IL-8对肝癌细胞增殖、迁移、侵袭的影响及其机制研究

目的探讨白细胞介素-8(IL-8)在肝癌细胞中的表达及其对增殖、迁移、侵袭的影响并分析其可能作用机制。方法采用qRT-PCR与Western blot方法分别检测肝癌细胞系HepG2、SMMC-7721及正常肝细胞L02中IL-8 mRNA和蛋白表达水平。将IL-8 siRNA转染至HepG2细胞,MTT检测沉默IL-8对HepG2细胞增殖能力的影响,Transwell迁移及侵袭实验检测沉默IL-8对HepG2细胞迁移及侵袭能力的影响,采用qRT-PCR与Western blot方法分别检测MMP-2、MMP-9 mRNA和蛋白表达水平。Western blot法检测沉默IL-8对磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)/蛋白激酶B(AKT)信号通路蛋白表达的影响。HepG2细胞中加入PI3K/Akt信号通路抑制剂(LY294002),观察其对HepG2细胞增殖、迁移及侵袭的影响。结果相较于L02相,肝癌细胞系HepG2、SMMC-7721中IL-8 mRNA及蛋白表达均显著升高(P 0. 05); HepG2细胞中敲低IL-8后细胞增殖、迁移及侵袭能力均明显减弱,MMP-2、MMP-9及PI3K、p-AKT表达水平均明显降低;加入LY294002可明显抑制HepG2细胞增殖、迁移及侵袭能力。结论 IL-8可能通过激活PI3K/Akt信号通路进而增强肝癌细胞增殖、迁移、侵袭能力。     

CLDN1影响放疗后肝癌侵袭转移潜能变化的机制研究

[目的]分析放疗后肝癌侵袭转移能力及其相关分子标志物表达水平变化,探讨肝癌侵袭转移分子机理。[方法]随机将肝癌细胞分为放疗组(8 Gy射线照射)和未放疗组(未射线照射),检测HepG2和Huh7两组细胞的干性相关标记物(CD133、CD44)表达水平,并且通过蛋白印迹试验检测肝癌细胞放疗前后中CLDN1表达水平差异;通过Transwell小室试验检测放疗组及未放疗组肝癌细胞侵袭转移潜能,确定侵袭转移潜能改变趋向,并进一步探讨CLDN1在其中的作用。[结果]放疗后肝癌细胞发生侵袭转移数目较未放疗组明显增加(P0.05),放疗后HepG2和Huh7肝癌细胞中CD133及CD44的表达量均显著高于未放疗组(P0.05);CLDN1在放疗前后表达水平差异显著(P0.05);而降低CLDN1的表达,肝癌细胞发生侵袭转移数量减少(P0.05),并且放疗CLDN1低表达肝癌细胞,肝癌细胞表面干性相关标记物CD133、CD44表达上调表达不明显,与正常对照组(CLDN1未敲低组)比较差异有统计学意义(P0.05)。[结论]放疗后肿瘤细胞干性增加,CLDN1可通过诱导肝癌细胞获得肿瘤干细胞特性,从而增强放疗后肝癌细胞侵袭转移能力。     

去乙酰化酶1在肝癌干细胞更新中的机制研究

目的探讨去乙酰化酶1(Sirtuins,SIRT1)在肝癌干细胞(cancer stem cells,CSCs)更新中的作用及相关的分子机制。方法获取肝CSCs,Western blotting和免疫荧光染色法检测CSCs和非-CSCs中SIRT1表达;包装过表达SIRT1的慢病毒,感染肝脏非-CSCs,Western blotting检测非-CSCs中SIRT1表达,克隆形成实验探讨过表达SIRT1后非-CSCs克隆形成能力,球体形成实验探讨非-CSCs的自我更新能力,裸鼠体内移植瘤实验探讨非-CSCs和过表达SIRT1的非-CSCs体内致肿瘤性;CSCs转染SIRT1特异性siRNA或NC-siRNA,或经不同浓度(2、4、6、8、12μmol/L)SIRT1特异性抑制剂VT6处理,然后检测CSCs的克隆形成能力、自我更新能力及体内致肿瘤性;Western blotting检测SOX2、c-Myc和Nanog蛋白表达;SIRT1特异性RNA或NC-siRNA与过表达SOX2的质粒共转染CSCs,克隆形成实验探讨CSCs克隆形成能力,球体形成实验探讨CSCs的自我能更新能力。结果 CSCs中SIRT1表达显著高于非-CSCs中SIRT1的表达(P0.01)。与NC-siRNA转染组相比,si SIRT1转染组克隆形成能力与球体形成能力下均降了,且体内致肿瘤性也显著下降(P0.01);感染过表达SIRT1的慢病毒后,非-CSCs中SIRT1表达显著高于空载体对照组,且与对照组相比,过表达SIRT1后非-CSCs克隆形成能力与球体形成能力均提高(P0.01),且体内致肿瘤性也显著增强;Western blotting检测结果表明,敲低或抑制SIRT1表达后,SOX2、Nanog表达显著被抑制(P0.01),而c-Myc的表达无显著变化(P0.05);过表达SOX2显著逆转了敲低SIRT1表达对克隆形成能力和自我更新能力的抑制作用(P0.01)。结论 SIRT1在肝脏CSCs的自我更新和致肿瘤过程中发挥重要作用,其可能为肝癌的治疗提供新的靶标。     

骨形态发生蛋白2在骨髓间充质干细胞向肝细胞分化中的作用

目的：观察骨形态发生蛋白2（BMP2）在骨髓间充质干细胞（BMSCs）向肝细胞分化中的作用。方法采用贴壁法分离培养大鼠股骨BMSCs ,将体外扩增的第3代BMSCs制作细胞爬片,并行肝细胞定向诱导。根据诱导因子不同分为：肝细胞生长因子（ HGF）组、HGF＋BMP2组、BMP2组及空白对照组。培养10 d左右收集细胞,观察各组细胞形态的变化,并采用ELISA法检测培养液上清中肝细胞特异性标志物甲胎蛋白（ AFP）、白蛋白（ ALB）,免疫细胞化学法检测诱导分化后细胞CK-18的表达。结果 HGF组和HGF＋BMP2组可检测到ALB、AFP及CK-18,且HGF＋BMP2组ALB、AFP及CK-18明显高于HGF组（P均＜0．05）。结论 BMP2不能单独诱导BMSCs向肝细胞分化,但能增强HGF诱导BMSCs向肝细胞分化的作用。     

miR-5188在肝癌细胞中的作用及网络调控机制研究

目的 探究miR-5188在肝癌细胞中的作用及网络调控机制。方法过表达或敲低miR-5188表达后,检测肝癌细胞HepG2的增殖能力。利用miRNA靶基因预测数据库miRDB获取miR-5188潜在的靶基因,使用小干扰RNA(siRNA)敲低HepG2细胞中的上述靶基因后检测细胞增殖能力。采用实时荧光定量PCR法检测正常肝细胞LO2和HepG2细胞中mi R-5188、pre-miR-5188和pri-miR-5188的表达水平,并分析长链非编码RNA NEAT1（下文简称NEAT1）、NONO/PSF复合体对pri-miR-5188的影响。结果过表达mi R-5188后,HepG2细胞的增殖能力增强;敲低miR-5188表达后,HepG2细胞的增殖能力减弱,差异均有统计学意义（P均<0.05）。敲低DIDO1表达后,HepG2细胞的增殖能力增强;过表达DIDO1后,HepG2细胞的增殖能力减弱,差异均有统计学意义（P均<0.05）。过表达miR-5188后,HepG2细胞中DIDO1的表达水平降低;敲低miR-5188表达后,HepG2细胞中DIDO1的表达水平升高,差异...     

GTPBP2通过Wnt/β-catenin信号通路调控结直肠癌干细胞增殖、细胞周期、迁移、侵袭和凋亡

目的 探讨GTP结合蛋白(GTPBP)2对CD133阳性结直肠癌干细胞增殖、细胞周期、迁移、侵袭和凋亡的影响及其分子机制。方法 选取30例结直肠癌患者的结直肠癌组织及相应癌旁组织；利用免疫磁珠法分选出人结直肠癌SW480细胞的CD133阳性肿瘤干细胞，将其分为Con组、si-NC组、si-GTPBP2组；实时荧光定量-聚合酶链反应(RT-qPCR)检测GTPBP2 mRNA表达水平；Western印迹检测GTPBP2表达、干细胞表面标志物表达及增殖、细胞周期、迁移、侵袭、凋亡和Wnt/β-catenin信号通路相关蛋白表达；四甲基偶氮唑蓝(MTT)检测细胞增殖；Transwell实验检测细胞迁移和侵袭；流式细胞术检测细胞凋亡和周期。结果 与癌旁组织相比，结直肠癌组织中GTPBP2表达水平明显升高(P<0.05);沉默GTPBP2可明显抑制结直肠癌干细胞增殖、迁移和侵袭，明显阻滞细胞周期进程，并明显促进凋亡，结直肠癌干细胞存活率、S期细胞比例、迁移、侵袭细胞数及细胞周期蛋白(Cyclin)D1、细胞核增殖抗原(Ki)-67、基质金属蛋白酶(MMP)-2、MMP-9、B细胞淋巴瘤(B...     

CD133和CD90在肝细胞癌中的表达及其意义

存在于肿瘤组织中的少数具有干细胞性质的细胞群体被称为肿瘤干细胞(CSCs),可促进肿瘤的发生和发展,也是肿瘤耐药性、复发及转移的根源.有报道CD133和CD90可能为肿瘤干细胞表面标志物,但CD133和CD90在肝癌中的表达及其意义报道尚少.本研究采用免疫组织化学方法检测不同肝组织中CD133及CD90蛋白的表达水平,探讨其在肝癌中的表达情况及其与肝癌生物学特性及预后的关系.     

CD133和CD90在肝细胞癌中的表达及其意义

存在于肿瘤组织中的少数具有干细胞性质的细胞群体被称为肿瘤干细胞(CSCs),可促进肿瘤的发生和发展,也是肿瘤耐药性、复发及转移的根源.有报道CD133和CD90可能为肿瘤干细胞表面标志物,但CD133和CD90在肝癌中的表达及其意义报道尚少.本研究采用免疫组织化学方法检测不同肝组织中CD133及CD90蛋白的表达水平,探讨其在肝癌中的表达情况及其与肝癌生物学特性及预后的关系.     

ERK/Smad通路在BMP2介导的牙髓干细胞增殖、分化中的作用

目的 探讨细胞外调节蛋白激酶(ERK)/SMAD家族(Smad)通路在骨形态蛋白(BMP)-2诱导的人牙髓干细胞(hDPSCs)增殖、分化中的调节作用。方法 将前磨牙hDPSCs分为空白组、荧光蛋白(GFP)组、BMP2组(80 ng/ml)、BMP2+ERK通路抑制剂(U0126)组(80 ng/ml+25μmol/L);空白组正常培养不做任何处理，GFP组转染重组腺病毒空载体溶液作为对照，BMP2组转染BMP2重组腺病毒溶液，BMP2+U0126组在BMP2组基础上加入U0126溶液进行干预培养。各组均培养7 d后，用CCK-8检测hDPSCs细胞的增殖能力；用碱性磷酸酶(ALP)染色法及茜素红染色法检测其分化能力；用实时荧光定量聚合酶链反应(RT-qPCR)检测BMP2、Runt转录因子蛋白(Runx)2、牙本质涎磷蛋白(DSPP)和骨唾液蛋白(BSP)基因表达；用蛋白Western印迹法检测各组细胞中ERK1/2及其磷酸化(p)-ERK1/2、Smad1/5/8及其磷酸化蛋白(p-Smad1/5/8)、Runx2、DSPP、BSP蛋白表达水平。结果 hDPSCs分离培养的第3代...     

Notch1基因在调控人肝癌细胞HepG2侵袭转移中的作用

目的：探讨Notch1基因在调控人肝癌细胞HepG2侵袭转移中的作用。方法将Notch1细胞内段（ pc-NICD）、干扰RNA和pEGF-C1空载体转入到HepG2细胞中,筛选稳定表达的细胞,采用荧光显微镜、RT-PCR及Western blot检测Notch1 mRNA及蛋白;采用Transwell迁移及Matrigel侵袭实验鉴定HepG2细胞侵袭、迁移能力。结果上调Notch1受体表达,可使肝癌细胞HepG2迁移侵袭能力增强;反之,下调Notch1受体表达时,细胞迁移侵袭能力减弱（P均＜0．05）。结论 Notch1基因对肝癌细胞HepG2的侵袭、转移具有重要作用。     

干细胞相关基因Oct-4在人肿瘤细胞系中的表达及其意义

目的 探讨干细胞相关基因Oct-4在多种人肿瘤细胞系中的表达.方法 体外培养人胰腺癌、宫颈癌、肝癌、乳腺癌、结肠癌细胞系,应用RT-PCR和Western blot法分别检测Oct-4 mRNA和蛋白在各种人肿瘤细胞系中的表达.结果 Oct-4 mRNA和蛋白在胰腺癌细胞系SW1990、PANC1、BxPC3、PC3,宫颈癌细胞系HELA,肝癌细胞系HepG2,乳腺癌细胞系MCF-7和结肠癌细胞系CaCo2中均有表达.结论 干细胞相关基因Oct-4在肿瘤细胞中的表达,一方面说明恶性肿瘤与干细胞具有密切的关系,另一方面也说明Oct-4基因在这些肿瘤的发生中起到重要作用.     

外源性骨形态发生蛋白9转入肺鳞癌细胞对其活性的影响及作用机制

目的观察骨形态发生蛋白(BMP)9对人肺鳞癌细胞株YTMLC-90迁移和侵袭能力的影响及其作用机制。方法 RT-PCR和Western印迹法检测YTMLC-90细胞和正常人支气管上皮细胞(NHBE)中BMP9 mRNA和蛋白表达水平;以转染重组腺病毒Ad-BMP9的YTMLC-90细胞为研究组,转染Ad-GFP为阴性对照组,未转染为空白对照组;采用划痕愈合实验检测3组细胞迁移能力,Transwell实验检测迁移和侵袭能力,同时检测迁移相关因子基质金属蛋白酶(MMP)2 mRNA和蛋白表达情况;Western印迹法检测3组细胞BMP-Smad信号通路中Smad 1/5磷酸化水平。结果YTMLC-90细胞中BMP9 mRNA和蛋白表达量均明显低于NHBE细胞(P<0.05)。Ad-BMP9转染YTMLC-90细胞后胞内BMP9蛋白表达量明显高于阴性对照组(P<0.01)。空白对照组48 h的细胞划痕愈合率与阴性对照组比较差异无统计学意义(P>0.05);研究组细胞划痕愈合率明显低于阴性对照组和空白对照组,穿过小室膜和基质胶的YTMLC-90细胞数均明显少于阴性对照组和空白对照组,MMP2表达量明显低于阴性对照组,MMP2mRNA和蛋白表达量均明显低于阴性对照组(均P<0.05)。YTMLC-90细胞高表达BMP9后其p-Smad 1/5表达量明显高于阴性对照组和空白对照组(P<0.01)。结论外源性BMP9转入人肺鳞癌细胞株YTMLC-90可有效抑制其迁移和侵袭能力,激活BMP-Smad信号通路是该抑制作用的机制之一。     

HBx和癌胚抗原相关细胞黏附分子1在乙型肝炎相关性肝癌中的作用及病理特征

目的 探讨HBx和癌胚抗原相关细胞黏附分子1(CEACAM1)在乙型肝炎相关性肝癌中的表达及意义.方法 采用免疫组织化学方法(SP法)检测81份乙肝相关性肝癌组织中HBx及CEACAM1的表达情况,分析HBx和CEACAM1与乙肝相关性肝癌的临床病理特征.Western印迹检测人正常肝细胞系QZG、肝癌细胞HepG2及稳定转染HBx的肝癌细胞HepG2(HepG2-X)中CEACAM1的表达.结果 81份乙肝相关性肝癌组织中HBx表达阳性率为74.07％ (60/81),CEACAM1表达阳性率为71.60％ (58/81),二者与门静脉侵袭、淋巴结转移和TNM分期存在显著相关,HBx与CEACAM1的表达呈负相关(rs=-0.310,P＜0.01);在HepG2-X中,CEACAM1蛋白表达水平与肝癌细胞HepG2及人正常肝细胞系QZG相比显著降低.结论 HBx的高表达和CEACAM1的低表达与乙肝相关性肝癌的侵袭、转移密切相关,HBx有可能通过抑制CEACAM1的表达而诱导乙肝相关性肝癌的侵袭与转移.     

活化蛋白C对重症急性胰腺炎大鼠丝裂原活化蛋白激酶信号通路的影响

丝裂原活化蛋白激酶（MAPK）信号通路对重症急性胰腺炎（SAP）继发严重并发症起早期关键介导作用，相应抑制剂可改善SAP的病情。活化蛋白C（APC）具有改善SAP病情的作用，其具体机制尚未阐明。目的：观察APC对SAP大鼠MAPK信号通路中主要激酶的影响以及后续炎症介质的变化，为临床用药提供理论依据。方法：Sprague．DawleY大鼠诱导SAP模型后即刻静脉注射APC10μg/kg或50μg/kg。以基因芯片检测胰腺组织MAPK信号通路相关基因。以实时定量聚合酶链反应（real-timePCR）和蛋白质印迹法检测胰腺组织该通路中p38MAPK、c-Jun氨基端激酶/应激活化蛋白激酶（JNK/SAPK）、细胞外信号调节激酶（ERK）1/2mRNA、蛋白和磷酸化蛋白水平的表达，同时检测肿瘤坏死因子（TNF）-α和白细胞介素（IL）-1β蛋白的表达。结果：与APC治疗组和正常对照组相比，SAP组胰腺组织p38MAPK和JNK2mRNA呈高表达。与SAP组相比，50Ixg/kgAPC治疗组p38MAPK、JNK/SAPK蛋白/磷酸化蛋白表达水平显著降低，ERK1/2蛋白/磷酸化蛋白表达水平显著升高，TNF-α和蛋白表达水平显著降低（P均〈0．05）。APC治疗组p38MAPK、磷酸化ERK1/2和TNF-α蛋白表达水平呈剂量依赖性（P均〈0．05）。结论：APC可抑制SAP大鼠胰腺组织MAPK信号通路内p38MAPK和JNK/SAPK的表达和活化，进而抑制TNF-α和IL-1β的释放，同时上调ERK1/2的表达和活化．从而减轻胰腺组织损伤。     

TGF⁃β1 p38MAPK及BMP⁃7蛋白在肝多房棘球蚴病患者肝组织中的表达及意义

目的　检测肝多房棘球蚴病患者肝组织中转化生长因子⁃β1（transforming growth factor⁃β1, TGF⁃β1）、p38MAPK及骨形态发生蛋白⁃7（bone morphogenetic protein⁃7, BMP⁃7）表达水平,探讨其在肝多房棘球蚴病肝纤维化中的潜在作用。方法　以20例肝多房棘球蚴病患者为研究对象,分别采集距肝脏病灶0.5 cm内（A组）、距肝脏病灶0.5～1.5 cm（B组）肝组织及距肝脏病灶2 cm及以上的正常肝组织（C组）。肝组织标本分别行HE和Masson染色观察纤维化病理变化,采用Western blotting检测肝组织中TGF⁃β1、p38MAPK及BMP⁃7蛋白表达水平,分析TGF⁃β1、p38MAPK及BMP⁃7蛋白表达与肝纤维化的相关性。结果　HE染色结果显示,A组和B组肝组织中肝细胞结构排列紊乱、肝小叶结构有不同程度破坏,可见不同程度肝细胞变性、萎缩、坏死及纤维组织增生,并有嗜酸性粒细胞浸润;C组肝组织无异常病理改变,肝细胞结构形态正常、大小均匀,未见明显排列紊乱,肝小叶结构清晰,无或轻度细胞变性、坏死及炎性细胞浸润。Masson染色结果显示,A组和B组肝组织可见汇管区较多纤维结缔组织增生,出现不同程度小叶内纤维化;C组肝组织无明显异常病理改变。A、B、C组肝组织中TGF⁃β1（P < 0.001）、p38MAPK（P < 0.01）及BMP⁃7蛋白（P < 0.05）表达水平差异均有统计学意义,A组和B组TGF⁃β1、p38MAPK及BMP⁃7蛋白表达水平均显著高于C组（P均< 0.05）,B组TGF⁃β1、p38MAPK及BMP⁃7蛋白表达水平亦显著高于C组（P均< 0.05）。TGF⁃β1、p38MAPK及BMP⁃7蛋白表达水平均与肝纤维化程度呈正相关（r = 0.866、0.702、0.801,P均< 0.05）,不同纤维化程度肝组织中TGF⁃β1（F = 72.580,P < 0.01）、p38MAPK（[χ2] = 31.705,P < 0.01）及BMP⁃7蛋白（[χ2] = 48.388,P < 0.01）表达水平差异均有统计学意义。TGF⁃β1蛋白与p38MAPK、BMP⁃7蛋白表达水平均呈显著正相关（r = 0.607、0.702,P均 < 0.001）,BMP⁃7与p38MAPK蛋白表达水平亦呈显著正相关（r = 0.456,P < 0.001）。结论　TGF⁃β1、p38MAPK和BMP⁃7蛋白通过相互作用、共同介导了肝多房棘球蚴病肝纤维化发生。     

ABCG2在肝细胞性肝癌组织和肝癌细胞株中的表达及意义

目的: 探讨干细胞标志物ABCG2在肝细胞性肝癌组织和肝癌细胞株中表达的意义.方法: 应用免疫组化SP方法检测ABCG2在30例肝细胞性肝癌组织和8例癌旁肝硬化组织中的表达、分布, 并采用细胞免疫荧光技术检测ABCG2在两种肝癌细胞株HepG2、PLC/PRF/5中的表达, 采用流式细胞技术测试出两种细胞株中ABCG2阳性细胞的比例.结果: 免疫组化中, ABCG2阳性染色定位于癌细胞胞膜, 部分病例胞质也有分布. 免疫组化显示ABCG2在肝细胞性肝癌组织和癌旁肝硬化组织中的表达阳性率分别为63.33%(19/30)和25%(2/8). ABCG2蛋白在HepG2、PLC/PRF/5这两个肝癌细胞株中均有表达, HepG2中, ABCG2阳性染色定位于细胞胞质中, 而在PLC/PRF/5中, ABCG2阳性染色定位于细胞胞质和细胞膜上. PLC/PRF/5细胞株中, 通过流式细胞仪能检测出表达ABCG2的细胞( P<0.05), 而在HepG2细胞株中, 通过流式细胞仪不能检测出表达ABCG2的细胞.结论: ABCG2在肝细胞性肝癌的发生发展过程中可能起着非常重要的作用, 有可能成为临床治疗肝细胞性肝癌的分子靶标.     

ERK1／2抑制剂PD98059对肝癌HepG2细胞增殖和凋亡的影响

目的探讨ERKI／2抑制剂PD98059对人肝癌细胞株HepG2细胞增殖和凋亡的影响。方法应用免疫组化法检测HepG2细胞中ERK1／2的表达,不同浓度PD98059处理HepG2细胞48h后,MTT法检测细胞增殖情况,流式细胞仪检测细胞凋亡变化。结果HepG2细胞中ERK1／2呈强阳性表达,PD98059明显下调ERK1／2表达,抑制HepG2细胞增殖,诱导肝癌细胞凋亡,呈剂量依赖趋势（P〈0．05）。结论ERK1／2抑制剂PD98059能够通过诱导细胞凋亡从而抑制HepG2细胞增值。     

MiR-122通过靶向SIRT1抑制肝癌细胞的增殖、迁移和侵袭

目的?探讨微小RNA-122（microRNA-122, miR-122）通过靶向沉默信息调节因子1（silent information regulator 1, SIRT1）对肝癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响。方法?用实时荧光定量PCR（real-time quantitative PCR, RT-qPCR）法检测肝癌组织和细胞中miR-122和SIRT1 mRNA表达水平；用生物信息学和双荧光素酶报告基因分析并验证miR-122和SIRT1靶向关系。培养肝癌细胞HepG2，将其分为空白对照组（control组）、miR-122过表达阴性对照组（miR-NC mimic组）、miR-122过表达组（miR-122 mimic组）、miR-122过表达和SIRT1过表达阴性对照组（miR-122 mimic+pcDNA组）、miR-122过表达和SIRT1过表达组（miR-122 mimic+pcDNA-SIRT1组）。用细胞计数试剂（cell counting kit-8, CCK-8）和5-乙炔基-2’脱氧尿嘧啶核苷分析各组细胞增殖情况；划痕愈合实验和Transwell实验分析各组细胞迁移和侵袭能力；用Western blot法分析各组细胞中增殖、迁移和侵袭相关蛋白p53、细胞周期蛋白D1、E-钙粘蛋白、N-钙粘蛋白和波形蛋白及SIRT1蛋白表达水平。结果?MiR-122表达水平在肝癌组织和细胞中下调，SIRT1 mRNA表达水平在肝癌组织和细胞中上调（P＜0.05）。MiR-122负靶向调控SIRT1表达（P＜0.05）。过表达miR-122抑制HepG2细胞增殖、迁移和侵袭，降低SIRT1、细胞周期蛋白D1、N-钙粘蛋白和波形蛋白蛋白水平，升高p53和E-钙粘蛋白蛋白水平（P＜0.05）。然而，SIRT1过表达可部分逆转过表达miR-122对HepG2细胞的作用（P＜0.05）。结论?MiR-122通过负靶向调控SIRT1抑制肝癌细胞增殖、迁移和侵袭。     

下调miR-421靶向Sirt3调控HepG2肝癌细胞生长和侵袭的机制研究

目的探讨下调miR-421靶向Sirt3调控肝癌细胞生长和侵袭的机制。方法 RT-PCR方法测定肝癌细胞和正常肝细胞中miR-421表达变化。在肝癌细胞中转染miR-421 inhibitor,MTT测定细胞增殖变化,Transwell小室检测细胞侵袭和迁移能力变化,Western blotting检测细胞中MMP-9和MMP-2蛋白表达变化。在线靶基因预测软件发现Sirt3可能是miR-421的靶基因,荧光素酶报告系统鉴定靶向关系。在肝癌细胞中共转染miR-421 inhibitor、Sirt3 siRNA,利用上述方法测定细胞增殖、侵袭、迁移能力和MMP-9、MMP-2蛋白表达水平。结果 miR-421在肝癌细胞中的表达水平高于正常肝细胞。miR-421 inhibitor转染后的肝癌细胞增殖能力下降,细胞侵袭和迁移能力降低,细胞中MMP-9和MMP-2蛋白表达减少。Sirt3受到miR-421的靶向负调控作用。Sirt3 siRNA能够逆转miR-421 inhibitor对肝癌细胞增殖、侵袭、迁移和MMP-9、MMP-2表达的抑制作用。结论下调miR-421靶向Sirt3抑制HepG2肝癌细胞生长和侵袭。     

葛根素对人肝癌细胞HepG2侵袭与迁移能力的影响

目的探索葛根素对人肝癌细胞HepG2侵袭与迁移能力的影响及其相关分子机制。方法将人肝癌细胞HepG2分为两组,实验组用60μg/ml、30μg/ml的葛根素进行培养,对照组用加入等体积的葛根素溶解剂二甲基亚砜(DMSO)的培养基培养;利用细胞划痕实验检测两组细胞的迁移能力;利用Transwell小室检测两组细胞的侵袭能力;通过蛋白免疫印迹检测波形蛋白(vimentin)、E-钙黏蛋白(E-cadherin)、基质金属蛋白酶2/9(matrix metalloproteinase2/9,MMP2/9)。结果人肝癌细胞HepG2在经过葛根素培养后,细胞划痕的愈合能力下降,Transwell小室细胞的侵袭能力下降;E-cadherin表达上升(P<0.05),vimentin、MMP2和MMP9的表达下调(P<0.05)。结论葛根素通过上皮细胞间质转化(EMT)途径导致人肝癌细胞HepG2侵袭转移能力下降。