afgf和TGFβ1联合诱导猪牙乳头细胞向成牙本质样细胞分化

目的建立猪牙乳头细胞向成牙本质样细胞分化的体外诱导方案。方法联合应用aFGF和TGFβ1对体外培养的猪牙乳头细胞进行平面诱导,观察诱导后细胞的形态学变化,通过Von Kossa染色检测诱导后细胞的矿化能力,并采用免疫荧光染色和RT-PCR检测成牙本质细胞特异性标志物——DSP蛋白和DSPP mRNA在诱导后细胞中的表达。结果诱导后部分细胞出现细长的单侧细胞突起,在矿化液培养2周后形成典型的矿化结节,并且表达DSP蛋白和DSPP mRNA。结论联合应用aFGF和TGFβ1可以诱导体外培养的猪牙乳头细胞向成牙本质样细胞分化。     

转化生长因子β1对体外成牙本质细胞分化的影响

目的：观察转化生长因子β1（transforming growth factorβ1，TGF－β1）对体外培养鼠牙乳头成本本质细胞分化的影响。方法：取17d胎龄小鼠下颌第一磨牙牙胚，胰腺蛋白消化分离牙乳头，置半固态培养基培养6d，半固态培养基中加入重组转化生长因子β1和肝素，组织学观察。结果：TGF－β1加肝素可诱导牙乳头周边细胞发生极化，并分泌胸外基质，单独加入TGF－β1未见细胞极化，但基质分泌增加，结论：TGF－β1能诱导前成牙本质细胞的细胞学和功能上分化。     

地塞米松诱发先天性腭裂对TGF-β1、TGF-β2表达的影响

目的：探讨TGF-β1、TGF—β2在先天性腭裂发病过程中的作用。方法：在GDl2^12以磷酸地塞米松注射液(50mg／kg)经母鼠腹腔注射，对照组则以等量生理盐水代替。分别于GDl3^12、GDl4^12、GDl5^12取出胎鼠头部标本，作冠状位切片。采用免疫组化方法检测TGF-β1、TGF-β2的表达。结果：地塞米松在GDl2^12作用于孕鼠可以诱发小鼠先天性腭裂，并使胚胎腭中TGF-β1表达较同期正常组高，TGF-β2表达较正常组高，腭突上抬后的降低被抑制。结论：地塞米松诱发先天性腭裂与TGF-β1．TGF-β2的表达异常改变有关。     

TGF β1、TGF β2 和TβRⅡ在口腔鳞癌中的表达和意义

目的：探讨转化生长因子TGFβ1、TGFβ2及其Ⅱ型受体TβRⅡ与口腔鳞癌发生和发展的关系。方法：采用SABC免疫组化法检测40例口腔鳞癌术后标本和20例正常口腔粘膜中TGFβ1、TGFβ2及其受体TβRⅡ的表达。结果：口腔鳞癌和正常口腔粘膜中均表达TGFβ1、TGFβ2和TβRⅡ，但程度不同。与正常口腔粘膜相比，TGFβ1、TGFβ2在口腔鳞癌中呈过表达，而TβRⅡ则表达下降，口腔鳞癌临床分期，在无颈淋巴结转移及病理分级与TGFβ1、TGFβ2过表达及TβRⅡ表达下降有关。结果：TGFβ1、TGFβ2和TβRⅡ可能参与了口腔鳞癌的发生发展及颈淋巴结转移过程，是口腔鳞癌发生发展及预后的一个指标。     

VEGF165真核表达载体的构建与体外表达

目的:体外构建血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)165的荧光真核表达载体,并检测其在293T细胞中的表达。方法:应用RT-PCR方法从人单核细胞白血病细胞株THP-1中分离、扩增目的片段,单酶切克隆到真核表达载体pEGFP-C1中,构成重组质粒pEGFP-VEGF165,测序验证。通过脂质体介导质粒瞬时转染293T细胞,RT-PCR和免疫细胞化学检测VEGF165的表达。结果:通过RT-PCR获得576bp的cDNA片段,测序结果与基因库(Genbank)中序列完全一致。转染后经RT-PCR和免疫细胞化学检测证实转染重组质粒组有VEGF165蛋白表达,而转染空质粒组及未转染组没有检测到VEGF的表达。结论:本研究构建了人VEGF165荧光真核表达载体pEGFP-VEGF165,并能成功地在293T细胞中表达。     

电离辐射对血管内皮细胞分泌与组织创伤相关细胞因子的影响

目的探讨电离辐射对血管内皮细胞分泌血管内皮生长因子（VEGF）、碱性成纤维生长因子（bFGF）和转化生长因子β1（TGF-β1）的影响。方法对人脐静脉血管内皮细胞（HUVEC）-12以0、4、8、12Gy剂量60Coγ射线照射后培养12、24h,采用流式细胞仪检测细胞VEGF、bFGF和TGF-β1的表达。结果VEGF在4Gy照射后12h有较明显的增加,24h后逐渐趋于正常;bFGF在4Gy照射后12和24h都有明显的表达,但表达量随着辐射剂量的增加而减少;TGF-β1表达的增加呈剂量-时间依赖性。结论血管内皮细胞受电离辐射后VEGF、bFGF和TGF-β1的分泌均有增加,但三者的剂量-时间关系不一致,可能与细胞对辐射的反应和损伤抵抗作用不同有关。     

人转化生长因子β1基因转染人牙龈成纤维细胞及其稳定表达

目的 :探讨人转化生长因子 - β1(hTGF - β1)基因转染人牙龈成纤维细胞 (GF)的表达能力。 方法 :体外培养人GF ,传代培养后以阳离子脂质体 (Lipofectamine) :pcDNA3-hTGF - β1为 3μL∶1μg的比例转染。通过免疫组织化学染色的方法及图像分析检测hTGF - β1表达水平 ;利用水貂肺上皮细胞生长抑制法检测TGF - β1的生物学活性。结果 :转染后的GF呈强阳性表达 ,并持续 4周以上。图像分析显示转染细胞hTGF - β1表达显著增强 ,与对照组比较差异显著 (P <0 .0 1)。转染后细胞上清可有效的抑制水貂肺上皮细胞的生长。结论 :hTGF - β1基因转染可使牙龈成纤维细胞有效而稳定的表达活性hTGF - β1而产生生物效应     

转化生长因子β1和血管内皮生长因子在腺样囊性癌中的表达和临床病理意义

目的 研究转化生长因子β1(TGF-β1)和血管内皮生长因子(VEGF)在腺样囊性癌(ACC)中的表达和临床意义.方法 应用免疫组织化学SP法检测30例正常唾液腺组织,28例多形性腺瘤(PA)、31例ACC中TGF-β1和VEGF的表达和相关性,并由CD34标记MVD计数,采用SPSS 13.0统计软件进行统计学分析,...     

TGF-β1对MDPC-23细胞增殖和细胞周期的影响

目的：研究转化生长因子β1(transforming growth factor-β1，TGF-β1)对成牙本质细胞系MDPC—23增殖和细胞周期的影响。方法：细胞培养，MTT比色测定法和流式细胞仪(flow cytometry，FCM)分析技术。结果：TGF-β1能明显抑制MDPC—23细胞增殖，无剂量依赖性，但呈时间依赖性；FCM结果显示，TGF-β1作用后，MDPC—23细胞G1％升高，而S％显著降低，反映细胞增殖活性的增殖指数Prl值(S G2M)％增高。结论：TGF-β1抑制成牙本质细胞系MDPC—23细胞增殖和DNA合成。     

富血小板血浆对人真皮细胞增殖及PDGF、TGF-β和VEGF表达的影响

目的:研究富血小板血浆(PRP)对人真皮成纤维细胞(hFbs)增殖、分化及胞质中PDGF、TGF-β和VEGF表达量的影响。方法:2次离心法制备PRP,成骨诱导条件下hFbs培养液中加入不同浓度PRP于第12天、21天钙-钴法染色,第21天茜素红染色;免疫细胞化学法检测加不同浓度PRP后第4天细胞PDGF、TGF-β和VEGF的表达;碱性磷酸酶染色(ALP)检测细胞活性;CCK-8法检测有和无成骨诱导条件下不同浓度PRP对细胞增殖的影响。结果:茜素红染色显示,2.8%PRP组钙结节形成最明显;钙-钴法染色显示,2.8%PRP组矿化作用最强;免疫细胞化学结果表明PDGF表达存在剂量依赖性,TGF-β和VEGF表达虽无剂量依赖性,但有适宜浓度的要求;ALP染色表明3%PRP组细胞增殖明显,活性最强。CCK-8检测表明各浓度PRP对hFbs均有促增殖作用,PRP加成骨诱导组比单纯PRP组表现出更明显的促增殖作用,其中4.8%PRP促增殖作用最强。结论:适宜浓度的PRP可促进hFbs增殖,但相关因子的表达存在适宜浓度的要求,PRP通过促进细胞增殖,增加相关因子表达促进创伤愈合。     

rhTGF-β1对大鼠髁突软骨细胞SZP表达的影响

目的:观察rhTGF-β1对大鼠髁突软骨细胞SZP表达的影响.方法:酶消化法获取大鼠髁突软骨细胞,甲苯胺蓝和Ⅱ型胶原染色鉴定.细胞培养液中分别加入10 μg/L、20μg/L rhTGF-β1后,不同时间点应用RT-PCR和ELISA法检测SZP mRNA和蛋白的表达.结果:加入10μg/L、20μg/L rhTGF-...     

渐进性咬合紊乱对髁突软骨TGF-β1表达的影响

目的:探讨渐进性咬合紊乱对髁突软骨TGF-β1表达的影响及意义。方法:27只雄性新西兰大白兔被随机分为实验组、操作对照组和正常组,每组9只,用结扎丝固定橡皮圈单颌牵拉第一前磨牙向近中倾斜移动,造成渐进性咬合紊乱。只结扎钢丝不牵拉的兔子做为操作对照组。1、2和3个月分批取颞下颌关节髁突,用免疫组织化学方法检测髁突软骨TGF-β1表达变化,并做图像分析和统计学处理。结果:与对照组相比,实验组大多数部位TGF-β1表达持续增强。表达分布发生变化,纤维层和增殖层,由对照组的前内强、后外弱变为实验组的前内弱、后外强;肥大层,由对照组的内后最强变为实验组的外后最强。结论:渐进性咬合紊乱可导致髁突软骨中TGF-β1表达明显增强,TGF-β1可能参与了关节软骨的修复活动。     

TGFβ1mRNA在颌骨骨折愈合过程中的表达及意义

为了进一步探讨ＴＧＦβ在骨生长和骨愈合中的作用，建立了颌骨骨折愈合的动物模型，利用原位杂交方法检测骨折愈合过程中ＴＧＦβ１ｍＲＮＡ的表达。结果发现，在骨折愈合过程中的软骨形成和膜内骨骨化阶段，ＴＧＦβ１的转录水平较高，在膜内成骨时转录水平较低，而在伤后即刻反应阶段无ＴＧＦβ１的转录。说明ＴＧＦβ在骨折修复过程中最初的形态发生，随后的细胞增殖及最终的组织重建中起着重要的作用。     

转化生长因子β1和骨形成蛋白2体外诱导成牙本质细胞分化

目的 观察转化生长因子β1（transforming growth factorβ1,TGF-β1）和骨形成蛋白2（bone morphogenetic protein2,BMP2)对体外培养的鼠牙乳头成牙本质细胞分化的影响。方法 取17d胎龄小鼠下颌第一磨牙牙胚，胰蛋白酶消化分离牙乳头，置半固态培养基培养6d，半固态培养基中加入重组TGF-β1或BMP2与肝素，组织学观察。结果 TGF-β1或BMP2加肝素可诱导牙乳头周边细胞发生极化，并分泌胞外基质。TGF-β1或BMP2单独加入时未见细胞极化，但基质分泌增加。结论 TGF-β1和BMP2均能诱导成牙本质细胞的细胞学分化和分泌功能。     

He-Ne激光对兔实验性牙移动牙周组织中TGF-β1表达的影响

目的:研究局部照射He-Ne激光后,兔实验性牙移动牙周组织中转化生长因子β1(transforminggrowthfactorbeta,TGF-β1)表达的变化,探讨弱激光对正畸牙周组织改建的影响。方法:35只健康日本大耳白兔,随机分为7组:未加力组及加力1、3、5、7、14、21d组,每组5只。于双侧上颌第一磨牙至切牙间拴结不锈钢螺簧,80g力拉上颌第一磨牙向近中移动。加力组动物采用自身对照,右侧为照射侧,左侧为对照侧。除1、3d组分别照射1次、3次外,其余各组连续照射5次,每天1次。制作以上颌第一磨牙为中心的近远中方向的组织切片,行TGF-β1免疫组化染色。镜下观察,并对图像分析的灰度积分应用统计学软件SPSS10.0进行两样本均数比较t检验。结果:未加力组与加力各组牙周组织的张力区和压力区中TGF-β1均有表达。压力区照射侧1d组牙周组织TGF-β1表达显著低于对照侧(P<0.05),而3～5d组照射侧TGF-β1表达则显著高于对照侧(P<0.05),高峰值出现在牙受力后第5天。张力区TGF-β1表达在加力3～7d组照射侧高于对照侧(P<0.05),高峰值也出现在牙受力后第5天。结论:He-Ne激光照射有效地促进了TGF-β1在兔实验性牙移动牙周组织中的表达。     

TGF-β及其受体在颌面部血管瘤组织中表达的研究

目的　探讨多肽生长因子TGF β及其受体与颌面部血管瘤发生、发展的关系。 方法　通过免疫组织化学EnVison方法分别测定TGF β及其受体 (TGF βRII)在颌面部血管瘤和血管畸形中的表达 ,并以正常组织为对照组。结果　TGF β在血管瘤组织中阳性表达 ,主要表达于增殖活跃的内皮细胞胞浆、细胞膜上 ,间质细胞中也有表达 ;明显高于血管畸形和正常组织中的表达 (P <0 0 5 ) ;TGF βRII在血管瘤内皮细胞在组织中无明显表达 ,与血管畸形组织和正常组织无显著差异 (P >0 0 5 )。结论　血管瘤组织中的内皮细胞不是特异性TGF β靶细胞 ;TGF β对血管瘤的内皮细胞调节作用可能通过其它途径 ,并可能与血管瘤的退化有关。     

转化生长因子β1(TGF-β1)和骨形成蛋白2(BMP2)体外联合诱导成牙本质细胞样细胞分化

目的：观察转化生长因子β1（transforming growth factor β1,TGF-β1）和骨形成蛋白2（bone morphogenetic protein 2,BMP2）联合应用对体外培养的鼠牙乳头成牙本质细胞分化的影响。方法：取17d胎龄小鼠下颌第一磨牙牙胚,胰蛋白酶消化分离牙乳头,置半固态培养基培养6d,半固态培养基中单独加入重组TGFβ1、BMP2,或分别与肝素联合,或TGFβ1和BMP2联合,组织学观察牙乳头的形态学变化。结果：TGF-β1或BMP2单独加入时未见细胞极化,但基质分泌增加。TGF-β1或BMP2加肝素可诱导牙乳头周边细胞发生极化,并分泌胞外基质。半固态培养基中同时加入TGF-β1和BMP2的牙乳头培养6d后,牙乳头周边细胞出现极化和功能性分化,牙乳头周边胞外基质沉积明显,且可见牙乳头尖形态的维持及从牙乳头尖至牙乳头基底部成牙本质细胞分化梯度的维持。结论：本研究结果证实,在没有内釉上皮和完整的基底膜存在的情况下,TGF-β1和BMP2加肝素可诱导培养的牙乳头出现成牙本质细胞分化,并促进胞外基质的分泌。TGF-β1和BMP2均能诱导成牙本质细胞的细胞学分化和分泌功能,二者联合应用可协同发挥作用增强诱导效果。     

He-Ne激光对兔正畸牙周组织VEGF mRNA和VEGFR-2 mRNA表达的影响

目的：研究He-Ne激光照射对兔正畸牙周组织血管内皮细胞生长因子（VEGF）mRNA及血管内皮细胞生长因子受体-2（VEGFR-2）mRNA表达的影响,探讨He-Ne激光照射促进正畸牙周组织改建的机理。方法：用波长632.8 nm,激光功率20 mW,能量密度2.50 J/cm^2的He-Ne激光照射兔正畸牙齿移动牙周组织,用原位杂交方法检测组织切片VEGF mRNA、VEGFR-2 mRNA的表达,用计算机图像分析及统计学方法对结果进行分析。结果：1、3和5 d组He-Ne激光照射侧压力区的VEGF mRNA和VEGFR-2 mRNA表达均高于对照侧压力区,差异有统计学意义（P〈0.05）。1、3、5和7 d组He-Ne激光照射侧张力区的VEGF mRNA和VEGFR-2mRNA表达均高于对照侧张力区,差异有统计学意义（P〈0.05,P〈0.01）。结论：He-Ne激光照射有效促进正畸牙周组织中VEGF mRNA及VEGFR-2 mRNA的表达,通过促进血管改建从而加速正畸牙周组织改建的进程。     

VEGF-ASODN转染对舌癌Tca8113细胞VEGF表达及生长的抑制作用

目的:研究血管内皮细胞生长因子(VEGF)-反义寡核苷酸(ASODN)转染舌癌Tca8113细胞对其VEGF表达和生长的抑制作用.方法:人工合成硫代磷酸化VEGF-ASODN,转染舌癌Tca8113细胞,24h后,应用原位杂交及免疫细胞化学法检测细胞VEGF mRNA及蛋白表达,ELISA法检测培养液上清中VEGF蛋白含量,流式细胞仪检测细胞凋亡情况,用MTT实验检测转染对细胞活性的影响,用细胞生长曲线表示转染对细胞生长的影响.结果与对照组比较,采用SPSS12.0软件包进行统计学分析.结果:VEGF-ASODN能显著降低VEGF mRNA及蛋白水平,降低培养液中VEGF蛋白含量,增加细胞凋亡,抑制细胞活性及生长(P<0.05).结论:VEGF-ASODN转染舌鳞癌Tca8113细胞,能显著抑制VEGF mRNA及蛋白表达,增加细胞凋亡,抑制细胞生长.