转基因番茄可食用防龋疫苗免疫BALB/c鼠的实验初探

目的：观察转基因番茄可食用疫苗的免疫原性和免疫反应性。方法：将60只60d龄的雌性BALB／c小鼠随机分为4组,分别口服或腹膜下注射转基因番茄或对照番茄。35d后取小鼠血清样本,用ELISA的方法检测其血清样本中的抗变形链球菌PAc的IgG抗体效价。结果：口服和腹膜下注射转基因番茄组小鼠的血清中均出现了抗PAc的IgG抗体,分别与对照组相比具有统计学差异（P〈0．05）,且口服转基因番茄组与注射转基因番茄组的小鼠血清抗体水平无统计学差异（P〉0．05）。结论：转基因番茄所表达的外源蛋白具有抗原性,能够诱导实验动物产生免疫应答。     

转基因番茄可食用防龋疫苗免疫BALB/c小鼠的实验研究

目的: 观察含PAcA/CTB的转基因番茄可食用防龋疫苗的免疫原性及免疫反应性。方法: 将18只6~8周龄的雄性BALB/c小鼠,随机分为3组,每周分别灌胃含有PAcA/CTB嵌合蛋白的转基因番茄果汁(实验组)、非转基因番茄果汁(阴性对照组)、灭活全菌疫苗(阳性对照组)。于首次免疫前和免疫后第1、2、3、4周采集血液、唾液样品。ELISA检测其血清和唾液样本中的抗变异链球菌PAcA的IgG、IgA抗体效价。结果: 阳性对照组和实验组小鼠血液和唾液中特异性抗体从免疫后1周开始升高,初始免疫后第4周达高峰,分别与阴性对照组比较存在统计学差异(P<0.05或P<0.01)。免疫后第2、3、4周阳性对照组与实验组差异有统计学意义(P<0.05)。结论: 转基因番茄所表达的外源目的蛋白具有抗原性,能够诱导BALB/c小鼠产生免疫应答。     

防龋用转基因番茄生态安全性的评价研究

目的:观察本课题组培育的防龋用转基因番茄中外源目的基因parA-ctxB、pacP-ctxB是否通过花粉和根系分泌物造成基因漂移,初步探讨该转基因番茄防龋疫苗的生态安全性.方法:田间种植转基因番茄,距转基因植株的边缘0.5、1、3、10m处种植非转基因对照番茄作为基因漂移的受体,开花期自由授粉,结果期在距离转基因番茄植...     

白细胞介素8基因在口腔鳞癌中的表达及意义

目的:探讨IL-8 mRNA在口腔鳞癌和正常口腔黏膜组织中的表达及意义。方法:采用实时荧光定量PCR法对35例口腔鳞癌组织和15例正常口腔黏膜组织中IL-8 mRNA的表达进行定量检测,并分析其与临床特征的相关性。结果:①IL-8 mRNA在口腔鳞癌中的表达为1.02±0.78,明显高于其在正常黏膜中的表达0.51±0.43,两者比较具有统计学意义(P<0.05);②IL-8 mRNA在中低分化和临床III、IV期口腔鳞癌中的表达显著高于其在高分化和临床I、II期口腔鳞癌中的表达(P<0.05)。结论:IL-8 mRNA在口腔鳞癌组织中呈高表达,并与分化程度和临床分期相关。     

定量PCR技术检测正畸患者牙龈卟啉单胞菌的变化

目的采用荧光实时定量PCR技术,研究正畸患者的龈下菌斑中牙龈卟啉单胞菌（Porphyromonas gingivalis,Pg）在总细菌中的构成比是否产生变化。方法挑选30例正畸治疗六个月以上患者为实验组,30例未带矫治器的牙周健康者为对照组,分别记录牙周临床指标（包括菌斑指数、龈沟出血指数、探诊深度）,和龈下菌斑中牙龈卟啉单胞菌在总细菌中的构成比,并比较两组患者的差异。结果菌斑指数实验组为1．60±0．58,对照组为1．09±0．72,两组比较差异有统计学意义（P〈0．05）。探诊深度实验组为（2．72±0．64）mm,对照组为（2．13±0．18）mm,两组比较差异有极显著的统计学意义（P〈0．001）。龈沟出血指数实验组为1．4±0．47,对照组为1．32±0．52,两组间比较差异无统计学意义（P=0．78）。牙龈卟啉单胞菌在总细菌中的构成比,实验组0．45％±0．07％和对照组0．05％±0．01％比较,P〈0．0001,差异有统计学意义。结论正畸患者龈下菌斑中,牙龈卟啉单胞菌在总细菌中的含量增加,荧光实时定量PCR技术可监测其变化,提示正畸期间保持牙周清洁的重要性。     

实时荧光定量RT-PCR检测舌癌E-cadherin mRNA的表达

目的:了解E-cadherin在舌癌中的表达及其临床意义.方法:采用实时定量PCR检测29例舌鳞癌患者的癌组织和正常组织中E-cadherin mRNA,分析E-cadherin基因表达与临床病理参数的相关性.结果:舌癌组织中E-cadherin mRNA表达水平2.23±1.16(E-cadherin/β-actin),低于正常组织组8.59±2.71,两组间差异有统计学意义(P＜0.01),E-cadherin mRNA水平与临床病理参数之间无相关性(P＞0.05).结论:E-cadherin的表达下降是舌癌发生过程中的重要事件,实时定量PCR检测E-cadherinmRNA的表达对舌癌早期诊断有重要参考价值.     

牙髓源性牙周牙髓联合病变牙周袋内牙龈卟啉单胞菌定量PCR检测

目的 比较牙髓源性牙周牙髓联合病变与重度慢性牙周炎患牙牙周袋内牙龈卟啉单胞菌的数量差异,为临床诊断牙髓源性牙周牙髓联合病变提供科学依据.方法 采集牙髓源性牙周牙髓联合病变、重度慢性牙周炎牙周袋内的龈下菌斑及正常人群龈沟液标本,应用实时定量PCR法检测牙龈卟啉单胞菌(Porphyromonas gingivalis,Pg)数量.结果 3组标本中Pg检出率差异无统计学意义;Pg数量差异有统计学意义.牙髓源性牙周牙髓联合病变中Pg数量显著性低于重度慢性牙周炎患牙(P<0.01),与正常人群Pg数量差异无统计学意义.结论 牙髓源性牙周牙髓联合病变中Pg数量低于重度慢性牙周炎患牙,与正常人龈沟液内的水平一致,Pg数量有可能作为鉴别牙髓源性与牙周源性牙周牙髓联合病变的指标.     

唾液中放线菌与儿童龋病相关性的定量检测研究

目的建立检测内氏放线菌（Actinomyces naeslundii,An）与龋齿放线菌（Actinomyces odontolyticus,Ao）的实时荧光定量PCR（RT-PCR）。方法探讨An和Ao在唾液中的定植数量与乳牙龋失补牙面指数（dmfs）的关系。方法分别采集59名不同患龋状况儿童唾液样本,其中无龋组（dmfs=0）19名、中龋组（dmfs=4～6）21名和高龋组（dmfs﹥8）19名。提取细菌总基因组DNA,应用SYBR GreenⅡ模式的实时荧光定量PCR技术,对唾液中的内氏放线菌及龋齿放线菌进行定量检测,所得数据应用SAS9.2统计软件进行统计学分析。结果内氏放线菌占总菌的比例在三组中有显著差异（P〈0.05）,在高龋组中显著高于中龋组（P〈0.0001）,在中龋组与无龋组间无显著差异（P〉0.05）;龋齿放线菌占总菌的比例在三组中无显著差异（P〉0.05）。结论儿童唾液中内氏放线菌的数量与龋病的发生发展过程有明显相关性;龋齿放线菌与儿童龋病的发生发展无明显相关性。     

可示踪防龋基因疫苗的构建及其体外表达

目的　构建一含绿荧光蛋白报告基因 (gfp)的防龋基因疫苗 ,利用绿荧光蛋白特有的发光性质 ,示踪防龋基因疫苗在体外的表达情况。方法　采用PCR方法 ,以质粒pPC4 1为模板 ,扩增变形链球菌表面蛋白质抗原(PAC)分子的氨基端A区 (pacA) ,以此作为基因防龋疫苗的目的基因片段 ,与质粒pEGFP_C1重组构建重组质粒pEGFPC1_pacA ,并经酶切、测序鉴定 ;重组质粒瞬时转染COS1细胞后 ,通过荧光显微镜直接观察发绿色荧光的细胞 ,流式细胞仪检测转染细胞的荧光强度, RT_PCR扩增pacA基因片段检测重组质粒的体外表达情况。结果　重组质粒中的pacA片段完全来自pac全基因序列 ,pEGFPC1_pacA构建正确 ;荧光显微镜直接观察到了发绿色荧光的细胞 ,重组质粒转染细胞的荧光强度明显高于未转染细胞的荧光强度 ,并证实了重组质粒pacA片段能在哺乳动物细胞中被转录。结论　重组质粒中的绿荧光蛋白基因以及置于gfp基因之后的防龋基因片段均能在体外同时正确表达 ,为深入研究防龋基因疫苗的安全性及有效性提供了较好的材料     

慢性牙周炎唾液牙龈卟啉单胞菌的定量PCR检测

目的:定量检测慢性牙周炎患者、牙周健康人群唾液中牙龈卟啉单胞菌的含量,比较其在各组人群分布的差异。方法:应用SYBR Green模式的实时荧光定量PCR技术,针对Pg特异基因Arg-gingipain设计引物,检测20例慢性牙周炎和20例牙周健康者唾液内Pg的含量,t检验分析比较在各组人群中Pg定植的差异。结果:慢性牙周炎患者唾液中,Pg的检出数目为(1.78×10³~1.99×10⁵),检出率为85%;牙周健康者唾液中,Pg的检出数目为(2.19×10³~2.30×10³),检出率为10%。Pg在慢性牙周炎和牙周健康者唾液中检出数目和检出率的差异具有统计学意义(P<0.05)。结论:慢性牙周炎唾液中,牙龈卟啉单胞菌较正常人群明显升高,在今后的研究及防治中,不仅要观察龈沟液中的牙龈卟啉单胞菌,也应注意其在唾液中含量的变化。