p27KIP1和SKp2蛋白异常表达与人胶质瘤临床病理学关系的研究

目的探讨脑胶质瘤组织中p27~(KIP1)蛋白和S期激酶相关蛋白2(skp2)异常表达与临床病理因素的关系。方法应用免疫组化SP法检测45例胶质瘤和10例正常脑组织中p27~(KIP1)和Skp2蛋白表达情况。结果p27~(KIP1)和Skp2蛋白在正常脑组织和胶质瘤组织中的阳性表达率差异有显著性(P=0.033、P=0.005);p27~(KIP1)和Skp2蛋白表达水平与胶质瘤组织学分级相关(P<0.01),但与患者的性别、年龄及肿瘤大小无明显关系(P>0.05);Skp2阳性表达组和阴性表达组之间p27~(KIP1)蛋白阳性率差异有显著性(x~2=4.8458,P=0.028);胶质瘤组织中p27~(KIP1)蛋白和Skp2蛋白的表达呈负相关(r=-0.5477,P<0.05)。结论Skp2蛋白在胶质瘤组织中表达上调,加速了对p27~(KIP1)泛素化依赖的蛋白降解,使p27~(KIP1)蛋白表达降低,失去对细胞周期的调控并促进细胞异常增殖,从而参与了胶质瘤的发生和发展。     

PTEN-PI3K/AKT细胞信号转导通路与肿瘤

PTEN基因是近年来发现的一种新的肿瘤抑制基因,其产物PTEN蛋白具有脂质磷酸酶活性和蛋白磷酸酶活性。PI3K/AKT信号通路为生物体内重要的生存信号通路。实验证实PTEN主要是通过其脂质磷酸酶活性作用于PI3K的下游靶分子PIP3从而阻断PI3K/AKT信号通路来实现其抑癌作用,故有学者将它们称为PTEN-PI3K/AKT信号转导通路。本文中从细胞凋亡、细胞周期调节、细胞迁移与侵袭、血管形成、肿瘤耐药、肿瘤免疫逃逸等多个角度综述了PTEN-PI3K/AKT信号转导通路与肿瘤的关系。     

Jurkat细胞增殖过程中S期激酶相关蛋白2与p27kip1的表达变化及意义

目的 探讨S期激酶相关蛋白2(Skp2)与p27kip1在淋巴瘤细胞株Jurkat细胞增殖过程中的表达变化及意义.方法 采用免疫沉淀法检测Jurkat细胞中p27kip1与Skp2的结合情况;采用血清饥饿合并释放法同步化处理Jurkat细胞,再分别用Western blot技术、免疫荧光双标技术及核浆分离法检测p27kip1和Skp2在Jurkat细胞中的表达变化及亚细胞定位.结果 p27kip1与Skp2能够相互结合.在Jurkat细胞增殖过程中,p27kip1蛋白表达减少,其中在细胞核内的减少更明显;Skp2蛋白表达增加,其中在细胞浆中的增加更明显.结论 在Jurkat细胞增殖过程中,Skp2在细胞浆中的合成增加,并可能通过加快p27kip1的泛素化降解使细胞核内p27kip1显著减少,从而推动细胞周期的进程.     

CHMP4C通过调控PI3K/AKT信号通路影响NSCLC细胞增殖与凋亡

目的:探究染色质修饰蛋白4C(CHMP4C)对非小细胞肺癌(NSCLC)进展及顺铂敏感性的影响及其机制。方法:通过免疫组化检测CHMP4C在NSCLC癌组织和癌旁组织中的表达情况。利用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)和蛋白免疫印迹法(Western blot)检测CHMP4C在NSCLC细胞系中的表达水平。细胞计数试剂盒(CCK-8)和细胞克隆实验检测细胞活力及半数抑制浓度IC₅₀;流式细胞术检测细胞周期和凋亡。Western blot分析细胞凋亡相关蛋白(caspase 3、Bad)及PI3K/AKT信号通路中关键蛋白的表达水平。另外,我们采用动物模型进一步验证CHMP4C对体内肿瘤生长的影响。结果:CHMP4C在NSCLC癌组织和细胞系中高表达,与肿瘤T分期显著相关(P<0.05)。敲低CHMP4C抑制细胞增殖,促进细胞凋亡,并将细胞阻滞在S期(P<0.05)。敲低CHMP4C可抑制PI3K/AKT信号通路活化,然而激活PI3K/AKT信号通路逆转了CHMP4C敲低对NSCLC细胞的影响(P<0.05)。利用顺铂处理细胞后发现NSCLC细...     

肿瘤抑制基因PTEN研究新进展

PTEN是具有磷酸酶活性的抑癌基因,其低表达或缺失与肿瘤的进展及不良预后密切相关,其抑制肿瘤作用机制系通过抑制PI3K/AKT信号通路,FAK/PI30C和MAPK信号通路,FRAP/Mtor信号通路及影响核转录因子-Kb/IB信号通路;另外,NEDD4-1通过泛素化蛋白体降解途径调节PTEN,BMP通过RAS/ERK信号通路抑制PTEN表达,IGF-1通过IGF-1/PI3K/Akt信号通路调节PTEN.     

食管癌中Skp2和p27^kipl蛋白表达及其临床意义

目的 探讨细胞S相激酶相关蛋白(Skp2)、p27kipl蛋白表达与食管癌的关系.方法 用免疫组化S-P法检测58例食管癌中Skp2、p27kipl蛋白的表达.结果 58例食管癌组织中Skp2、p27kipl蛋白阳性表达率分别为32.76%和58.62%;二者的阳性表达率均与食管癌患者的年龄、性别、肿瘤部位无关( P＞0.05).Skp2阳性表达率随肿瘤分化程度降低而升高,p27kipl阳性表达率随肿瘤分化程度降低、浸润深度加深、恶性程度增加而逐渐降低(P＜0.05).Skp2与p27kipl表达呈显著负相关(P＜0.01) .结论 在管癌中Skp2主要的泛素化降解靶物质是p27kipl,它通过影响p27kipl降解进而影响肿瘤的进展,导致不良预后.     

miR-140-5p靶向HDAC7抑制非小细胞肺癌细胞增殖、迁移和侵袭的机制探讨

目的:探讨miR-140-5p靶向组蛋白去乙酰化酶7(histone deacetylase 7,HDAC7)调控非小细胞肺癌（non-small cell lung cancer,NSCLC）细胞增殖、迁移和侵袭的机制。方法:采用qRT-PCR检测人NSCLC组织及癌旁组织中miR-140-5p的表达水平。用miR-140-5p mimic（模拟物）及miR-140-5p NC（阴性对照）转染A549细胞,CCK8法及克隆形成实验检测细胞增殖能力,划痕实验和Transwell实验检测细胞迁移和侵袭能力,双荧光素酶报告基因实验验证miR-140-5p与HDAC7的靶向关系,Western blot检测各组细胞HDAC7及PI3K、p-PI3K、AKT、和p-AKT表达水平。结果:与癌旁组织相比,miR-140-5p在NSCLC组织中的表达水平明显减低,差异有统计学意义（P＜0.01）。与miR-140-5p NC组相比,过表达miR-140-5p后A549细胞在48和72 h的增殖能力明显降低（P＜0.05）;且细胞克隆形成、细胞迁移和侵袭能力均降低（均P＜0.05）,PI3K/AKT信号通路中关键分子p-PI3K和p-AKT蛋白水平明显降低（均P＜0.05)。生物信息学预测HDAC7可能是miR-140-5p的一个靶基因,且双荧光素酶报告结果证实miR-140-5p直接靶向调节HDAC7表达。结论:miR-140-5p通过靶向HDAC7表达进而抑制NSCLC A549细胞的增殖、迁移和侵袭,其机制可能与通过抑制PI3K/AKT信号通路的激活有关。     

LY294002对LK2和H460肺肿瘤细胞系细胞增殖及SKP2和p27表达的影响

目的:探讨PI3K抑制剂LY294002对肺肿瘤细胞增殖影响及其分子机制。方法:培养肺癌细胞系LK2和H460,LY294002阻断PI3K信号通路后,MTT比色法测定细胞生长曲线;FCM分析细胞周期变化;实时RT-PCR、蛋白印迹法分别观察PI3K信号下游蛋白SKP2、p27mRNA及蛋白表达变化。结果:与对照组相比,处理组细胞生长速率受抑制,细胞周期阻滞于G1期。实时RT-PCR及蛋白印迹结果显示,LY294002处理后SKP2mRNA、蛋白表达水平均降低,2种细胞中基因降低量分别为42%和41%,蛋白降低量为65%和55%,p27mRNA表达水平增加了49%和36%,但蛋白表达水平不变。结论:肺肿瘤细胞LK2和H460中PI3K通路通过SKP2,但并不经由p27调节细胞周期,调控细胞增殖。     

lncRNA DLEU2/miR-455-3p/OTUD7B轴通过PI3K/AKT信号通路促进宫颈癌恶性发展

目的:探讨长链非编码RNA DLEU2(lncRNA DLEU2,DLEU2)对宫颈癌恶性发展的影响。方法:利用TCGA数据库和qRT-PCR分析DLEU2在宫颈癌组织和细胞系中的表达。采用CCK-8、Western blotting、免疫荧光、细胞划痕、Transwell和TUNEL实验检测干扰DLEU2(sh-DLEU2)对宫颈癌细胞增殖、迁移、侵袭和凋亡的影响。生物信息学和双荧光素酶报告基因实验分析DLEU2和miR-455-3p的靶基因,评估miR-455-3p inhibitor/mimic对宫颈癌细胞生长和PI3K/AKT信号通路的影响。裸鼠荷瘤实验检测干扰DLEU2后对瘤体体内生长的影响。结果:宫颈癌组织和细胞系中DLEU2表达显著上调（P＜0.01）。sh-DLEU2可抑制Hela和SiHa细胞的增殖、迁移和侵袭（P＜0.01）,促进细胞凋亡（P＜0.001）。DLEU2与miR-455-3p相结合,OTUD7B为miR-455-3p的靶基因。miR-455-3p inhibitor促进细胞恶性发展并激活PI3K/AKT信号通路,而sh-DLEU2可逆转其作用（P＜0.01）;miR-455-3p mimic也可部分逆转Oe-OTUD7B对细胞的作用（P＜0.01）。此外,sh-DLEU2抑制了裸鼠荷瘤组织的生长（P＜0.01）。结论:DLEU2通过miR-455-3p/OTUD7B轴激活PI3K/AKT信号通路促进宫颈癌的恶性发展。     

Skp2 的研究进展

  细胞内泛素-蛋白酶体途径通过对泛素化蛋白进行降解，在细胞周期发展、基因转录及信号转导等过程中发挥重要作用。此途径主要包括两步，即蛋白的泛素化，由泛素激活酶(E1)，泛素结合酶(E2)及泛素连接酶(E3)等共同完成；经泛素化的蛋白随后被26S蛋白酶体复合物降解。E3家族成员SCFSkp2泛素连接酶由Skp2与Skp1，Cul1／cdc53及Rbxl结合形成。Skp2属F-盒蛋白家族成员,在泛素化过程中负责对底物蛋白的识别而决定SCF^Skp2复合物作用的特异性。Skp2 通过对多种靶蛋白的泛素化降解而与细胞周期调控及肿瘤的发生、发展和预后密切相关。     

Skp2与其底物CDKN1B(p27)在结直肠癌中的作用

结直肠癌(colorectal cancer,CRC)是全球高发恶性肿瘤之一,居癌症患者致死第4位.对结直肠癌的发生、发展中的信号通路和与之相关的细胞因子的相关研究较多.S期激酶相关蛋白2(S-phase kinase-associated protein 2,Skp2)的过表达在结直肠癌的发生与发展的过程中扮演至关重要的角色.F-box蛋白Skp2是Skp1-Cullin 1F-box(SCF)泛素连接酶(E3)复合物的组成元件,具有调节细胞增殖的作用,同时能通过调控多种细胞周期的泛素化和26S蛋白酶体降解来调控肿瘤细胞的进展与转移.Skp2与其蛋白基质细胞周期蛋白依赖性激酶抑制剂1B(cyclin-dependent kinase inhibitor 1 B,CDKN1B),也被称为p27 kip1间通过SCF-Skp2复合体和细胞周期蛋白依赖性激酶亚基1(cyclin-dependent kinase subunit 1,Cks1)辅因子的激活而进行有效的链接.Skp2的过表达、Cks1和CDKN1B(p27)表达的变化对结直肠癌的发生、发展起到重要的作用,三者可能是结直肠癌独立的预后指标.Skp2可能是结直肠癌治疗中有前景的靶标,其抑制剂的研发对结直肠癌的治疗起关键性作用.本文将对Skp2与其泛素-蛋白酶体途径在结直肠癌中的作用进行综述.     

miR-214通过PTEN调控AKT信号通路抑制鼻咽癌细胞凋亡CSCD

目的探讨miR-214通过PTEN调控下游AKT信号通路激活对鼻咽癌细胞凋亡的影响。方法miR-214抑制剂转染鼻咽癌5-8F和6-10B细胞。MTT法评估细胞增殖情况。Annexin-V/PI染色法检测两种鼻咽癌细胞凋亡情况。Western blot和real-time PCR检测miR-214抑制剂对PTEN基因转录和蛋白表达以及对AKT信号通路和凋亡相关蛋白表达水平的影响。检测shRNA沉默PTEN基因转录和蛋白表达后,miR-214抑制剂对鼻咽癌细胞凋亡影响。结果miR-214抑制剂可抑制鼻咽癌细胞生长,诱导5-8F和6-10B细胞凋亡。miR-214通过靶向3'-UTR区域调控PTEN基因转录和蛋白表达。抑制miR-214可促进PTEN的表达,抑制AKT信号通路激活,进而调控下游细胞周期和凋亡相关蛋白表达。沉默PTEN基因转录和蛋白表达可逆转miR-214抑制剂对鼻咽癌细胞AKT信号通路活性和凋亡的影响。结论miR-214可通过直接靶向PTEN基因转录促进AKT信号通路激活抑制鼻咽癌细胞凋亡。     

EBV-BZLF1通过激活PI3K/AKT信号通路促进胃癌细胞生长

  目的   明确EB病毒（Epstein-Barr virus,EBV）BZLF1基因（EBV-BZLF1）对EB病毒阴性胃癌细胞生物学行为的影响及可能的分子机制。   方法   运用过表达BZLF1的慢病毒感染胃癌细胞系AGS和HGC27,分别采用CCK8、细胞凋亡检测、细胞迁移和侵袭实验及Western blot法检测细胞的增殖能力、细胞凋亡与迁移侵袭能力及细胞信号通路变化情况。将过表达BZLF1的胃癌细胞HGC27注射于非肥胖糖尿病/重症联合免疫缺陷（NOD/SCID）小鼠背部皮下构建移植瘤模型,观察BZLF1对肿瘤生长的影响。   结果   过表达BZLF1的慢病毒感染组AGS-BZLF1与HGC27-BZLF1相比亲本细胞,细胞中BZLF1蛋白表达明显上调;体外细胞增殖与小鼠体内成瘤能力均显著增强（P < 0.05）;细胞凋亡受到BZLF1蛋白的抑制,其中AGS-BZLF1和HGC27-BZLF1凋亡率为（2.40± 0.14）%和（3.90±0.14）%,显著低于AGS和HGC细胞的（5.75±0.35）%和（9.70±0.42）%（P < 0.05）;但细胞迁移和侵袭能力无明显改变。深入分子机制研究发现,BZLF1表达上调后,PI3K/AKT信号通路明显激活,表现为pAKT和pS6蛋白表达上调。使用BEZ235抑制剂阻断PI3K/AKT信号通路后,HGC27-BZLF1和AGS-BZLF1细胞的生长均受到抑制。   结论   EBV-BZLF1可通过激活PI3K/ AKT信号通路促进胃癌细胞生长,靶向PI3K/AKT通路抑制剂或可成为EBV阳性胃癌的治疗选择。      

TRPC3在胰腺癌细胞系中的表达及功能

目的:研究TRPC3在胰腺癌（pancreatic cancer,PC）细胞系中的表达及对细胞增殖和凋亡的影响。方法:采用qRT-PCR和Western blot检测正常和PC细胞系中TRPC3表达;采用Western blot检测GdCl3和TRPC3 siRNA干预PC细胞系后TRPC3、PI3K、p-PI3K、AKT、p-AKT和PTEN蛋白表达;CCK-8法检测细胞增殖;DAPI染色法检测细胞形态学;Annexin V/PI双标法检测细胞凋亡;钙成像法检测细胞内［Ca2+］ i。结果:PC细胞系中TRPC3 mRNA和蛋白表达明显高于正常胰腺上皮细胞HDPE6-C7;与溶剂和转染阴性对照细胞比较,GdCl3和转染TRPC3 siRNA的Panc1、A8184和T3M4细胞核固缩数量明显增加,Annexin V/PI双阳性凋亡细胞比例明显增多,T3M4细胞的静息［Ca2+］i、达峰［Ca2+］i和恢复相［Ca2+］i浓度明显降低;A8184和T3M4细胞的p-PI3K、p-AKT和PTEN蛋白表达明显降低。结论:TRPC3在PC细胞系中表达上调,且TRPC3通过调节细胞Ca2+介导的PI3K/AKT信号通路从而影响PC细胞增殖和凋亡。     

前列腺癌中泛素降解途径蛋白的表达及与临床病理特征的相关性

目的 探讨泛素降解途径蛋白Skp2、p27kipl和PTEN在前列腺癌中的表达及与前列腺癌各项临床病理特征的关系,并探讨三者的相关性.方法 应用免疫组织化学法和图像分析系统研究41例前列腺癌标本、20例开放手术切除良性前列腺增生标本中Skp2、p27kipl和PTEN的表达情况.并使用Mann-Whitney检验、Spearman等级相关分析临床病理资料与免疫组化的结果及Skp2、p27kipl和PTEN之间的相关性.结果 在前列腺癌中,Skp2蛋白染色阳性率显著高于良性前列腺增生(P<0.001),p27kipl蛋白染色阳性率显著低于良性前列腺增生(P<0.001),PTEN蛋白染色阳性率显著低于良性前列腺增生(P<0.001).Skp2 蛋白表达与前列腺癌术前PSA水平、肿瘤穿透前列腺被膜、肿瘤分期、病理分级密切相关(P<0.05).而p27kipl和PTEN蛋白表达与上述临床病理特征负相关(P<0.05).Spearman 等级相关分析表明,Skp2与p27kipl蛋白表达呈负相关(r=-0.572, P<0.001),Skp2与PTEN 蛋白表达呈负相关(r=-0.433, P=0.005).结论 Skp2蛋白在前列腺癌中表达增加,与术前PSA水平、局部浸润、临床分期和病理分级呈正相关,而p27蛋白在前列腺癌中表达降低,与上述临床病理特征呈负相关,Skp2蛋白表达与p27蛋白表达之间呈负相关.Skp2表达与抑癌基因PTEN蛋白表达呈负相关.     

外源性SHIP基因对K562细胞周期及其相关蛋白表达的影响

目的:探讨SHIP基因对人白血病细胞系K562细胞周期的调控作用.方法:用携带野生型SHIP基因及绿色荧光蛋白 (green fluorescent protein,GFP)基因的慢病毒及空载体慢病毒转染人白血病K562细胞.FCM检测转染效率、细胞凋亡率及细胞周期变化,实时荧光定量PCR(real-time fluorescent quantitative PCR,RFQ-PCR)检测SHIP mRNA水平的变化,Western 印迹法检测SHIP、cyclin D1、p21WAF1/CIPI、p27KIP1蛋白表达水平的变化.结果:与转染空载体组和未转染组相比,转染野生型SHIP基因的K562细胞增殖减慢,凋亡率明显上升(P＜0.05);细胞周期显示,G0/G1期延长,G1期前出现亚二倍体的凋亡峰,S期和G2/M期比例降低;cyclin D1表达降低,p21WAF1/CIPI和p27KIP1表达增加.结论:转染野生型SHIP基因可使细胞周期阻滞在G0/G1期,抑制白血病细胞增殖,促进白血病细胞凋亡.     

PTEN基因及其在卵巢癌中的研究进展

PTEN基因是目前发现的第一个具有磷酸酶活性的抑癌基因,可通过基因突变、DNA甲基化等方式失活,主要表现为基因缺失、蛋白表达减少.PTEN作用于PI3K/AKT信号途径和选择性抑制MAPK途径,调控细胞增殖;通过发挥蛋白磷酸酶功能,使FAK和SHC去磷酸化,抑制细胞迁移.PTEN在卵巢癌的发生、发展中发挥着重要作用.     

卵巢癌细胞PI3K/AKT通路与肾上腺髓质素促迁移作用的相关性研究

  目的  检测PI3K/AKT信号通路在肾上腺髓质素(AM)促卵巢癌细胞HO8910迁移中的作用。  方法  利用划痕实验检测外源性AM对卵巢癌细胞HO8910迁移功能的影响, 并且检测PI3K抑制剂Wortmannin对AM促进卵巢癌细胞迁移功能的干扰。为进一步研究AM对AKT磷酸化的影响, 应用蛋白印迹法检测细胞AKT蛋白磷酸化的表达, 应用整合素α5β1抑制性抗体(mAb)拮抗AM对卵巢癌细胞AKT磷酸化作用。  结果  外源性AM处理的卵巢癌细胞12 h迁移率(62.83±4.46)%明显高于正常卵巢癌细胞的迁移率(30.26±1.55)%(P < 0.001), PI3K抑制剂Wortmannin干扰1 h后再用Am处理12 h, 细胞迁移率为(40.44±0.88)%, 明显低于单纯应用AM刺激的细胞(P=0.001)。AM可以促进卵巢癌细胞迁移(P < 0.001), PI3K抑制剂Wortmannin可以拮抗AM的促迁移作用(P=0.001)。AM可以促进细胞AKT蛋白磷酸化, Wortmannin、整合素α5β1抑制性抗体均可以干扰AM对AKT蛋白磷酸化作用。  结论  在卵巢癌HO8910细胞中, PI3K/AKT的活化是AM促进卵巢癌细胞迁移重要机制, 而整合素α5β1可能作为感受器参与AM促进细胞PI3K/AKT通路的活化。      

碘及TSH对甲状腺乳头状癌细胞中miRNA表达的影响

目的:体外实验研究人体甲状腺乳头状癌(PTC)细胞中miRNA在碘、TSH影响下的表达变化。方法:体外培养PTC细胞,Western blot法半定量分析p27kip1、AKT、AP-1的表达,RT-PCR法定量分析miRNA-21、miRNA-221、miRNA-222的表达。结果:经不同浓度碘和TSH分别处理PTC细胞,3种miRNA的表达量较对照组均上调;所对应的蛋白p27kip1表达均减少,AP-1及AKT表达较对照组均增加,增加程度与处理因素的浓度未见明显关联。结论:碘、TSH对甲状腺乳头状癌细胞中PI3K/AKT信号通路起到上调作用,从而对甲状腺乳头状癌的发展起到了一定促进作用,且其作用程度与处理浓度无关。