重组人瘦素的分离纯化

目的：探索毕赤酵母表达的人瘦素的非亲和层析纯化方法。方法：采用强阴离子交换柱(Sepharose Qfast flow)和疏水层析柱(Phenyl Sepharose 6 fast flow)在pH7．5的条件下进行纯化。结果：经Q柱一步纯化后，产物纯度由42．3％到达89．6％，随后通过疏水层析纯化后，产物纯度达到96．2％。经SDS—PAGE证实为单一蛋白条带。结论：通过上述手段已成功分离纯化得到纯度较高的由毕赤酵母表达的重组人瘦素。     

不同色谱材料对黄酮苷分离研究

目的:考察3种反相柱色谱材料对黄酮苷类成分的分离.方法:采用RP-18、ODS和ODS-AQ 3种反相材料分离纯化黄酮苷类成分.结果:不同材料对黄酮苷类成分纯化效果不同.结论:ODS- AQ对饿蚂蝗黄酮苷纯化效果最好.