miR-31在结直肠癌患者血清中的表达及对结肠癌HCT116细胞增殖及凋亡的影响

背景与目的：microRNA与肿瘤关系密切,血清miRNAs可以作为筛选和监测结直肠癌的有效指标。该研究旨在检测结直肠癌患者血清中miR-31的表达水平,并分析miR-31对结肠癌细胞增殖、凋亡及细胞周期的影响。方法：收集40例结直肠癌患者和35例健康人群作为对照,采用实时荧光定量聚合酶链反应(real-time fluorescent quantitative polymerase chain reaction,RTFQ-PCR),检测其血清miR-31的表达水平,并分析结直肠癌患者血清miR-31的表达水平与临床病理特征之间的关系。采用脂质体转染将miR-31模拟物(miR-31 mimics)和抑制剂(miR-31 inhibitor)转染到HCT116细胞,采用CCK-8法检测细胞增殖,流式细胞术检测细胞凋亡及周期改变。结果：结直肠癌患者血清中miR-31的表达显著高于健康对照组,miR-31表达与结直肠癌分化程度有关。转染miR-31mimics组HCT116细胞生长增快,而转染miR-31抑制剂后细胞增殖能力明显降低(P＜0.01);同时miR-31mimics组细胞凋亡所占比例较miR-31抑制剂组和阴性对照组(miR-control,NC)明显减少,尤其是晚期凋亡细胞减少为著;转染miR-31抑制剂组,G1期细胞较miR-31 mimics组和NC组明显增多。结论：miR-31在结直肠癌患者血清中表达显著上调,miR-31可能通过促进结肠癌细胞增殖、抑制细胞凋亡而参与了结直肠癌的发展进程,有望成为结直肠癌诊断的标志物。     

Circ_0001946靶向miR-671-5p调控Wnt/β-catenin通路对结直肠癌细胞恶性进展的影响

摘 要：［目的］ 探讨circ_0001946对结直肠癌细胞恶性进展的影响。［方法］培养结直肠癌HCT116、SW480、Colo320、HT29细胞和正常结直肠CCC-HIE-2细胞,实时定量PCR检测circ_0001946、miR-671-5p表达量。miRcode和双荧光素酶报告实验分析circ_0001946和miR-671-5p的关系。circ_0001946、miR-671-5p在HCT116细胞中的表达量被上调或下调后,分别检测HCT116细胞生长活性、细胞凋亡率及细胞迁移能力。免疫蛋白印迹法检测Bcl-2、Bax、Caspase-3和Caspase-9蛋白表达及Wnt/β-catenin信号通路蛋白表达。［结果］ HCT116（4.76±0.47）、HT29（2.85±0.57）、SW480（2.75±0.62）、Colo320（3.12±0.68）细胞中circ_0001946表达水平高于CCC-HIE-2细胞（1.24±0.09）（t=7.238、8.129、6.893、6.875,P均<0.05）。下调circ_0001946表达显著降低了HCT116细胞增殖（P<0.05）和迁移能力（P<0.05）,促进了细胞凋亡（P<0.01）; circ_0001946靶向miR-671-5p; circ_0001946表达被上调或miR-671-5p表达被下调后,HCT116细胞增殖和迁移能力显著上升,细胞凋亡率明显降低,Wnt/β-catenin信号通路被激活。［结论］ circ_0001946靶向miR-671-5p激活了Wnt/β-catenin信号通路,促进了结直肠癌细胞恶性进展。     

长链非编码RNA PANDAR促进结直肠癌转移的作用和机制研究

背景与目的：越来越多的研究表明,长链非编码RNA(long non-coding RNA,lncRNA)在肿瘤发生、发展过程中有重要作用。LncRNA CDKN1A反义链启动子DNA损伤激动RNA(promoter of CDKN1A antisense DNA damage activated RNA,PANDAR)与多种肿瘤的进展及预后相关,在结直肠癌转移中的作用尚未得到证实。该研究旨在探索lncRNA PANDAR在结直肠癌中的功能,并对其作用机制进行初步探索。方法：采用实时荧光定量聚合酶链反应(real-time fluorescent quantitative polymerase chain reaction,RTFQ-PCR)检测lncRNA PANDAR在结直肠癌细胞及组织中的表达,并分析其表达水平与结直肠癌临床病理特征的关系。构建lncRNA PANDAR沉默(HCT116-shPANDAR)和高表达(DLD1-PANDAR)及其对照(HCT116-shNC、DLD1-vector)稳定转染细胞系。通过Transwell和Matrigel实验检测lncRNA PANDAR对细胞迁移和侵袭能力的影响。采用RTFQ-PCR检测lncRNA PANDAR表达改变后介导细胞上皮-间质转化能力的主要调控基因表达情况,并对目的基因在介导lncRNA PANDAR调控结直肠癌细胞转移中的作用进行验证。结果：LncRNA PANDAR在结直肠癌细胞中的表达明显高于结直肠正常上皮细胞;LncRNA PANDAR在结直肠癌组织中的表达明显高于癌旁组织［(171.52±97.80)% vs (100.00±63.18)%,P<0.05］,且其表达水平与结直肠癌的TNM分期、淋巴结转移和远处转移相关(P<0.05)。在Transwell及Matrigel实验中,lncRNA PANDAR沉默能够明显减弱结直肠癌细胞的迁移［100.00% vs (42.08±4.77)%,P<0.05］和侵袭［100.00% vs (39.14±3.81)%,P<0.05］能力,lncRNAPANDAR高表达能够明显促进结直肠癌细胞的迁移［100.00% vs (194.12±9.33)%,P<0.05］和侵袭［100.00%vs (204.08±12.27)%,P<0.05］能力。采用RTFQ-PCR检测lncRNA PANDAR表达改变后介导结直肠癌细胞上皮-间质转化的基因表达情况发现,锌指E-盒结合同源异形盒(zinc-finger E-box binding homeobox 1,ZEB1)表达与lncRNA PANDAR表达呈显著正相关;在lncRNA PANDAR高表达的细胞中干扰ZEB1表达能够明显逆转lncRNAPANDAR高表达引起的细胞迁移和侵袭能力的增强。结论：LncRNA PANDAR能够通过调控ZEB1表达进而促进结直肠癌转移,lncRNA PANDAR可能成为结直肠癌新的诊断指标及治疗靶点。     

MiR-885对结直肠癌细胞奥沙利铂化疗敏感性的影响

摘 要：［目的］ 探究miR-885对结直肠癌细胞奥沙利铂化疗敏感性的影响。［方法］利用qRT-PCR 验证在耐药和敏感结直肠癌蜡块组织中miR-885的相对表达量;运用质粒转染方法沉默结直肠癌细胞系HCT116中miR-885基因,按照miR-885表达水平分为2组：miR-NC和miR-885 inhibitor组,并且利用qRT-PCR验证转染效率。将细胞分成4组,分别是阴性对照组(NC)、阴性对照加奥沙利铂组（L-OHP）、miR-NC加奥沙利铂组（L-OHP/miR-NC）和miR-885 inhibitor加奥沙利铂组（L-OHP/miR-885 inhibitor）。利用CCK-8法检测HCT116细胞活性;Transwell检测HCT116细胞的侵袭能力;流式细胞术检测HCT116细胞的细胞周期。［结果］ 相比于癌旁正常组织（1.31±0.36）,耐药组织（2.75±0.82）中miR-885的表达量增加,而敏感组织（0.31±0.14）中miR-885的表达量降低。在miR-885组中miR-885表达水平（0.02±0.01）相对于miR-NC组（0.80±0.19）呈显著降低(P<0.05）。与L-OHP/miR-NC组（0.77±0.14）相比,L-OHP/miR-885 inhibitor组（0.48±0.23）细胞活性降低（P<0.05）。与L-OHP/miR-NC组（169±25）相比,L-OHP/miR-885 inhibitor组（28±9）细胞的侵袭数量减少（P<0.05）。与NC组G0/G1期（42.27±3.33）相比,L-OHP组（3.33±0.41）细胞比例降低（P<0.001）,与NC组S期（32.19±2.29）相比,L-OHP组（53.29±3.04）细胞比例增多(P<0.05),与NC组（16.32±2.29）G2/M期相比,L-OHP组（4.83±0.76）细胞比例减少(P<0.05)。同时,与L-OHP/miR-NC组（5.07±0.31）G0/G1期相比,L-OHP/miR-885 inhibitor组（45.59±1.95）细胞比例增加（P<0.001）,与L-OHP/miR-NC组（42.71±2.58）S期相比,L-OHP/miR-885 inhibitor组（12.72±1.60）细胞比例降低（P<0.001）,与L-OHP/miR-NC组(18.19±1.30)G2/M期相比,L-OHP/miR-885 inhibitor组（2.55±0.51）细胞比例减少（P<0.01）。［结论］ 沉默miR-885能够增强结直肠癌细胞HCT116对奥沙利铂化疗敏感性,miR-885可能成为结直肠癌治疗的新靶点。     

miR-203在结直肠癌中的表达及其功能分析

目的 探讨microRNA-203（miR 203）在结直肠癌中的表达情况及其临床意义,并在结直肠癌细胞中验证其功能。方法 采用实时荧光定量PCR（qRT-PCR）检测52例结直肠癌及对应癌旁组织中miR-203的水平,分析miR-203表达与临床病理参数及术前癌胚抗原的关系;检测miR 203在3种结直肠癌细胞株SW480、Lovo和HT 29及人正常结肠黏膜上皮细胞NCM460中的表达情况,选取miR-203水平最低的细胞分别转染miR-203模拟物（mimics）和miR-203 control,采用MTT法、流式细胞仪PI／Annexin V双染法和Transwell法检测转染miR 203对细胞增殖、凋亡和侵袭能力的影响。结果 结直肠癌组织中miR-203的相对表达量为0.372±0.019,低于癌旁组织的miR-203水平,且其表达与TNM分期、淋巴结转移、肿瘤大小及术前癌胚抗原水平均有关（P＜0.05）;与NCM460细胞相比（其miR-203表达水平设为1.00）,结直肠癌细胞SW480、Lovo和HT-29的miR 203相对表达量依次为0.26±0.07、0.44±0.05和0.32±0.04,选取SW480细胞进行后续实验。MTT检测显示,转染miR-203 mimics 48、72和96 h的SW480细胞吸光值均低于转染miR-203 control组,差异均有统计学意义（P＜0.05）;且转染miR-203 mimics 48和96 h的SW480细胞凋亡率高于转染miR-203 control组,但穿膜细胞数低于转染miR-203 control组（P＜0.05）。结论 miR-203在结直肠癌组织和细胞中低表达,上调miR 203水平可抑制结直肠癌细胞的增殖、侵袭并诱导凋亡。     

RSK4对结直肠癌细胞增殖的影响

摘 要：［目的］ 探讨RSK4（p90 ribosomalprotein S6 kinase4）在结直肠癌细胞的表达情况及其生物学作用。［方法］ 挑选结直肠癌细胞株SW480和HCT116,用Lipofectamin 2000技术将RSK4基因转染至细胞核内,建立结直肠癌RSK4基因高表达细胞系,用RT-PCR及WB证实了RSK4在结直肠癌细胞SW480和HCT116转染成功,采用MTT、流式细胞仪技术检测转染RSK4后对结直肠癌细胞增殖的影响。［结果］ RSK4在结直肠癌细胞呈低表达,转染成功后对结直肠癌细胞有明显的抑制作用,并使S 期细胞所占的比例下降,G0 / G1期比例上升（P<0.05）。［结论］ RSK4基因在结直肠癌细胞株中呈低表达,转染RSK4后可抑制肿瘤细胞生长,有可能为一个潜在的抑癌基因。     

MiR-655对结直肠癌细胞奥沙利铂化疗敏感性的影响

摘 要：［目的］ 探讨miR-655对结直肠癌细胞奥沙利铂化疗敏感性的影响。［方法］ 通过qRT-PCR 验证奥沙利铂耐药和敏感结直肠癌组织蜡块中miR-655的相对表达量;CCK-8法检测细胞活性;Transwell检测细胞侵袭能力;流式细胞术检测细胞周期。［结果］ 相比于癌旁的正常组织,对奥沙利铂耐药的结直肠癌组织中miR-655表达量相对较低（1.24±0.28 vs 0.25±0.12,P<0.01）,而对奥沙利铂敏感的结直肠癌组织中miR-655表达量相对较高（1.24±0.28 vs 2.68±0.76,P<0.01）。QRT-PCR鉴定miR-655转染效率结果显示,在miR-655 mimics组中miR-655表达水平相对于miR-NC组显著升高（1.70±0.10 vs 0.83±0.07,P=0.004）。CCK-8检测细胞活性结果显示,与L-OHP/miR-NC组相比,L-OHP/miR-655 mimics组细胞活性降低（48h：0.79±0.05 vs 0.56±0.03,P=0.0015;72h：0.65±0.05 vs 0.25±0.05,P=0.0081）。Transwell法检测细胞的侵袭能力结果显示,与L-OHP/miR-NC组相比,L-OHP/miR-655 mimic组细胞侵袭数量减少（845±85 vs 613±36,P=0.0292）。流式细胞术检测细胞周期结果显示,与L-OHP/miR-NC组G0/G1期相比,L-OHP/miR-655 mimics组细胞比例增加（5.16±0.22 vs 45.53±0.75,P=0.022）,与L-OHP/miR-NC组S期相比,L-OHP/miR-655 mimics组细胞比例降低（44.83±1.17 vs 20.75±0.36,P=0.015）,与L-OHP/miR-NC组G2/M期相比,L-OHP/miR-655 mimics组细胞比例减少(22.86±1.21 vs 3.85±0.35,P=0.0023）。［结论］MiR-655能够提高结直肠癌细胞对奥沙利铂的化疗敏感性,miR-655可能成为联同奥沙利铂治疗结直肠癌的新靶点。     

miR-184在肾癌组织中的表达及其对癌细胞增殖和凋亡的影响

摘 要：［目的］ 探讨microRNA-184(miR-184)在人肾组织细胞病变以及癌症发生发展中的生理功能。［方法］ 采用反转录-荧光实时定量PCR(RT-qPCR)检测肾癌组织细胞、癌旁组织细胞中miR-184相对表达;在体外进行细胞实验,向786-0肾癌细胞系转染 miR-184 mimics,并运用MTT噻唑兰法对转染miR-184 mimics成功的肾癌细胞进行体外增殖活力检测,同时通过流式细胞仪来检测细胞凋亡发生的情况;Western-blot法检测目的蛋白的相对表达水平。［结果］ 荧光定量PCR检测结果表明,miR-184在肾癌组织中的表达水平显著低于癌旁组织(P<0.001);细胞体外转染实验结果表明,与阴性对照组相比,转染miR-184 mimics的786-0肾癌细胞株,其细胞增殖活力显著下降而凋亡率显著升高,差异均有统计学意义(P<0.05);Western-blot检测结果表明,在miR-184 mimics的786-0肾癌细胞株中,EPB41L5表达水平显著下降,相比于阴性对照组以及空白对照组差异均有统计学意义（P<0.05）。［结论］肾癌患者的癌组织中miR-184的表达显著降低,其可能参与肾癌的发生发展;体外细胞学实验表明其在肾癌细胞的增殖和凋亡过程中起着重要作用,可能是通过调控细胞内源EPB41L5蛋白的表达来发挥其生理功能。     

端粒酶抑制剂1对裸鼠结直肠癌转移的影响

目的建立人结直肠癌裸鼠转移瘤模型，探讨端粒酶抑制剂1（PinX1）对结直肠癌转移的影响。方法分别通过PinX1干扰慢病毒、阴性对照慢病毒和空白对照细胞转染人结直肠癌细胞株HCT116；应用Western 印迹检测转染干扰慢病毒后PinX1蛋白表达量，筛选建立稳定干扰 PinX1基因表达细胞株、阴性对照细胞株和空白对照细胞株；将稳定干扰PinX1基因表达的结直肠癌细胞、阴性对照结直肠癌细胞和空白对照结直肠癌细胞分别注射到裸鼠尾静脉内，建立裸鼠实验性转移模型，定期称量裸鼠体质量并观察其摄食、活动及精神状况；45 d后处死裸鼠，从大体水平及显微镜下观察裸鼠各脏器转移情况，免疫组织化学方法检测PinX1蛋白表达情况。结果成功构建裸鼠结直肠癌转移模型，经组织病理学确认为结直肠癌肝转移。PinX1干扰组裸鼠体质量明显高于阴性对照组和空白对照组[ (19.42 ± 2.67) 比(16.24 ± 2.17)、（15.89 ±3.08），P<0.05]；PinX1干扰组肝转移瘤数目明显多于阴性对照组和空白对照组［(21.10± 7.50) 比(6.20 ± 5.51)、(6.40 ± 5. 10)，P<0.01］。PinX1干扰组免疫组化染色免疫反应性评分明显低于阴性对照组和空白对照组［(2.90± 2.77) 比(6.30 ± 2.95)、(6.10 ± 3.41)，P <0.05］。结论PinX1基因能够抑制人结直肠癌细胞在裸鼠体内转移能力。 结论端粒酶抑制剂1（PinX1）基因能够抑制人结直肠癌细胞在裸鼠体内转移能力。     

Role of miR-100 in the radioresistance of colorectal cancer cells

The prognosis of radioresistant colorectal cancer (CRC) is generally poor. Abnormal expression of microRNAs (miRNAs) is involved in the radiosensitivity of various tumor cells as these RNAs regulate biological signaling pathways. However, radioresistance-associated miRNAs in CRC have not yet been identified. In this study, we filtered out HCT116 and CCL-244 from seven CRC cell lines that showed the highest difference in radiosensitivity in a clonogenic assay. MiRNA sequencing identified 33 differentially expressed miRNAs (13 up-regulated and 20 down-regulated) in CCL-244 and 37 in HCT116 (20 up-regulated and 17 down-regulated) cells. MiR-100 was significantly down-regulated in CCL-244 cells after X-ray irradiation but not in HCT116 cells. Quantitative real-time PCR showed that the expression of miR-100 in CRC tissues was significantly lower than that in normal tissues. Thus, miR-100 seems to be involved in the radioresistance of CCL-244 cells. MiR-100 up-regulation sensitized CCL-244 cells to X-ray irradiation, which probably led to apoptosis and DNA double-strand breaks in these. In conclusion, to our knowledge, this is the first study to show that miR-100 may play an important role in regulating the radiosensitivity of CRC, and it may act as a new clinical target for CRC radiotherapy.     

miR-92a 在结直肠癌中的表达及其对肿瘤血管生成的作用*

目的：探讨miR-92a 在结直肠癌中的表达及其对肿瘤血管新生功能的影响和作用机制。方法：采用qRT-PCR方法检测广东医学院附属深圳南山医院2014年6 月至2015年12月经手术切除的25例结直肠癌组织和对应癌旁组织及4 种结直肠癌细胞（HCT 116、SW620、SW480、HT29）中miR-92a 的表达;免疫组织化学法检测结直肠癌和癌旁组织中CD31阳性表达的微血管密度（microvesseldensity,MVD）,Pearson相关性分析探讨miR-92a 表达与肿瘤血管新生MVD的相关性。通过转染miR-92a-mimic、inhibitor 上调或抑制结直肠癌细胞HCT 116、SW620 中miR-92a 的表达水平,采用小管形成实验检测miR-92a 不同表达对HUVEC小管形成的影响,免疫印迹法检测对其下游潜在靶点PTEN的蛋白表达的影响。结果：结直肠癌组织miR-92a 的表达水平显著高于对应癌旁组织（P < 0.01）;4 种人结肠癌细胞系miR-92a 的表达水平均显著高于正常肠上皮组织（P < 0.05）;结直肠癌组织CD31阳性微血管密度显著高于癌旁组织（P < 0.01）,miR-92a 表达水平与结直肠癌血管新生MVD呈显著正相关（r = 0.580,P = 0.01）;上调miR-92a 表达的HCT 116 细胞培养上清液可以显著促进HUVEC小管形成（P < 0.05）;上调miR-92a 表达可以显著抑制HCT116 细胞中PTEN蛋白表达水平（P < 0.01）。 结论：miR-92a 在结直肠癌细胞和组织中高表达,与肿瘤血管新生增加密切相关;miR-92a 可能通过抑制PTEN的表达发挥促进结直肠癌血管新生的生物学功能。     

miR-186通过下调垂体瘤转化基因1的表达抑制骨肉瘤细胞的增殖侵袭并诱导其凋亡

目的:探讨miR-186对骨肉瘤细胞增殖、凋亡及侵袭能力的影响,并探讨其可能机制.方法:实时荧光定量PCR检测骨肉瘤细胞HOS、U2-OS、Saos-2及成骨细胞NHOst中miR-186表达,并运用人工合成的miR-186模拟片段及对照scramble mimic转染至人骨肉瘤HOS及U2-OS细胞内,运用实时荧光定量PCR检测转染后细胞中miR-186的表达水平;分别运用CCK-8法、流式细胞检测技术及Transwall体外侵袭实验检测过表达miR-186对HOS及U2-OS细胞增殖、凋亡及侵袭能力的影响;运用Westem blotting及实时荧光定量PCR检测miR-186过表达对细胞中垂体瘤转化基因1(pituitary tumor transforming gene 1,PTTG1)的蛋白及mRNA表达水平的影响.结果:骨肉瘤细胞中miR-186呈现低表达;转染人工合成的miR-186片段可上调HOS及U2-OS细胞中miR-186的表达;miR-186过表达组细胞的增殖能力较scramble组明显下降(P＜0.01),转染组HOS[(16.9±2.1)％ vs(10.4±1.6)％,P＜0.05]及U2-OS[(22.6±2.9)％ vs (14.1±2.2)％,P＜0.05]细胞的凋亡比例明显高于scramble组,转染组HOS及U2-OS细胞的穿膜数明显低于scramble组(P＜0.01);转染组细胞中PTTG1的蛋白及mRNA表达水平均明显下降(P＜0.01),而scramble组无明显变化(P＞0.05);结论:miR-186能够抑制骨肉瘤细胞的增殖及侵袭并促进细胞凋亡,其作用机制可能与抑制PTTG1表达相关.     

靶向IRF2的miR-1290对非小细胞肺癌细胞增殖、侵袭的调控作用及其机制研究

背景与目的：miR-1290可以调节干扰素调节因子-2（interferon regulatory factor-2，IRF2）的表达，调节非小细胞肺癌（non-small cell lung cancer，NSCLC）的恶性生物学行为，但其具体作用机制目前尚不清楚，因此，探讨miR-1290靶向IRF2对NSCLC细胞增殖、侵袭的调控作用及相关机制。方法：将体外培养的A549细胞分为miR-1290 mimic组、miR-1290 inhibitor组和NC组；实时荧光定量聚合酶链反应（real-time fluorescence quantitative polymerase chain reaction，RTFQ-PCR）和蛋白质印迹法（Western blot）检测各组细胞miR-1290和IRF2的表达，采用荧光素酶实验进一步验证靶向关系。将体外培养的A549细胞分为NC组（转染空白质粒）、miR-1290组（转染miR-1290）、IRF2组（转染IRF2）和miR-1290+IRF2组（转染miR-1290+IRF2）；细胞计数试剂盒（cell counting kit-8，CCK-8）检测各组细胞的增殖活性；Transwell实验检测各组细胞的侵袭，划痕实验检测细胞迁移，Western blot检测各组细胞血管内皮生长因子（vascular endothelial growth factor，VEGF）、E-钙黏着蛋白（E-cadherin）、基质金属蛋白酶（matrix metalloproteinase，MMP）-2和Ki-67。结果：miR-1290可以靶向负调控IRF2的表达；与NC组相比，miR-1290组miR-1290的表达明显上调（P<0.05），IRF2的表达明显下调（P<0.05），细胞增殖活性、侵袭力和迁移率明显上调（P<0.05），VEGF、MMP-2和Ki-67明显上调（P<0.05），E-cadherin水平明显下调（P<0.05），IRF2组IRF2的表达明显上调（P<0.05），细胞增殖活性、侵袭力和迁移率明显下调（P<0.05），VEGF、MMP-2和Ki-67明显下调（P<0.05），E-cadherin水平明显上调（P<0.05）；与IRF2组相比，miR-1290+IRF2组miR-1290的表达明显上调（P<0.05），IRF2的表达明显下调（P<0.05），细胞增殖活性、侵袭力和迁移率明显上调（P<0.05），VEGF、MMP-2和Ki-67明显上调（P<0.05），E-cadherin水平明显下调（P<0.05）。结论：miR-1290可能通过靶向负调控IRF2的表达，促进NSCLC细胞的增殖和侵袭。     

长链非编码RNA AFAP1-AS1通过PTEN/p-AKT信号通路调控结直肠癌细胞增殖的分子机制研究

目的探讨长链非编码RNA(lncRNA)肌动蛋白纤维相关蛋白1-反义RNA1(Actin filament-associatedprotein1-antisenseRNA1,AFAP1-AS1)调控结直肠癌(Colorectal cancer,CRC)细胞增殖的分子机制。方法收集2014年7月—2018年6月深圳市第二人民医院消化内科和胃肠外科诊治的38例正常人及38例CRC患者的粪便标本,用Real time-PCR检测lncRNA AFAP1-AS1表达,同时检测人正常结肠上皮细胞株NCM460、人结直肠癌细胞株SW620和HCT116中lncRNA AFAP1-AS1的表达;将靶向siRNA转染到CRC细胞株SW620和HCT116中抑制AFAP1-AS1的表达;通过MTT测定si-AFAP1-AS1转染对CRC细胞增殖的影响;应用免疫印迹检测Cleaved caspase 3、Bcl-2、Bax、p-AKT、total-AKT和PTEN的水平。结果与正常人相比,CRC患者粪便中AFAP1-AS1的表达显著上升(P<0.01);与NCM460细胞相比,SW620和HCT11...     

LncRNA ANRIL靶向miR-195对HCT116细胞及裸鼠移植瘤放射增敏实验研究

目的 探究LncRNA ANRIL对结直肠癌HCT116细胞体外体内放射增敏作用及机制。方法 qPCR检测ANRIL表达。将阴性对照siRNA、ANRIL siRNA、miR-NC mimic、miR-195 mimic、miR-NC inhibitor、miR-195 inhibitor转染至HCT116细胞中分别记为阴性对照、沉默ANRIL、过表达miR-NC、过表达miR-195、抑制miR-NC、抑制miR-195组,以不做任何处理的HCT116细胞为空白对照组。克隆形成实验检测放射敏感性,流式细胞术检测细胞凋亡,StarBase预测ANRIL下游miRNAs,双荧光素酶报告基因实验进一步验证。裸鼠皮下移植瘤实验检测ANRIL对照射后移植瘤生长影响。结果 沉默ANRIL组细胞存活分数较阴性对照组降低(P<0.05),其放射增敏比为1.52。沉默ANRIL+4Gy组细胞凋亡率较阴性对照+4Gy组增加[(27.86±2.78)%︰(12.06±1.46)%,P<0.05]。裸鼠皮下移植瘤实验结果显示在13、16、19、22、25天时阴性对照组肿瘤体积比沉默ANRIL组降低[(234±66)、(273±63)、(296±72)、(321±85)、(403±94) mm³与(357±79)、(485±124)、(617±143)、(764±174)、(985±221) mm³,P<0.05]。miR-195是ANRIL靶基因,抑制miR-195可逆转沉默ANRIL对HCT116细胞放射增敏和凋亡促进作用及移植瘤生长抑制作用。结论 LncRNA ANRIL通过调控miR-195表达来调节HCT116细胞放射敏感性,可能为临床结直肠癌放疗提供一个新的增敏靶点。     

茯苓酸通过调控AKT/MDM2/p53通路影响结直肠癌HCT116细胞的恶性生物学行为

目的：探究茯苓酸（PA）是否通过AKT/MDM2/p53通路影响结直肠癌HCT116细胞的恶性生物学行为。方法：常规培养HCT116细胞,并将其分为对照组、MK-2206(AKT抑制剂)组、PA低浓度（PA-L）组、PA高浓度（PA-H）组、PA-H+SC79(AKT激活剂)组。CCK-8法、细胞克隆形成实验、流式细胞术、Transwell、qPCR法和WB法实验分别检测各组HCT116细胞的增殖活力,克隆形成能力,细胞凋亡,迁移、侵袭能力,E-cadherin、N-cadherin和vimentin mRNA表达以及AKT/MDM2/p53通路相关蛋白的表达。结果：PA可明显抑制HCT116细胞的增殖活力（P<0.05）、克隆形成能力（P<0.05）、迁移和侵袭能力（P<0.05）,诱导其凋亡（P<0.05）,抑制N-cadherin、vimentin mRNA的表达（P<0.05）,促进E-cadherin mRNA的表达（P<0.05）,抑制AKT、MDM2的磷酸化水平（P<0.05）,促进p53蛋白的表达（P<0.05）;AKT抑...     

下调REV7基因对于人结肠癌HCT116细胞放射敏感性影响及机制研究

目的 研究下调REV7基因表达对人结肠癌HCT116细胞放射敏感性影响及其机制。方法 对HCT116细胞进行培养并运用RNA干扰技术实现REV7基因下调,将细胞分为空白组、转染阴性RNA oligo片段阴性对照组、转染REV7 RNA oligo的REV7基因下调组。克隆形成实验反映细胞增殖水平,蛋白印迹法检测相关基因表达水平、细胞凋亡发生水平和非同源末端连接途径发生水平。结果 6Gy照后REV7 siRNA组细胞克隆形成率降低(P<0.05)。REV7 siRNA组REV7基因下调效率>60%。REV7 siRNA组γH2AX、Caspase9表达升高(P<0.05),Ku80、XRCC4表达降低(P<0.05)。结论 下调REV7基因能提高HCT116细胞放射敏感性,其机制可能与下调REV7后非同源末端连接的发生被削弱有关。     

下调REV7基因对于人结肠癌HCT116细胞放射敏感性影响及机制研究

目的 研究下调REV7基因表达对人结肠癌HCT116细胞放射敏感性影响及其机制。方法 对HCT116细胞进行培养并运用RNA干扰技术实现REV7基因下调,将细胞分为空白组、转染阴性RNA oligo片段阴性对照组、转染REV7 RNA oligo的REV7基因下调组。克隆形成实验反映细胞增殖水平,蛋白印迹法检测相关基因表达水平、细胞凋亡发生水平和非同源末端连接途径发生水平。结果 6Gy照后REV7 siRNA组细胞克隆形成率降低(P<0.05)。REV7 siRNA组REV7基因下调效率>60%。REV7 siRNA组γH2AX、Caspase9表达升高(P<0.05),Ku80、XRCC4表达降低(P<0.05)。结论 下调REV7基因能提高HCT116细胞放射敏感性,其机制可能与下调REV7后非同源末端连接的发生被削弱有关。     

miR-503 靶向ERCC1 抑制食管鳞状细胞癌放疗抵抗作用的机制

[摘要] 目的:探讨miR-503 通过调控人切除修复交叉互补基因1（ERCC1）介导食管鳞状细胞癌（ESCC）放疗抵抗作用的分子机制。方法：采用qPCR法检测在放疗抵抗的ESCC肿瘤组织及KYSE140、KYSE140R细胞中miR-503 的表达水平。将miR-503模拟物、miR-503 抑制物或si-ERCC1 转染至KYSE140 和KYSE140R细胞中,经射线照射后,克隆形成实验和CCK-8 实验检测KYSE140R细胞的增殖活力,流式细胞仪检测KYSE140R细胞的凋亡情况,WB实验检测ERCC1 蛋白表达水平的变化。双荧光素酶报告基因验证miR-503 与ERCC1 的靶向关系。结果：miR-503 在ESCC放疗抵抗组织和细胞中均低表达（均P<0.01）。过表达miR-503 可显著抑制KYSE140R细胞增殖并诱导细胞凋亡（均P<0.01）。双荧光素酶报告基因实验证实ERCC1 是miR-503 的靶基因,且miR-503 负调控ERCC1 的表达。过表达miR-503 显著下调KYSE140、KYSE140R 细胞中ERCC1 表达水平（均P<0.01）,并显著抑制细胞增殖活力（均P<0.01）、显著提高细胞凋亡率（均P<0.01）;敲降ERCC1 有类似作用,而同时敲降ERCC1 和miR-503 则逆转以上影响。结论：过表达miR-503 通过靶向ERCC1 调控KYSE140R细胞对放疗的敏感性。