猪链球菌2型福建分离株的主要毒力基因分析

目的为了解福建地区猪链球菌2型菌株毒力因子分布情况。方法选取谷氨酸脱氢酶(gdh)、荚膜多糖(cps)、溶菌酶释放蛋白(mrp)、胞外因子(ef)、溶血素(sly)、纤连蛋白/血纤蛋白原结合蛋白(fbps)及毒力相关序列orf2等7个猪链球菌2型主要毒力基因,分别设计了7对引物,采用PCR方法,对本室分离保存的猪链球菌2型福建分离株的毒力基因进行分析。结果从屠宰生猪体内分离的4个猪链球菌2型菌株和SS2PFJ07株基因型为gdh+/cps2J+/mrp+/ef-/sly-/fb-ps+/orf2+,另1株从生猪体内分离的分离菌株基因型为gdh+/cps2J+/mrp+/ef+/sly+/fbps+/orf2+。结论福建地区生猪中猪链球菌2型至少有两种毒力基因型。     

2006-2017年四川省临床分离猪链球菌2型的病原学特征

目的 了解四川省2006-2017年临床分离猪链球菌2型的病原学特征。方法 对2006-2017年四川省临床分离的28株猪链球菌2型进行毒力基因检测、药物敏感性分析、脉冲场凝胶电泳分析(PFGE)。结果 28株猪链球菌2型分为2种毒力基因型,1株为cps2J+/mrp-/sly+/gapdh+/ef+型别,其余均为cps2J+/mrp+/sly+/gapdh+/ef+型别;药敏检测结果显示,28株猪链球菌对第三代、第四代头孢菌素类、碳青霉烯类、青霉素、左氧氟沙星、利奈唑胺、万古霉素、氯霉素、达托霉素均敏感,对四环素均耐药。28株猪链球菌中,仅2株对克林霉素、阿奇霉素、红霉素耐药,其余均敏感。PFGE分析结果显示,28株猪链球菌呈现6种PFGE图谱,相似性为76%,其中23株是完全相同的图谱,占82.14%;2006-2007年分离的19株菌呈现完全相同的PFGE图谱,2010年后分离的9株呈现出6种PFGE图谱。结论 2006-2017年四川省临床分离猪链球菌2型流行株的毒力基因型主要为高致病性cps2J+/mrp+/sly+/gapdh+/ef+型别,对β-内酰胺类药物敏感,2006、2007年不同市区临床分离的猪链球菌2型为统一来源,2010年后分离的菌株PFGE图谱相似度较低。     

一株人血源猪链球菌的分离鉴定与毒力基因检测

目的对北京某医院就诊的一例疑似人感染猪链球菌病患者的血液来源菌株进行鉴定与毒力因子检测分析。方法将患者血液分离菌株接种哥伦比亚血琼脂平板,经革兰氏染色镜检、血清凝集试验、VITEK 2Compact微生物分析仪以及基质辅助激光解析电离飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)检测后,再用PCR技术检测猪链球菌种特异性基因(16S rRNA)和猪链球菌2型特异性荚膜多糖编码基因(cps2J)以及多个毒力基因:溶菌酶释放相关蛋白(mrp)、溶血素(sly)、细胞外蛋白因子(ef)、谷氨酸脱氢酶(gdh)、纤粘连蛋白结合蛋白(fbps)、甘油醛-3-磷酸脱氢酶(gapdh)的编码基因和毒力相关基因orf2。结果传统细菌鉴定方法和蛋白质谱技术以及核酸检测方法将这株患者血源性细菌分离株鉴定为猪链球菌2型,该菌株的毒力基因cps2J、sly、ef、gdh、fbps、gapdh和orf2的PCR检测均为阳性,mrp基因为阴性。结论该株人血源细菌分离株为猪链球菌2型sly+/ef+/mrp强毒株。     

湖南省首例猪链球菌14型人源分离株鉴定及毒力基因分析

目的 了解湖南省首例猪链球菌14型菌株的生物学性状及病原学特征。方法 采集患者的关节液接种到血琼脂平板,进行猪链球菌的分离培养,通过镜检、生化和血清凝集试验确认后,用聚合酶链反应(PCR)检测猪链球菌种特异性基因(16S rRNA)、2型荚膜多糖基因(cps2J)、14型荚膜多糖基因(cps14J)以及相关毒力基因:溶菌酶释放相关蛋白(mrp)、溶血素(sly)、纤粘连蛋白结合蛋白(fbps)、胞外因子(ef)、谷氨酸脱氢酶(gdh)、毒力相关序列orf2基因(orf2)和甘油醛一3一磷酸脱氢酶的编码基因(gapdh)。结果 患者的关节液中分离到猪链球菌14型菌株,种特异性基因16S rRNA阳性,荚膜多糖基因cps2J阴性、cps14J阳性,毒力基因mrp阴性,其余sly、fbps、ef、gdh、orf2、gapdh均为阳性。结论 湖南省已经出现了猪链球菌14型的流行,并携带多种毒力基因,需密切关注其流行趋势。     

1例猪链球菌5型感染者分离菌的病原学诊断、分型及相关基因的检测

目的 对来自人感染猪链球菌患者血培养的分离株进行病原学分离鉴定,了解该菌株分子生物学特征,提供分子流行病原学依据。方法 通过常规分离培养、生化鉴定、质谱检测分析、病原诊断基因及相关毒力基因检测和多位点序列分型技术(multi locus sequence typing,MLST)分析。结果 菌株为猪链球菌血清型5型,毒力基因携带模式为mrp+/ef-/sly+/gdh+/gapdh+/fbps-/orf2- ,MLST分型为ST373,该分离株对氯霉素和四环素耐药。结论 猪链球菌血清型5型也可以引起人感染,可通过相关的分离培养鉴定以及相关的病原学基因进行快速诊断和流行病学研究。     

贵州省一例人感染猪链球菌病例的病原学检测与分析

目的 对贵州省一疑似人感染猪链球菌病患者的血液来源菌株进行鉴定。方法 将患者血液分离菌株接种羊血琼脂平板,经革兰氏染色镜检、血清凝集试验和生化反应后,再用PCR技术检测猪链球菌种特异性基因(16S rRNA)和猪链球菌2型特有的荚膜多糖编码基因(cps2J)以及溶菌酶释放相关蛋白编码基因(mrp)、溶血素基因(sly)和细胞外蛋白因子编码基因(ef)。结果 传统方法和PCR技术将病例来源菌株鉴定为猪链球菌2型,PCR鉴定结果显示该菌株的毒力基因cps2J、mrp、sly和Ef均为阳性。结论 贵州省一例人感染猪链球菌疑似病例来源菌株为猪链球菌2型强毒株。     

Ⅱ型猪链球菌浙江分离株cps2J、ef、mrp基因的克隆及序列分析

目的阐明浙江省猪链球菌分离株的血清型分型,分析其与国内外其他猪链球菌Ⅱ型（SS2）菌株 cps2J、ef、mrp毒力基因的差异。方法参照GenBank上已发表的cps2J、ef、mrp毒力基因序列,设计引物 ,对6株浙江省猪链球菌分离株进行cps2J、ef、mrp全基因克隆及序列测定,并与国内外其他分离株的基 因序列进行比较。结果cps2J、ef、mrp基因的完整开放阅读框（ORF）分别为999bp、2532bp、3771bp,各 自编码333、843、1256个氨基酸。经对cps2J、ef、mrp毒力基因的序列比较与系统进化分析,6株浙江分 离株均分布在SS2发生群中,与国内外其他SS2菌株cps2J、ef、mrp基因核苷酸的同源性均较高,分别为 98.39%～100.0%、99.6%～100.0%和99.4%～100.0%,分离的年代和地区对基因的同源性和系统进化分支影 响不大。结论6株浙江省猪链球菌分离株为2型菌株,cps2J、ef、mrp基因序列非常保守,与GenBank上国 内及欧洲SS2菌株中相应序列有很高的同源性,可能有着相同的起源。     

徐州市7株猪链球菌病原学分析及分子分型研究

目的 对2020-2022年徐州市3起人感染猪链球菌疫情中分离到的7株猪链球菌进行鉴定和分型,了解本地区猪链球菌的病原学特征和流行特点。方法 采集与病例相关猪的鼻拭子和外环境等标本进行猪链球菌分离,采用飞行质谱和VITEK-2 Compact等微生物鉴定系统进行鉴定,对分离到的猪链球菌进行血清型、毒力基因的检测,并通过多位点序列分型(MLST)和脉冲场凝胶电泳(PFGE)等方法进行分子分型和溯源分析。结果 6株猪链球菌为血清2型,其中2021年人源(1株)与猪源(3株)猪链球菌荚膜多糖基因(cps2J)、溶菌酶释放蛋白基因(mrp)、细胞外蛋白因子基因(ef)和溶血素基因(sly)检测均为阳性,多位点序列分型结果为ST7型,PFGE同源性为100%,推断人可能因宰杀带菌猪时通过破损的伤口而感染;2020年和2022年临床分离株mrp基因缺失,多位点序列分型结果为ST1型。2022年外环境分离菌株不携带4种所检测的毒力基因,非数据库中已知ST型别。结论 本地区分离到的猪链球菌株携带多种毒力基因,致病菌株主要为血清2型,ST1和ST7型。     

表观健康猪群携带猪链球菌情况流行病学调查

目的了解我国不同地区表观健康猪群携带猪链球菌的情况。方法从我国20个不同地区屠宰场采集248份扁桃体,进行增菌培养后用PCR方法进行猪链球菌种型鉴定并用血清凝集试验复检,最后用多位点序列分型(Multilocus se-quence typing,MLST)系统研究各菌株之间的遗传关系。结果从248份扁桃体中共检出14株猪链球菌(检出率为5.65%),其中3株为猪链球菌2型,2株为猪链球菌7型,1株为猪链球菌9型,8株未定血清型;对6株定型菌株进行毒力因子(mrp、epf、sly、orf2、fbps、gapdh)检测发现5种毒力基因型:A1Cps2+mrp-epf+sly+orf2+fbps+gapdh+、A2Cps2+mrp-epf+sly-orf2-fbps+gapdh-、A3Cps7+mrp+epf-sly-orf2-fbps-gapdh+、A4Cps9+mrp-epf-sly-orf2-fbps+gapdh+、A5Cps7+mrp-epf-sly-orf2+fbps+gapdh+,A1和A2型的分离株为弱毒株,其他型菌株的毒力无法确定;经MLST分析,3株猪链球菌2型属于ST1,1株猪链球菌7型属于ST29,1株猪链球菌9型(CQ15)属于一个国际上未报道过的新ST型,该型被猪链球菌MLST数据库(http://ssuis.mlst.net)收录并编号为ST128。结论不同地区表观健康猪群平均带菌率为5.65%,分离到的猪链球菌2型均为弱毒株。     

我国不同地区健康猪猪链球菌检出率调查

目的 了解我国不同地区健康猪猪链球菌的检出率,评估猪链球菌感染风险。方法 分别从不同地区采集正常屠宰猪或活体采集猪咽拭子,经选择性培养基增菌培养,用PCR的方法进行猪链球菌特异的16S rRNA、gapdh以及cps1j、cps2j、cps7h、cps9h、mrp、ef 和sly的检测。结果 共采集337份咽拭子标本。猪链球菌的检出率为93.8%(316/337)。316份阳性标本中,毒力基因mrp、ef、sly的检出率分别为29.4%, 70.3% ,83.9%,血清2型为优势血清型61.4%(194/316)。结论高致病性猪链球菌的检出率很高,可能的猪链球菌感染风险不容忽视。     

猪2型链球菌安徽分离株的毒力基因、溶血性及耐药性分析

目的 了解猪2型链球菌(S. suis 2)安徽分离株的毒力基因分布特征以及溶血性和耐药性。方法 对19株S. suis 2安徽分离株,采用PCR方法检测cps2J、mrp、epf、sly 4种毒力基因,PA法和micro-ELISA法检测溶血类型和溶血价,K-B法检测对25种抗生素的敏感性。结果 11株毒力基因型为cps2J+/mrp+/epf+/sly+,占总菌株的57.9%,为毒力优势基因型;19株均呈α或β溶血,溶血价为1∶4～1∶128;对利福平、头孢他啶、氟苯尼考、头孢唑啉的敏感率较高,平均为84.2%,对强力霉素、四环素、杆菌肽和磺胺异恶唑的耐药率较高,平均为82.9%,且对该4种抗生素的多重耐药率为63.2%。结论 安徽猪群中流行的S. suis 2毒力基因的分布特征与国内相似,与国外存在一定差异,CPS、MRP、EPF和SLY是重要的毒力因子;S. suis 2的溶血类型与其SLY有关,但sly基因的不完整性并不一定改变S. suis 2的溶血性;S. suis 2安徽分离株的多重耐药性严重,耐药谱与其他地区存在一定差异。