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目的 探讨lncRNA DGCR5对鼻咽癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响及其作用机制。方法 将pcDNA-NC、pcDNA-DGCR5、anti-miR-NC、anti-miR-21质粒分别转染至CNE-1、HNE-1细胞中,记为pcDNA-NC组、pcDNA-DGCR5组、anti-miR-NC组、anti-miR-21组;将pcDNA-DGCR5分别与mimic-NC、mimic-miR-21共转染至CNE-1、HNE-1细胞中,记为pcDNA-DGCR5+mimic-NC组、pcDNA-DGCR5+mimic-miR-21组;采用qRT-PCR检测miR-21和DGCR5的表达水平;四甲基偶氮唑蓝(MTT)、Transwell、流式细胞术检测CNE-1、HNE-1细胞增殖活性、迁移、侵袭和凋亡;双荧光素酶报告实验检测DGCR5和miR-21靶向调控。结果 与癌旁组织和人永生化鼻咽上皮细胞NP69相比,鼻咽癌组织和鼻咽癌细胞SUNE-1、CNE-2、CNE-1、HNE-1、HONE-1中DGCR5表达水平显著降低(P<0.05),miR-21表达水平显著增加(P<0.05)... 相似文献
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目的 探讨微小RNA(miR)-485-5p对鼻咽癌CNE2细胞增殖、凋亡、侵袭、迁移和上皮间质转化的影响及其机制。方法 采用实时荧光定量聚合酶链反应(PCR)检测miR-485-5p在人永生化鼻咽上皮细胞系NP69和人鼻咽癌细胞系CNE2中的表达情况;将体外培养的CNE2细胞分为Con组(正常培养)、NC组(转染mimics阴性对照)和mimics组(转染miR-485-5p mimics),实时荧光定量PCR测定miR-485-5p表达,噻唑蓝法、Transwell小室、流式细胞术分别检测细胞增殖活性、侵袭和迁移、凋亡,免疫印迹法检测细胞中E-钙黏蛋白、N-钙黏蛋白、波形蛋白和CDC28蛋白激酶调节亚基(CKS)1B蛋白表达水平,双荧光素酶报告基因实验检测miR-485-5p和CKS1B靶向关系。结果 与NP69细胞比较,miR-485-5p在CNE2细胞中的表达水平明显降低(P<0.05)。与Con组、NC组比较,mimics组细胞中miR-485-5p表达水平、细胞凋亡率和E-钙黏蛋白表达水平均明显升高,而增殖活力、侵袭与迁移能力和N-钙黏蛋白、波形蛋白、CKS1B蛋白表... 相似文献
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目的 探讨过表达miR-515-5p对视网膜母细胞瘤细胞增殖、凋亡、侵袭能力的影响及其机制。方法 利用StarBase数据库进行生物信息学分析并预测miR-515-5p的靶基因为CBX4,并经双荧光素酶报告基因实验验证。选择视网膜母细胞瘤细胞系SO-RB50、Y79、HXO-RB-44细胞中miR-515-5p表达降低最明显的SO-RB50细胞进行实验,分为miR-515-5p NC组、miR-515-5p mimics组、miR-515-5p mimics+CBX4组、miR-515-5p mimics+CBX4-NC组,分别转染miR-515-5p阴性对照、miR-515-5p mimics、miR-515-5p mimics+CBX4过表达载体、miR-515-5p mimics+CBX4空载体。采用实时荧光定量PCR法检测各组miR-515-5p及CBX4 mRNA表达,Western blotting法检测CBX4蛋白表达,CCK-8法检测转染12、24、48、72 h的细胞增殖能力(OD值),TUNEL法检测细胞凋亡率,Transwell小室实验检测细胞侵袭能力。结果 mi... 相似文献
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目的 探讨微小RNA-199(miR-199)对结直肠癌细胞增殖、侵袭的影响及其作用机制。方法 常规培养人正常结肠上皮细胞系(HCoEpiC细胞)、结直肠癌细胞系(LOVE、SW620、SW480、HT29、DLD-1细胞),用实时定量PCR法检测细胞中miR-199表达。将SW620细胞随机分为miR-199过表达组、阴性对照组及miR-199+转铁蛋白受体1(TFR1)共表达组(miR-199mimics+TFR1组),分别将miR-199mimics、mimic-NC、miR-199mimics+TFR1过表达质粒转染至细胞内;另取部分未转染细胞作为空白对照组。实时荧光定量PCR法检测TFR1 mRNA表达,MTT实验检测细胞增殖能力,Transwell侵袭实验检测细胞侵袭能力,Western blotting法检测TFR1蛋白表达,生物学软件TargetScan及双荧光素酶报告基因实验分析miR-199的靶基因。结果 人结直肠癌细胞系中miR-199相对表达量均低于人结肠上皮细胞系(P均<0.05),且SW620细胞中miR-199相对表达量最低,故选SW620细胞为实验... 相似文献
5.
目的 观察微小RNA-200a(miR-200a)对宫颈癌细胞系HeLa增殖、迁移和侵袭的调控作用,对miR-200a的靶向mRNA及靶向长链非编码RNA(lncRNA)进行预测分析。方法 取人宫颈癌细胞系HeLa分为1、2、3及4组,分别转染miRNA模拟物miR-200a mimics、miRNA抑制物miR-200a inhibitor、对照物mimics NC及inhibitor NC。培养48 h时采用qRT-PCR法检测各组细胞miR-200a表达;采用CCK8法检测各组细胞增殖能力,采用Transwell侵袭实验检测细胞侵袭能力,采用Transwell迁移实验和细胞划痕实验检测各组细胞迁移能力。使用miRNA数据库在线预测miR-200a靶向mRNA和靶向lncRNA,采用基因本体论功能注释和京都基因和基因组百科全书富集分析法分析宫颈组织中miR-200a的靶向mRNA和靶向lncRNA的生物学功能。结果 与3组比较,1组细胞miR-200a相对表达量高;与4组比较,2组细胞miR-200a相对表达量低(P均<0.05)。与3组比较,培养72、96 h时1组细胞增殖... 相似文献
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目的 探讨长链非编码RNA(lncR)FOXD2-AS1调控微小RNA(miR)-145-5p对非小细胞肺癌(NSCLC)细胞增殖、迁移、侵袭和上皮-间质转化(EMT)等生物学特性的影响。方法 体外培养人NSCLC细胞系A549、H1299、SK-MES-1及人正常肺支气管上皮细胞系16HBE,应用RT-qPCR检测各细胞系中lncR-FOXD2-AS1和miR-145-5p表达。选取lncR-FOXD2-AS1相对高表达的SK-MES-1作为敲低实验的研究对象,将SK-MES-1细胞按照转染处理的不同分为NC组(转染si-NC)和si-FOXD2-AS1组(转染si-FOXD2-AS1),转染后,RT-qPCR检测细胞中lncR-FOXD2-AS1、miR-145-5p表达,CCK-8法检测细胞增殖活性,Transwell实验检测细胞迁移、侵袭能力,Western blotting法检测细胞中E-cadherin、N-cadherin、Fibronectin蛋白表达。双荧光素酶报告基因实验验证lncR-FOXD2-AS1和miR-145-5p的相互关系。结果 与16HBE细胞相比,l... 相似文献
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目的构建peDNA3.1(+)-血清淀粉样蛋白A(SAA)真核表达载体,观察其在人鼻咽癌细胞CNE-2中的表达及对CNE-2增殖的影响。方法以CNE-2细胞的eDNA为模板,通过PCR扩增得到SAA片段,经酶切、纯化后与peDNA3.1(+)连接;重组质粒经酶切分析及测序鉴定后,用脂质体转染法转染人鼻咽癌细胞CNE-2,用Westernblot法检测转染前后该细胞中SAA蛋白的表达,并用MTr法检测转染重组质粒后的细胞增殖情况。结果peDNA3.1(+)-SAA经酶切、测序鉴定完全正确,真核表达载体构建成功;转染peDNA3.1(+)-SAA真核表达载体后CNE-2细胞中SAA蛋白表达水平明显高增高;转染pcDNA3.1(十)-SAA后CNE-2细胞增殖速度加快。结论成功构建peDNA3.1(+)-SAA真核表达载体,其能稳定表达于人鼻咽癌细胞CNE-2并促进细胞增殖;此为进一步研究SAA的生物学功能及鼻咽癌的新型治疗方法奠定了基础。 相似文献
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目的 探讨miR-375-3p过表达后甲状腺乳头状癌细胞增殖和侵袭能力以及PI3K/AKT/EMT信号通路相关蛋白的变化。方法 取人甲状腺上皮细胞系Nthy-ori3-1和人甲状腺乳头状癌细胞系TPC-1、BHP5-16、BHP2-7、K-1,采用RT-qPCR法检测细胞miR-375-3p表达。以四种甲状腺乳头状癌细胞中miR-375-3p表达最低的细胞为研究对象,将其分为转染组和阴性对照组,转染组通过转染miR-375-3p模拟物miR-375-3p-mimics上调细胞中miR-375-3p表达,阴性对照组转染阴性对照序列scramble。采用MTT法检测两组细胞增殖能力,Transwell实验观察细胞侵袭能力,Western blotting法检测细胞PI3K/AKT信号通路相关蛋白p-PI3K、p-AKT和上皮间质转化(EMT)相关蛋白E钙黏蛋白(E-cadherin)、N钙黏蛋白(N-cadherin)、波形蛋白(Vimentin)表达。取甲状腺乳头状癌细胞,随机分为阴性对照组、miR-375-3p过表达组和miR-375-3p过表达+IGF-1组,miR-375-3p过表... 相似文献
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目的 探讨miR-21在大肠癌细胞迁移和侵袭中的作用及机制.方法 取大肠癌SW480细胞培养、传代,分为两组.观察组转染miR-21 mimics,对照组加入同浓度的miRNA mimics negative control.采用实时荧光定量PCR法检测细胞中miR-21的表达情况,采用Transwell小室检测细胞的迁移和侵袭能力,Western blot法检测上皮一间质转化(EMT)相关蛋白表达情况.结果 转染组miR-21的表达量、细胞的迁移和侵袭能力均明显高于对照组(P均<0.05);细胞中紧密连接蛋白(ZO-1)和上皮钙黏蛋白(E-cad)的表达明显降低、神经钙黏蛋白(N-cad)和转录因子Slug的表达明显升高,第10号染色体同源缺失性磷酸酶-张力蛋白(PTEN)表达明显降低、而磷酸化蛋白激酶B(p-Akt)表达明显升高(P均<0.05).结论 miR-21可促进人大肠癌细胞发生EMT发生细胞迁移和侵袭,其机制为下调PTEN蛋白表达、激活P13K/Akt,促进EMT. 相似文献
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目的 探讨微小核糖核酸7(miR-7)靶向调控Krüppe样因子4(KLF4)对结肠癌干细胞生物学行为的影响。方法 体外传代培养结肠癌干细胞。取传15代、对数生长期、生长状态良好的结肠癌干细胞,随机分为对照组、NC mimics组、miR-7 mimics组,NC mimics组和miR-7 mimics组分别转染空载质粒、miR-7 mimics质粒,对照组不予转染。采用RT-qPCR法验证转染效率。收集各组转染48 h结肠癌干细胞,采用CCK-8法检测细胞活力,采用细胞划痕实验检测细胞迁移能力,采用改良Boyden小室法检测细胞侵袭能力,采用流式细胞术检测细胞凋亡率。通过TargetScan在线网站预测miR-7与KLF4的结合位点,并通过双荧光素酶报告基因实验验证miR-7对KLF4的靶向调控作用。收集各组转染48 h结肠癌干细胞,分别采用RT-qPCR法、Western blotting法检测KLF4 mRNA和蛋白表达。结果 miR-7 mimics组miR-7相对表达量高于对照组和NC mimics组(P均<0.05),而对照组与NC mimics组比较差异无统计学意... 相似文献
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《中国老年学杂志》2017,(7)
目的探讨miR-34b在老年鼻咽癌组织中表达及对细胞增殖、侵袭的影响。方法选取初治原发性老年鼻咽癌患者83例,正常鼻咽黏膜组织40例作为对照组,培养人鼻咽癌CNE-2细胞株,根据转染物不同将细胞分为miR-34b转染组、阴性对照组和空白对照组,利用实时荧光定量PCR技术检测老年鼻咽癌及对照组组织中miR-34b表达以及不同转染组细胞中miR-34b表达,MTT比色法检测不同转染组细胞增殖能力,检测细胞黏附能力,Transwell法检测不同转染组细胞侵袭能力。结果老年鼻咽癌组织中miR-34b相对表达量为(0.64±0.09),显著低于对照组的(0.94±0.12),差异有统计学意义(t=14.410,P<0.001);miR-34b在老年鼻咽癌组织中相对表达量与临床分期、T分期、N分期和淋巴结转移有关(P<0.001);miR-34b转染组细胞中miR-34b相对表达量为(0.85±0.10),显著高于阴性对照组和空白对照组,分别为(0.52±0.08)和(0.50±0.07),差异有统计学意义(F=243.329,P<0.001);与阴性对照组和空白对照组相比,miR-34b转染组细胞增殖能力显著降低(P<0.05);miR-34b转染组黏附细胞数显著高于阴性对照组和空白对照组,而侵袭细胞数显著低于阴性对照组和空白对照组(P<0.001)。结论 miR-34b在老年鼻咽癌组织中呈低表达,上调miR-34b表达可减少细胞增殖,增加细胞黏附能力,抑制细胞侵袭能力,有望成为提高鼻咽癌对放射治疗敏感性的目的基因。 相似文献
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目的探讨miR-302a对胃癌BGC-823细胞上皮间质转化(EMT)、侵袭和迁移能力的影响和机制。方法在胃癌BGC-823细胞中转染miR-302a mimics,CCK-8测定细胞增殖变化,Transwell小室测定迁移和侵袭,Western blotting检测E-cadherin、Vimentin、N-cadherin蛋白表达。靶基因预测软件预测E2F1可能为miR-302a的靶基因,荧光素酶报告系统鉴定靶向关系。在胃癌BGC-823细胞中共转染pcDNA 3.1-E2F1和miR-302a mimics,按照上述方法测定细胞增殖、侵袭、迁移和E-cadherin、Vimentin、N-cadherin、E2F1蛋白表达水平。结果miR-302a mimics降低胃癌BGC-823细胞增殖、侵袭和迁移能力,下调细胞中Vimentin、N-cadherin蛋白表达水平,促进细胞中E-cadherin蛋白表达。miR-302a靶向负调控E2F1表达。pcDNA 3.1-E2F1能够提高miR-302a mimics条件下胃癌BGC-823细胞中E2F1蛋白表达水平,促进细胞增殖、侵袭和迁移,促进细胞中Vimentin、N-cadherin蛋白表达,减少细胞中E-cadherin蛋白表达。结论miR-302a靶向E2F1抑制胃癌BGC-823细胞EMT并降低细胞侵袭和迁移能力。 相似文献
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目的 探讨重楼皂苷Ⅱ对肺癌细胞增殖、迁移和侵袭能力的抑制作用及其可能的机制。方法 取对数生长期的肺癌A549细胞,分为高浓度组、中浓度组、低浓度组和对照组,分别加入3、2、1μmol/L重楼皂苷Ⅱ及等量二甲基亚砜溶液,干预24 h。采用CCK-8法检测细胞增殖能力(以细胞增殖活力表示),细胞划痕实验检测细胞迁移能力(以细胞迁移率表示),Transwell侵袭实验检测细胞侵袭能力(以侵袭细胞数表示),Western blotting法检测凋亡相关蛋白[Cleave-Caspase-3、Bax、Bcl-2、基质金属蛋白酶2(MMP-2)]表达,实时荧光定量PCR法检测miR-16-5p表达。取对数生长期的A549细胞,分为miR-16-5p inhibitor组和miR-16-5p NC组和阴性对照组,miR-16-5p inhibitor组和miR-16-5p NC组分别转染含有绿色荧光标记的miR-16-5p inhibitor和miR-16-5p inhibitor NC,并加入2μmol/L重楼皂苷Ⅱ溶液,阴性对照组未进行细胞转染并加入等量二甲基亚砜溶液,干预24 h,参照上法检测... 相似文献
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目的 探究微小RNA-125a-5p(miR-125a)对人鼻咽癌细胞(HK-1细胞)增殖的影响及机制。方法 常规培养HK-1细胞及人胚肾细胞永生化细胞系(293T细胞),将HK-1细胞随机分为对照1组、过表达miR-125a组(转染miR-125a mimics)、沉默miR-125a组(转染miR-125a inhibitor);另取部分HK-1细胞随机分为对照2组、miR-125a过表达组(转染miR-125a mimics)及回补组[转染miR-125a mimics同时过表达含PDZ结合基序的转录共激活因子(TAZ)]。转染48 h后检测miR-125a表达验证转染效率。用RT-qPCR法检测miR-125a-5p、TAZ mRNA;用Western blotting法检测TAZ蛋白;CCK-8实验、集落形成实验检测细胞增殖能力;通过预测网站TargetScan(http://www. targetscan. org/)和miRDB(http://mirdb. org/)预测miR-125a与TAZ的结合位点。将293T细胞随机分为4组,WT+miR-ctrl组共转染TAZ野... 相似文献
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李欢庆蒋淼毛雨晴胡静娴卜淑蕊樊晓明 《老年医学与保健》2016,(2):100-103
目的探讨MicroRNA-21在胃癌细胞上皮-间质转化中的作用及其机制。方法利用Lipofectamine 2000脂质体将miR-21 mimics、miR-21 inhibitor转染入AGS细胞中;Real-time聚合酶链反应(RT-PCR)法测定AGS细胞内miR-21的表达;采用划痕法、Transwell小室检测细胞的迁移和侵袭能力;Western blotting方法检测上皮-间质转化(EMT)相关蛋白表达的表达变化。结果 AGS细胞转染miR-21 mimics后,细胞的迁移和侵袭能力均高于对照组(P<0.05),Western blot结果显示E-Cadherin、PTEN表达下降,Vimentin表达升高;AGS细胞转染miR-21 inhibitor后,细胞的迁移和侵袭能力均低于对照组(P<0.05);E-Cadherin、PTEN表达升高,Vimentin表达降低。结论 miR-21可以诱导AGS胃癌细胞迁移和侵袭。E-cadherin和PTEN表达下调和上调Vimentin可能是miR-21作用的分子机制。miR-21在胃癌肿瘤转移中可能起着重要作用,可能成为胃癌治疗的一个潜在靶点。 相似文献
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目的 观察微小RNA-1306-5p(miR-1306-5p)在急性髓系白血病(AML)患者骨髓组织单个核细胞中的表达及对人白血病细胞株HL60增殖凋亡和迁移侵袭调控作用。方法 分别提取初诊AML患者和再生障碍性贫血(AA)患者骨髓组织单个核细胞,采用qRT-PCR法检测单个核细胞miR-1306-5p;(2)取HL60细胞,分别转染过表达和敲低miR-1306-5p质粒(mimics control、miR-1306-5p mimics、inhibitor control、miR-1306-5p inhibitor,计为1、2、3、4组),转染48 h后采用CCK8法检测各组细胞OD值,流式细胞术和Transwell法分别检测各组细胞凋亡率、迁移细胞数、侵袭细胞数。结果 AML患者和AA患者miR-1306-5p相对表达量分别为0.27±0.07、1.00±0.08,两者比较,P<0.05。与mimics control组比较,miR-1306-5p mimics组OD值、侵袭细胞数、迁移细胞数降低,凋亡率升高(P均<0.05);与inhibitor control组比较... 相似文献
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目的 探讨长链非编码RNA(lncRNA)NKILA对鼻咽癌细胞放射抵抗和上皮间质转化的影响及其机制。方法 体外传代培养鼻咽癌细胞CNE2并构建放射抵抗细胞模型。将放射抵抗CNE2细胞随机分为空白组、NC组、转染组,转染组和NC组分别转染NKILA-mimic、NKILA-NC质粒,空白组不予转染。收集细胞,采用RT-qPCR法检测lncRNA NKILA、miR-21表达,采用MTT法检测细胞增殖能力,采用Transwell小室实验检测细胞侵袭和迁移能力,采用Western blotting法检测E-cadherin、N-cadherin表达;通过TargetScan预测lncRNA NKILA与miR-21的靶向调控关系,并通过双荧光素酶报告基因实验验证lncRNA NKILA与miR-21的靶向调控关系。取SD裸鼠10只,随机分为观察组和对照组各5只,分别于右前肢腋下注射转染lncRNA NKILA的放射抵抗CNE2细胞、单纯放射抵抗CNE2细胞,常规饲养4周处死,分离并测量移植瘤体积。结果 转染组lncRNA NKILA表达、E-cadherin表达均高于空白组和NC组,miR... 相似文献
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目的 观察微小RNA-144(miR-144)对人结肠癌细胞株增殖、迁移、侵袭的影响及其与同源盒基因A10(homeobox gene A10,HOXA10)的结合力。方法 (1)人结肠癌细胞株HCT116、SW480、CL-11和永生化正常人结肠上皮细胞株FHC中miR-144及HOXA10 mRNA检测:采用实时荧光定量PCR法检测HCT116、SW480、CL-11及FHC中miR-144与HOXA10 mRNA,观察人结肠癌细胞和人结肠上皮细胞miR-144、HOXA10 mRNA表达变化,选择miR-144相对表达量最低HCT116细胞为后续研究对象。(2)miR-144对人结肠癌细胞株增殖、侵袭及迁移的影响观察:取对数生长期HCT116细胞分为3组,1组细胞顺序转染miR-144模拟物(miR-144 mimics)和HOXA10过表达质粒pcDNA3.1-HOXA10,2组细胞转染miR-144 mimics,3组细胞转染空白质粒。转染24 h时测算各组细胞增殖活性、观察各组细胞的侵袭及迁移情况、检测各组细胞miR-144及HOXA10蛋白。(3)HCT116细胞中miR... 相似文献
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目的 探讨高、低表达miR-296-5p的肿瘤细胞外泌体对食管鳞癌细胞(ESCC)迁移和侵袭的调控作用及其机制。方法 提取转染miR-296-5p过表达和miR-296-5p干扰及其阴性对照物(NC)后的ESCC细胞外泌体,并采用透射电镜与Western blotting法进行鉴定;将ESCC细胞分为三组,干扰组、过表达组分别加入miR-296-5p干扰或过表达细胞的外泌体培养,NC组加入NC转染细胞的外泌体培养48 h;取各组细胞,MTT法检测细胞活力、Transwell法检测细胞侵袭迁移能力,RT-PCR、Western blotting法检测细胞黏附分子3(CADM3)、CADM1、CADM4、钙黏蛋白E(E-cadherin)及血管内皮细胞生成浸润相关蛋白CD31、CD44。结果 细胞活力、迁移和侵袭细胞数过表达组>NC组>干扰组(P均<0.05)。细胞中CADM1、CADM4、E-cadherin基因及蛋白表达水平干扰组>NC组>过表达组,CADM3、CD31、CD44基因及蛋白表达水平过表达组>NC组>干扰组(P均<0.05)... 相似文献