非近交系615/PBI-beige/nude小鼠免疫学功能的初步研究

非近交系615/PBI-beige/nude小鼠(以下简称615-bg/nu)是一种T和NK细胞功能联合缺陷型动物,其主要遗传背景来源于国内培育的近交系小鼠615/GI。它是以615/PBI-nu和615.B6—bg为亲本动物,采用杂交-内交和回交-内交等5个不同交配步骤培育而成。初步研究表明,该615-bg/nu小鼠脾细胞对ConA诱导的增殖反应,与非beige裸鼠相近,而其自然杀伤(NK)细胞活性(9.2±2.4％)明显低于615-nu裸小鼠(39±4.8％)和BALB/C-un裸小鼠(32±4.6％)(P<0.01)。此外,我们发现在beige和非beige小鼠,其脾细胞的NK活性都有随其nu基因数目增加而升高的趋势,这表明杂合状态下的nu基因亦可使小鼠的NK活性增高。这种低NK活性的T细胞缺陷动物模型——615-bg/nu的育成,为肿瘤免疫学和实验肿瘤学的研究工作提供了一种极有价值的新实验材料。     

615近交系小鼠脾细胞自然杀伤活性的观察

实验采用~(125)Ⅰ—udR标记肿瘤靶细胞(YAC—1小鼠淋巴瘤细胞)DNA释放试验,对615近交系小鼠脾细胞自然杀伤活性进行了观察。两批实验结果表明,615近交系小鼠脾细胞NK细胞细胞毒性为13.9—14.9％。     

转输小鼠脾细胞对小鼠白血病(L615)的防治作用

本文报告了转输正常小鼠脾细胞对615系小鼠白血病(L615)攻击的保护效应。如果在攻击前7天转输,五种具有不同遗传学背景的正常小鼠脾细胞都有明显的保护效应;但若在攻击前28天转输,其保护效应则因供者品系而异;随着E/T(效应细胞数/肿瘤细胞数)比值降低其保护效应也有降低的趋势。如果将相同数量的正常小鼠脾细胞装入扩散盒,然后将其植入小鼠腹腔,则不能诱导保护效应。转输正常肾细胞或注射正常脾细胞匀浆对L615白血病细胞攻击也无任何保护效应。实验组大多数存活小鼠都能耐受剂量递增(10~4—10~6)的L615白血病细胞的反复攻击。在继承性化学免疫治疗实验中这些存活小鼠的免疫脾细胞能延长晚期L615病鼠的中位存活时间,甚至能使50%(5/10)的小鼠获得治愈。     

绞股蓝总皂苷抑制小鼠Lewis肺癌生长与提高免疫力研究

目的 :研究绞股蓝总皂苷 ( gypenosides ,GPs)对小鼠Lewis肺癌肿瘤生长、脾淋巴细胞数及NK细胞活性的影响。方法 :采用整体动物的抑瘤试验、脾淋巴细胞计数及NK细胞活性测定。结果 :GPs对小鼠Lewis肺癌细胞具有明显的抑制作用 ,在剂量 10、2 0、4 0mg/kg腹腔注射 (ip)给药条件下 ,其瘤重抑制率 (TWI)分别为 ( 2 9.8± 1.3) %、 ( 51.4± 2 .2 ) %和 ( 50 .0± 1.6) %。同时 ,GPsip给药后荷瘤小鼠脾淋巴细胞总数明显增加 ,外周血NK细胞活性明显升高 ,脾NK细胞活性也明显升高。结论 :GPs的抗肿瘤作用与其对荷瘤小鼠免疫功能的增强作用密切相关。     

用免疫缺陷型小鼠研究L615瘤株的继承性免疫和瘤苗免疫的原理

利用不同免疫缺陷小鼠研究转输正常脾细胞诱导受体鼠产生免疫预防效应的部分机理和瘤苗自动免疫的免疫细胞基础。结果表明:转输脾细胞诱导受体鼠产生免疫预防效应的有效脾细胞成分是T和/或NK细胞,似只有在受体鼠体内有T细胞的条件下才可使其产生免疫预防效应。还表明:MMC-L_(615)瘤苗诱导受体鼠产生的自动免疫保护效应,是通过体内T细胞介导实现的,T细胞可能是效应细胞。     

GITR抗体介导增强NK细胞杀伤活性的实验研究

目的 探讨糖皮质激素诱导的TNF受体家族相关受体(glucocorticoid-induced tumor necrosis factor receptorfamily related receptor,GITR)的抗体通过抑制Treg细胞的功能,进而增强NK细胞杀伤活性来对L615白血病细胞产生杀伤作用.方法 通过不同的给药方式将L615白血病小鼠设立为4个实验组,提取实验分组后的小鼠脾脏中NK细胞作为效应细胞,以L615白血病细胞作为靶细胞,在体外观察了NK细胞的杀伤活性变化情况,并运用RT-PCR,进一步观察了体现NK细胞杀伤活性的几个相关指标的变化.结果 GITR抗体可以明显增强小鼠脾脏中NK细胞的杀伤活性,具体表现为同NK细胞活性密切相关的3个指标穿孔素(Perforin),γ干扰素(IFN-γ),Fas的表达量明显增加.结论 GITR抗体能够通过Treg细胞的调节增强NK细胞的杀伤活性,进而有效的抑制L615白血病细胞.     

甲腈咪胍实验治疗小鼠P615移植瘤及其抗肿瘤机理

本文采用甲腈咪胍口服给药法,实验治疗小鼠P615移植瘤;并且利用单克隆抗体SPA菌体直接花环形成实验,测定小鼠脾T淋巴细胞亚群的变化。结果表明,甲腈咪胍具有抑制小鼠P615移植瘤细胞生长,延长荷瘤小鼠生存时间的作用;还可以降低荷瘤小鼠脾T淋巴细胞Lyt2(TS细胞)亚群的数目,调整L_3T_4/Lyt2比值恢复正常,发挥抗肿瘤效应。     

痘苗病毒增强人类白血病细胞免疫原性的实验研究

作者应用痘苗病毒处理人白血病细胞制备瘤苗,免疫正常615系小鼠。结果发现,实验组小鼠的NK细胞活性、白细胞介素-2(IL-2)诱生水平显著提高,T辅助细胞数及T_(11)/Ts比值显著提高(与对照组相比,P<0.01或P<0.05),未经痘苗病毒处理的人白血病细胞则无此作用。     

小鼠脾细胞替代人淋巴细胞的E花结试验

目的 :探讨以小鼠脾细胞代替人外周血淋巴细胞进行 E玫瑰花结试验实验教学的可行性。方法 :以 0 .41 ml5% SRBC免疫昆明系小鼠 ,4天和 2 1天后制备脾细胞悬液 ,常规方法进行 E玫瑰花结试验。结果 :经 SRBC免疫 4天和 2 1天后 ,与 SRBC混合反应 1 0 min与 1 2 0 min的小鼠脾细胞特异性 E玫瑰花结形成百分率无显著性差异 (P>0 .0 5) ,达 2 8.64± 4.48%至34.38± 7.2 5% ,其形态、大小、染色与人外周血 T细胞 E玫瑰花结相近。结论 :小鼠免疫脾细胞 E玫瑰花结试验可代替人外周血淋巴细胞 E玫瑰花结试验用于实验教学 ,有关实验结果可反映实验动物的特异性体液和细胞免疫功能     

用酶释放试验检测小鼠的自然杀伤细胞活性

用乳酸脱氢酶(LDH)释放试验检测小鼠自然杀伤细胞(NK)活性,以YAC-1为靶细胞,小鼠脾细胞为效应细胞,用分光光度计测定受损靶细胞释放的LDH,探讨靶细胞的最适培养时间和浓度,效靶比例和测定时温度的影响。实验证实了小鼠NK活性水平与鼠龄及鼠的品系有关,并观察到非纯化白细胞介素-2(IL-2)与鼠脾细胞体外共育1h对NK活性有增强作用。     

分泌抗H_(615)单克隆抗体的杂交瘤细胞系的建立

用抗615纯系小鼠的正常肝细胞抗体处理的H_(615)瘤细胞免疫BALB/c系小鼠,取其脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞融合,以间接免疫荧光法和细胞ELISA两种方法检测,建立两株分泌抗H_(615)单克隆抗体的杂交瘤细胞系8A58和12C_6。两杂交瘤细胞系所产生的单克隆抗体与正常615系小鼠的肝、脾、肺、肾、脑、心肌、横纹肌、胸腺组织细胞以及小鼠肿瘤细胞、人肝细胞性肝癌细胞均无交叉反应。证明两种单克隆抗体具有一定的特异性。两种单克隆抗体均属IgG_1。     

GITR抗体介导增强NK细胞杀伤活性的实验研究

目的探讨糖皮质激素诱导的TNF受体家族相关受体（glucocorticoid-induced tumor necrosis factor receptor family related receptor．GITR）抗体通过调节Treg细胞和NK细胞的功能对L615白血病细胞增殖的影响．了解NK细胞对白血病细胞的杀伤活性。方法通过不同的给药方式将L615白血病小鼠设立为4个实验组．提取实验分组后的小鼠脾脏中NK细胞作为效应细胞．以L615白血病细胞作为靶细胞．在体外观察了NK细胞的杀伤活性变化情况．并运用RT-PCR进一步观察了体现NK细胞杀伤活性的几个相关指标的变化。结果GITR抗体可以明显增强小鼠脾脏中NK细胞的杀伤活性．表现为同NK细胞活性密切相关的3个指标穿孔素（Perforin）、γ干扰素（IFN-γ）、Fas的表达量明显增加。结论GITR抗体能够通过Treg细胞的调节增强NK细胞的杀伤活性,进而有效的抑制L615自血病细胞。     

葡萄球菌A蛋白抗癌机理的研究 Ⅲ、葡萄球菌A蛋白对小鼠巨噬细胞和NK细胞的体外刺激效应

本文观察了纯化的SpA和SpA菌体对小鼠巨噬细胞和NK细胞的体外刺激效应,并与CP作了比较。结果表明:(1) 纯化的SpA和SpA菌体在体外刺激小鼠腹腔巨噬细胞24小时,可使后者的细胞毒性效应明显增强,但总的看来,SpA菌体激活巨噬细胞的作用不如CP。(2) 纯化的SpA和SpA菌体以及CP在体外均可提高小鼠脾细胞NK活性,三者的作用强度相近。     

紫菜多糖对小鼠NK细胞活性的增强作用

目的:探讨紫菜多糖对小鼠免疫功能的刺激作用。方法:以不同浓度的紫菜多糖及生理盐水向BALB/C小鼠腹腔连续注射7d后,通过ELISA技术及乳酸脱氢酶释放法分别检测小鼠的脾细胞分泌γ-干扰素(IFN-γ)水平及自然杀伤细胞(NK细胞)杀伤活性。结果:0.15g·kg-1紫菜多糖注射组小鼠的脾细胞分泌IFN-γ水平及NK细胞杀伤活性高于生理盐水对照组(P<0.05)。结论:适宜浓度的紫菜多糖具有增强小鼠免疫功能的效应。     

615小鼠两株淋巴肉瘤白血病晚期外周血T和B淋巴细胞的变化

很多资料表明,带瘤宿主的免疫功能随着肿瘤的发展而逐渐受到抑制。我们采用ANAE染色观察了两株晚期小鼠淋巴肉瘤白血病(L7710和L7711)外周血T和B淋巴细胞百分率的变化,获得了初步的结果。材料和方法实验动物:分别接种了L7710、L7711白血病细胞的615系小鼠和正常615小鼠(对照)雌雄数相近,体重20克左右。     

复合双歧胶囊对小鼠免疫功能的影响

目的:探讨复合双歧胶囊对小鼠免疫调节作用.方法:将192只BALB/c小鼠随机分为4批,每批均为48只,一批动物进行脏器/体质量比值和小鼠碳廓清实验;一批动物进行绵羊红细胞诱导小鼠足趾增厚(DTH)、抗体生成细胞检测和血清凝血素测定;一批动物进行小鼠愎腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞实验;一批动物进行刀豆蛋白A(ConA)诱导的小鼠脾淋巴细胞转化实验和乳酸锂脱氢酶法测定NK细胞活性.每批动物分为低、中和高3个剂量组(0.2、0.4和1.2 g/kg)和溶剂对照组,每组12只,分别给予复合双歧胶囊和蒸馏水.结果:高剂量组复合双歧胶囊可提高小鼠碳廓清能力(F=2.872,P=0.047),促进NK细胞活性(F=3.866,P=0.015)和血清凝血素的生成(F=3.748,P=0.018);中剂量和高剂量组复合双歧胶囊能促进ConA诱导的小鼠脾淋巴细胞转化能力(F=8.213,P<0.001)和抗体生成细胞的生成(F=65.033,P<0.001),提高小鼠腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞能力(吞噬百分率:F=7.500,P<0.001;吞噬指数:F=9.715,P<0.001);3个剂量组均可增强绵羊红细胞诱导小鼠DTH能力(F=11.666,P<0.001).4组脾脏和胸腺的免疫器官/体质量比值比较,差异无统计学意义(F=1.302和0.762,P均0.05).结论:复合双歧胶囊对小鼠的细胞免疫、体液免疫和单核-巨噬细胞功能和NK功能有促进作用,即具有增强免疫力功能.     

三联合(T、B、NK 细胞)免疫缺陷型PB I/3-xid beige裸鼠的培育初报

为了满足国内实验肿瘤学研究的需要,作者自1979年以来,先后育成单一 T细胞功能缺陷型的 PB Ⅰ/1裸鼠(615/PB Ⅰ裸鼠),以及 T 和 NK 细胞联合免疫缺陷型的同源系 C57 BL/6 PB Ⅰ-beige 裸鼠和非同源系的 PB Ⅰ/2-beige 裸鼠(615 B 6/PBⅠ-beige 裸鼠)。在此基础上,作者选用 T、NK 细胞免疫功能联合缺陷型的 PB Ⅰ/2-beige 裸鼠作为供体动物,B 细胞功能低下的 CBA/N 近交系小鼠作为受体动物,采用杂交-回交(Cross-back cross)和回交一互交(back cross-inter cross)导入法,将具有 PB Ⅰ/2遗传背景的“bg”和“nu”基因导入 CBA/2近交系小鼠中,通过两年多努力,经 N_3+F_3而培育成功三联合(T、B、NK 细胞)免疫功能缺陷型的 PB Ⅰ/3-xid beige 裸鼠(CB·615/PB Ⅰ-xid.beige 裸鼠)。初步研究表明,该PB Ⅰ/3-xid beige 裸鼠保持了其双亲各自的特性。表型为裸体,皮肤浅淡呈苍白色,虹膜睫状体和脉络膜色素细胞变浅并形成一个含深色颗粒的色素环,以及无肉眼可见胸腺,出血时间延长等特征。就其免疫学特性进行的研究表明,PB Ⅰ/3-xid bejge 裸鼠 NK 细胞活性与 PB Ⅰ/2beige 裸鼠相当,而显著低于 PB Ⅰ/1裸鼠。Con A 诱导的增殖反应在 PB Ⅰ/3-xid beige裸鼠明显低于615/PB Ⅰ小鼠,而与 PB Ⅰ/1裸鼠相近。在 B 细胞功能方面,与遗传背景相同的 PB Ⅰ/2 beige 裸鼠相比,PB Ⅰ/3-xid beige 裸鼠 EAC 花环形成细胞百分率及 LPS诱导的增殖反应均显著降低,Smlg~+细胞百分率均为 PB Ⅰ/2-beige 裸鼠的2/3,与文献报导一致。以上结果证明,PB Ⅰ/3-Xid beige 裸鼠是 T、B、NK 细胞功能低下的一种新型的动物模型。     

615系小鼠的自发性肿瘤观察

615系小鼠是中国医学科学院输血及血液学研究所将昆明种(雌)杂种小鼠与C_(57)BL(雄)近交系小鼠杂交后,进一步培育而成的一株灰褐色近交系小鼠,已广泛应用于肿瘤学的实验研究中。但是关于615系小鼠自发瘤的发生率,迄今未见有公开报道。为了获得有关615系小鼠的某些生理学或和病理     

615系小鼠血容量及红细胞比积的测定

我所于1961年5月用昆明种(?)和C_(57)BL系(?)小鼠杂交,经连续近亲交配培育而成的615系小鼠至今已繁殖57代,各项生物学性状已相对稳定.为了解该小鼠的生理特性,测定了全身血液容量以及循环血红细胞的比积,兹将结果报告如下.材料和方法(一)动物本所饲育的第56代正常615系小鼠,2-3月龄,体重18-25克,雌雄各半.并以20克左右的昆明种和年龄在1年以上的老年615系小鼠作为比较.     

正常小鼠脾细胞的抑瘤效应与自然杀伤细胞活性相关

利用甲基氚化胸腺嘧啶核苷(~3H-dT)与~(51)Cr释放法平行对比,检测正常小鼠脾细胞对YAC-1细胞的抑瘤率和杀伤率,两者呈显著相关。参与抑瘤效应的细胞与自然杀伤细胞(NK细胞)类似,都能被多聚肌苷酸:胞苷酸(polyⅠ:C)、白细胞介素2(IL-2)活化;耐受20Gyγ射线。实验表明,在抑瘤效应中,包含着NK细胞的作用。但~3H-dT掺入试验比~(51)Cr释放法更敏感,当选用低杀伤率的效靶配组时,仍能检测一定程度的抑瘤率。