姜黄素对人表皮黑素细胞活性、迁移及c-kit mRNA表达量的影响

目的 探讨姜黄素对人表皮黑素细胞活性、黑素细胞迁移及c-kit mRNA相对表达量的影响。方法 不同浓度（5、10、20、30 μmol/L）姜黄素对人表皮黑素细胞活性影响实验,分为阴性对照组（添加MelM-2完全培养基 + 细胞）、药物对照组（MelM-2完全培养基 + 姜黄素）、空白对照组（仅添加MelM-2完全培养基）及实验组（MelM-2完全培养基 + 姜黄素 + 细胞）,用MTS法分别检测培养24 h、48 h后细胞活性。划痕实验检测黑素细胞迁移的情况,实时荧光定量PCR检测黑素细胞c-kit mRNA相对表达量。实验分为对照组（仅添加MelM-2完全培养基 + 细胞）及3个浓度（5、10、20 μmol/L）实验组。 结果 不同浓度（5、10、20、30 μmol/L）姜黄素培养基培养黑素细胞24 h、48 h时,与对照组相比,30 μmol/L组均可明显抑制黑素细胞的增殖（P < 0.05）,其他浓度差异无统计学意义（均P > 0.05）。划痕实验结果显示,与对照组相比,在培养48 h时,5、10、20 μmol/L姜黄素均能显著抑制黑素细胞迁移（均P < 0.05）。实时荧光定量PCR检测结果显示,与对照组相比,经各浓度（5、10、20 μmol/L）姜黄素作用48 h后,均可明显抑制黑素细胞c-kit mRNA相对表达量（均P < 0.05）。 结论 低浓度的姜黄素（≤ 20 μmol/L）对黑素细胞无明显细胞毒性,30 μmol/L的姜黄素能够促进黑素细胞的凋亡。姜黄素（≤ 20 μmol/L）可抑制黑素细胞的迁移,并下调人表皮黑素细胞c-kit mRNA的相对表达量。     

阿魏酸对黑素细胞增殖、黑素合成、酪氨酸酶活性及c-kit、ERK蛋白表达的影响北大核心CSCD

目的 探讨阿魏酸对体外培养的正常人表皮黑素细胞增殖、黑素合成、酪氨酸酶活性及c-kit、ERK蛋白表达的影响.方法 以不同浓度的阿魏酸干预体外培养的正常人表皮黑素细胞,用MTS法分别检测培养24、48、72 h后黑素细胞的增殖活性.用NaOH裂解法检测培养72 h后黑素细胞的黑素合成.用多巴氧化反应法测定培养72 h后黑素细胞酪氨酸酶活性.用Western印迹法测定培养72 h黑素细胞c-kit蛋白及ERK1/2蛋白表达水平.结果 与对照组相比,0.01、0.1、1 mg/ml阿魏酸在作用24、48、72 h后,抑制黑素细胞增殖作用的差异有统计学意义（均P＜ 0.05）,其中1 mg/ml阿魏酸作用72 h抑制黑素细胞活性最高.0.01、0.1、1 mg/ml阿魏酸均能显著影响黑素合成和酪氨酸酶活性,并可降低黑素细胞中c-kit蛋白及ERK1/2蛋白表达水平,与对照组相比,差异有统计学意义（均P＜ 0.05）.结论 阿魏酸可抑制培养的人表皮黑素细胞增殖、黑素合成及酪氨酸酶活性,并可下调黑素细胞c-kit蛋白及ERK蛋白的表达.     

女贞子乙醇提取物及酪醇对人表皮黑素细胞黏附和迁移的影响

目的 探讨女贞子乙醇提取物及其单体酪醇对人表皮黑素细胞黏附和迁移的调节作用。方法 体外分离培养人表皮黑素细胞,XTT法测定细胞增殖情况,用经FN包被的培养板测定细胞黏附率,Transwell微孔膜法观测细胞迁移情况,激光共聚焦显微镜观察经中药处理的细胞内肌动蛋白细胞骨架的结构分布,半定量分析细胞内荧光强度。结果 0.0375 ～ 0.6 mg/ml女贞子乙醇提取物均可促进黑素细胞在FN上的黏附（P ＜ 0.05或P ＜ 0.01）;0.5 ～ 2 mmol/L酪醇可促进黑素细胞黏附（P ＜ 0.05或P ＜ 0.01）。0.15 mg/ml女贞子乙醇提取物及2 mmol/L酪醇无明显细胞毒性,在24 h时不明显促进细胞增殖,选择此浓度为工作浓度,女贞子乙醇提取物及酪醇穿过微孔滤膜的黑素细胞数分别为43.7和51.0个,显著高于对照组的20.3 个（P ＜ 0.01）;两种药物工作浓度作用的黑素细胞与对照组相比,胞内可见较多呈束状的应力纤维,并集中分布于细胞膜内侧和细胞核周围,胞内荧光强度均高于对照组（P ＜ 0.01）。结论 女贞子乙醇提取物及其单体酪醇在体外可促进黑素细胞的黏附及迁移,其机制可能与诱导黑素细胞内肌动蛋白细胞骨架的聚合有关。     

人参皂苷Rb1对人表皮黑素细胞黑素生成的影响

目的 探讨人参皂苷Rb1对体外培养的人黑素细胞黑素生成的影响及其作用机制。方法 人表皮黑素细胞取自小儿包皮环切术标本,取第2 ～ 5代细胞进行实验。采用MTT法测定体外培养的人黑素细胞增殖情况,分光光度计法测定酪氨酸酶的多巴氧化酶活性,氢氧化钠裂解法测定黑素含量,免疫蛋白印记法测定黑素细胞酪氨酸酶、小眼畸形相关转录因子（MITF）的表达及cAMP应答元件结合蛋白（CREB）的磷酸化。结果 体外培养的人黑素细胞分别加入25、50、100 μmol/L人参皂苷Rb1 作用72 h后,黑素细胞存活率3组间差异无统计学意义（P ＞ 0.05）,黑素含量呈浓度依赖性增加（与溶剂对照组相比的相对黑素含量分别为112.4% ± 5.7%、155.7% ± 6.3%、217.2% ± 11.7%）,酪氨酸酶活性增加（相对酪氨酸酶活性分别为117.9% ± 5.7%、158.2% ± 9.6%、182.6% ± 10.0%）。100 μmol/L人参皂苷Rb1作用72 h,黑素细胞酪氨酸酶（225.4 %± 12.8%）、MITF（313.5% ± 16.7%）蛋白表达明显升高（与溶剂对照组相比,P值均 < 0.01）,CREB磷酸化明显增加（322.5% ± 21.1%）（与溶剂对照组相比,P < 0.01）。100 μmol/L人参皂苷Rb1 作用黑素细胞8 h,MITF蛋白表达无明显变化;作用24 h后,MITF表达明显增加,与0时间点相比,P < 0.01。10 μmol/L的蛋白激酶A（PKA）抑制剂H-89预处理细胞,可明显抑制100 μmol/L人参皂苷Rb1引起的CREB激活、酪氨酸酶及MITF蛋白表达的增加,与100 μmol/L人参皂苷Rb1作用72 h比较,P值均 < 0.01,进而抑制人参皂苷Rb1引起的酪氨酸酶活性作用增强及黑素合成增加。 结论 人参皂苷Rb1可促进正常人黑素细胞的黑素合成和酪氨酸酶活性。PKA/CREB/MITF/酪氨酸酶信号通路可能参与了人参皂苷Rb1的促黑素生成机制。     

17-β雌二醇对人表皮黑素细胞非经典Wnt通路作用的初步探讨

目的探讨非经典的Wnt通路对雌激素刺激后黑素生成相关基因的作用。方法原代培养人表皮黑素细胞,用含不同浓度17-β雌二醇的培养基培养黑素细胞,采用CCK-8法测定黑素细胞增殖率、多巴比色法测定酪氨酸酶活性、NaOH溶解法测定黑素含量。根据结果选择合适的雌激素浓度作用于黑素细胞,实时荧光定量PCR检测作用后非经典通路相关因子mRNA的表达,蛋白印迹法检测作用前后非经典通路相关因子蛋白的表达。使用单因素的方差分析法分析各组之间的差异。结果雌激素浓度为10~(-13)~10~(-5)mol/L时黑素细胞增殖率较对照上升(P0.01)。雌激素刺激后酪氨酸酶活性和黑素含量均较对照组升高(P0.01)。10~(-9)mol/L雌激素作用后,WIF-1基因mRNA表达升高(P0.01),JNK、MITF基因mRNA表达均降低(P0.01),WNT5A,TYR基因mRNA的表达与对照组相比无统计学意义(P0.05)。10-9mol/L雌激素作用后,WNT5A,WIF-1,TYR基因蛋白表达升高,MITF,JNK基因蛋白表达量降低。结论非经典通路相关基因参与了雌激素对黑素细胞黑素生成的调节作用。     

迷迭香酸对人表皮黑素细胞黑素生成的影响

目的探讨迷迭香酸(rosmarinic acid)对体外培养的人表皮黑素细胞黑素生成的影响。方法取对数生长期的人表皮黑素细胞,分别加入不同浓度的迷迭香酸进行实验。MTT法测定体外培养的人黑素细胞活力,NaOH裂解法测定黑素含量,体外氧化多巴反应方法测定酪氨酸酶活性。结果与对照组相比,10～80μmol/L迷迭香酸对黑素细胞活力无明显影响,而100μmol/L迷迭香酸抑制黑素细胞活力(P0.01);10～80μmol/L迷迭香酸呈浓度依赖性促进黑素细胞黑素合成;10～80μmol/L迷迭香酸对蘑菇酪氨酸酶活性无明显影响(P0.05);20～80μmol/L迷迭香酸对黑素细胞酪氨酸酶活性有促进作用(P0.01)。结论迷迭香酸具有促进人表皮黑素细胞黑素生成的作用。     

不同浓度阿魏酸溶液对人表皮黑素细胞增殖的影响

目的:观察不同浓度阿魏酸溶液对体外培养的正常人表皮黑素细胞增殖的影响。方法:采用L-DOPA染色法鉴定正常人表皮黑素细胞;分别用0.01、0.1、1 mg/m L的阿魏酸溶液处理正常人表皮黑素细胞24 h、48 h、72 h,采用MTS法测定黑素细胞增殖活性。结果:与未用阿魏酸溶液处理的对照组相比,0.01、0.1、1 mg/m L阿魏酸在作用24、48、72 h后,黑素细胞增殖作用均受到抑制,差异均有统计学意义(P值均0.05);不同浓度与时间有交互作用(F=2.48,P=0.034),随着阿魏酸溶液浓度的增加及作用时间的延长,对黑素细胞的抑制作用增强。结论:阿魏酸溶液可以抑制正常人表皮黑素细胞的增殖,提示其在治疗黄褐斑等疾病方面具有良好的前景。     

卡泊三醇对黑素细胞黑素合成的影响

目的 探讨卡泊三醇对黑素细胞黑素合成的影响及其作用的可能机制.方法 用噻唑蓝比色法(MTT法)、酶学方法及NaOH法,观察卡泊三醇对黑素细胞增殖及色素合成的作用;RT-PCR和蛋白印迹分别检测卡泊三醇对黑素细胞酪氨酸酶基因转录和蛋白表达水平的影响.结果 10~(-9)～10~(-5) mol/L浓度范围的卡泊三醇对体外培养的黑素细胞增殖的影响与空白对照组比较差异无统计意义(P＞0.05).同样浓度范围下,10~(-9)、10~(-8)mol/L浓度的卡泊三醇能明显增强黑素细胞的酪氨酸酶活性和促进黑素细胞的黑素含量,与空白对照组比较,酪氨酸酶活性可分别升高137%、123%(P＜0.05),黑素含量分别增加40.63%、18.75%(P＜0.05).其中10~(-9) mol/L浓度的卡泊三醇增强黑素细胞的酪氨酸酶活性及促进黑素细胞的黑素含量最明显.与高浓度组、空白对照组比较,10~(-9) mol/L浓度的卡泊三醇使酪氨酸酶蛋白表达增高也最明显.较空白对照组增高270.4%(P＜0.05).结论 卡泊三醇对黑素细胞增殖无影响,可增加黑素细胞酪氨酸酶蛋白表达水平,提高酪氨酸酶活性,从而促进黑素细胞的黑素合成.     

葛根素促进黑素细胞黑素合成及其机制的初步探讨

目的 探讨葛根素对正常人黑素细胞黑素合成的影响和可能机制。 方法 用噻唑蓝（MTT）法、NaOH裂解法观察葛根素对黑素细胞增殖及黑素合成作用,RT-PCR及Western印迹法检测葛根素对黑素细胞小眼畸形相关转录因子（MITF）、酪氨酸酶（TYR）、酪氨酸酶相关蛋白1（TRP-1）基因转录和蛋白表达水平的影响。 结果 1 ~ 40 μmol/L浓度范围内葛根素对体外培养的黑素细胞增殖影响与正常对照组相比,差异无统计学意义（P > 0.05）。与正常对照组相比,40 μmol/L葛根素可显著促进黑素细胞的黑素合成（P < 0.05）,并可显著增加MITF、TYR、TRP-1 mRNA及蛋白的表达（P < 0.05）。40 μmol/L葛根素使MITF、TYR、TRP-1的蛋白表达量分别比正常对照组增加8.69%,10.28%和10.58%（P < 0.05）;并使MITF、TYR、TRP-1的mRNA表达量分别比正常对照组增加2.48倍,1.91倍和1.63倍（P < 0.05）。 结论 葛根素能增加MITF、TYR、TRP-1 mRNA及蛋白的表达水平,促进黑素合成。     

表没食子儿茶素没食子酸酯对人表皮黑素细胞黑素合成的影响及机制

目的：观察表没食子儿茶素没食子酸酯（EGCG）对体外培养的人表皮黑素细胞的黑素合成和酪氨酸酶（TYR）活性以及TYR、酪氨酸酶相关蛋白（TRP）-1、TRP-2mRNA表达的影响,探讨EGCG对黑素合成的影响及其作用机制。方法：选择5．0、10．0、12．5、15．0、20．0μg／mL5个浓度的EGCG作用于体外培养的人表皮黑素细胞72h,分别测定细胞增殖活性、TYR活性、黑素含量;采用逆转录（RT）-PCR半定量检测EGCG对黑素细胞中TYR、TRP-1、TRP-2 mRNA表达的影响。结果：EGCG显著抑制黑素合成和TYR活性,且呈浓度依赖性;EGCG可明显抑制黑素细胞中TYR mRNA和TRP-1 mRNA的表达,但对TRP-2mRNA的表达无明显影响。结论：EGCG可抑制黑素合成和TYR活性,这种作用可能与EGCG下调TYR和TRP-1的表达有关。     

粒细胞集落刺激因子及其受体对人黑素细胞增殖及酪氨酸酶活性的影响

目的 探讨粒细胞集落刺激因子受体（G-CSFR）在人黑素细胞中的表达及重组人粒细胞集落刺激因子（rhG-CSF）对人黑素细胞生物学作用的影响。方法 分别用普通的合成培养基与添加一定浓度rhG-CSF的合成培养基培养健康人的黑素细胞,并对黑素细胞的生长情况及形态进行观察。应用流式细胞仪检测人黑素细胞、中性粒细胞及红白血病细胞（HEL 92.1.7）中G-CSFR的表达率。Western印迹、逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）方法分别检测黑素细胞、中性粒细胞及HEL 92.1.7中G-CSFR蛋白及G-CSFR mRNA的表达情况;噻唑蓝比色法（MTT法）检测不同浓度rhG-CSF（200、400、600、800 μg/L）对黑素细胞增殖作用。多巴氧化法检测黑素细胞的酪氨酸酶活性。 结果 黑素细胞G-CSFR的表达率（76.81% ± 10.70%）较HEL92.1.7（2.53% ± 1.54%） 明显升高（P < 0.01）,略低于中性粒细胞（85.76% ± 15.71%,P < 0.05）;黑素细胞可表达G-CSFR蛋白和mRNA,不同浓度rhG-CSF处理组间比较,差异无统计学意义（P > 0.05）。黑素细胞G-CSFR蛋白和mRNA的表达水平明显高于HEL 92.1.7 （P < 0.01）,低于中性粒细胞（P < 0.05或P < 0.01）。rhG-CSF在200 ～ 800 μg/L时均有促黑素细胞增殖的能力,与空白对照组相比,差异有统计学意义（P < 0.01或P < 0.05）;在200 ～ 600 μg/L范围内呈浓度依赖性（P < 0.01）,600 μg/L时的效应（164.04% ± 13.0%）与20 μg/L的TPA作用（165.62% ± 10.6%）相当（P > 0.05）;200 ～ 800 μg/L的rhG-CSF对黑素细胞酪氨酸酶活性的影响与空白对照组相比差异无统计学意义（P > 0.05）。结论 人黑素细胞可表达G-CSFR;rhG-CSF具有促进黑素细胞增殖的作用,但对酪氨酸酶活性无影响。     

沙利度胺对HaCaT细胞分泌血管内皮细胞生长因子及肿瘤坏死因子α的影响

目的 探讨沙利度胺对HaCaT细胞增殖及血管内皮细胞生长因子（VEGF）和肿瘤坏死因子α（TNF-α）表达的影响。方法 体外培养的HaCaT细胞分为阴性对照组及不同浓度沙利度胺实验组;采用水溶性四氮唑法（WST-1）检测沙利度胺对HaCaT细胞增殖的影响,实时定量PCR法检测HaCaT细胞VEGF及TNF-α mRNA的表达水平,ELISA法检测HaCaT细胞VEGF及TNF-α蛋白的表达水平。采用单因素方差分析进行统计分析。结果 沙利度胺浓度在0.01 ～ 100 nmol/L之间时,可抑制VEGF mRNA（0.439 ～ 0.634,P ＜ 0.01）与蛋白（0.587 ～ 0.923,P ＜ 0.05）的表达;浓度在0.1 ～ 100 nmol/L之间时,可抑制TNF-α mRNA（0.493 ～ 0.587,P ＜ 0.05）与蛋白（0.408 ～ 0.617,P ＜ 0.01）的表达。结论 沙利度胺在一定浓度范围可抑制角质形成细胞增殖及减少VEGF及TNF-α表达。 【关键词】 角蛋白细胞; 沙立度胺; 血管内皮生长因子类; 肿瘤坏死因子α     

滇山茶、银线草、车桑子、重楼对黑素细胞株增殖活性和酪氨酸酶影响的研究

目的 探讨滇山茶、银线草、车桑子、重楼提取物的美白作用。 方法 7种植物提取物（滇山茶枝叶提取物、滇山茶枝叶提取物70%乙醇洗脱物、滇山茶花蕾提取物、滇山茶花蕾提取物70%乙醇洗脱物、银线草提取物、车桑子提取物、重楼提取物）分别设立10、25、50、100、200、400、800 mg/L 7个浓度作用于体外培养人表皮黑素细胞株,同时设立阴性对照组、空白对照组和100 μg /ml熊果苷阳性对照组。采用噻唑蓝比色法测定植物提取物对黑素细胞增殖影响,体外氧化多巴反应法测定提取物对酪氨酸酶活性的影响。 结果 对黑素细胞增殖活性的影响：400 mg/L滇山茶枝叶提取物,10 ~ 100 mg/L滇山茶枝叶提取物70%乙醇洗脱物,10 ~ 25 mg/L滇山茶花蕾提取物,10 mg/L滇山茶花蕾提取物70%乙醇洗脱物和10 ~ 25 mg/L车桑子提取物对黑素细胞增殖活性的抑制作用与100 mg/L熊果苷相当（P > 0.05）。800 mg/L滇山茶枝叶提取物对HEM-m细胞增殖活性的抑制作用低于熊果苷（P < 0.05）。余不同浓度提取物对HEM-m细胞增殖的抑制作用均强于熊果苷（P < 0.05或P < 0.01）。对黑素细胞酪氨酸酶活性的影响： 10 mg/L滇山茶枝叶提取物,10 ~ 400 mg/L滇山茶枝叶提取物70%乙醇洗脱物,10 ~ 25 mg/L滇山茶花蕾提取物,50 ~100 mg/L滇山茶花蕾提取物70%乙醇洗脱物,10 ~ 50和400 mg/L银线草提取物,10 ~ 800 mg/L车桑子提取物,10和100 ~ 200 mg/L重楼提取物对酪氨酸酶活性的抑制作用与100 mg/L熊果苷相当（P > 0.05）。10 ~ 25 μg/ml滇山茶花蕾提取物70%乙醇洗脱物对酪氨酸酶的抑制作用明显低于熊果苷（P < 0.05）。其余不同浓度的提取物对酪氨酸酶的抑制活性均优于熊果苷组（P < 0.05或P < 0.01）。 结论 滇山茶、车桑子提取物于特定浓度时,能抑制酪氨酸酶活性。     

重组人色素上皮衍生因子对HaCaT细胞体外增殖和白细胞介素6、8及血管内皮生长因子表达的影响

目的 探讨重组人色素上皮衍生因子（rhPEDF）对HaCaT细胞体外增殖和白细胞介素6（IL-6）、IL-8及血管内皮生长因子（VEGF）表达的影响。 方法 HaCaT细胞分4组进行不同处理,分别为100 μg/L rhPEDF组、50 μg/L rhPEDF组、25 μg/L rhPEDF组及对照组（只加RPMI 1640培养液）。采用CCK8法检测不同浓度rhPEDF作用于HaCaT细胞24、48、72 h后对细胞体外增殖的影响。RT-PCR和Western印迹法检测rhPEDF对HaCaT细胞IL-6、IL-8、VEGF mRNA及其蛋白表达的影响。统计分析方法采用两因素方差分析、单因素方差分析、SNK-q检验以及Pearson相关分析。 结果 25、50、100 μg/L的rhPEDF作用24、48、72 h后对HaCaT细胞体外增殖均有不同程度的抑制作用。随时间延长和rhPEDF浓度的增加,rhPEDF对HaCaT细胞体外增殖的抑制作用均逐渐增强（F = 1115、329.9,均P < 0.001）。与对照组相比,不同浓度（100、50、25 μg/L）rhPEDF作用于HaCaT细胞48 h后,VEGF、IL-6、IL-8 mRNA及蛋白的表达均下降,差异均有统计学意义（P < 0.05）。随rhPEDF浓度的增加,各浓度rhPEDF组VEGF mRNA、IL-6和IL-8蛋白表达均出现下调,与对照组比较,差异均有统计学意义（P < 0.05）;100 μg/L rhPEDF组的IL-6、IL-8 mRNA表达明显低于25 μg/L rhPEDF组（P < 0.05）;100 μg/L rhPEDF组VEGF蛋白表达分别低于50、25 μg/L rhPEDF组（P < 0.05）,而50与25 μg/L rhPEDF组间差异无统计学意义（P > 0.05）。 结论 rhPEDF可抑制HaCaT细胞体外增殖,并可在mRNA及蛋白水平下调IL-6、IL-8、VEGF的表达。     

甲磺酸伊马替尼对黑素瘤细胞Hs294T生物学活性的影响

【摘要】 目的 探讨酪氨酸激酶抑制剂甲磺酸伊马替尼对黑素瘤细胞Hs294T生物学活性及其Wnt/β-连环蛋白通路的的影响。 方法 用甲磺酸伊马替尼作用黑素瘤细胞Hs294T后,用MTT实验、Annexin V-PI双染色法、基质胶侵袭实验分别观察细胞增殖活性、凋亡和侵袭能力的变化。用激光共聚焦显微镜观察细胞中Wnt通路关键性蛋白分子β-连环蛋白定位的改变。用Western印迹和荧光定量PCR分别检测β-连环蛋白,靶基因细胞周期蛋白D1蛋白的表达变化,及通路转录因子LEF1、靶基因C-myc 的mRNA表达的变化。结果 4 ～ 10 μmol/L浓度药物能使细胞增殖活性呈梯度下降（P ＜ 0.05）;用10 ?滋mol/L药物可使细胞增殖能力呈时间梯度下降（P ＜ 0.01）;与对照组相比,处理组细胞早期及晚期凋亡比例均明显增加,细胞侵袭能力显著降低约48%（P ＜ 0.05）,同时β-连环蛋白蛋白表达未见明显变化,但其胞核定位相对减少,LEF1、C-myc、细胞周期蛋白D1的表达均下调。结论 甲磺酸伊马替尼可能通过下调Wnt/β-连环蛋白通路而抑制黑素瘤细胞增殖、促进凋亡并降低侵袭力。     

全乙酰化表没食子儿茶素没食子酸酯对氧化应激导致黑素细胞损伤的保护作用研究

目的 研究全乙酰化表没食子儿茶素没食子酸酯（AcEGCG）对H2O2诱导的人表皮黑素细胞损伤的保护作用,探讨其可能的作用机制。 方法 体外培养人表皮黑素细胞,采用H2O2诱导细胞损伤模型。实验分对照组、H2O2组、不同浓度表没食子儿茶素没食子酸酯（EGCG）组和AcEGCG组。MTS法测定细胞存活率,LDH测试盒检测乳酸脱氢酶（LDH）的漏出量,流式细胞仪检测细胞内活性氧（ROS）的表达水平;Western印迹法检测半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶9（caspase-9）和半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3（caspase-3）的表达情况。多个样本均数比较采用单因素方差分析,各样本间多重比较采用SNK-q检验。 结果 与对照组相比,H2O2处理组黑素细胞存活率明显降低（22.99% ± 0.53%,P < 0.01）,细胞内LDH漏出量增加（36.58% ± 0.73%,P < 0.01）,细胞内ROS水平明显升高（19.08 ± 0.57,P < 0.01）,caspase-9和caspase-3表达升高（分别为2.65 ± 0.079和2.36 ± 0.057,均P < 0.01）。与H2O2组相比,细胞存活率在10、20、40 μmol/L AcEGCG组（79.50% ± 3.62%、86.52% ± 5.13%、97.81% ± 5.21%）及EGCG组（43.19% ± 1.68%、63.34% ± 3.60%、70.82% ± 2.1%）明显增加（均P < 0.01）,caspase-9分别降低为1.44 ± 0.067、1.26 ± 0.059、1.10 ± 0.072及2.31 ± 0.085、2.13 ± 0.091、1.35 ± 0.064,caspase-3分别降低为1.70 ± 0.053、1.57 ± 0.057、1.24 ± 0.068及2.09 ± 0.076、1.98 ± 0.093、1.79 ± 0.056,差异均有统计学意义（P < 0.05）;LDH含量均明显下降（P < 0.01）;40 μmol/L AcEGCG或EGCG处理后,ROS含量明显下降（均P < 0.01）。 结论 AcEGCG对H2O2诱导的黑素细胞氧化应激损伤有显著的保护作用,且显著优于EGCG,可能通过清除自由基、抗氧化、降低caspase-9及caspase-3表达等途径发挥作用。     

积雪苷体外对瘢痕疙瘩成纤维细胞增殖及结缔组织生长因子表达的影响

目的 探讨积雪苷体外对瘢痕疙瘩成纤维细胞增殖和对结缔组织生长因子（CTGF）表达的影响。方法 取手术切除的瘢痕疙瘩组织作成纤维细胞的原代培养,加入不同浓度积雪苷,观察细胞的形态变化,MTT法检测细胞活性,免疫组化和Western印迹法检测积雪苷对瘢痕疙瘩成纤维细胞结缔组织生长因子表达的影响。结果 细胞形态学观察显示,经不同浓度积雪苷处理的成纤维细胞呈现明显的抑制及凋亡征象。积雪苷在1 ～ 100 mg/L范围内,在24、48、72 h时积雪苷浓度与细胞活性抑制率均呈正相关,r分别为0.95、0.90和0.92,P值均 ＜ 0.01;且各浓度不同时间段细胞活性抑制率间单因素方差分析,P值均 ＜ 0.01。瘢痕疙瘩成纤维细胞中CTGF呈强阳性表达,而经积雪苷处理瘢痕疙瘩成纤维细胞48 h后,CTGF表达有所减弱,每100个成纤维细胞中CTGF表达阳性细胞数均值未加药组为73个,1 mg/L积雪苷组为54个,10 mg/L积雪苷组为46个,未加药组与1 mg/L、10 mg/L积雪苷组比较,差异均有统计学意义（t值分别为4.34和6.26,P值均 ＜ 0.01）;1 mg/L积雪苷组与10 mg/L积雪苷组比较,差异亦有统计学意义（t = 1.95,P ＜ 0.05）。Western印迹显示,积雪苷作用48 h后,成纤维细胞中CTGF的表达量比未加药的细胞明显减弱,且表达量随药物剂量的加大有递减趋势。结论 积雪苷能有效抑制瘢痕疙瘩成纤维细胞的增殖和结缔组织生长因子的表达。